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耐思细胞培养摇瓶安全操作及保养规程细胞培养摇瓶是细胞培养中不可或缺的装置，其不仅提供供氧和营养物质的传输，还可促进细胞增殖和分化。
在细胞培养实验中，正确的操作和维护细胞培养摇瓶是保证实验结果准确性和细胞健康的重要环节。
本文将介绍耐思细胞培养摇瓶的安全操作及保养规程，以便为从事细胞培养实验的科研人员提供参考。
1. 药物及试剂储存•药物和试剂应当分类存储，密封、干燥、避光、防潮、防腐，避免与致癌、致畸、致敏等物质混存。
•储存在细菌、病毒等微生物生长的试剂应立即彻底湿消杀后存放，严格控制入库和容器消毒。
•管理人员应当每日检查药品试剂保存状态并登记记录，过期物品应及时清理销毁。
2. 操作规程2.1 准备工作•检查细胞培养摇瓶配件是否齐全，清洗并消毒。
•准备所需培养基、培养原料和工具，并进行严格消毒。
•操作前应先洗手，并戴好实验手套，避免交叉污染。
2.2 细胞接种•在细胞培养摇瓶中加入适量的培养基和相关培养原料，按照实验需要将细胞接种到细胞培养摇瓶中。
•在接种细胞前，应先观察细胞的质量和健康状况，并确保细胞数目满足实验要求。
•细胞接种后应密封摇瓶盖子，并在细胞培养箱中适当位置上固定细胞培养摇瓶。
2.3 摇瓶操作•摇瓶操作应该在细胞生长平稳的情况下进行，操作前应先关闭细胞培养箱门，开启摇瓶机，并设置正确摇动速度和时间。
•摇瓶时应注意细胞的健康状态，避免破坏细胞结构和摇坏摇瓶。
•摇瓶结束后应立即关闭摇瓶机，检查细胞状态。
2.4 细胞收获•细胞生长到适宜的程度后，应及时收获细胞，先用PBS等缓冲液清洗细胞，然后用相关消化液和补充剂进行细胞消化和酶解，将细胞转摇瓶或称为传代细胞，再用离心机进行离心去除细胞残骸，最后用PBS等缓冲液再次清洗细胞，将细胞分装到相应的实验器具中。
3. 细胞培养摇瓶保养3.1 消毒清洗•在每次使用前，应用70%乙醇消毒细胞培养摇瓶和相关配件。
•使用后，应用酸性过氧化氢或其他适当消毒剂进行彻底消毒，并清洗干净。
如何利用高效摇瓶进行食用菌液体菌种的
培养？
液体菌种的培养方式主要有振荡培养和发酵罐培养两类。
振荡培养又称为高效摇瓶培养，是利用机械振荡，使培养液振动而达到通气的目的，是将斜面试管菌种接种到培养液中，置摇床上振荡培养。
高效摇瓶培养的工艺流程为：制备培养基一分装一灭菌一冷却一接种一摇床培养一一级液体菌种一二级液体菌种。
经高效摇瓶培养的菌丝体一般呈球状、絮状等多种形态，培养液呈黏稠状或清液状，有或无清香味及其他异味。
菌液中因有菌体发酵产生的次生代谢产物，可呈不同的颜色。
采用高效摇瓶培养液体菌种时，可采用往复式摇床或者旋转式摇床。
往复式摇床的往复频率一般在80～140r/min，冲程一般为5～14cm，在频率过快、冲程过大或瓶内液体过多时，振荡使液体容易溅到瓶口纱布上而造成污染。
旋转式摇床的偏心距一般为3～6cm，旋转次数为60～300r/min，它的结构比较复杂，加工安装要求比往复式摇床高，造价也较贵，但是氧的传递好、功率消耗低，培养基一般不会溅到棉塞上。
因此，要根据实际需要选择合适的摇床及振荡速度。
