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利用乳酸菌制作酸奶实验报告一、引言酸奶是一种含有大量乳酸菌的发酵乳制品，具有丰富的营养价值和益生菌功能。
利用乳酸菌制作酸奶是一种简单且常见的实验。
本实验旨在通过观察和分析乳酸菌在发酵过程中的作用，了解酸奶的制作原理和过程。
二、实验材料和方法1. 实验材料：- 牛奶：新鲜牛奶500ml- 酸奶菌种：包装上标明含有活性乳酸菌的酸奶100ml- 酸奶容器：玻璃或陶瓷容器2. 实验方法：- 将牛奶倒入锅中，加热至70℃，并保持在此温度下加热10分钟，以杀灭可能存在的有害细菌。
- 将加热后的牛奶冷却至40℃左右，此时牛奶已经变凉但仍然能感觉到温度。
- 取出一小部分冷却后的牛奶，倒入酸奶菌种中，进行搅拌均匀。
- 将搅拌好的菌种倒入剩余的牛奶中，进行充分搅拌。
- 将含菌奶液倒入酸奶容器中，盖紧盖子。
- 将酸奶容器放入恒温箱或保温箱内，保持在温度约37℃的环境中静置发酵8小时。
- 发酵结束后，将酸奶冷藏2小时以上即可。
三、实验结果和讨论在实验过程中，我们使用了乳酸菌作为发酵的菌种，通过观察发现，经过8小时的发酵，牛奶发生了明显的变化，变成了酸味浓郁的酸奶。
乳酸菌是一种有益菌，通过发酵作用，将牛奶中的乳糖转化为乳酸。
乳酸的产生使酸奶呈现出酸性的特点，同时也增加了酸奶的口感和保质期。
在发酵过程中，温度的控制是十分重要的。
乳酸菌需要在适宜的温度下进行生长和繁殖，一般在37℃左右是最适宜的温度。
过高或过低的温度都可能影响乳酸菌的活性和发酵效果。
发酵时间也是影响酸奶质量的重要因素。
发酵时间过短，乳酸菌的数量和活性可能不足，酸奶的口感和滋味会受到影响。
而发酵时间过长，乳酸菌可能过度繁殖，导致酸奶过于酸涩。
四、实验结论通过本实验，我们成功利用乳酸菌制作了酸奶。
乳酸菌在酸奶制作过程中起到了关键的作用，通过发酵作用将牛奶中的乳糖转化为乳酸，使酸奶具有了酸性的特点和丰富的营养。
同时，适宜的温度和发酵时间也是制作高质量酸奶的重要因素。
第1篇一、实验目的本次实验旨在了解酸奶发酵的基本原理和制作方法，掌握酸奶发酵过程中各种因素对发酵效果的影响，提高食品发酵工艺水平，为今后的食品加工提供理论依据。
二、实验原理酸奶是以牛乳或羊乳为原料，加入乳酸菌进行发酵而成的一种乳制品。
乳酸菌在发酵过程中，将乳糖转化为乳酸，使乳液pH降低，导致酪蛋白凝固，形成凝胶状酸奶。
发酵过程中，乳酸菌的代谢产物还能赋予酸奶独特的风味。
三、实验材料1. 原料：纯牛奶、白糖、发酵剂（乳酸菌粉）2. 仪器：发酵瓶、温度计、电热恒温水浴锅、天平、计时器、无菌操作台、无菌操作工具等四、实验步骤1. 配制发酵剂：将乳酸菌粉按照说明书的比例加入适量白糖，用无菌水溶解，搅拌均匀。
2. 牛奶预热：将纯牛奶加热至40-45℃，保持温度恒定。
3. 添加发酵剂：将溶解好的发酵剂均匀地加入到预热后的牛奶中，充分搅拌均匀。
4. 分装：将混合好的牛奶分装到发酵瓶中，每个发酵瓶装满，封口。
5. 发酵：将发酵瓶放入恒温箱中，保持40-45℃的温度，发酵4-6小时。
6. 冷藏：将发酵好的酸奶取出，放入冰箱中冷藏24小时。
