如何区分凋亡细胞与坏死细胞
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如何区分凋亡细胞与坏死细胞凋亡(apoptosis)和坏死(necrosis)都是细胞死亡的两种主要形式。
凋亡是一种受控的细胞死亡过程,而坏死则是一种非受控的细胞死亡过程。
凋亡是细胞根据生物体的需要主动死亡,而坏死则是由于外部压力或损害等因素导致的细胞死亡。
这两种细胞死亡形式具有不同的特征和机制,我们可以通过以下几个方面来区分凋亡细胞和坏死细胞:1.形态学特征:凋亡细胞的形态学特征是细胞体积缩小,胞膜发生凹陷,并形成凋亡小体。
凋亡小体由于细胞核内的染色质凝聚而形成,核内染色质变得致密而有浓缩。
而坏死细胞的形态学特征是细胞体积肿胀,细胞内的各种细胞器失去完整性,胞膜断裂。
此外,坏死细胞还会伴随细胞溶解,释放细胞内容物。
2.细胞腔内过程:凋亡是一种主动的细胞死亡过程,凋亡细胞通常会产生信号分子,引导其他细胞吞噬和清除死细胞。
而坏死是一种被动的细胞死亡过程,由于细胞损伤导致细胞死亡,坏死细胞通常不会引发周围细胞的吞噬和清除反应。
3.细胞死亡信号:凋亡细胞死亡通常与一系列的信号通路有关,这些通路的激活可能受到细胞内外环境的调控,如DNA损伤、激素等。
而坏死细胞死亡通常是由于外部刺激引起的,如机械损伤、化学毒物、热伤害等。
4.细胞死亡机制:凋亡细胞死亡通常通过激活一系列的凋亡激活因子(apoptotic activator)和抑制剂(inhibitor)来实现。
而坏死细胞死亡过程往往与炎症反应相关,包括细胞溶解和细胞内容物的释放。
5.生理意义:凋亡是正常细胞死亡的重要方式,通过调控细胞数量,维持组织器官的结构和功能。
坏死则常常是细胞损伤和疾病的结果,如心肌梗死、脑中风等。
综上所述,凋亡细胞和坏死细胞在外观、形态学特征、细胞死亡机制、信号通路以及生理意义等方面具有明显的差异。
通过对这些方面的观察和分析,我们可以区分凋亡和坏死细胞。
细胞凋亡坏死的区别全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:细胞凋亡和坏死是两种不同的细胞死亡方式,它们在细胞内部发生的过程以及对机体的影响都有所不同。
了解这两种细胞死亡方式的区别对于研究疾病的发生和治疗具有重要意义。
细胞凋亡是一种程序性死亡方式,也被称为程序性细胞死亡。
在细胞凋亡中,细胞会按照一定的程序主动死亡,从而维持组织器官的正常发育和稳态。
细胞凋亡的过程通常包括细胞体积缩小、细胞核凝缩、细胞质内溶酶体的活化及DNA断裂等。
这些特点使得细胞在死亡的过程中能够及时清除自身,避免对周围细胞产生损害。
细胞凋亡在生理上扮演着重要的角色,它不仅可以通过清除受损细胞维持组织和器官的健康状态,还可以调控发育、免疫应答和器官形态等重要生物过程。
与细胞凋亡不同的是,坏死是一种被动的细胞死亡方式。
在细胞坏死中,细胞通常由于外界因素的刺激或内源性损伤导致的生理失调而发生病理性死亡。
细胞坏死的过程通常包括细胞体积膨胀、细胞膜破裂、细胞质溶胶以及细胞内容物泄漏等。
这些变化会导致细胞内部物质向外释放,引发周围组织和器官的炎症反应,从而对机体产生损害。
在病理状态下,细胞坏死常常和炎症、组织坏死及疾病的发生等联系在一起。
细胞凋亡与坏死的区别在于细胞死亡的方式和对机体的影响。
细胞凋亡是一种有序的细胞死亡方式,能够维持组织的稳态和健康。
而细胞坏死则是一种非程序性的细胞死亡方式,会引发炎症反应和对周围组织产生损害。
在研究和治疗疾病的过程中,需要充分理解细胞凋亡和坏死的不同特点,并根据其特点采取不同的治疗策略。
只有深入了解这两种细胞死亡方式的区别,才能更好地保护细胞和维护机体的健康。
第二篇示例:细胞是构成生物体的基本单位,而细胞的凋亡和坏死是两种不同的细胞死亡方式。
在生命活动的过程中,出现了细胞死亡是十分正常且必不可少的现象。
细胞的死亡方式对于生物体的健康和生存至关重要,因此了解细胞凋亡和坏死的区别是很重要的。
细胞凋亡和坏死是两种不同的细胞死亡方式。
细胞凋亡和细胞坏死的区别细胞凋亡和细胞坏死是两种不同的细胞死亡方式,虽然它们都是细胞在生命周期中发生的不可逆的终结过程,但两者在发生机制、特征和生物学意义上存在显著差异。
细胞凋亡细胞凋亡,又称程序性细胞死亡,是一种受控的细胞死亡方式。
在细胞凋亡的过程中,细胞通过内部程序自主进行死亡,不会引起周围细胞的损伤。
细胞凋亡通常涉及一系列复杂的细胞信号通路,如细胞因子、受体、蛋白酶等分子参与其中。
细胞凋亡的表现形式包括细胞体积缩小、核膜破裂、细胞核染色体凝集和DNA 断裂等特征。