以上是利用高效摇瓶进行食用菌液体菌种培养的要点，高效摇瓶除了用于食用菌液体菌种的培养外，还可用于全时悬浮细胞培养，培养基制备或储存。
- 1 -。
一) 摇瓶培养摇瓶培养技术问世于本世纪30年代，由于其简便、实用，很快便被发展成为微生物培养中极重要的技术而普及，并广泛用于工业微生物菌种筛选、实验室大规模发酵试验、种子培养等。
摇瓶培养设备主要有旋转式摇床和往复式摇床两种类型，也有旋转式和往复式的混合类型，其中以旋转式最为常用。
用旋转式摇床进行微生物振荡培养时，固定在摇床上的三角烧瓶随摇床以200～250r/min的速度运动，由此带动培养物围绕着三角烧瓶的内壁平稳地运动。
在用往复式摇床进行振荡培养时，培养物被前后抛掷，引起较为剧烈的搅拌和撞击。
振荡培养中所使用的发酵容器通常为三角烧瓶，也有使用特殊类型的烧瓶或试管。
在振荡培养过程中所采用的烧瓶类型和振荡类型主要取决于所要研究的发酵类型及性质。
振荡培养通常用于有氧过程中，主要是两种类型：(1) 供氧相对较大，以产生大量的细胞，常见于丝状微生物(如食用菌、放线菌)中; (2) 需供氧但所需供氧量较小，常见于细菌。
要获得高氧供应，可在较大的烧瓶(250～500ml三角烧瓶) 中盛装相对较小容积的培养基，由此可获得更高的氧传递速率，便于细胞的迅速生长，要获得较低的氧供，则采用较慢的振荡速度和相对大的培养体积。
经连续振荡培养一段时间后，细菌等单细胞微生物可以呈均一的细胞悬液; 而丝状真菌和放线菌，可得到纤维糊状培养物——纸浆状生长。
如果振荡不足，则会形成许多球状菌团——颗粒状生长。
振荡培养技术通常用于微生物菌种的筛选或生产工艺的改良和工艺参数的优化。
因此，通常使用复合培养基。
用于振荡培养的复合培养基通常由碳水化合物及多种蛋白质性物质(玉米上清、大豆粉、豌豆粉等) 及植物油组成。
这些培养基组分以不同的速率被代谢掉，从而为微生物提供一较长的、最适生长和代谢的条件。
在复合培养基中通常还加入一些固体物质如石膏(CaCO3)，以协助培养基pH的控制并有利于絮凝物的形成，此在啤酒工艺中特别重要。
此外，经过精心设计的化学限定性培养基(避免pH 波动及防止重要培养基组分的突然耗尽)也可用于振荡培养，这类培养基的组成通常是蔗糖加酒石酸盐、铵盐、磷酸盐、金属盐类以及生长因子。
细胞培养优化瓶摇瓶安全操作及保养规程1. 引言细胞培养是生物学和医学研究中常用的技术手段之一。
在细胞培养过程中，瓶摇瓶作为常规设备被广泛应用于细胞培养、溶液混合等实验操作。
为了确保实验的准确性和安全性，本文档旨在介绍细胞培养优化瓶摇瓶的安全操作及保养规程。
2. 瓶摇瓶的基本组成和工作原理瓶摇瓶主要由电机、摇床、瓶架、控制面板等组成。
其工作原理是通过电机驱动摇床上下运动，从而实现对瓶内溶液的摇动和混合。
3. 安全操作规程为了确保使用瓶摇瓶的安全性，以下是一些安全操作规程：3.1 使用前的准备工作•确保瓶摇瓶的电源和电线处于正常工作状态，不带有破损和裸露的线路。
•清洁和消毒瓶摇瓶的摇床和瓶架，以防止细菌污染。
•检查瓶摇瓶的控制面板和按钮是否正常工作。