7. 品尝与鉴定：取出冷藏好的酸奶，品尝其口感、酸度、香气等，对酸奶的品质进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 发酵效果：发酵过程中，酸奶呈现半凝固状，酸度适中，具有浓郁的乳酸菌香气。
2. 发酵时间对酸奶品质的影响：实验中发现，发酵时间过长或过短都会影响酸奶的品质。
发酵时间过短，酸奶酸度不足，口感不佳；发酵时间过长，酸奶酸度过高，口感过酸。
3. 发酵温度对酸奶品质的影响：发酵温度对酸奶的品质有较大影响。
温度过高，会导致乳酸菌死亡，发酵效果不佳；温度过低，发酵速度慢，酸奶品质不稳定。
4. 发酵剂添加量对酸奶品质的影响：发酵剂添加量对酸奶的品质有直接影响。
添加量过少，发酵效果不佳；添加量过多，会导致酸奶酸度过高，口感过酸。
六、实验结论1. 酸奶发酵过程中，温度、发酵时间、发酵剂添加量等因素对酸奶品质有显著影响。
乳酸菌发酵酸奶实验报告一、实验目的通过实验使同学们对酸奶从原材料到成品生产的全过程以及生产组织管理等知识，在生产现场将科学的原理知识加以验证、深化、巩固和充实。
并培养学生进行调查、研究、分析和解决工程实际问题的能力。
激发学生向实践学习和探索的积极性，为今后的学习和将从事的技术工作打下坚实的基础。
二、实验原理酸奶是以乳为原料(或加入蔗糖)，杀菌后经乳酸发酵而制成，且具有细腻的凝块和特别芳香风味的乳制品，也叫酸凝乳或酸牛奶，是发酵乳制品。
酸奶可以是牛乳在自然状态下进行发酵，也可以经巴氏杀菌或超高温瞬时灭菌后，加入乳酸菌发酵而成。
现在生产中采用将原料乳灭菌后加入乳酸菌的方法生产酸奶。
因为在自然状态下进行发酵会有杂菌污染，造成酸奶出现异味或发酵失败。
酸奶发酵过程中，原料乳中的乳糖在乳酸菌的作用下转化成乳酸，随着乳酸的形成，溶液的pH逐渐达到酪蛋白的等电点(酪蛋白是乳中的一种蛋白质，等电点时pH为4.64.7)，使酪蛋白聚集沉降，从而形成半固体状态的凝胶体物质。
三、实验材料纯牛奶、盒装酸奶、白糖、勺子、一次性杯子、保鲜膜、筷子、恒温箱、水浴锅四、实验步骤①消毒。
将容器（一次性杯子等）、搅拌的工具(勺或筷子)放在超净工作台上，用紫外线对其进行杀菌消毒。
牛奶如果是新开封的，本身已消毒得很好，可以不用煮开消毒，可直接放在40℃的水浴锅中预热。
若是鲜奶一定要先煮沸消毒，待温度降到40℃左右以不烫手为宜。
②接种。
将温牛奶从水浴锅中拿出，在超净工作台接种。
准备工作完成后（用酒精对手进行消毒处理），先将100毫升纯牛奶倒入一次性杯子中，再在往其中加入酸奶（一般比例为5:1-10:1），最后加入6克白糖。
原料加完后用筷子搅拌均匀，用保鲜膜将杯子全面封紧。
③前发酵。
放恒温箱中(40℃左右)。
一般发酵8一10小时即可，可以根据自己的口味来调整发酵时间，发酵时间越长酸度越大。
④后发酵。
刚做好的酸奶酸味比较淡，口感不够好，应将其放入冰箱冷藏。
一、实验目的1. 了解酸奶制作的基本原理和过程。
2. 掌握乳酸菌发酵的基本操作步骤。
3. 学习如何通过发酵工艺改善乳制品的品质。
4. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理酸奶是一种以鲜奶为原料，通过乳酸菌发酵制成的乳制品。
在发酵过程中，乳酸菌将乳糖转化为乳酸，降低牛奶的pH值，使牛奶中的蛋白质凝固，形成具有独特风味和营养价值的酸奶。
本实验采用纯牛奶为原料，接种乳酸菌进行发酵。