此外,细胞凋亡通常伴随着炎症反应程度较轻,不会引发局部组织的炎症反应。
细胞坏死细胞坏死是一种非受控的细胞死亡方式,通常由外部因素引起,如缺氧、毒物作用、物理损伤等。
与细胞凋亡不同,细胞坏死没有完整的信号通路参与,是一种被动的、紊乱的过程。
细胞坏死的表现形式包括细胞体积肿胀、细胞膜破裂、细胞质渗漏和细胞内容物外溢等特征。
细胞坏死还会引起严重的炎症反应,导致周围组织的炎症浸润和破坏。
区别与联系细胞凋亡和细胞坏死在发生机制、特征和生物学意义上有明显的区别。
细胞凋亡是一种主动的、受控的细胞死亡方式,通常发生在生理性或病理性条件下,对维持组织稳态和免疫调控具有重要意义。
而细胞坏死则是一种 passim 的细胞死亡方式,通常与急性炎症和组织损伤相关。
不过,细胞凋亡和细胞坏死之间并不存在绝对的界限,有时候两者也可能同时发生或相互转化。
在一些疾病状态下,细胞凋亡和细胞坏死的失衡可能导致病理性改变,如肿瘤发展、心肌梗死等。
总的来说,细胞凋亡和细胞坏死作为细胞生物学领域的两种基本现象,其区别与联系为我们深入理解细胞死亡的生理与病理过程提供了重要线索。
这也促使我们更深入地研究它们在疾病发生发展中的作用机制,并为相关疾病的治疗和预防提供理论基础。
细胞凋亡(Apoptosis) 是生物界广泛存在的一种现象,与其它的生命现象一样具有同等重要的生理学或病理学意义。
尽管其最终结果也是导致细胞死亡,但其诱导因素、发生机制和过程及意义均明显不同于一般的病理性细胞死亡(即细胞坏死性死亡,简称细胞死亡) 。
细胞凋亡的形态特征与细胞坏死性死亡的形态特征不同。
细胞坏死性死亡是被动的病理性死亡,其形态特征首先是膜通透性增加,细胞外型发生不规则变化,内质网扩张,核染色质不规则移位,进而线粒体及核肿张,溶酶体破坏,细胞膜破裂,胞浆外溢,这种死亡过程常常引起炎症反应。
细胞凋亡则是在某些因素的诱导下,由细胞内在的有规律的机制引起的,是主动的生理性细胞自杀。
其特征是细胞首先变圆,随即与邻近细胞脱离,失去微绒毛,胞浆浓缩,内质网扩张呈泡状并与细胞膜融合,线粒体无明显变化,核染色质浓缩成块并凝聚在核膜周边,胞膜内陷将细胞自行分割为多个有外膜包裹、内涵物不外溢的凋亡小体,后被吞噬细胞或邻周细胞所识别、吞噬。
由于细胞凋亡过程不导致溶酶体破坏及胞膜破裂,没有细胞内容物外泄,故不引起炎症反应,在生理条件下,生物体内细胞存活与死亡是由自身发育阶段提供的遗传信息,或由邻近细胞和其微环境提供的信号决定的,其中包括细胞相互接触提供的信号以及周围环境中活性物质、激素等。
这些刺激信号的增加或减少调节着细胞产生和凋亡,维系着机体细胞的有序状态细胞凋亡的检测细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。
细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。
一、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征,人细胞凋亡形态学检测方法。
细胞凋亡( apoptosis)的命名主要是根据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或树叶散落般的形态学特征。
目前对细胞凋亡的认识不断得到深化,检测凋亡细胞的方法也逐渐增多,但形态改变仍是确定细胞凋亡的最可靠的方法。
一步一步教你读流式图:凋亡和坏死的区别2008-08-05 00:00 来源:丁香园点击次数: 841 关键词:流式图调亡坏死区别分享到:•收藏夹•腾讯微博•新浪微博•开心网下图为坏死图。
坏死的位于G0/G1峰前的峰形为从左至右的反抛物线形。
如下:而APOptosis则是一个较为对称的峰。
如下:.而有时凋亡和坏死同时存在。
如下图:蓝色的为apo峰(第一个三角),而白色的为坏死峰。
第二个三角为G0/G1峰。
第三个为异倍体G0/G1峰。
实际上,很多时候我们诱导的凋亡峰不像上图那样明显,如下:原因要从实验的原理开始,到细胞状态,实验步骤,试剂效能等,一一分析。
例如,某因素诱导的凋亡需要较长时间,而我们培养时间还没到,就有可能不出凋亡峰;或是在早期凋亡是用PI染色做SUB-G 1,凋亡率会不高,而用API法则更好地测出其凋亡率。
编辑: famsking 一步一步教你读流式图:凋亡诱导2008-08-05 00:00 来源:丁香园点击次数: 978 关键词:流式图教程调亡诱导分享到:•收藏夹•腾讯微博•新浪微博•开心网先发一张关于PI染色的uv诱导凋亡的图片,这是con:这是诱导凋亡的流式图,我们称之为sampl:那么怎么看这两张图呢?首先,我们要知道各个参数的意义。
