脐血单个核细胞

NK 细胞无血清培养套装使用说明书——脐血2L 体系【适用范围】【试剂准备】【使用步骤】【产品组成】【脐血PBMC 分离】用于脐带血体外诱导扩增NK 细胞。

如用采血袋采集，由于采血袋中含有抗凝剂，务必保证血样净含量50mL （不包括抗凝剂体积），否则在接种细胞时细胞的总数量达不到接种要求，最终收获不到理想细胞数。

2L 培养体系套装：适用于50mL 脐带血的样本量，使用2L 培养基。

分离单个核细胞前，应将脐血、PBS （生理盐水）和淋巴细胞分离液室温平衡至20℃。

将脐带血平均分装到50 mL 离心管中，于室温下700g 离心15 min （离心机升速8，降速4）， 取上层淡黄色血浆至新的50mL 离心管中（下层红色液体用于提取单个核细胞），于水浴锅中 56℃灭活30min ，然后900g 离心10min ，取上清，置于-20℃，15min ，再次900g 离心10min ， 取上清，置于4℃保存。

（900g 离心时离心机的升降速均调节至最高即可） 1. 第0天T175培养瓶包被:先将15mL PBS 加入T175瓶中，再将一支YC00A 添加于T175瓶中，充分混 匀后，37℃孵育2h ，弃去上清，并用15mL PBS 清洗一次,弃清洗液后备用。

接种45mL 培养 基A ，细胞密度2-3E6/mL ，添加诱导因子一支YC00B ， 添加10%比例的自体血浆。

2. 第3天补加100mL 培养基B ，添加5%的自体血浆，动作轻柔、不可将贴壁细胞晃起。

3. 第5天补加150mL 培养基B ，添加1%的自体血浆，分成两个T175进行培养，分瓶时轻轻将底部细胞 团吹起，单个的贴壁细胞不用过度吹打。

4. 第7天补加300mL 培养基B ，添加1%的自体血浆，轻轻地将细胞团晃起后把所有细胞转移至细胞培 养袋，原瓶中各添加50mL 新鲜培养基B 。

原瓶中的单个贴壁细胞不用过度吹打。

(1) 取上一步血浆提取中得到的下层红色液体用生理盐水1：2稀释，混匀，备用。

外周血单个核细胞的分离
概述
外周血单个核细胞是一种白细胞。

通过分离单个核细胞，可以进行多种分子生物学实验和临床应用。

本文将介绍两种分离外周血单个核细胞的方法。

方法
密度梯度离心
1.将外周血收集到 EDTA 管中。

2.将 3 毫升 Ficoll-Paque™ PLUS 加入到 15 毫升离心管中。

3.轻轻加入同等体积的外周血到离心管，保持液面平整。

4.以 400g 的速度离心 40 分钟。

在离心温度达到室温前离心室门不得
打开。

5.用温和的力度将上清液吸出到新的离心管中，并在 1200g 的速度下
洗涤 2-3 次。

6.已经分离的单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。

此过程中加入生长
培养基以维持细胞质稳定。

磁性负选择法
1.将外周血收集到 EDTA 管中。

2.加入红细胞淋巴细胞分离液，根据厂家指南染色。

3.加入磁性微珠混合液，使单个核细胞与微珠组合。

4.放入磁场中过滤掉未与微珠组合的细胞及其他血细胞。

5.经过多次洗涤和离心，单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。

此过程
中加入生长培养基以维持细胞质稳定。

密度梯度离心法和磁性负选择法是分离外周血单个核细胞的两种有效方法。

这些方法对于多种分子生物学实验和临床应用都非常有用。

密度梯度离心法分离脐血单个核细胞方法的优化任思坡;吴秀娟;罗小虎;李全双;韩光宇;谭昆;拾莉;耿跃春【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2012(027)001【摘要】目的对密度梯度离心法分离脐血单个核细胞的方法进行优化,以提高该方法分离脐血单个核细胞的收率.方法脐血40份,每份40 ml,分为常规组和优化组,每组20份.常规组脐血与NS1∶1混合稀释后,直接通过Ficoll分离液分离单个核细胞；优化组通过先将脐血洗涤一次,加入等量NS充分吹打混匀,200目筛网过滤,保持细胞悬液和Ficoll分离液1:1的体积比进行分离操作.对每份分离得到的脐血单个核细胞通过白细胞稀释液稀释后计数.结果常规组分离后的白膜层有11份界面不清晰,同时均混有少量的红细胞.优化组分离后的白膜层有1份界面不清晰,仅有极少的红细胞混入.两种方法收集的脐血单个核细胞数比较,优化组多于常规组(P＜0.01).结论通过对密度梯度离心法的步骤进行优化,可提高脐血单个核细胞的分离效果.【总页数】3页(P101-103)【作者】任思坡;吴秀娟;罗小虎;李全双;韩光宇;谭昆;拾莉;耿跃春【作者单位】徐州市医学科学研究所,江苏徐州221006;徐州医学院,江苏徐州221002;徐州医学院,江苏徐州221002;徐州市医学科学研究所,江苏徐州221006;徐州市医学科学研究所,江苏徐州221006;徐州市医学科学研究所,江苏徐州221006;徐州市医学科学研究所,江苏徐州221006;徐州市医学科学研究所,江苏徐州221006【正文语种】中文【中图分类】R446.113【相关文献】1.密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞方法的优化 [J], 郝洪波;任思坡;谢晓东2.密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞方法的优化 [J], 郝洪波;任思坡;谢晓东;3.Ficoll密度梯度离心法分离腹水单个核细胞方法的优化 [J], 杨永强;张巧玲4.密度梯度离心法分离单采浓缩白细胞悬液中单个核细胞方法探讨 [J], 王富英; 廖群艳5.Ficoll密度梯度离心法分离猪外周血单个核细胞条件的探讨 [J], 张素华;林丹丹;张美娟;陈雪松;徐进梅;单昊;吴观陵;吴海玮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脐带血有必要保存吗？科学认识脐带血不要被不实言论误导现如今，已经有越来越多的家长选择为孩子保存脐带血，因为脐带血含有丰富的造血干细胞，是重要的人类生命资源。