三、实验材料1. 原料：纯牛奶（全脂或低脂）、白糖、发酵好的酸奶（作为菌种）。
2. 仪器：恒温培养箱、量筒、烧杯、搅拌棒、保鲜膜、计时器等。
3. 试剂：乳酸菌发酵剂、无菌水。
四、实验步骤1. 准备阶段：- 称取100克纯牛奶和10克白糖，加入烧杯中。
- 将烧杯放入70℃的水浴锅中加热，使糖完全溶解。
2. 杀菌阶段：- 将加热后的牛奶冷却至室温（约25℃）。
- 取一小勺发酵好的酸奶，加入牛奶中，搅拌均匀。
3. 发酵阶段：- 将混合好的牛奶放入恒温培养箱中，保持43℃的恒定温度，发酵8-10小时。
4. 冷却阶段：- 发酵完成后，将酸奶取出，室温下冷却至室温。
5. 后处理阶段：- 将冷却后的酸奶倒入无菌容器中，加入少量白糖，搅拌均匀。
- 使用保鲜膜封好容器口，放入冰箱中冷藏。
五、实验结果与分析1. 感官评价：- 酸奶色泽均匀，呈乳白色或微黄色。
- 酸奶口感细腻，具有浓郁的乳酸风味。
- 酸奶质地均匀，无沉淀物。
2. 理化指标：- 酸度：pH值为4.5-4.7。
- 蛋白质含量：约2.5-3.0克/100克。
- 脂肪含量：约2.0-2.5克/100克。
3. 发酵过程分析：- 在发酵过程中，乳酸菌将乳糖转化为乳酸，降低牛奶的pH值，使牛奶中的蛋白质凝固，形成酸奶。
- 发酵过程中，乳酸菌的生长和代谢产物对酸奶的品质有很大影响。
适当控制发酵时间和温度，可以改善酸奶的口感和品质。
六、实验心得1. 通过本次实验，我了解了酸奶制作的基本原理和过程，掌握了乳酸菌发酵的基本操作步骤。
乳酸菌制作酸奶实验报告-回复本实验旨在了解乳酸菌的生长与繁殖能力，并通过制作酸奶的实验，探究乳酸菌在酸奶发酵过程中所起的作用。
实验原理：乳酸菌是一种在酸性环境中繁殖的细菌，其代谢过程中产生乳酸，从而使周围环境酸化。
在鲜牛奶中加入乳酸菌培养液后，乳酸菌能够利用共生和竞争优势，稳定地繁殖，并在发酵过程中转化牛奶中的乳糖为乳酸。
实验材料：1. 鲜牛奶2. 乳酸菌培养液（含乳酸菌的培养基）3. 温度计4. 酸度计5. 培养皿、烧杯、玻璃棒、过滤纸等实验器材实验步骤：1. 准备工作：将乳酸菌培养液放置于恒温箱中以保持温度在37左右，同时将鲜牛奶保持在室温下。
2. 实验前准备：清洗实验器材，确保无杂质，以免对实验结果产生干扰。
3. 取适量的鲜牛奶倒入烧杯中，并使用温度计测量其温度。
4. 将烧杯中的牛奶放入恒温箱中，并将温度调节至37，保持10分钟，以使牛奶达到合适的发酵温度。
5. 在此过程中，取一片过滤纸，带有无菌的玻璃棒，在乳酸菌培养液上涂取少量的乳酸菌。
6. 将乳酸菌培养液中的乳酸菌均匀涂抹在整个培养皿的表面上。
7. 从恒温箱中取出发酵温度调节好的牛奶烧杯并将其放置在实验台上。
8. 将涂有乳酸菌的培养皿打开，并轻轻按压其表面，将培养皿中的乳酸菌涂抹到鲜牛奶中。
9. 使用酸度计测量鲜牛奶的pH值，并记录下初步的酸度。
10. 将涂有乳酸菌的培养皿盖好，将其放入恒温箱中，保持温度在37左右。
11. 在实验过程中，每隔一段时间，取出培养皿，使用酸度计测量鲜牛奶的pH值，并记录下每个时间点的酸度变化。
12. 持续观察培养皿中是否有乳酸菌的生长，是否有酸奶的酸甜味出现，以及酸奶的质地是否发生变化等实验现象。
13. 实验结束后，整理数据并制作实验报告。
实验结果：通过实验观察，我们发现在经过一段时间的培养后，酸奶的酸度有逐渐增加的趋势。
