最新不规则抗体筛选分析教学讲义PPT
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不规则抗体筛选一、试验原理:利用不规则抗体筛选红细胞试剂对血清进行血型不规则抗体检测。
在任何介质中,只要任何单组或多组筛选红细胞产生凝集或溶血反应,则试验为阳性,表明血清中存在与筛选细胞中抗原相对应的抗体。
若抗筛试验为阳性,建议用谱细胞来检测抗体特异性。
一、注意事项:1. 建议在使用血型卡前重新离心后再应用。
2. 若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡时,不可使用。
3. 撕开凝胶卡的封口膜时,不能用力过猛,以免造成凝胶微孔间的交叉污染。
4. 红细胞悬液的浓度为0.5~0.8%,浓度过高或过低会影响检测结果。
5. 血浆标本必须充分离心去除纤维蛋白,否则会在微柱凝胶中阻止红细胞沉淀,呈现假阳性反应。
6. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象,强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应,也不排除其他原因所致溶血,一定要认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。
7. 某些药物、疾病可导致正定型结果弱阳性反应或正反定型不相符,应进一步检查以明确原因。
8. 溶血性疾病、巨球蛋白血症、输注大分子血浆扩容剂如右旋糖酐等可能会影响实验结果。
9. 人源血液样本存在潜在的传染性,凝胶卡使用后按医疗生物垃圾废弃物处理。
二、设备及材料试剂:1、LB-3000医用低速离心机2、LB-C02-1免疫微柱孵育器3、加样枪:10μl, 25μl, 50μl 和 1000μl4、广谱抗人球蛋白卡(抗-IgG+C3d)5、不规则抗体筛选红细胞试剂三、操作流程:1、取广谱抗人球蛋白卡(抗-IgG+C3d)一张,按规定检查符合要求后,进行标记(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,受检者姓名或编码)。
2、红细胞悬液配制:不规则抗体筛选红细胞悬液:取不规则抗体筛选红细胞试剂中的I号、II号、III号红细胞,稀释4倍(1份红细胞和3份生理盐水)。
3、加样:①第1,2,3及第6孔加入受检者红细胞悬液50μl。
②第4孔加入A1型反定型试剂红细胞悬液50μl③第5孔加入B型反定型试剂红细胞悬液50μl。