序页/总页：1/7 ####制药有限公司GMP标准文件
目的：制定农药残留量测定法的检验标准，使检验有据可依。
范围：本公司药材农药残留量的测定。
责任人：质检中心负责人及检验员。
依据：《中国药典》2010年版一部。
内容：
1 本法系用气相色谱法测定药材、饮片及制剂中部分有机氯、有机磷和拟除虫菊酯类农药，除另有规定外，按下列方法测定。
2 有机氯类农药残留量测定
2.1 仪器与用具：
2.1.1 气相色谱仪带有63Ni-ECD电子捕获检测器，载气为高纯氮(纯度>99.9999%)，必须安装脱氧管(购自)。
2.1.2 超声仪。
2.1.3 离心机。
2.1.4 旋转蒸馏发仪。
2.1.5 色谱柱：SE－54或DB-1701弹性石英毛细管柱(30m×0. 32mm×0. 25μm)
2.1.6 具塞刻度离心管00 mI)，刻度浓缩瓶，具塞锥形瓶100ml)，移液管等。
2.2 试药与试液
2.1.1 丙酮、石油醚(60~90℃)和二氯甲烷均为分析纯，且全部经过全玻璃蒸馏馏装置重蒸馏馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求。(有条件的实验室可使用进口的农残级的试剂)
2.1.2 无水硫酸钠钠和氯化钠均为分析纯，硫酸钠为优级纯。
2.1.3 农药对照品：六六六（BHC）[包括α-BHC，β-BHC，γ-BHC和δ-BHC四种异构体]，滴滴涕（DDT）[包括pp'-DDE，pp'-DDD，op'-DDT和pp'-DDT四种异构体]及五氯硝基苯(PCNB)，由中国计量科学研究院提供标示含量（浓度）的农药标准品，也可采用国际认可的农药标准品自行配制。
2.3 色谱条件与系统适用性试验
2.3.1 SE-54色谱柱：进样口温度：230℃。检测器温度：300℃，不分流进样。程序升温：
初始温度100℃，每分钟10℃升至220℃，再以每分钟8℃升至250℃，保持10min。
2.3.2 DB-1701色谱柱：进样口温度：220℃，检测器温度：300℃，不分流进样。程序升温：初始温度140℃，保持lmin，以每分钟10℃升至210℃，再以每分钟20℃升至260℃，保持4min。
按上述条件操作，理论板数以α－BHC峰计算应不低于1 ×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
2.4 操作方法
2.4.1 对照品储备液的制备精密称取六六六(BHC) [α-BHC，β-BHC，γ-BHC和δ-BHC]、滴滴涕（DDT)[PP'-DDE，PP'-DDD，OP'-DDT，PP'-DDT]及五氯硝基苯(PCNB)农药对照品溶液适量，用石油醚(60~90℃)分别制成每1ml含4~5μg的溶液。
2.4.2 制备精密量取上述各对照品储备液0. 5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60~90℃)稀释至刻度，摇匀。
2.4.3 混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用石油醚(60~90℃) 制成每1L分别含0μg，1μg，5μg，10μg，50μg，100μg和250μg的溶液。
2.5.4 供试品溶液制备
2.5.4.1 方法1（药材）取供试品于60℃干燥4h，粉碎成细粉，取约2 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，加水20 ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6 g，精密加二氯甲烷30 ml，称定重量，超声处理15min，直至氯化铀完全溶解，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使水相与有机相完全分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠钠的100 ml具塞锥形瓶中，脱水4h，精密量取35ml，置100 ml旋转蒸馏发瓶中，40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60~90℃)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(60~90℃)溶解并转移至10 ml具塞刻度离心管中，加石油醚(60~90℃)精密稀释至5ml，小心加入硫酸钠1 ml，振摇1min，离心(3000r/min) 10min，精密量取上清液2ml，置刻度浓缩瓶中，连接旋转蒸馏发器，40℃下(或用氮气)将溶液浓缩至适量，精密稀释至1 ml，即得。同法制备空白样品。
2.5.4.2 方法2（制剂）取供试品，研成细粉(蜜丸切碎，液体直接量取)，精密称
取适量(相当于药材2g)，以下按方法1，制备供试品溶液。
2.6 测定法按上述色谱条件操作，分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。
2.7 注意事项
2.7.1 本试验所用器皿应严格清洗(不能残存卤素离子)。
2.7.2 供试品溶液制备时，有机相减压浓缩务必至近干，避免待测成分损失。
2.7. 3 为防止假阳性结果，可选择不同极性的色谱柱进行验证，有条件的可采用气质联用予以确认。
2.7.4 如样品中其它成分有干扰，可适当改变色谱条件也但需进行空白验证。
3 有机磷类农药残留量测定
3.1 仪器与用具
3.1.1 气相色谱仪，带有氮磷检测器(NPD)，载气为高纯氮(纯度>99.9999%)。
3.1.2 超声仪。
3.1.3 旋转蒸馏发仪。
3.1.4 多功能真空样品处理器。
3.1.5 活性炭小柱120~400目，石墨碳填料0.25g，内径0.9cm，3ml)。
3.1.6 氮吹仪(Organomation Associates，Inc.，N-EV AP TM 112 nitrogen evaporator)。
3.1.7 色谱柱：DB-17MS或HP-5弹性石英毛细管柱(30m×0. 25mm×0.25μm)或类似极性的毛细管柱。
3.1.8 具塞锥形瓶、250ml平底烧瓶、棕色量瓶、移液管等。
3.2 试药与试液
3.2.1 无水硫酸钠为分析纯。
3.2.2 乙酸乙醋、正己烷(农残级或分析纯试剂经过全玻璃蒸馏装置重蒸馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求)。
3. 2.3 农药对照品：对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酷甲胺磷，由中国计量科学研究院及农业部环境保护科研检测所提供，其纯度大于99%；也可以使用国际认可的、纯度要求等符合规定的进口标准物质。