同时，酸奶中逐渐出现了典型的酸奶酸甜味和独特的质地。
这些结果都表明了乳酸菌在酸奶发酵中起到了重要作用。
乳酸菌制作酸奶实验报告实验报告：乳酸菌制作酸奶一、实验目的通过实验了解乳酸菌发酵原理，掌握酸奶的制作方法，培养实践操作能力。
二、实验原理乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的统称。
这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性。
在食品工业中，乳酸菌是重要的发酵微生物，它能够将碳水化合物发酵成乳酸，因而得名。
酸奶就是由牛奶经过乳酸菌发酵而制成的。
通过乳酸菌发酵，牛奶中的糖类、蛋白质和脂肪等营养成分在微生物的作用下发生一系列变化，产生具有特殊风味的酸奶。
三、实验材料与器具1. 实验材料：纯牛奶、乳酸菌发酵粉2. 实验器具：酸奶机、温度计、烧杯、搅拌勺、漏斗、纱布四、实验步骤1. 准备材料：将纯牛奶倒入烧杯中，加入适量的乳酸菌发酵粉，搅拌均匀。
2. 加热牛奶：将烧杯放入酸奶机中，设置温度为42℃，加热牛奶至适宜的温度。
3. 恒温发酵：保持恒温42℃进行发酵，时间约为6-8小时。
4. 冷藏凝固：发酵完成后，将酸奶放入冰箱中冷藏凝固。
5. 装瓶：将凝固好的酸奶装入准备好的瓶中。
6. 保存：将酸奶放置在4℃左右的冷藏环境中保存。
五、实验结果与分析经过乳酸菌发酵和恒温发酵，我们成功制作出了酸奶。
酸奶质地细腻，口感酸甜可口，具有乳酸菌特有的香味。
在实验过程中，我们需要注意以下几点：1. 选择优质的乳酸菌发酵粉，以保证酸奶的质量和口感。
2. 控制好加热温度和发酵时间，以保证乳酸菌的活性得到充分发挥。
3. 注意卫生，避免杂菌污染，以保证酸奶的品质安全。
4. 在冷藏凝固过程中，要保持适当的温度和时间，以保证酸奶的口感和质地。
六、结论与建议通过本次实验，我们成功掌握了乳酸菌制作酸奶的方法，了解到了乳酸菌发酵的原理和操作要点。
为了更好地制作出口感和质量更佳的酸奶，我们建议在实验中注意以下几点：1. 选择新鲜的牛奶作为原料，以保证酸奶的营养价值和口感。
2. 根据个人口味和需求，适当调整乳酸菌发酵粉的用量和发酵时间。
乳酸菌制作酸奶实验报告
实验目的：探究乳酸菌在酸奶中的作用及其制作过程。
实验材料：
1. 牛奶（500ml）
2. 酸奶（含活性乳酸菌，适量）
3. 温度计
4. 温度控制器（加热作用）
5. 高温消毒锅
6. 试管
7. 试管架
8. 高压锅
9. 餐具消毒液
实验步骤：
1. 用餐具消毒液清洗干净所有实验用具，以确保实验环境的卫生。
2. 500ml牛奶倒入高温消毒锅中，加热至85℃度，持续加热五分钟，杀灭牛奶中
的细菌并破坏酶活性。
3. 关闭加热，将牛奶放入高压锅中，加压三分钟，提高牛奶温度快速降低。
4. 等待牛奶降温至45℃左右，向其中加入适量的酸奶，搅拌均匀，将乳酸菌注入。
5. 将搅拌均匀的牛奶倒入试管中，放入试管架上，放入温度为45℃的温箱中，保持30分钟。
6. 取出试管，观察牛奶的凝固情况和酸奶的味道，记录观察结果。
实验结果：
1. 实验所得酸奶，状如凝固状、细腻黄白色，味道酸甜。
2. 实验中所用酸奶倒入温度为45℃的牛奶中，乳酸菌开始进行发酵作用，使牛奶中的乳糖转化为乳酸，从而使牛奶变酸、凝固。
