小分子人工抗原的制备方法

抗原的制备方法　除完整的细胞可作为抗原外，各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质，也都具有全抗原或半抗原的性质，某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的，可作为这种细胞的一个标志。

由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质，有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质，以供科学研究之用。

一、抗原的提取 抗原的制备是一件十分细致的工作，要制备一个高纯度的抗原，需要付出艰巨的努力，制备工作涉及物理学、化学和生理学等许多领域的知识。

根据物理或化学特性建立起来的分离、纯化方法的主要原理不外乎科二个方面：①利用混合物中几个组分分配率的差别将他们分配到可用机械方法分离的两或几个物相中，如盐析、有机溶剂抽提、层析和结晶等；②把混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同的区域而达到分离的目的，如电泳、超速离心和超滤等。

由于组织细胞内存着许多分子结构和理化性质不同的抗原物质，其分离方法也不一样，就是同一类大分子物质，因选材不同，所使用的方法也很大差别。

因此很难有一个通用的标准方法供提取任何生物活性物质使用，所以在提取前必须针对所欲提取的物质，充分查阅文献资料，选用合适的方法。

如果要提取一个结构及性质未知的抗原物质，更需要经过各种方法的比较探索，才能找到一些工作规律和获得预期的效果。

抗原物质的制备，大概要经过如下过程：①材料的选择和预处理；②细胞的粉碎（细胞器的分离）。

③提取；④纯化；⑤浓缩或干燥，保存。

现分别简述如下。

（一）材料的选择及预处理 选择什么材料主要根据实验目的而定。

通常选含量高、工艺简便、成本低的材料。

材料选定后，通常要进行预处理，剔除结缔组织、脂肪组织等，把组织块剪碎。

若取材后不立即进行提取，则应冷冻保存，动物组织更要深低温保存。

某些容易失活的物质，一般宜采用新鲜材料。

（二）细胞的粉碎 除了提取体液、组织间液内的多肽、蛋白质、酶不需粉碎细胞外，凡要提取组织内、细胞膜上及胞内的生物活性物质，都必须把组织和细胞粉碎，使活性物质充分释放到溶液内。

半抗原的设计、修饰及人工抗原的制备宋娟;王榕妹;王悦秋;唐雨榕;邓安平【摘要】制备具有良好免疫原性的人工抗原是建立测定小分子化合物的免疫分析方法的最关键步骤.本文对半抗原的设计、修饰(修饰位点的选择、修饰物的制备、连接臂的选择)、载体的选择、半抗原与载体的偶联(偶联方式、偶联条件、最佳偶联率)、人工抗原的纯化与鉴定等方面作了详细的介绍.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2010(038)008【总页数】8页(P1211-1218)【关键词】半抗原;人工抗原;设计;修饰;免疫分析;评述【作者】宋娟;王榕妹;王悦秋;唐雨榕;邓安平【作者单位】四川大学化学学院,成都,610064;四川大学化学学院,成都,610064;四川大学化学学院,成都,610064;四川大学化学学院,成都,610064;四川大学化学学院,成都,610064【正文语种】中文免疫分析是以抗原与抗体之间特异性识别和可逆性结合反应为基础的痕量分析方法,已在临床分析和生物分析中得到广泛应用。

免疫分析不仅适用于大分子化合物 (如蛋白质、核酸、细菌)的检测,也适用于小分子化合物(如激素、药物)的测定。

由于免疫分析具有特异性强、灵敏度高、简单、快速、费用低和适于现场大批量样品筛选等优点,它在环境和食品安全等分析领域中的应用备受关注[1]。

近年来,针对环境和食品样品中的农药[2]、兽药[3-4]、环境激素[5]、毒素[6]及违禁食品添加剂[7]等小分子化合物残留量的免疫分析方法的应用实例较多。

建立小分子化合物的免疫分析方法的关键是能够制备出对小分子化合物具有高亲和力和高选择性的抗体。

由于大多数农药、兽药等为小分子化合物 (分子量小于 1000),不具有免疫原性,即缺乏 T细胞表位而无法直接诱导动物机体等产生特异性抗体,故小分子化合物被称为半抗原。

