生理学实验指导copy

引言生理学实验是生理学学习中不可或缺的一部分，通过实验可以直观地观察和了解生物体内的各种功能和机制。

本文将为您提供一份生理学实验指导（二），内容涵盖了多个方面的生理学实验方法和技巧，希望能为您的实验提供有益的指导。

概述本文将分为五个大点来阐述生理学实验的指导内容。

我们将讨论实验前的必要准备工作，包括实验设计、材料准备和安全注意事项。

我们将介绍一些常用的生理学实验技术，如离心、染色和显微镜观察等。

接着，我们将详细解释一些常见的实验操作流程，包括取样、培养和记录数据等。

然后，我们将讲解如何进行生理学实验的数据分析和结果解读。

我们将总结本文的主要内容，并提供一些建议和建议。

正文内容1.实验前的准备工作（1）实验设计：在进行生理学实验之前，我们需要制定一个有效的实验设计。

这包括确定实验目标、选择合适的实验对象和确定实验组织的数量和分组。

通过仔细的实验设计，可以提高实验的可靠性和可重复性。

（2）材料准备：准备好所需的实验材料是实验成功的关键。

这包括培养基、试剂、生物样本和实验设备等。

在准备材料时，要注意保持材料的新鲜度和质量，确保实验结果的准确性和可靠性。

（3）安全注意事项：在进行生理学实验时，安全是至关重要的。

我们需要了解和遵守实验室的安全规定，正确使用实验设备和化学试剂，避免事故的发生。

在实验过程中，要注意个人防护和实验环境的卫生。

2.常用的生理学实验技术（1）离心技术：离心是一种常用的实验技术，可以将悬浮物质与液体分离开来。

通过调整离心机的速度和时间，可以将生物样本中的细胞和颗粒沉淀下来，用于后续的实验分析。

（2）染色技术：染色是一种常见的生理学实验技术，通过使用染色剂可以将细胞和组织中的结构和成分染色，便于观察和分析。

常用的染色方法包括荧光染色、Giemsa染色和HE染色等。

（3）显微镜观察：显微镜是生理学实验中常用的观察工具，可以放大细胞和组织的结构，帮助研究者观察和分析。

在显微镜观察中，要注意调整光源、镜头和对焦等参数，以获得清晰的观察结果。

实验五、急性动物实验
实验名称：急性动物实验
【材料与设备】家兔；常规手术器械一套；气管插管；兔手术台；止血钳；剪毛剪；20ml 注射器；生理盐水；纱布；棉线；
【实验目的】学习生理实验基本的组织分离技术；掌握气管插管、膀胱导尿的方法。

【方法和步骤】
1、麻醉、固定动物、气管插管
取家兔一只，称重，用35mg/kg体重量的戊巴比妥钠或用4mL/kg体重量的25%乌拉坦溶液耳缘静脉注射麻醉后，仰卧位固定于手术台上，剪去颈部兔毛，沿颈部正中做3～4cm 长的切口，进行气管插，分离颈部两侧的迷走神经，穿线备用。

2、膀胱导尿
剪去腹部兔毛，沿耻骨联合上方1cm处做3-5cm长切口，沿腹白线逐层分离，找到膀胱，进行膀胱导尿。

【小结】
1、家兔肌肉紧张、角膜反射喝对皮肤夹捏的反应，这些活动银线减弱后消失时，应立即停止注射，以避免麻醉过深，抑制呼吸中枢，导致动物死亡。

2、不能将毛兔拎起，这样容易剪到皮肤和皮下神经
3、输尿管镜膀胱处结扎后，可略等片刻，输尿管观略充盈后再剪口插管会容易很多。

动物生理学实验指导书实验一基本生理实验操作——蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备（2学时）［实验目的］学习生理学实验基本的组织分离技术；学习和掌握制备蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的方法；了解刺激的种类。

［实验原理］蛙类的一些基木生命活动和生理功能与恒温动物相似，若将蛙的神经-肌肉标木放在任氏液中，其兴奋性在几个小时内可保持不变。

若给神经或肌肉一次适宜刺激，可在神经和肌肉上产生一个动作电位，肉眼可看到肌肉收缩和舒张-•次，表明神经和肌肉产牛了-•次兴奋。

在牛理学实验屮常利用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴奋、兴奋性；刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征等，制备坐骨神经腓肠肌标木是生理学实验的一项基木操作技术。