实验结论：
1. 乳酸菌在酸奶制作过程中起到了关键的作用，通过发酵作用使牛奶变酸、凝固。
此过程中，乳酸菌将牛奶中的乳糖转化为乳酸。
2. 酸奶的制作过程需要控制好温度，确保温度在适宜的范围内进行。
实验讨论：
1. 实验中未加入其他添加剂如糖、果酱等，所得酸奶只有酸甜味，如果希望添加其他口味，可以在酸奶制作完成后再进行添加。
2. 实验中所得酸奶为自制酸奶，所以活性乳酸菌的含量较高，有助于促进肠道健康。
乳酸菌制作酸奶实验报告一、实验目的通过本实验，学生将学习如何利用乳酸菌制作酸奶，并了解酸奶的制作原理和过程。
还可以了解乳酸菌对健康的好处，提高对酸奶的认识和了解，从而促进学生发展健康的饮食习惯。
二、实验原理酸奶是将乳品加热杀菌后，接种乳酸菌，使之在一定温度下发酵而得到的。
乳酸菌是一种对人体有益的活性乳酸菌，有益于促进肠道蠕动，改善肠内环境，促进消化吸收。
三、实验器材和试剂1. 牛奶2. 乳酸菌粉3. 温度计4. 玻璃容器5. 锅6. 搅拌勺7. 水8. 灭菌布四、实验步骤1. 将适量牛奶倒入锅中加热，使其达到85℃左右，保持5分钟，以杀灭牛奶中的细菌。
2. 将煮沸的牛奶倒入玻璃容器中，等待其冷却至40℃左右。
3. 将乳酸菌粉均匀撒在牛奶中，用搅拌勺搅拌均匀。
4. 将搅拌均匀的混合物倒入玻璃容器中，盖上盖子，用灭菌布包裹。
5. 将包裹好的玻璃容器放入水中，水温保持在40℃左右。
6. 在25-30℃温度下静置8-10小时，直至酸奶凝固。
五、实验注意事项1. 操作时注意卫生，保持实验器皿、试剂的干净和无菌。
2. 在发酵的过程中要保持温度适宜，不可受到外界环境的影响。
3. 搅拌均匀是为了使乳酸菌充分与牛奶混合，有利于发酵。
4. 注意使用温度计测量温度，确认温度不超出40℃。
六、实验结果与分析经过8-10小时的发酵，酸奶在适宜温度下已经凝固，表现出光滑细腻的状态。
通过显微镜观察可以看到其中充满了成堆的乳酸菌。
七、实验结论本次实验中，通过添加乳酸菌粉在牛奶中，经过恰当的温度、时间条件下，成功制取了酸奶。
酸奶中的乳酸菌对人体有益，能促进肠道蠕动，改善肠内环境，对人体健康极为有益。
通过本次实验，增加了同学们对制作酸奶的了解，也促进了对酸奶的消费。
八、实验拓展1. 可以尝试添加不同的水果或坚果进行调味，制作水果酸奶或坚果酸奶。
2. 对不同温度的发酵条件进行实验，观察酸奶的发酵效果是否有差异。
通过本次实验，同学们不仅学会了如何制作酸奶，也了解了乳酸菌的好处，增进了对健康饮食的认识。
制酸奶的实验报告1. 实验目的本实验旨在探究制作酸奶的过程和原理，并通过实验了解发酵的过程和微生物的作用。
2. 实验原理酸奶是利用乳酸菌对牛奶中的乳糖进行发酵而制成的一种食品。
乳酸菌通过分解乳糖产生乳酸，改变牛奶的酸碱度，使之变酸，从而得到酸奶。
乳酸菌对人体有益，能促进肠道消化吸收，增强免疫力。
3. 实验材料- 牛奶- 酸奶种子（含活性乳酸菌）- 温度计- 勺子- 玻璃容器4. 实验步骤1. 将约500ml牛奶倒入玻璃容器中。
2. 用温度计测量牛奶的温度，确保温度在37左右。
3. 取出一勺酸奶种子，加入到牛奶中。
4. 用勺子搅拌均匀，使酸奶种子均匀分布在牛奶中。
5. 盖上玻璃容器的盖子，放置在温暖通风的地方，不要移动或震动。
6. 等待6-8小时，酸奶即可完成发酵。