这在流式原理中有介绍。
然后,我们要知道各个图之间的联系。
大家看一下下面的图。
R1主要代表粘连细胞R2主要代表G2/M期细胞R3主要代表G0/G1期细胞R4主要代表s期细胞R5主要代表凋亡细胞“主要”是因为大家可以看到设的gate后各个gate中的细胞有位置重叠。
FL2-W/FL2-A和FL2-A/COUNT之间的关系。
这两张图的最大区别在于G0/G1期前面的亚G1峰。
这个峰就是FL2-W/FL2-A图上的左下方的“小尾巴”,小尾巴越大,SUB-G1峰就越高。
也就是说凋亡的越多。
当然这需要跟整张图比较,就是选取mark 后测量其gate%。
编辑: famsking 一步一步教你读流式图:表型CD4CD82008-08-05 00:00 来源:丁香园点击次数: 927 关键词:表型CD4CD8流式图教程分享到:•收藏夹•腾讯微博•新浪微博•开心网大鼠外周血T细胞CD亚群CD4/CD8比值所做的流式分析图右上角的图片是CD4和CD8的双荧光检测。
细胞死亡的类型
细胞死亡是指细胞在某些状况下失去生命功能,不再执行正常生理功能而逐渐消失的过程。
细胞死亡可分为多种不同类型:
1. 坏死:是因为机体外部或内部原因导致的细胞死亡,如物理损伤、缺血、中毒等,坏死细胞通常会导致炎症反应。
2. 凋亡:是细胞自身程序性死亡的一种方式,凋亡细胞通常会被其他细胞吞噬,而不会导致炎症反应。
凋亡对维持正常组织的结构和功能非常重要。
3. 前凋亡:是凋亡前的一个状态,细胞在此状态下可以被保护和修复。
前凋亡是细胞死亡的防线,如果前凋亡失败,细胞就会进入凋亡状态。
4. 亡:是指细胞在凋亡过程中发生的自噬现象。
在细胞凋亡过程中,细胞会把自己的组织结构分解,并释放出杀死自己的物质,最终导致细胞死亡。
不同类型的细胞死亡对于机体的影响也不同,因此对于细胞死亡的研究非常重要,有助于更好地认识和治疗各种疾病。
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述坏死和凋亡的区别
坏死和凋亡是两个常用于描述生物组织或细胞的词语,它们之间存在一些区别。
1. 坏死(Necrosis):坏死是指由于细胞受到严重损伤或死亡而引起的组织的不可逆转性损害。
坏死通常是病理过程中的一部分,由多种因素引起,如缺血、化学物质暴露、感染或损伤等。
在坏死过程中,受损细胞会发生明显的形态和结构上的变化,细胞膜破坏,细胞内部的物质会泄漏出来,引发炎症反应。
常见的坏死形式有坏死老化、干酪样坏死、脂肪坏死等。
2. 凋亡(Apoptosis):凋亡是一种机制性的、有规律的、受控的细胞死亡过程。
它是细胞生命周期中的一部分,并在正常生理过程中发挥重要作用,如胚胎发育、免疫系统调节、组织维持和调整等。
凋亡通常对个体或组织是有利的,它确保了细胞数量的平衡。
在凋亡过程中,细胞会发生收缩和凝结,核DNA出现断裂,胞质内部形成凋亡小体,并最终被吞噬和清除。
凋亡可以被认为是一种正常细胞死亡的方式。
因此,坏死和凋亡之间的关键区别在于,坏死是受到严重的损伤或病理因素引起的不可逆转的细胞死亡,而凋亡是一种受控的、有规
律的、随着正常生理过程发生的细胞死亡方式。
如何区分凋亡细胞与坏死细胞,细胞坏死与细胞凋亡在形态学上如何鉴别采用一些凋亡细来胞检测方自法,因为要区bai分,所以只能从形态学方du面入手.如细胞核染色zhi,用dapi,观察细胞核形dao态:凋亡细胞核固缩,晚期有凋亡小体凋亡早期可以用双重染色:膜不通透的染料和通透性染料.希望我的回答能帮到你,望采纳!如何区分凋亡细胞与坏死细胞采用一些凋亡细胞检测 ... ,因为要区分,所以只能从形态学方面入手.如细胞版核染色权,用dapi,观察细胞核形态:凋亡细胞核固缩,晚期有凋亡小体凋亡早期可以用双重染色:膜不通透的染料和通透性染料.希望我的回答能帮到你,望采纳!细胞凋抄亡是由基因所决袭定的细胞自动结束生命的过程,由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程式性调控,所以也常常被称为细胞程式设计性死亡。
而细胞坏死则是在种种不利因素的影响下,由于细胞正常代谢活动受损或中断引起的细胞损伤和死亡。
对于生物体来说,细胞调亡是有积极意义的,对于多细胞生物体完成正常发育,维持内部环境的稳定,以及抵御外界各种因素的干扰都起著非常关键的作用。
如,被病原体感染的细胞的清除,就是通过细胞凋亡来完成的。