［实验对象］蟾赊或蛙［实验药品］任氏液、食盐、1% H2SO4滤纸［仪器与器械］普通剪刀、手术剪、眼科蹑（或尖头无齿银）、金属探针（解剖针）、玻璃分针、蛙板（或玻璃板）、蛙钉、细线、培养皿、滴管、锌铜弓（或电了刺激器）、酒精灯。

［实验方法与步骤］（一）标木制备1.破坏脑脊髓：左手持蛙，用食指下压吻端，拇指按压背部，使蛙头前俯；右手食指沿两鼓膜」［沖向后触摸，触及一凹陷处，即枕骨大孔。

用蛙针由凹陷处乖直刺入枕骨大孔，再向前伸入颅腔，捣毁脑；向后插入椎管，捣毁脊髓。

或把铁剪刀插入口裂，沿两眼后缘剪去头，再以蛙针捣毁脊髓。

待蛙四肢肌肉紧张性完全消失，即表示脑和脊髓己破坏完全。

2.剪除躯干上部及内脏：在腋部用铁剪刀剪断脊柱，将头、前肢和内脏一并弃去，仅保存一段脊柱和后肢。

脊柱的两旁可见坐骨神经从。

3.剥皮：先剪去肛门周I韦I皮肤，然后用左手捏住脊柱断端，右手捏住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤。

标本放入盛有林格液的小烧杯中，将手及用过的器械、蛙板洗净，以免皮肤分泌物污染神经-肌肉标本。

若标本系电生理实验用则禁止撕皮，需用剪刀剪断皮F 结缔纟R织来分离皮肤。

4.分离标本为两部分：沿脊柱正中线将标本均匀地分成左右两半，分别作进一步剥制。

实验项目一：常用实验动物的基本操作（一）实验动物的抓握、固定和处死方法1、小鼠抓取固定方法小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。

有经验者直接用左手小指钩起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后颈背部皮肤亦可。

这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。

如进行解剖、手术、心脏采血和尾静脉注射时，则需将小鼠作一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧位（必要时先行麻醉），再用大头针将鼠前后肢依次固定在腊板上。

2、小鼠的处死方法可采用颈椎脱臼法。

此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。

操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。

（二）动物血细胞计数方法材料和用品（1）器材：细胞计数板、细口滴管、绸布。

（2）试剂：0.4％台盼蓝。

（3）材料：血细胞悬液。

实验原理细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数。

细胞计数时，先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液，然后将细胞悬液滴入细胞计数板内，计数计数板上计数室四大格内的细胞数。

根据计数室的容积及稀释倍数，即可计算出细胞浓度。

实验步骤：图5－1 血细胞计数板1．采血及稀释用1ml移液管吸取0.38ml白细胞稀释液放入小试管内备用，另用5ml移液管吸取3.98ml红细胞稀释液放入小试管内备用。

用酒精棉球消毒兔的耳缘静脉采血部位，用刺血针刺破血管，让血液自然流出，擦去第一滴血，待流出第二滴血时，用一次性毛细血管分2次准确吸取20ul、和20ul，将血液分别吹入盛有白、红细胞稀释液的小试管内，用滴管放在试管底部轻轻吹出血液，用上清液冲洗毛细取血管2～3次，轻轻摇动，使液体充分混匀。

运动生理学实验指导实验一血红蛋白测定及血型测定A..血红蛋白的定量测定【目的】掌握用比色法来测定血红蛋白量。

（3分）【原理】血红蛋白量测定方法有光电比色法、分光光度法和沙里氏比色计比色法。

本实验采用沙里氏比色法。

血液中血红蛋白的颜色随其结合的氧量多少而有一定的变化。

为提高测定的标准，可向血液中加稀盐酸，使亚铁血红蛋白酸化成高铁血红蛋白而显稳定的棕黄色，加蒸馏水稀释并与标准色比较，既可求出100mL血液中所含的血红蛋白的克数。