可以根据个人口味，决定发酵的时间长度。
5. 实验结果与分析经过6小时的发酵，我们得到了一杯浓郁的酸奶。
通过观察，可以看到牛奶变得更加稠密，并散发出酸味的气味。
酸奶的味道也相比原始的牛奶更加酸涩。
发酵的过程中，乳酸菌利用牛奶中的乳糖进行代谢，产生了大量的乳酸。
乳酸的形成降低了牛奶的pH值，使之变酸。
同时，乳酸的产生也在一定程度上抑制了其他有害菌的生长。
因此，酸奶比牛奶更容易保存，乳酸菌还可以促进肠道的消化吸收，对人体有益。
6. 实验总结通过本次实验，我们了解到了制作酸奶的原理及过程。
制作酸奶并不复杂，只需要准备好牛奶和活性乳酸菌种子，并将牛奶发酵即可。
实验的过程中需要注意保持温度在37左右，并保持容器不受震动或移动，以确保乳酸菌能够顺利发酵。
通过制作酸奶的实验，我们也更加深入地了解了发酵的原理。
乳酸菌对牛奶中的乳糖进行分解代谢，产生乳酸，从而改变了牛奶的口感和味道。
总的来说，酸奶是一种非常健康和美味的食品，通过本实验，我们不仅能够享受酸奶的好处，也更加了解了酸奶的制作过程和原理。
鉴定乳酸菌发酵生成酸奶的物质
一、实验目的
（一）掌握分离纯化乳酸菌的方法。
（二）了解掌握凝胶层析的基本原理。
（三）学会用凝胶层析分离纯化蛋白质。
二、实验原理
根据乳酸菌对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，然后分离纯化该微生物，直至得到纯菌株。
盐析的一般操作步骤是，选择一定浓度范围的盐溶液（如0-25%饱和度的硫酸铵）使部分杂质呈“盐析”状态从溶液中沉淀出来，经离心法去除。
而目的蛋白质呈盐溶状态，存在于上清中。
增加盐浓度（如25-60%饱和度的NH4SO4）使目的蛋白质呈盐析状态，而从溶液中分离出来。
凝胶层析也称分子筛层析，是具有一定孔径的网状结构物质，是一种分子筛效应，主要用于分离分子大小不同的生物大分子以及测定其相对分子质量（Mr）。
相对分子质量小的物质可通过凝胶网孔进入凝胶颗粒的内部，而相对分子质量大的物质不能进入凝胶内部，被排挤在凝胶颗粒之外，随着洗脱的进行，相对分子质量小的物质由于进
入凝胶内部，不断地从一个网孔穿到另一个网孔，这样“绕道”而移动，走的路程长，下来得慢（迁移速度慢），而相对分子质量大的物质由于不能进入凝胶内部即随洗脱液从凝胶颗粒之间的空隙挤落下来，走的路程短，下来得快（迁移速度快），达到分离的目的。
细菌体中还有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子质量。
强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在PAGE上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。
采用考马斯亮兰，可及时观察电泳分离效果。
三、实验器材
（一）实验仪器：
（1）高压灭菌锅；（2）鼓风干燥箱；（3）超净工作台；（4）恒温恒湿培养箱；（5）电子天平；（6）显微镜；（7）匀浆机；（8）紫外分光光度计；（9）试管；（10）培养皿；（11）锥形瓶；（12）恒温水浴摇床；（13）烧杯；（14）酒精灯；（15）移液管；（16）移液枪；（17）移液枪头；（18）橡胶塞；（19）试管架；（20）麻绳；（21）接种环；（22）离心管。