而细胞坏死对对机则是不利的。
如何区分凋亡细胞与坏死细胞细胞凋亡是由基因所决定的细胞自动结束生命的过程,由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程式性调控,所以也常常被称为细胞程式设计性死亡。
而细胞坏死则是在种种不利因素的影响下,由于细胞正常代谢活动受损或中断引起的细胞损伤和死亡。
对于生物体来说,细胞调亡是有积极意义的,对于多细胞生物体完成正常发育,维持内部环境的稳定,以及抵御外界各种因素的干扰都起著非常关键的作用。
如,被病原体感染的细胞的清除,就是通过细胞凋亡来完成的。
而细胞坏死对对机则是不利的。
采用一些凋亡细胞检测 ... ,因为要区分,所以只能从形态学方面入手.如细胞核染色,用dapi,观察细胞核形态:凋亡细胞核固缩,晚期有凋亡小体凋亡早期可以用双重染色:膜不通透的染料和通透性染料.细胞坏死与细胞凋亡在形态学上如何鉴别?坏死形态学特征-膜完整性丧失,胞浆和线粒体膨胀,全细胞裂解凋亡形态学特征-胞膜出芽,但保持完整,染色体聚集在核膜周边,胞浆收缩、细胞核凝集,最后细胞**为凋亡小体,bcl-2家族蛋白导致线粒体膜通透性增加坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。
细胞凋亡(Apoptosis) 是生物界广泛存在的一种现象,与其它的生命现象一样具有同等重要的生理学或病理学意义。
尽管其最终结果也是导致细胞死亡,但其诱导因素、发生机制和过程及意义均明显不同于一般的病理性细胞死亡(即细胞坏死性死亡,简称细胞死亡)。
细胞凋亡的形态特征与细胞坏死性死亡的形态特征不同。
细胞坏死性死亡是被动的病理性死亡,其形态特征首先是膜通透性增加,细胞外型发生不规则变化,内质网扩张,核染色质不规则移位,进而线粒体及核肿张,溶酶体破坏,细胞膜破裂,胞浆外溢,这种死亡过程常常引起炎症反应。
细胞凋亡则是在某些因素的诱导下,由细胞内在的有规律的机制引起的 ,是主动的生理性细胞自杀。
其特征是细胞首先变圆,随即与邻近细胞脱离,失去微绒毛,胞浆浓缩,内质网扩张呈泡状并与细胞膜融合,线粒体无明显变化 ,核染色质浓缩成块并凝聚在核膜周边,胞膜内陷将细胞自行分割为多个有外膜包裹、内涵物不外溢的凋亡小体,后被吞噬细胞或邻周细胞所识别、吞噬。
由于细胞凋亡过程不导致溶酶体破坏及胞膜破裂,没有细胞内容物外泄,故不引起炎症反应,在生理条件下,生物体内细胞存活与死亡是由自身发育阶段提供的遗传信息,或由邻近细胞和其微环境提供的信号决定的,其中包括细胞相互接触提供的信号以及周围环境中活性物质、激素等。
这些刺激信号的增加或减少调节着细胞产生和凋亡,维系着机体细胞的有序状态细胞凋亡的检测细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。
细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。
一、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征,人细胞凋亡形态学检测方法。
细胞凋亡(apoptosis)的命名主要是根据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或树叶散落般的形态学特征。
目前对细胞凋亡的认识不断得到深化,检测凋亡细胞的方法也逐渐增多,但形态改变仍是确定细胞凋亡的最可靠的方法。
光学显微镜观察凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染,形成致密质块,有时可碎裂。
在HE染色的组织切片中细胞积缩小.胞质致密、嗜酸性染色增强,并可形成凋亡小体。
在组织中凋亡细胞以分散单个形式存在,凋亡细胞与周围细胞分离,不引起炎症反应。
检测方法:细胞涂片或组织石蜡切片作HE染色或Giemsa染色,在高倍物镜下观察凋亡细胞的形态改变,结合显微镜测量工具可作凋亡计数。
本方法简便易行,但在细胞密集的组织中对于改变不典型的细胞判断较困难,常缺乏较为特征的指标,具有较强的主观性,重复性差。
本方法.可用于凋亡现象的初步观察,作为分析指标之一。
视频时差显微技术(videotime-lapsemicroscopy)本方法用于细胞培养,通过相差显微镜可动态观察细胞凋亡的变化过程,尤其是观察细胞表和外形的变化。
凋胞与基质分离,胞体变圆、收缩、出泡,有的细胞拉长,出现钉状突起,持续数小时后细胞膜破裂,细胞溶解,通过连续观察,本方法可检测培养基中凋亡细胞,但不能用于病理组织。
