动物实验的基本技术和方法[优质分析]

动物实验的基本知识和操作技术第⼆章动物实验的基本知识和操作技术第⼀节实验动物药理学实验常⽤的动物有蛙、蟾蜍、⼩⽩⿏、⼤⽩⿏、豚⿏、家兔、猫和⽝等。

常根据实验⽬的和要求选⽤不同的实验动物。

由于不同的动物具有不同的特点，故所选⽤的动物应能较好地反映试验药物的选择性作⽤，并符合节约的原则。

（⼀）、实验动物的选择原则1、尽量选择与⼈体结构、机能、代谢及疾病特征相似的动物；2、选⽤的实验动物的解剖、⽣理特点应符合实验⽬的；3、根据⼈与实验动物对同⼀刺激的反应差异，选⽤具有明显反应的动物；4、根据⽣物医学研究必须达到的精确度，选⽤结构功能简单⼜能反映研究指标的动物；5、选⽤患有⼈类类似疾病的近交系或突变系动物；6、选⽤与实验设计、技术条件、实验⽅法等相适应的标准化动物；7、在不影响实验⽬的与结果的前提下，选择最易获得、最经济、便于操作管理的动物；8、供实验⽤的动物应具备质量合格证。

（⼆）、常⽤实验动物的特点1、蛙和蟾蜍离体⼼脏能较持久地有节律地搏动，常⽤于观察药物对⼼脏的作⽤；坐⾻神经和腓肠肌标本可⽤来观察药物对周围神经、神经肌⾁或横纹肌的作⽤；蛙的腹直肌还可以⽤于鉴定胆碱能药物的作⽤。

2、⼩⽩⿏是实验室最常⽤的⼀种动物。

易于⼤量繁殖，且价廉，适⽤需要⼤量动物的实验，如药物筛选、半数致死量测定、药物效价⽐较、抗感染、抗肿瘤药物及避孕药物的研究等。

3、⼤⽩⿏与⼩⽩⿏相似。

⼀些在⼩⽩⿏⾝上不便进⾏的实验可选⽤⼤⽩⿏，如药物抗炎作⽤的实验常选⽤⼤⽩⿏踝关节制备关节炎的模型。

此外，也可⽤⼤⽩⿏直接记录⾎压、作胆管插管，或⽤⼤⽩⿏观察药物的亚急性或慢性毒性。

⼤⽩⿏的⾎压和⼈相近，且稳定，现常⽤于抗⾼⾎压药物实验。

4、豚⿏是实验室常⽤动物之⼀。

对组织胺很敏感，容易致敏，常⽤于平喘药和抗组胺药的实验。

对结核菌亦敏感，故也⽤于抗结核药的研究。

此外还⽤于离体⼼脏及平滑肌实验，其乳头肌和⼼房常⽤于电⽣理特性及⼼肌细胞动作电位实验，研究抗⼼律失常药物的机理。

动物实验的基本技术第一节实验动物的抓取和固定在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。

抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。

操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要爱惜动物，使动物少受痛苦。

一、小鼠小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。

通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。

在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定,如尾静脉注射架或粗的玻璃试管。

如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作,如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。

二、大鼠大鼠的门齿很长，在抓取方法不当而受到惊吓或激怒时易将操作者手指咬伤,所以,不要突然袭击式地去抓它，取用时应轻轻抓住其尾巴后提起，置于实验台上，用玻璃钟罩扣住或置于大鼠固定盒内，这样即可进行尾静脉取血或注射。

如要作腹腔注射或灌胃等操作时，实验者应戴上棉纱手套(有经验者也可不戴)，右手轻轻抓住大鼠的尾巴向后拉，但要避免抓其尖端，以防尾巴尖端皮肤脱落，左手抓紧鼠两耳和头颈部的皮肤，并将大鼠固定在左手中，右手即可进行操作。