（二）实验试剂：
（1）牛肉膏;(2)酵母膏;(3)乳糖;(4)琼脂粉;(5)活性乳酸菌牛奶；（6）吐温；（7）蒸馏水（8）CaCO3；（9）KH2PO4（10）革兰氏染液；（11）二甲苯；（12）香柏油；（13）考马斯亮兰R520；（14）甲醇；（15）乙酸；（16）乙醇；（17）SDS；（18）Tris；（19）甘油；
（20）过硫酸铵；（21）TEMED ；（22）Acrylamide ；（23）Glycine ；
（24）NaCl 。
四、实验流程
五、操作步骤
（一）采样
市场上购买活性乳酸菌牛奶。
（二）培养
（1）取样：以无菌操作用5ml 灭菌吸管吸取样品2ml ，倒入3支已装好5ml LB 液体培养基的试管中；45℃恒温培养24h 。
（2）以无菌操作用2ml 灭菌吸管吸取LB 液体培养基的试管500ul 喷板，一式三份，45℃恒温培养24h 。
（三）鉴定
（1）初鉴定：选取平板中菌落进行革兰氏染色，显微镜检查。
革兰氏阳性，无芽孢的球菌或杆菌为乳酸菌。
（2）转接：用接种针接种检测为乳酸菌的菌落，分别加入5ml 纯牛奶中培养45℃恒温培养24h ；5ml LB 液体培养基的试管中45℃
恒温培养24h。
（3）鉴定：纯牛奶变成酸奶（外观呈乳白色或稍带黄色，表面光滑，凝乳结实，组织细腻，质地均匀，允许有少量乳清析出，无气泡，没有辛辣味及其他异味），则接种的菌株为乳酸菌。
（4）检测：
1）PH
配置500mlLB液体培养基，置于5个三角瓶中，分别调PH至2、3、4、5、7、9、11。
将乳酸菌接种于三角瓶中，观察其生长状况。
（四）盐析
（1）将50ml细胞裂解液置于100ml烧杯中，加入搅拌磁棒后放置在磁力搅拌器上
（2）在搅拌状态下缓缓加入研细的（NH4）2SO4末至最佳饱和度之前的一级饱和度，静置2小时后,离心得上清
（3）在搅拌下向上清中添加研细的（NH4）2SO4粉末，使终浓度达最佳饱和度，静置2小时后离心收集目的蛋白沉淀（4）将沉淀的蛋白质溶解于尽量小体积的磷酸盐缓冲的生理盐水中，用Bradford试剂测定蛋白质浓度后，置-20℃冰箱中保存备用。
（五）蛋白质的分离纯化
（1）凝胶的处理
Sephadex G—75干粉经蒸馏水室温充分溶胀24h，或沸水浴3h（可大大缩短溶胀时间和杀死细菌和排除凝胶内的气泡）。
溶胀过程中注意不要过分搅拌，以防颗粒破碎。
凝胶颗粒大小要均匀，使
流速稳定。
凝胶充分溶胀后用倾泌法将不易沉下的较细颗粒除去。
加密后溶胀后的凝胶抽干，用10被体积的洗脱液处理约1h，搅拌后继续用倾泌法除去悬浮的较细颗粒。
（2）装柱
将层析柱垂直装好，关闭出口，加入洗脱液约1cm高。
将处理好的凝胶用等体积洗脱液搅成浆状，自柱顶部沿管内壁缓缓加入柱中，待底部凝胶沉积约1cm高时，再打开出口，继续加入凝胶浆，至凝胶沉积至一定高度（约70cm）即可。
装柱要连续，均匀，无气泡，无“纹路”。
（3）平衡
将洗脱液与恒流泵相连，恒流泵出口端与层析柱入口相连，用2—3倍床体积的洗脱液平衡，流速为0.0ml/min。
平衡好后在凝胶表面放一片滤纸以防加样时凝胶被冲起。
柱装好和平衡后可用蓝色葡聚糖2000检查层析行为，在层析柱内加1ml（2mg/ml）蓝色葡聚糖2000，然后用洗脱液进行洗脱（流速0.5ml/min）,若色带狭窄并均匀下降，说明装柱良好，然后再用2倍床体积的洗脱液平衡。
