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不同方法检测甲型肝炎病毒 IgM抗体摘要：目的通过不同方法学检测甲型肝炎IgM抗体，总结一种提高特异性和敏感性，减少临床误诊和漏诊，便于推广普及，便于标准化管理和提高工作效率的方法。
方法甲型肝炎IgM抗体首先用化学发光法初筛，阳性标本再用胶体金法和酶联免疫法进行复检。
结果 2021年01月～2022年02月期间，在我院体检科办理健康证体检人群27463例，用化学发光法检测甲型肝炎IgM抗体初筛阳性15例；15例阳性标本再用酶联免疫法进行复测，结果酶联免疫法检测阳性4例。
结论化学发光法便于标准化操作和提高工作效率，也是未来发展方向，用化学发光法初筛，阳性标本再用酶联免疫法进行复测验证，可解决化学发光敏感性过高的问题，能更好的保证检测结果质量，减少误诊和漏诊。
关键词：甲型肝炎IgM抗体；化学发光法；酶联免疫法。
甲型病毒性肝炎简称甲肝,是由甲型肝炎病毒(HepatitisA Virus,HAV)引起的一种急性传染病,甲肝IgM(HAV-IgM)抗体检测是甲肝的诊断标准之一。
甲型肝炎在临床上为一种常见的急性传染病。
病原体主要为甲型肝炎病毒，感染形式主要为流行和散发等[1]。
在我国近些年来甲型肝炎病毒导致的流行相对较少，然而在临床上仍有甲型肝炎散发；此类疾病已经成为公共卫生问题。
在临床诊断中甲型肝炎IgM为早期特异性指标。
甲型肝炎病毒通过粪便排出体外，可对海产品、食物、水源等进行污染，会造成大流行或散发[2]。
与乙型肝炎病毒相比，甲型肝炎病毒具有较长的持续时间，一般不会由于注射和输血而传播。
甲型肝炎病毒属小核糖核酸病毒科，肝病毒属；只有一种血清型，7种基因型；对热、酸、干燥有抵抗性，是肝炎病毒中惟一能用细胞培养的一种。
经粪-口途径传播，潜伏期3～9周。
甲型肝炎儿童多见，黄疸型多见，经济不发达卫生条件差的地区多见；可散发或暴发流行。
甲型肝炎是一种自限性疾病，经常为亚临床状态，尤其是儿童，80%～90%为隐匿性感染，无明显临床症状[3]。
HQBJS/MYXM-14-2014 HQBJS/MYXM-14-2014SOP文件B14.2【检测原理】甲型肝炎病毒IgM抗体检测试纸采用捕获法及胶体金免疫层析技术原理，在聚酯纤维（或无纺布）上预包被金标记HAV抗原和鼠单抗，在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗人IgMu链单抗和抗鼠IgG抗体。
检测阳性标本时，血清（或血浆）样本中甲型肝炎病毒IgM抗体与胶体金中的甲型肝炎病毒抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物延纸条向前移动，经过检测线时于预包被的抗人IgMu链单抗结合形成“ Au-HAVAg-HAVIgM Ab- 抗人IgM Ab”夹心物，从而在检测处显示紫红色条带，游离金标鼠单抗则于质控对照线处与抗鼠 IgG抗体结合，从而在质控线处显示紫红色条带。
阴性标本则仅在质控对照线处显示紫红色条带。
戊型肝炎病毒IgM抗体检测试纸采用捕获法及胶体金免疫层析技术原理，在聚酯纤维（或无纺布）上预包被金标记HEV抗原和鼠单抗，在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗人IgMu链单抗和抗鼠IgG抗体。
检测阳性标本时，血清（或血浆）样本中戊型肝炎病毒IgM抗体与胶体金中的戊型肝炎病毒抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物延纸条向前移动，经过检测线时于预包被的抗人IgMu链单抗结合形成“ Au-HEVAg-HEVIgM Ab- 抗人IgM Ab”夹心物，从而在检测处显示紫红色条带，游离金标鼠单抗则于质控对照线处与抗鼠 IgG抗体结合，从而在SOP文件质控线处显示紫红色条带。
阴性标本则仅在质控对照线处显示紫红色条带。
B14.3【样本要求】B14.3.1.在无菌条件下采集静脉血样本，尽快分离血清或血浆以避免溶血。
B14.3.2.检测时应尽量使用新鲜标本。
如标本不能及时检测，可在2-8 C 冷藏7天。
长期保存需冷冻于-20 C,反复冻融次数不超过3次。
B14.3.3.常规的 0.2mg/ml 肝素和 150mmol/L 的 EDTA-2Na及2.5 %枸橼酸钠抗凝剂不影响检测结果。
甲型肝炎病毒IgM抗体操作步骤1．检验目的：检测人血清或血浆中的抗HA V-IgM。
2．检测原理：本品系用抗人-IgM（u链）包被的微孔板，配以纯甲型肝炎抗原（HA V-Ag）和酶标记的甲型肝炎病毒抗体（抗HA V-HRP）及其它试剂，采用捕获法原理，检测人血清或血浆中的抗-HA V-IgM。
34．操作：4.1 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有结晶析出应充分溶解）浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
4.2 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