血红蛋白的含量受年龄、性别、营养状况、体育锻炼以及居住条件的影响。

（5分）我国正常成年男子约含12～15g·dL-1；女子约为11～14 g·dL-1。

【器材】沙里氏比色计（含比色管、比色架、吸血管）、采血针、75℅酒精、棉球、95℅酒精、0.1mol盐酸、乙醚、蒸馏水、小玻棒、小滴管。

（6分）【步骤】1.向比色管内加入0.1mol盐酸10滴（约达到比色管的10℅的刻度线）。

（3分）2. 采血。

以75℅的酒精消毒无名指及采血针（2分）；3．用采血针刺破无名指指腹一侧皮肤，让血液自然流出，用消毒干棉球擦去一滴后，用右手平持吸血管使管口接触自然流出的一滴血管，准备吸取20μl 的血液（血柱液面平20μl刻度线）。

（6分）4．用干棉球拭檫管外的血液，然后迅速将吸血管移入比色管，徐徐将血液吹入盐酸深层，并用上层清夜多次洗涤吸血管，轻轻振荡，置室温中10～15min,充分到使亚铁血红蛋白变成高铁血红蛋白。

（6分）5.比色。

将比色管放入血红蛋白比色架中，向比色管逐滴加入蒸馏水并且边滴边搅拌边竖起对光观察，将比色管的颜色与比色计上的标准颜色做比较，直至比色管溶液颜色与标准颜色一致为止。

正确读出并记录比色管内溶液弯月面下缘最底点对应的比色管刻度数值，此数值即为每100mL血液中所含血红蛋白的克数。

（9分）【注意事项】1.要准确配制0.1mol的盐酸。

血液被酸化的时间不得少于10min。

生理学实验一、蛙（蟾蜍）坐骨神经腓肠肌标本制备【实验目的】1. 掌握蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。

2. 观察组织的兴奋性、刺激与反应律以及骨骼肌收缩的特点。

【实验原理】蛙和蟾蜍是两栖类动物，其生存环境较简单，离体组织或器官所要求的条件也较简单。

坐骨神经和腓肠肌属于可兴奋组织，把它们置于人工配制的林格液中，其兴奋性在几个小时内保持不变。

若给坐骨神经一个适宜的刺激，可在神经和肌肉上产生一个可传导的动作电位，肉眼可以看到一次肌肉的收缩和舒张，表明神经和肌肉兴奋了一次。

【实验材料】实验对象：蟾蜍或蛙。

实验器材：蛙板、玻璃分针、粗剪刀、眼科剪刀、尖镊子、培养皿、锌铜弓。

实验试剂：任氏液【实验方法】坐骨神经腓肠肌标本的制备可采用离体或在体的方法。

1 、离体坐骨神经腓肠肌标本制备（ 1 ）破坏脑脊髓：取蟾蜍 1 只，以左手示指压其头部前端使其尽量前俯，中指与示指夹住其前肢，拇指抵住其骶部，使整个躯干做最大屈曲，后肢悬空。

探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，随即将探针改变方向刺入颅腔，向左右两侧不断搅动，彻底捣毁脑组织。

将探针退出至枕骨大孔处，转向后刺入椎管，捻动探针使其逐渐刺入整个椎管内，完全捣毁脊髓。

脑脊髓完全破坏的标志是：下颌呼吸运动消失，反射消失，四肢松软。

（ 2 ）去除头部和内脏：左手握住蟾蜍后肢，此时躯干上部及内脏即全部下垂。

右手持粗剪刀在骶髂关节前1cm处剪断脊柱，剪除全部躯干及内脏组织，注意勿损伤神经。

（ 3 ）去皮：用圆头镊子夹住脊柱，注意不要碰到神经，捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。

全部皮肤剥除后，把标本置于盛有林格液的培养皿中。

（ 4 ）双手和用过的全部手术器械。

（ 5 ）分离两后肢：避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开两腿，将已分离的下肢标本浸入盛有任氏液的培养皿中保存。