检测方法:收集2x105细胞/ml培养,置于多空培养板,加入凋亡诱导剂,在带有自动摄像装置的相差显微镜下观察凋亡细胞的动态改变,每隔30秒作序列摄影,连续24小时。
如同时进行荧光染色,可参荧光显微镜下观察和摄影。
电子显微镜观察凋亡细胞的典型形态改变如胞质的固缩,染色质浓缩成半月板或帽状附于核膜,核的碎裂和凋亡小体形成等,在透射电镜下得到最佳体现。
为凋亡细胞判定提供了最可靠的依据。
本方法的缺点是样品制作过程较复杂,且仪器、设备的费用昂贵,较难广泛大量开展。
由于样品范围局限,在凋亡数较少时需进行大量的观察才能观察到典型的凋亡改变。
检查方法:透射电镜标本经戊二醛和饿酸双重固定,丙酮脱水,环氧树脂包埋,超薄切片,醋酸枸橼酸电子重染色,透射电镜观察。
扫描电镜标本经戊二醛和饿酸双重固定,乙醇逐级脱水,CO2临界点干燥,真空喷金,扫描电镜观察。
一、检测细胞膜成分变化的AnnexinV 联合PI法磷脂酰丝氨酸外翻分析( AnnexinV 法)原理:磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS )正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中(图3)。
Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。
将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶(propidineiodide,PI) 是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
因此将Annexin-V 与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
方法1悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ulBindingBuffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ulBindingBuffer,立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过1h),同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。
2贴壁培养的细胞染色:先用0.25%的胰酶消化,洗涤、染色和分析同悬浮细胞。
3爬片细胞染色:同上,最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。
应用价值:细胞发生凋亡时,膜上的PS外露早于DNA断裂发生,因此AnnexinV联合PI染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏。
又AnnexinV联合PI染色不需固定细胞,可避免PI染色因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法因固定出现的DNA 片段丢失。
因此, Annexin V联合PI法更加省时,结果更为可靠,是目前最为理想的检测细胞凋亡的方法。
结果:细胞内氧化还原状态改变的检测:细胞色素 C的定位检测细胞色素C作为一种信号物质,在细胞凋亡中发挥着重要的作用。
正常情况下,它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中,凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,结合Apaf-1(apoptotic proteaseactivatingfa ctor-1 )后启动caspase级联反应:细胞色素C/Apaf-1复合物激活caspase-9,后者再激活caspase-3和其它下游caspase。
细胞色素C氧化酶亚单位Ⅳ(cytochromecoxidasesubunit Ⅳ:COX4)是定位在线粒体内膜上的膜蛋白,凋亡发生时,它保留在线粒体内,因而它是线粒体富集部分的一个非常有用的标志。
方法:ApoAlertTMCellFractionationKit 不用超离心,可从凋亡和非凋亡细胞中快速有效分离出高度富集的线粒体部分,再进一步通过Western杂交用细胞色素C抗体和COX4抗体标示细胞色素C和COX4的存在位置,从而判断凋亡的发生。