3.2 操作时的注意事项•使用前先将需要摇动的溶液倒入培养瓶中，然后再将培养瓶放入瓶摇瓶的瓶架中，确保瓶盖紧闭。
•避免在摇动过程中打开瓶摇瓶的盖子，以免溶液溅出或引起其他安全问题。
•操作完毕后，先将瓶摇瓶停止运转，再将瓶架中的培养瓶取出。
3.3 废液处理•使用完毕的培养液，应按照相关规定进行废液处理，避免对环境造成污染。
4. 瓶摇瓶的保养规程为了确保瓶摇瓶的正常运行和使用寿命，以下是一些建议的保养规程：4.1 定期清洁•每次使用完毕后，在使用专用溶液或酒精擦拭瓶摇瓶的摇床和瓶架，以保持清洁。
•定期清洁瓶摇瓶的外部表面，避免灰尘和污渍积累。
4.2 定期检查•定期检查瓶摇瓶的电源线和电机连接线是否正常。
•检查瓶摇瓶的控制面板和按钮是否损坏或松动。
•检查瓶摇瓶的瓶架和固定装置是否牢固。
4.3 维护和保养•定期加入润滑油或润滑脂，以保持瓶摇瓶的正常工作。
•定期检查电机的工作状态，如异常声音或震动应及时保养或更换。
5. 总结细胞培养优化瓶摇瓶的安全操作及保养对于确保实验结果的准确性与保证实验人员的安全至关重要。
本文档介绍了瓶摇瓶的基本组成和工作原理，以及使用时的安全操作规程和保养规程。
厌氧培养方法范文厌氧培养是一种在缺氧条件下进行的微生物培养方法，对于一些需氧菌或者厌氧菌的研究非常重要。
本文将详细介绍厌氧培养的方法和步骤，并探讨其应用和优缺点。
厌氧培养的方法主要有以下几种：摇瓶培养、拊盘培养、封口瓶培养和深层培养。
摇瓶培养是最常用的厌氧培养方法之一、首先，选择适当的培养基，如液态或半固态培养基，并添加适宜的培养物。
然后，将培养基倒入摇瓶中，尽量避免气泡的产生。
接下来，用柱塞或酸奶盖密封摇瓶，并利用橡皮筋将塞子固定在摇床上。
最后，调节摇床的转速和温度，进行培养。
拊盘培养是一种用于培养需氧菌和厌氧菌的简单而有效的方法。
首先，将适当的培养基倒入培养皿中，然后用柱塞或酸奶盖密封。
接下来，用一个4角钝的扁担将培养皿颠倒置放入密闭的培养箱中。
最后，将培养箱密封并将其置于恒温培养箱中。
封口瓶培养是一种用于培养厌氧菌的方法。
首先，选择适当的培养基并添加适宜的培养物。
然后，将培养基倒入平底培养瓶中，并用瓶塞或金属夹密封瓶口。
接下来，将密封的培养瓶置于温度适宜的培养箱中进行培养。
深层培养是一种用于培养厌氧菌的方法，允许微生物在无氧条件下生长，并通过其代谢产物显示菌落的出现。
首先，准备含有培养物的试管。
然后，结合震荡和倾倒的方法，将培养液均匀地倒入试管中，使空气尽可能少地进入。
最后，使用胶体溶液或者石蜡密封试管，以便在无氧条件下进行培养。
厌氧培养方法的应用非常广泛，可以用于分离和鉴定厌氧菌，研究厌氧代谢等。
在医学领域，厌氧培养可以用于检测和诊断各种厌氧菌感染，如产气荚膜梭菌感染和肠道厌氧菌感染等。
在环境领域，厌氧培养可以用于研究厌氧微生物的多样性和功能。
厌氧培养方法也有一些局限性和不足之处。
首先，厌氧培养需要特殊设备和技术，对实验环境的要求比较高。
其次，厌氧条件往往会导致培养时间延长，且很多厌氧菌并不容易培养。
此外，厌氧培养也容易受到外界条件的干扰，如温度和氧气浓度等。
总的来说，厌氧培养是一种重要的微生物培养方法，在微生物学研究和应用中起着重要的作用。