三、家兔家兔比较驯服，不会咬人，但脚爪较尖，应避免家兔在挣扎时抓伤皮肤。

常用的抓取方法是先轻轻打开笼门，勿使其受惊，随后手伸入笼内，从头前阻拦它跑动。

然后一只手抓住兔的颈部皮毛，将兔提起，用另一只手托其臀，或用手抓住背部皮肤提起来，放在实验台上，即可进行采血、注射等操作。

因家兔耳大，故人们常误认为抓其耳可以提起，或有人用手挟住其腰背部提起均为不正确的操作。

在实验工作中常用兔耳作采血、静脉注射等用，所以家兔的两耳应尽量保持不受损伤。

家兔的固定方法有盒式固定和台式固定。

动物实验的基本操作技术生理学实验主要以动物为实验对象，为了能获得满意的实验结果，应对动物品系特性有所了解。

实验动物系指供生物医学实验而科学育种、繁殖和饲养的动物。

高质量的实验动物是指通过遗传学与微生物学的控制，培育出来的个体；其具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和实验再现性。

一、常用实验动物的种类及其特点（一）青蛙与蟾蜍两者均属于两栖纲，无尾目。

蟾蜍和青蛙是教学实验中常用的小动物。

其心脏在离体情况下仍可有节奏地搏动很久，可用于心功能方面的实验。

蛙舌与肠系膜是观察炎症和微循环变化的良好标本。

此外，蛙类还能用于水肿和肾功能不全的实验。

（二）小白鼠属于哺乳纲，啮齿目，鼠科。

其繁殖周期短、产仔多、生长快，饲料消耗少，温顺易捉，操作方便，又能复制出多种疾病模型，是药学实验中用途最广泛和最常用的动物。

（三）大白鼠亦属鼠科。

性情不像小白鼠温顺。

受惊时表现凶恶，易咬人。

雄性大白鼠间常发生殴斗和咬伤。

具有小白鼠的其他优点，故在药学实验中的用量仅次于小白鼠。

（四）豚鼠豚鼠又名天竺鼠、荷兰猪。

原产于欧洲中部。

属于哺乳纲，啮齿目，豚鼠科。

性情温顺，胆小。

不咬人也不抓人。

豚鼠可分为短毛、长毛和刚毛3种。

短毛种豚鼠的毛色光亮而紧贴身，生长迅速，抵抗力强，可用于实验。

其余两种对疾病非常敏感，不宜用于实验。

（五）家兔家兔属于哺乳纲，啮齿目，兔科，为草食哺乳动物。

家兔性情温顺、怯懦、惊疑、胆小，是常用的实验动物。

家兔品种很多，在实验室中常用的有：（1）青紫蓝兔：体质强壮，适应性强，易于饲养，生长较快。

（2）中国本兔（白家兔）：抵抗力不如青紫蓝兔强。

（3）新西兰白兔：是近年来引进的大型优良品种，成熟兔体重在4～5.5kg。

（4）大耳白兔：耳朵长大，血管清晰，皮肤白色，但抵抗力较差。

（六）狗狗属于哺乳纲，食肉目，犬科。

狗的嗅觉很灵敏，对外环境的适应力强；血液、循环、消化和神经系统等均很发达，与人类很相近。

狗喜欢接近人，易于驯养。

第二章动物实验的基本操作与技术动物实验方法是多种多样的，在医学的各个领域内都有其不同的应用，其中一些基本方法都是共同性的，如动物的选择、抓取、固定、麻醉、脱毛、给药、采血、采尿、急救、处死、尸检等，不管是从事何种课题的医学研究都要用这套基本方法，因此，动物实验基本方法，已成为医学科技工作者必须掌握的一项基本功。

第一节实验动物的抓取固定方法一、小鼠抓取固定方法小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤（见图2-1之一），将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可（图2-1之二）。

有经验者可直接用左手小指钩起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后颈背部皮肤亦可。

这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。

如进行解剖、手术、心脏采血和尾静脉注射时，则需将小鼠作一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧位（必要时先行麻醉），再用大头针将鼠前后肢依次固定在腊板上。

尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定（图2-2），先根据动物大小选择好合适的固定架，并打开鼠筒盖，手提鼠尾巴，让动物头对准鼠筒口并送入筒内，调节鼠筒长短合适后，露出尾巴，固定筒盖即可进行尾静脉注射或尾静脉采血等操作。