将孩子脐带血保存起来可以说是给孩子一份健康保障。

但是还是有很多人并不完全了解脐带血，对于“脐带血有必要保存吗”这个问题，下面就为大家详细解答一下。

首先，要想知道脐带血有没有必要保存，就必须要正确地认识脐带血的价值。

脐带血含有丰富的造血干细胞，具有重建血液系统和免疫系统的功能，是造血干细胞的重要来源之一。

造血干细胞移植技术目前已经广泛应用于临床治疗，是成熟的医疗技术。

自1988年第一例脐带血移植在法国成功治疗范科尼贫血后，全球目前脐带血治疗已经超过50000个案例，在北京已经有超过280，000家庭储存脐带血。

世界首例脐带血移植专家，美国杜克大学临床和转化细胞治疗项目的首席医学官兼科学家Joanne Kurtzberg教授介绍了美国在脐带血研究和应用方面的前沿实践与经验。

Joanne Kurtzberg教授展示了一张31年前接受脐带血移植的患者照片。

当时，图片上的小男孩接受了他同胞妹妹脐带血的移植，脐带血中的造血干细胞可以替代骨髓中的造血干细胞为他造血。

至今经过31年，这位病人妹妹的干细胞仍然在他的体内持续植入，并发挥正常造血功能。

事情远远没有这么简单，脐带血的价值也不仅限于造血干细胞。

经研究发现，脐带血中不仅含有可以造血的造血干细胞，还含有淋巴细胞、单核细胞等单个核细胞。

脐带血中的单个核细胞是可用于治疗脑损伤，包括脑瘫、中风等的重要组成部分。

“我们发现脐带血在神经功能方面有多种非常神奇的效果，我们将会进行更多的研究，来弄清楚脐带血治疗神经功能损伤的机理，扩大适应证。

”Joanne Kurtzberg教授说。

脐带血是孩子来到这个世界上带给自己的珍贵礼物，一生只有一次保存机会。

所以保存脐带血已经成为一种趋势，希望广大家长为孩子积极保存，切勿随意抛弃。

外周血单个核细胞外周血单个核细胞是指外周血液中存在的一种细胞类型，具有单个核的特点。

这些细胞在身体的免疫系统中起着重要的作用，帮助身体抵抗疾病和保持健康。

外周血单个核细胞主要包括淋巴细胞和单核细胞。

淋巴细胞是一种重要的免疫细胞，它们在身体免疫反应中起着关键的作用。

淋巴细胞分为T细胞、B细胞和自然杀伤细胞。

T细胞在免疫应答中起着核心作用，它们能识别并杀伤感染体内的病原体。

B细胞主要负责产生抗体，这些抗体能识别和中和外来的细菌和病毒。

自然杀伤细胞则负责直接杀伤肿瘤细胞和感染的细胞。

单核细胞是另一类外周血单个核细胞，它们是免疫系统中的“垃圾清道夫”，主要负责吞噬和清除白细胞分解产物、细菌、病毒和其他病原体。

单核细胞也起着侦测和报告导致炎症和感染的信号的重要作用。

在感染或炎症发生时，单核细胞会被激活，释放出一系列信号分子，促进免疫系统的反应。

外周血单个核细胞的数量和比例可以通过外周血常规检查来确定。

正常情况下，淋巴细胞在外周血细胞中占据较大的比例，单核细胞则相对较少。

这反映了免疫系统的正常功能。

然而，某些疾病和情况可以导致外周血单个核细胞计数的异常。

首先，淋巴细胞计数过高可能是由细菌或病毒感染引起的。

在这种情况下，淋巴细胞会大量增加，以应对感染。

此外，某些疾病如淋巴瘤和白血病也会导致淋巴细胞计数异常增高。

相反，单核细胞计数过高可能是由某些病毒感染、结核病或其他炎症性疾病引起的。

在这些情况下，单核细胞会增加，以清除病原体和炎症因子。

此外，单核细胞数量的异常增加也可能是白血病等血液恶性肿瘤的表现之一。

除了计数异常，外周血单个核细胞的形态也可以提供一些关于疾病的线索。

细胞形态学分析可以检测出淋巴细胞或单核细胞的异常形态，例如细胞增大、细胞核形变等。

这些异常形态可能提示一些疾病如感染、炎症或免疫系统异常。

总之，外周血单个核细胞是身体免疫系统中的重要成分之一，对于维持健康和抵抗疾病起着重要的作用。

通过检测外周血单个核细胞的计数和形态，可以了解免疫系统的状况，并且可以提供一些关于疾病的提示。