（ 6 ）完成坐骨神经腓肠肌标本。

①游离坐骨神经：取出一下肢，用蛙钉固定于蛙板上。

动物生理学实验指导书生理学实验指导目录实验一神经生理实验1.1 蛙坐骨神经腓肠肌标本制备1.2 神经干动作电位引导 1.3 神经传导速度的测定实验二血液生理实验2.1 红细胞计数 2.2 红细胞渗透脆性试验实验三循环生理实验之蛙心起搏点及心肌特性3.1 蛙心起搏点 3.2 心肌特性实验四循环生理实验之蛙心灌流 4.1 蛙心灌流实验五循环生理实验之动脉血压的直接测定及其影响因素5.1 动脉血压的直接测定及其影响因素实验六消化生理实验7.1 胃肠运动的直接观察 7.2 小肠吸收和渗透压的关系 7.3 离体肠段运动描记实验七泌尿生理实验8.1 尿的分泌及其影响与调节实验八泌尿、循环、呼吸生理综合实验（综合计划 07级）实验九肌肉生理实验9.1 阈刺激、阈上刺激与最大刺激 9.2 肌肉的单收缩9.3 肌肉的强直收缩和收缩总和实验一神经生理实验年月日星期1.1 蛙坐骨神经腓肠肌标本制备目的和原理：蛙类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，它的离体组织所需要的生活条件又比较简单，易于控制和掌握，因此在实验中常用蟾蜍或蛙坐骨神经腓肠肌标本来研究神经肌肉的一般生理，如：神经干动作电位引导、神经传导速度测定、肌肉收缩的机能等。

实验对象：蟾蜍或蛙实验器材和药品：中式剪子，眼科剪，眼科镊，蛙板，玻璃分针（玻璃勾），探针，锌铜弓，培养皿，大头针，棉花，线，任氏液，纱布等。

实验方法：1、破坏脑脊髓取一只蟾蜍或蛙，用自来水冲洗干净。

保定好，用探针从枕骨大孔垂直刺入，然后向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，再向后刺入脊椎管捣毁脊髓。

此时蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓破坏完全。

2、剪除躯干上部及内脏，提起蟾蜍的背部，在骶髂关节水平以上0.5-1.0厘米处剪断脊柱（见图），用左手捏住蟾蜍骶髂关节以下的脊柱，使蟾蜍头与内脏自然下垂，右手持中式剪刀，沿脊柱两侧剪除皮肤肌肉和一切内脏（注意勿损伤坐骨神经），仅留骶尾联合以下的后肢、骶骨、脊柱及由它发出的坐骨神经。

生理学实验指导中药教学部重庆邮电学院生物学院二O O四年六月前言本课程的作用是使学生学习人体生理学实验知识、方法和技能，了解生理学实验的主要过程及基本方法以及与人体的联系。

从而使学生在认识人体机能活动基本规律的基础上，进一步认识运动训练的生理学原理；了解各类不同年龄、性别、运动项目、及训练水平的运动员的生理特点，从而科学地指导训练实践；了解体育运动对人体机能活动发展变化的影响，为运动健身提供理论基础。

本实验指导选择的实验内容经典、实用，做到既与理论课有密切联系，又有实验课的独特体系；既有整体动物实验，既有验证性实验，又有设计性实验,还有综合性实验。

从而使学生初步具备对客观事物进行观察、比较、分析、综合和解决问题的能力，并验证、巩固和加深理解基本理论，从而初步掌握药理学实验的基本方法。

重庆邮电学院生物学院陈玉英刘圣蓉编著二0 0四年六月目录绪论3 (5)实验一刺激频率、刺激强度与肌肉反应的关系6 (7)实验二反射时的测定与反射弧的分析8实验三安静时脉博、心音和动脉血压的测定9 (11)实验四肺功能的测定12 (14)绪论运动生理实验课的目的：１．初步掌握生理学实验的基本操作技术，了解获得生理学知识的科学方法。

２. 验证和巩固生理学的基本理论。

３. 培养科学作风和分析解决问题的能力以及对科学工作的严肃态度、严肃的工作方法和严谨的工作作风，从而为科学地组织体育教学，指导体育锻炼和课余体育锻炼，以及开展体育科学研究奠定初步基础。