图2-1 小鼠的抓取固定方法图2-2 小鼠尾静脉注射方法二、大鼠的抓取固定方法大鼠的抓取方法基本同小鼠，只不过大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击方式抓取，否则会被咬伤手指。

抓取时为避免咬伤，可带上帆布手套。

如果进行腹腔、肌肉皮下等注射和灌胃时，同样可采用左手固定法，只是用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏鼠背皮肤，置于左掌心中，这样右手即可进行各种实验操作。

也可伸开左手之虎口，敏捷地从后一把抓住。

若做手术或解剖等，则需事先麻醉或处死，然后用细棉线绳活结缚腿，背卧位绑在大鼠固定板上；尾静脉注射时的固定同小鼠（只需将固定架改为大鼠固定盒）。

动物实验的基本技术和方法动物实验是科学研究中常用的一种手段，通过对动物进行实验，可以了解生物体的生理、病理、药理等信息，对人类疾病的预防和治疗起到重要作用。

下面将介绍动物实验的基本技术和方法。

1.动物选择：选择适合进行实验的动物是进行动物实验的首要任务。

常用的实验动物有小鼠、大鼠、兔子、猪、狗等。

根据研究目的的不同，可以选择不同品种、不同年龄、不同性别的动物进行实验。

2.动物养护：对于实验动物的养护是确保实验结果可靠的重要环节。

动物应在适宜的温度、湿度和光照条件下饲养，并提供适宜的饲料和水源。

为了防止交叉感染，需要实施严格的无菌操作和动物消毒。

3.动物注射：动物注射是常用的动物实验技术之一、通过针筒和注射器将药物或其他物质注射到动物体内，以研究其作用机制。

常见的注射方式有皮下注射、肌肉注射和静脉注射。

4.动物手术：动物手术是进行生理、病理研究的重要手段。

常见的动物手术包括造模手术、器官移植手术和腹腔镜手术等。

在进行动物手术时，需要注意术前麻醉、手术操作的细节和术后的护理。

5.动物观察：动物观察是动物实验中重要的实验方法之一、通过观察动物行为、体征和疾病发展等，了解其生理和病理状态。

动物观察可以采用直接观察和间接观察的方法，比如记录动物的活动情况、进食量、体重变化等。

6.动物取样和检测：在动物实验中，需要采集动物的组织、血液、尿液等样本进行检测。

常用的动物取样方式有穿刺、切片、摘取组织等。

取样后，可以进行生化分析、免疫表型分析等检测方法进行进一步研究。

7.数据统计和分析：对于动物实验的结果，需要进行数据统计和分析，以得出科学的结论。

常用的统计分析方法有t检验、方差分析、回归分析等。

通过数据的处理和分析，可以确定实验结果的可靠性和显著性。

8.动物伦理：在进行动物实验时，需要遵循动物伦理原则，确保动物的福利和权益。

包括动物的合理饲养和管理、注重动物的生理和心理健康、减少动物的痛苦和不适等。

同时，需要通过伦理审查机构的审批，确保实验符合伦理要求。

三、动物实验的基本技术(一)实验动物的捉持方法1．青蛙和蟾蜍通常用左手握持，以食指和中指夹住左前肢，大拇指压住右前肢，右手将下肢拉直并固定于无名指和小指之间。

毁脑和脊髓时，左手食指和中指夹持青蛀或蟾蜍的头部，右手将探针经枕骨大孔向前刺入颅腔，左右摆动探针捣毁脑组织。

如需破坏脊髓，毁脑后退回探针刺入椎管即可。

2．小鼠右手提起鼠尾，放在鼠笼(或其它粗糙面)上，向后轻拉其尾，小鼠即固定于鼠笼上，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠头颈部皮肤，并以左手小指、无名指压其尾部于手掌尺侧。