实验四糖化酶综合实验（一）糖化酶摇瓶实验一、实验目的掌握糖化酶摇瓶实验的基本操作。
二、实验原理摇瓶培养是实验室常用的通风培养方法，通过将装有液体培养物的三角瓶放在摇床上振荡培养，以满足生物生长、繁殖及产生许多代谢产物对氧的需求。
三、实验材料1.菌种：黑曲霉（糖化酶生产常用菌种）2.培养基：玉米粉、豆饼粉、麸皮、水3.器材：500ml三角瓶、玻片四、方法步骤1. 配制培养基玉米粉 6%，豆饼粉 2%，麸皮 1%。
补足水分，原料浸入水中。
8层纱布+牛皮纸包扎，0.1MPa下灭菌30min。
500ml三角瓶 1瓶/小组，装液量分别为100ml 2个小组、200ml 2个小组2. 接种成熟斜面，在无菌条件下，注入10ml无菌水，振荡成孢子悬浮液。
待发酵培养基灭菌后冷却到30～32℃时，分别将孢子悬浮液接入三角瓶中，接种量为2ml，做好标记3. 培养将三角瓶固定在摇床上，培养温度为31℃，转速为200rpm，培养时间为96h4. 显微镜观察菌丝形状，测量发酵液pH，测定糖化酶活力五、实验结果1.比较两种不同装液量条件下的菌体形状特征、酶活力，将结果填入分析：由于摇瓶培养的时间未达到96小时。
所以，培养瓶内壁只出现少量黑色菌落。
但相对于100ml培养基中的菌体要多一些。
说明培养基量的多少会影响菌体的生长，培养基量多则营养多更有利于菌体快速旺盛生长，增殖。
因此，观察到的菌丝相对于100ml培养基中的菌丝多而粗。
培养时间一定要遵循菌体的生长曲线时间，不能过早或过晚结束培养。
应按照各种菌体与产物的模式，适时停止培养收集产物酶。
本实验摇瓶培养才72小时，未能使菌体充分生长，即菌数少，产酶量低，或培养时间还未达到菌体大量产酶的时段，这将影响后续酶的分离提取及活力测定。
培养基应适量，在不浪费原料的同时有能使菌体快速生长，并且控制培养基的量，将减轻酶分里提取的工作量。
（二）糖化酶活力测定一、实验目的掌握糖化酶活力测定的原理与方法。
一) 摇瓶培养
摇瓶培养技术问世于本世纪30年代，由于其简便、实用，很快便被发展成为微生物培养中极重要的技术而普及，并广泛用于工业微生物菌种筛选、实验室大规模发酵试验、种子培养等。
摇瓶培养设备主要有旋转式摇床和往复式摇床两种类型，也有旋转式和往复式的混合类型，其中以旋转式最为常用。
用旋转式摇床进行微生物振荡培养时，固定在摇床上的三角烧瓶随摇床以200～250r/min的速度运动，由此带动培养物围绕着三角烧瓶的内壁平稳地运动。
在用往复式摇床进行振荡培养时，培养物被前后抛掷，引起较为剧烈的搅拌和撞击。
振荡培养中所使用的发酵容器通常为三角烧瓶，也有使用特殊类型的烧瓶或试管。
在振荡培养过程中所采用的烧瓶类型和振荡类型主要取决于所要研究的发酵类型及性质。
振荡培养通常用于有氧过程中，主要是两种类型：(1) 供氧相对较大，以产生大量的细胞，常见于丝状微生物(如食用菌、放线菌)中; (2) 需供氧但所需供氧量较小，常见于细菌。
要获得高氧供应，可在较大的烧瓶(250～500ml三角烧瓶) 中盛装相对较小容积的培养基，由此可获得更高的氧传递速率，便于细胞的迅速生长，要获得较低的氧供，则采用较慢的振荡速度和相对大的培养体积。