（4）加样与洗脱
装注中多余的液体放出，使液面刚好盖过凝胶，关闭出口，将1ml样品沿层析柱管壁小心加入，加完后打开底端出口，使液面降至与凝胶面相平时关闭出口，用少量洗脱液洗柱内壁2次，加洗脱液至液层4cm左右，按上恒流泵，调好流速（0.5ml/min），开始洗脱。
上样的体积的体积，分析用量一般为床体积的1%—2%，制备用量一般为床体积的20%—30%。
（5）收集
用部分收集器收集洗脱液，每管4ml。
(6）凝胶柱的处理
一般凝胶用过后，反复用蒸馏水通过柱（2—3倍床体积）即可，若凝胶有颜色或比较脏，需用0.5mol/LNaOH—0.5mol/LNaCl 洗涤，再用蒸馏水洗。
冬季一般放2个月无长霉情况，但在夏季如不用，则要加0.02%的叠氮钠防腐。
（六）紫外分光光度
(1)在紫外分光光度计上，将收集好的蛋白质洗脱液小心盛于石英比色皿中，以生理盐水为对照，测得280nm和260nm两种波长的吸光度(A280nm及A260nm)。
(2)将280nm和260nm波长处测得的吸光度按下列公式计算蛋白质浓度：C=1.45A280nm-074A260nm。
（七）提取
（1）将以培养好的乳酸菌用移液枪从试管中吸取500ul菌液，喷到装有固体LB培养基的培养皿上。
在30℃恒温培养箱培养1-2d。
（2）用30ml 1mol/L无菌NaCl洗去培养基上的菌落，倒入50ml 离心管，12000rpm离心10 min，分离上清液与沉淀，分别保留。
（3）取沉淀用30ml 1mol/L无菌NaCl用匀浆机匀浆4-5次，冰浴10min.
（4）用30ml 1mol/L无菌NaCl洗涤匀浆离心后的菌悬液2-3次，12000rpm离心10min,倒掉上清液，保留沉淀。
（5）鉴定：将保留好的沉淀与上清液分别取样加入5ml纯牛奶的试管中，45℃恒温培养24h，判断是否变成酸奶。
（6）加5mlddH2O于沉淀中，混匀，取10ul进行SDS-PAGE 电泳。
（7）取10ul上清液进行SDS-PAGE电泳。
（八）SDS-PAGE电泳
(1)10ul制备好的蛋白质和3ul的sample-buffer混合，100℃沸水中煮沸5min，然后12000rpm离心5min，上清立即上样。
(2)在100V电压下，电泳大约1h，电泳至溴酚兰行至电泳槽下端停止。
(3)染色：将胶从玻璃板中取出，60rpm振荡染色，利用考马斯亮蓝R250染色液进行染色半小时。
(4)脱色：将胶从染色液中取出，放入脱色液中，60rpm振荡脱色，多次脱色至蛋白带清晰，清水中漂洗至蛋白带清晰。
(5)凝胶摄像和保存：在图像处理系统下将脱色好的凝胶摄像，结果存于电脑中，凝胶可保存于双蒸水中或7%乙酸溶液中。
（九）鉴定
（1）将SDS-PAGE电泳与紫外分光光度终和得出乳酸菌蛋白种类。
（2）将确定好的蛋白种类分别加入5ml纯牛奶的试管中，45℃
恒温培养24h。
六、实验结果及分析
（1）菌种提纯的蛋白能使纯牛奶变成酸奶（外观呈乳白色或稍带黄色，表面光滑，凝乳结实，组织细腻，质地均匀，允许有少量乳清析出，无气泡，没有辛辣味及其他异味），接种的菌株为乳酸菌。
（2）胞外酶不能使纯牛奶变成酸奶。
①SDS-PAGE电泳图片
②凝胶层析
经图片及数据分析：乳酸菌内蛋白可能有三种，使其纯牛奶变成酸奶。
③培养皿图片。