另一方法是只用左手，先用食指和拇指抓住小鼠尾巴后用手掌尺侧和小指夹住尾根部，然后用左手拇指和食指捏住头颈部皮肤。

3．大鼠捉持方法与小鼠相似。

因大鼠容易被激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套。

右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住头部，其余手指与手掌握住脊部和腹部。

注意不要捏其颈部，以防用力过大、过久，造成窒息死亡。

4．豚鼠以左手直接从背侧握持前部躯干，右手托住臀部或抓住两后肢。

体重小者，可用单手捉持。

5．家兔一只手抓住兔颈背部皮肤，将兔轻轻提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿势。

切不可用手握持双耳提起兔子。

(二)实验动物的性别辨认、标记和去毛方法1．性别辨认鼠类：雄性小鼠和大鼠性器官与肛门距离较远，其间有被毛，阴囊明显可见。

雌性小鼠和大鼠性器官与肛门距离较近，其间无被毛，腹部乳头明显可见。

豚鼠性别辨认方法与小鼠和大鼠相同；家兔：雄兔泄殖孔附近，可见阴囊，用拇指和食指挤压泄殖孔部位，可露出阴茎。

雌兔腹部5对乳头明显可见。

2．标记小鼠、大鼠和兔多采用染色法，一般用1％的苦味酸溶液(黄色)或5％中性红溶液(红色)涂于动物体表不同部位的皮毛处，代表不同号码。

编号原则是先左后右，自前到后。

例如1号涂左前肢；2号涂左侧腹部；本号涂后肢；4号涂右前肢；5号涂右侧腹部；6号涂右后肢；7号涂头部；8号涂背部；9号涂尾部；10号不涂色。

如10只以上动物作标记时，可用两种不同颜色溶液，一种颜色作为个位数，另一种颜色作为十位数，涂在不同部位。

实验一动物的实验技术和方法动物实验的方法是各种各样的，如常用模型复制法、切开和分离法、切除和注入法、离体组织器官法等，在不同的研究领域有其不同的目的和应用，但是一些基本的操作技术方法是一样的，如动物的抓取、固定、标号、脱毛、麻醉、给药、采血、采尿、处死等，对于实验研究者来说无论从事哪一类研究项目，都会不同程度的应用这些技术。

下面以大鼠为例，介绍相关的动物实验技术。

一、动物的抓取和固定方法抓大鼠时，最好戴上防护手套。

如果是灌胃、腹腔注射、肌肉和皮下注射时，可用拇指、食指捏住大鼠的耳朵及头颈皮肤，余下的三指紧捏住背部皮肤，置于掌心中，调整大鼠在手中的姿势后即可操作。

另一种方法是张开左手虎口，迅速将拇指、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中段，并将其保持卧位，之后调整左手拇指位置，紧压在下颌骨上（不可过紧，否则会造成窒息），即可进行实验操作。

若对大鼠进行采血和手术操作，需对大鼠进行麻醉后，将四肢用棉线固定在实验板上，为防止苏醒时伤人或便于颈、胸部实验操作，应用棉线将大鼠两上门齿固定于实验板上。

二、动物的编号、标记、分组和被毛方法1、和标记方法在动物实验中，为了观察每个实验动物的反映情况，必须对实验动物进行编号、标记。

标记的方法应该保证号码清楚、耐久、简便、易认和使用。

比如：染色法、挂牌法、烙印法、耳孔法。

一般来说，小型动物适宜用耳孔法和染色法，中型动物适用挂牌法和烙印法。

大鼠常常选用染色法，即用化学剂在动物身体明显的部位如被毛、四肢等处进行涂染或用不同颜色等来区别各组动物，是最常用、最容易掌握的方法。

这种方法多用于实验周期较短，动物数量不多的情况。

动物无疼痛和损伤，但由于动物之间相互摩擦、舔毛、尿、水浸渍被毛或脱毛，或因日久颜色自行消退，应及时发现，及时补染。

常用编号标记溶液有：①3%-5%苦味酸溶液，涂然橙黄色；②2%硝酸银溶液，涂染成咖啡色（涂后需光照10min）；③0.5%中性红或品红溶液，涂染成红色；④煤焦油酒精溶液，涂染成黑色；⑤龙胆紫溶液，涂染成紫色。