经连续振荡培养一段时间后，细菌等单细胞微生物可以呈均一的细胞悬液; 而丝状真菌和放线菌，可得到纤维糊状培养物——纸浆状生长。
如果振荡不足，则会形成许多球状菌团——颗粒状生长。
振荡培养技术通常用于微生物菌种的筛选或生产工艺的改良和工艺参数的优化。
因此，通常使用复合培养基。
用于振荡培养的复合培养基通常由碳水化合物及多种蛋白质性物质(玉米上清、大豆粉、豌豆粉等) 及植物油组成。
这些培养基组分以不同的速率被代谢掉，从而为微生物提供一较长的、最适生长和代谢的条件。
在复合培养基中通常还加入一些固体物质如石膏(CaCO3)，以协助培养基pH的控制并有利于絮凝物的形成，此在啤酒工艺中特别重要。
此外，经过精心设计的化学限定性培养基(避免pH 波动及防止重要培养基组分的突然耗尽)也可用于振荡培养，这类培养基的组成通常是蔗糖加酒石酸盐、铵盐、磷酸盐、金属盐类以及生长因子。
1. 摇瓶培养方法在浸没培养过程中振荡的目的在于改善活细胞的氧气和营养物的供给。
摇瓶培养通常以特定生长条件下的培养物接种，也可用孢子接种。
在绝大多数情况下，摇瓶接种量有一最佳浓度，此在摇瓶开始之前，必须通过预试加以确定。
而在整个摇瓶发酵过程中保持相对无菌是成功地实施这项技术的必要保证。
摇瓶培养的机械装置主要由用于放置和固定烧瓶的平台以及牵引其运转的马达和运转系统组成，摇瓶需安装于有维持恒温和恒湿自动调节能力的隔热室内。
目前也有具备恒温装置的小型台式摇床。
考察摇床的设计和使用性能主要从下列几项入手：(1) 所使用的设备，(2) 平衡要求，(3) 摇床的大小、型号，(4) 培养条件及恒温调控，(5) 试管或小型发酵器的振荡培养性能。
通常，摇床的工作温度为25～37℃。
由于电机和机械传动部分的产热、振荡产热和微生物生长代谢释放的热能，使摇瓶中培养基的实际温度要比实际室温高2℃左右，且在强烈振荡时，此温差更为明显。
因此，在实验过程中设计高温点时必须认真注意到这一问题。
另外，由于夏季气温偏高，温控困难随之增大; 培养放线菌和真菌时温控更为主要，因为大部分放线菌和真菌在30℃下培养时，其代谢已被严重干扰，而30℃的温度在摇瓶中是极易形成的。
因此，在摇床室中必须装配一个可靠的致冷系统。
一般台式摇床都有一通过空气循环或水浴来保持恒温的装置，可使所有的摇瓶内培养基温度处于同一水平。
振荡培养所用的发酵容器也可选用试管。
所选用的试管大小可根据需要来定。
将盛有一定体积的培养基的试管倾斜固定在支架上，倾斜角度一般为15～30°，倾斜方向与振荡方向一致。
试管随摇床平台作旋转式或往复式运动。
用试管作发酵容器的优点在于在较小的空间范围内一次可处理较大的试样数。
但其效率远不如三角烧瓶。
因此，在通常情况下更多的是选择25～50ml小烧瓶。
同样，
在用试管进行振荡培养时，可在试管中盛装相对较少的培养基以旋转式振荡培养来提供丝状微生物良好的气体环境，也可以用相对多的培养基，以往复式振荡培养，使细菌迅速生长。
振荡培养中，三角烧瓶用6～8层医用纱布封口，试管塞一般用普通棉塞，也有使用封口胶或其他的塑料或金属盖。
2. 振荡培养中遇见的实际问题振荡培养是建立深层发酵的开始。