为了达到实验目的，请同学门做到以下要求：1.遵守纪律，提前5分钟到达实验室，因故外出或早退应向老师请假。

进入实验室必须身穿白大衣，不许穿拖鞋，衣着整洁干净。

实验时应严肃认真，不高声谈笑，不进行实验室无关的活动。

2.实验前：仔细阅读实验手册，复习有关理论。

做到充分理解，预测该实验各个步骤应得的结果和可能发生的误差。

3.实验中：1.实验者必须先熟悉仪器的使用要点，而后运用。

仪器损坏或失灵，应请老师修理或调换。

生理学实验指导生理学实验指导（生物工程2012级3、4班用）实验一、神经干复合动作电位的引导【目的要求】1. 学习电生理实验方法。

2. 观察蛙坐骨神经干复合动作电位的波形，并了解其产生的基本原理。

【基本原理】神经干在受到有效刺激后，可以产生动作电位，标志着神经发生兴奋。

如果在神经干另一端引导传来的兴奋冲动，可以引导出双相的动作电位，如果在两个引导电极之间将神经麻醉或损坏，则引导出的动作电位即为单相动作电位。

神经细胞的动作电位是以“全或无"方式产生的。

坐骨神经干是以由很多不同类型的神经纤维组成的，所以，神经干的动作电位是复合动作电位。

复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的变化而变化的。

【动物与器材】蟾蜍或蛙、常用手术器械、计算机采集系统、神经屏蔽盒、任氏液。

【方法与步骤】1. 制备蛙或蟾蜍坐骨神经干标本。

2. 将蛙的坐骨神经干标本置于屏蔽盒内的电极上，神经干的中枢端置于刺激电极一侧，从末梢端引导动作电位3. 实验观察与记录(1) 神经干兴奋阈值的测定刺激强度从0.1V开始，逐渐增加刺激强度，当刚刚出现动作电位时的刺激强度，即为神经干的兴奋阈值。

(2) 双相动作电位在刺激阈值的基础上逐渐加大刺激强度，可见动作电位的图形为双相，而且其幅值随刺激强度增大而加大。

当刺激增加到一定强度时，可见动作电位的幅值不再增大。

(3) 动作电位参数的测量用鼠标点击“快捷工具栏”的“观察”，移动鼠标，测出动作电位的一系列参数。

(4) 单相动作电位在两个引导点击之间损伤神经干标本，可使原来的双相动作电位的下相小时，变为单相；注意上相动作电位的图形有什么变化。

【注意事项】a) 实验过程中注意保持标本的活性良好，经常用任氏液湿润之。

b) 如果在显示窗上发现动作电位图形倒置，将引导电极位置交换即可实验二、反射时的测定与反射弧的分析【目的要求】1．学习测定反射时的方法。

2．了解反射弧的组成。

【基本原理】从皮肤接受刺激至机体出现反应的时间为反射时。

实验一生理学实验常用仪器使用方法，手术器械的识别及急性动物实验手术操作实验二低温对蟾蜍坐骨神经干动作电位传导速度及不应期的影响实验三出血、凝血时间的测定，影响兔血液凝固的因素实验四兔减压神经放电、动脉血压调节及心血管受体分析实验五生理因素对兔呼吸运动及膈神经放电的影响实验六影响家兔循环、泌尿、呼吸的综合实验实验总论一、实验目标与要求通过实验使学生初步掌握生理学实验的一些基本操作技能，学会检查人体功能活动的一些测试方法，验证和巩固某些基本理论知识，培养认真、负责、严谨求实的态度和团结协作的良好作风，增强对事物进行观察、比较、分析和综合的能力。

为此要求：1.实验前应仔细阅读实验指导，了解本次实验的目标、原理、步骤等，并复习有关理论知识。

2.实验时要按照实验指导及教师的指示进行操作和观察，客观、及时地记录实验现象或结果，并联系讲授内容进行思考。

3.实验后须及时整理实验记录，分析实验结果，按照规定格式书写实验报告，按时交负责教师评阅。

二、实验报告书写要求因实验内容不同，可以填表、叙述等形式写出报告。

书写要整洁，文字应简练、通顺。

首先注明班级、组别、姓名、实验日期，写出实验题目、实验目标等项目，然后着重书写实验结果以及分析和讨论。

并要求：1.实验结果必须凭自己观察，随时记录，如实填写。

有曲线记录的，经必要注明后，剪贴在实验报告上。

2.分析和结论实验结果的分析，是根据学过的理论知识对结果进行解释。

如果出现非预期的结果时，应分析其可能的原因。

实验结论，是从实验结果中归纳出概括性的判断，即本次实验所验证的理论概要。

三、生理实验室规则1.须携带实验指导、记录本等文具准时进实验室，并穿戴实验衣帽。

2.遵守学习纪律，保持实验室安静；严肃、认真、安全地进行实验，不做与本实验无关的事情。

3.实验室的一切物品，未经教师许可，不得擅自取用或带出。

4.各组应用的实验器材、物品，在使用前应查点清楚，不得随意与别组调换；如遇机件不灵或损坏时，应报告教师，以便及时修理或更换。