然而,半抗原可以通过适当的化学修饰方法,在其分子结构的某个位置上,带上端基为活性基团的连接臂,再与大分子载体结合,生成半抗原-载体的偶联物,此偶联物即为人工抗原,它可以借助 T细胞表位来间接诱导B细胞的增殖及分化,产生特异性抗体[8]。

林可霉素人工抗原的合成与鉴定张小辉;职爱民;侯玉泽;宋春美;王耀;龚芳;赵启法;张改平【摘要】拟合成并鉴定林可霉素( Lincomycin,LIN)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源LIN多克隆抗血清.采用高碘酸钠法将林可霉素与牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫原LIN-BSA和包被原LIN-OVA,并采用紫外分光光度法(UV)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果表明,半抗原LIN和载体蛋白偶联成功.动物免疫试验(免疫BALB/c纯系小鼠)结果显示,3只小鼠效价均达1∶3 000,且2号小鼠多抗血清抗LIN的半数抑制质量浓度IC50为3.85 μg/L,与莫能菌素的交叉反应率为6.19％,与其他药物无交叉反应.表明成功获得高效价、特异性好、亲和力高的鼠源抗LIN多抗血清.%The goal of this study was to synthesize artificial antigen of lincomycin and to obtain its mice polyclonal antiserum. Artificial antigen LIN-BSA and LIN-OVA were synthesized using sodium perio-date by linking carrier proteins BSA and OVA to LIN. The antigen LIN-BSA and LIN-OVA was identified by ultraviolet scanning and SDS-PAGE. The results showed that the hapten LIN was successfully linked to carrier proteins. The animal immunization results showed that three BALB/c mice indirect ELISA titer against LIN were 1 : 3 000 and the IC50 of No. 2 mice was 3. 85 μg/L and the high-titer; the rate of cross reaction of LIN mAb with Monensin was 6. 19%, and there was no cross-reactivity to other compounds; sensitivity LIN polyclonal antiserum has been generated. The artificial antigen of LIN and its mice polyclonal antiserum laid a foundation base for product the monoclonal antibodies and rapid test reagent against LIN.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2012(021)008【总页数】6页(P1-6)【关键词】林可霉素;人工抗原;合成;多抗血情【作者】张小辉;职爱民;侯玉泽;宋春美;王耀;龚芳;赵启法;张改平【作者单位】河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳471003;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳471003;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S859.84林可霉素（lincomycin，LIN）又称洁霉素，是由林肯链霉菌发酵产生的林可酰胺类抗生素［1－2］。