三、线粒体膜势能的检测原理:线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位DYmt的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体 DYmt崩溃,则细胞凋亡不可逆转。
线粒体跨膜电位的存在,使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123 、 3 ,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6 ( 3 )] 、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanineiodide[JC-1]、Tetramethylrhodaminemethylester(TMRM)等可结合到线粒体基质,其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
方法:将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine123 (1mM)或终浓度为DiOC6(25nM),JC-1(1mM),TMRM(100nM),37°C平衡30min,流式细胞计检测细胞的荧光强度。
结果判定:经LPS刺激后的细胞,绿色荧光强度增加,意味着膜电位下降,细胞发生凋亡。
意义:该法通过对细胞生理指标的监测检测来反映细胞凋亡,结果直观、灵敏四、DNA片断化检测、DNA凝胶电泳(一)、检测原理细胞凋亡过程中 ,可发生特异性级联生化反应,其中最具特色的是内源性核酸内切酶的激活此酶可作用于连接DNA的核小体间区域,DNA链被切割成180~200bp 或其整倍数的片断抽提DNA, 经琼脂糖电泳可见梯状电泳图谱。
而坏死细胞的 DNA断裂点为无特征的杂乱片断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。
方法:1,DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡细胞2,获取凋亡细胞3,抽提DNA4,琼脂糖凝胶电泳5,紫外灯下观察结果. .(二)结果判断正常活细胞 DNA 电泳出现阶梯状(LADDER) 条带;坏死细胞DNA 电泳类似血抹片时的连续性条带。
用途:此方法灵敏性不高,大量凋亡细胞同时存在时才出现典型的结果,且只能被用于细胞群体,不能用于组织的原位检测。
凋亡细胞DNA含量的流式细胞计分析原理:由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。
研究表明,用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色,其DNA可染性降低。
许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
方法:收集细胞?70%冷乙醇(inPBS)4°C固定过夜?PBS洗涤,1000rpm′10min?RNaseA(0.5mg/ml)37°C消化30min?PI(50mg/ml)染色,室温避光15min?FACScan分析DNA亚二倍体的形成及细胞周期的变化。
优点:敏感度高,适合于检测少量样本,小部分凋亡细胞。
如临床活组织检测。
三、酶联免疫吸附法( ELISA)核小体测定原理:凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。
核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成,可由 ELISA 法检测。
检测步骤 1、将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体;2、在微定量板上吸附组蛋白体;3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合;4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合‘4、加酶的底物,测光吸收制。
用途该法敏感性高,可检测5*100/ml 个凋亡细胞。
可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。
该法不需要特殊仪器,适合基层工作,但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。