就一特定微生物而言，振荡培养时存在一最佳培养基配方和最佳培养基容量。
一般来说，振荡培养丝状微生物时培养基最佳容量为50～100ml/500ml三角烧瓶，或25～50ml/250ml三角烧瓶，即为所使用的发酵容器容积的10～20%。
在这一范围内，所使用培养基量越小，所得试验结果越好。
通过使用带有挡板的烧瓶、使用气体通透性更好的封口胶代替纱布或棉塞，以及增加摇床振荡速率也可获得相同的效应。
但需特别注意的是提高振荡速率时必须注意烧瓶的放置位置与重力平衡，以减少由于角速度增加引起的磨耗和不平衡甚至翻车。
使用棉塞和纱布时应采用普通棉纱而非脱脂棉纱，以防吸水潮湿而妨碍氧的扩散。
将经接种的烧瓶固定到摇床上培养，在培养过程中应特别注意两个问题：一是上文已提及的温度控制，另一个十分重要的问题就是维持连续振荡。
振荡不连续进行那怕只是数分钟的停顿，对结果的影响都是极显著的; 而且由于数分钟的停顿对微生物细胞生长的影响不明显，使影响从表面上不易被发现。
有报道在用黑曲霉素生产柠檬酸的发酵试验中，提高通气率可以刺激柠檬酸的生产，中断通气时柠檬酸的产生直线下降，甚至不可逆转。
在繁殖期中断通气20min不会使菌株的活力下降，但菌株生产和积累柠檬酸的能力受到不可逆的破坏或减慢。
经24～48h培养，可对烧瓶进行检查，以判断生长的程度和类型。
在好氧生长时，消耗1g葡萄糖通常可增加0.25～0.5g的细胞。
单细胞性细菌经培养后会出现一稠密或轻度稠密的培养物; 而丝状菌株如在含5%的糖的培养基中生长可形成密细胞培养物，4～5天后，细胞密度可达20～30g/L，如果培养物产生毒性物质或大量的副产物以及产生抑制细菌生长的产物，则其生长速度相应降低。
振荡培养过程中，必须定期定时分析培养过程中的各种参数。
通过光密度、培养基中细胞沉积或通过过滤、干燥和称重可定量或半定量地估计细胞生长情况。
迅速而粗略地估计细胞生长的方法是将一些培养物放置于一小的测量瓶中，室温静置一段时间后根据细胞沉积粗略估计微生物细胞生长情况。
此外，培养液的pH、残糖、色质、表观和气味的变化也应随时加以记录; 用显微镜检测菌丝末端状态、分枝情况、絮凝体形成及污染情况，对于掌握培养物的培养状况也是重要的。
细胞或孢子接种浓度对试验的成功极为重要，不同的微生物细胞或孢子以及不同的振荡培养过程的接种浓度差异可以是十分显著的，且各自存在一最适浓度。
此必须在预试验中确定。
最适接种浓度的获得和使用可保证良好的生长和高质量的培养物的获得。
使用不同的接种浓度还可获得不同的生产类型。
例如，当使用2×102～1×103/ml青霉孢子接种浓度时，经25℃培养120h后菌丝呈平滑、致密沉积体;而当接种浓度在5×103～5×104/ml时，相同条件下培养后则呈小、纤丝状、絮凝物，直径在0.4mm左右。
振荡培养中最常出现的另一问题是贫脊生长。
这通常是由于接种浓度太低或种子活力较差。
经验而言，种子的培养时间为1～2天，接种后培养基中的孢子浓度在5×104～1×106/ml。
振荡培养时培养物被污染并不常见，但一旦被污染，会带来许多麻烦。
出现污染时，培养物表面为表观改变，气味异常，菌丝体雾浊不清，产品丢失等。
需及时发现并及时处理。