抗原的制备方法
抗原是指能够诱导机体产生免疫应答并能与免疫应答产物（抗体或效应细胞）特异性结合，发生免疫效应的物质。

抗原的制备方法有很多种，下面介绍其中几种常见的方法：
1. 天然抗原的制备：天然抗原是指从自然界中获得的抗原，如病毒、细菌、真菌、寄生虫等。

这些抗原可以通过培养、分离、纯化等方法获得。

2. 人工抗原的制备：人工抗原是指通过人工合成或修饰得到的抗原，如蛋白质、多糖、核酸等。

这些抗原可以通过化学合成、基因工程等方法获得。

3. 基因重组抗原的制备：基因重组抗原是指通过基因重组技术将抗原基因导入宿主细胞中表达得到的抗原。

这种方法可以获得大量的抗原，并且可以对其进行修饰和改造。

4. 合成肽抗原的制备：合成肽抗原是指通过化学合成方法合成的抗原肽段。

这种方法可以获得特定的抗原肽段，并且可以对其进行修饰和改造。

氨苄青霉素人工抗原的制备及鉴定刘成梅;黄丽;罗舜菁;张鸿【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2007(028)009【摘要】本研究采用戊二醛法和物理法制备氨苄青霉素(AMP)人工抗原,以紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定偶联成功,采用改良的BCA法测定偶联率分别为8～10和17～21.通过单因素和L9(34)正交试验研究了反应物起始摩尔比、偶联剂的添加量和偶联时间等因素对偶联率的影响,选择最佳的偶联条件.最终确定戊二醛法的最佳反应条件为:反应物起始摩尔比40:1;戊二醛10μl;反应时间4h.物理法的最佳反应物起始摩尔比为20:1,反应时间3h.本研究表明物理法优于戊二醛法,是一种更好的制备氨苄青霉素人工抗原的方法.【总页数】5页(P384-388)【作者】刘成梅;黄丽;罗舜菁;张鸿【作者单位】南昌大学,食品科学教育部重点实验室,南昌大学中德食品工程中心,江西,南昌,330047;南昌大学,食品科学教育部重点实验室,南昌大学中德食品工程中心,江西,南昌,330047;南昌大学,食品科学教育部重点实验室,南昌大学中德食品工程中心,江西,南昌,330047;南昌大学,食品科学教育部重点实验室,南昌大学中德食品工程中心,江西,南昌,330047【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.氨苄青霉素人工抗原的制备及抗体特性鉴定 [J], 张海棠;李桂平;季跃光;王自良2.烯效唑人工抗原的制备及其免疫原性鉴定 [J], 欧阳秋丽; 万益群3.万古霉素人工抗原的制备及鉴定 [J], 李玉静;刘鹏茹;刘静静;李春生4.1-芘丁酸人工抗原的制备及鉴定 [J], 孔蒙蒙;黄忠民;邓瑞广;索标;刘情情;胡骁飞;王娜5.基于杂环类双功能螯合剂DOTA的重金属铅人工抗原的制备与鉴定 [J], 翟璐;郭建军;金仁耀;桑丽雅;王振国;陈笑笑;王伟萍;廖杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

多西环素人工抗原的合成与鉴定米克热木·沙衣布扎提;孟坤杰;王剑【摘要】建立多西环素人工抗原（Doxycycline，DOX）的合成及鉴定方法。

采用戊二醛偶联法将 DOX 分别与载体牛血清白蛋白（BSA）及卵清蛋白（OVA）偶联制备免疫抗原（DOX-BSA）和包被抗原（DOX-OVA）。

经 SDS-PAGE 电泳法、紫外可见吸收光谱鉴定，证实人工抗原成功合成，偶联比分别为8．6∶1和3．8∶1。

结果表明建立了一种新的 DOX 抗原合成方法，为进一步制备特异性DOX 抗体和建立检测食品中 DOX 的酶联免疫方法奠定了基础。

%To explore a method for the synthesis and identification of doxycycline (DOX)artificial antigens, DOX artificial antigens were synthesized by glutaraldehyde coupling method between DOX and bovine ser-um albumin (BSA)and ovalbumin (OVA)for preparing immune antigen (DOX-BSA)and envelope anti-gen (DOX-OVA).DOX artificial antigens were identified by UV spectrophotometry and SDS-PAGE.The results confirmed that the DOX artificial antigens were successfully synthesized.The coupling ratios of DOX hapt en and BSA or OVA were 8.6∶1 and 3.8∶1,respectively.In conclusion,this method can be ap-plied for DOX artificial antigen synthesis and provide the basis for the preparation of DOX antibodies and development of DOX immune detection.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2016(037)004【总页数】4页(P67-69,70)【关键词】多西环素;人工抗原;偶联比【作者】米克热木·沙衣布扎提;孟坤杰;王剑【作者单位】新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052;新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052;陕西理工学院生物科学与工程学院，陕西汉中 723001【正文语种】中文【中图分类】S859.7多西环素(doxycycline，DOX)属于常见的四环素类抗菌药，具有高效、长效、广谱等优点，被广泛直接用作治疗或预防性兽药或饲料添加剂，如针对预防治疗沙门菌，大肠埃希菌感染以及猪支原体肺炎等多种感染性疾病[1-3]。