4.3 加样：待测样本用生理盐水作1：1000稀释，每个样本检测孔加入稀释样本100 uL。
设阴阳对照各1孔，每孔加入100 uL，并设空白对照1孔。
4.4 温育：置37℃温育20分钟，室温平衡2分钟。
4.5 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
4.6 加抗原、酶：每孔加入抗原（HA V-Ag）30 uL、酶标记抗体50uL（1滴），充分混匀。
4.7 温育：置37℃温育20分钟。
4.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
4.9 显色：每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置15分钟。
4.10 终止：每孔加终止液50uL，混匀。
4.11 测定：用酶标仪单波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定需设定空白对照一孔，30分钟完成测定，并记录结果）。
5. 结果判定：5.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD均值N×2.1阴性对照OD值低于0.050←0.050计算，高于0.050按实际OD值计算。
5.2结果判定：样品OD值S/C.O.≥1者为HA V-IgM阳性样品OD值S/C.O.＜1者为HA V-IgM阴性5.3 失效：如果阳性对照OD均值小于0.05，则表明不正常的操作或试剂盒已变质损坏。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。
甲型肝炎IgM定性检测作业指导书1.检验目的血清抗HAV抗体IgM是HAV急性感染的标志，在感染的早期即已出现，是早期诊断甲型肝炎的依据。
感染后3个月内可维持较高滴度，6个月后逐渐消失。
2.方法原理采用ELISA架桥法，反应板的琼脂微孔包被兔抗人-IgMμ链，加入待测样本，同时加入HAVAg、抗-HAV-HRP，当样本中有抗-HAV-IgM时，会与包被在板上的兔抗人-IgMμ链结合，并被HAVAg 捕获、再与抗-HAV-HRP联接成复合物，加入底物TMB产生显色反应，反之则无显色反应。
3.性能指标此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。
4.标本收集4.1 标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4.3 标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
4.4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
4.6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。
甲型肝炎病毒IgM抗体检测试(北京现代)一、检验目的规范实验室人员操作，保证检验结果的准确性二、预期用途本试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆样本中甲型肝炎病毒的特异性IgM抗体。
人群未注射甲肝疫苗者对HAV普遍易感，在我国,15岁以下的儿童及青少年最容易患甲型肝炎，而患过甲型肝炎或感染过甲型肝炎病毒的人可以获得持久的免疫力。
甲型肝炎的潜伏期为15-45天，主要表现为急性肝炎，仅少数表现为急性甲型肝炎而出现发热、畏寒、食欲下降、乏力、肝肿大及肝功能异常等症状。
特异性血清学检测抗HAV-IgM抗体是早期确诊甲型肝炎的重要指标。
三、检验原理本试剂盒利用免疫层析作用原理，在硝酸纤维素膜的检测线处包被鼠抗人IgM单克隆抗体，在质控线处包被兔抗HAV抗体，在金标垫上固定胶体金标记细胞培养的纯化甲肝病毒抗原(HAV-Ag)".检测时，如为阳性样本，样本中的抗HAV-igM抗体可与金标垫上的胶体金标记的HAV-Ag发生结合，形成免疫复合物,并在层析作用下沿膜移动，经过检测线时与预包被的鼠抗人IgM单克隆抗体发生结合而凝聚显色，游离的胶体金标记HAV-Ag在质控线处与兔抗HAV抗体发生结合而凝聚显色。
如为阴性样本，则只在质控线处发生结合而凝聚显色。
四、主要组成成分1、检测卡/条主要组分a、硝酸纤维素膜( NC膜)b、金标垫c、鼠抗人IgM单克隆抗体d、细胞培养的纯化甲肝病毒抗原(HAV-Ag)e、兔抗HAV抗体2,样本稀释液：1瓶，主要组分为0.05M PBS缓冲液(pH 7.4).五、储存条件及有效期4~30℃避光密封干燥保存，有效期为12个月。
生产日期及失效日期详见标签。
检测卡/条开封后，相对湿度低于40%时，需在60分钟内检测；相对湿度高于40%时，开封即用。
六、样本要求样本应为血清或者血浆。
血清样本按常规方法由静脉采集制作。
适用于本试剂盒检测的血浆样本需采用肝素、枸橼酸钠或EDTA进行处理。
5天内检测的样本可放置4℃保存，5天后检测的样本需放置在-20℃以下冷冻保存。
