【CN109694853A】一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法【专利】

抗HER2单抗报告基因法检测抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性方法的建立及应用抗HER2单抗报告基因法检测抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性方法的建立及应用摘要：抗腫瘤单抗疗法是目前治疗HER2阳性乳腺癌的首选方法之一。

抗体依赖性细胞吞噬作用（ADCC）是抗体药物的主要机制之一，通过激活免疫细胞来杀伤肿瘤细胞。

本研究旨在建立一种基于报告基因的方法，用于检测抗HER2单抗的ADCC活性，并在体外和体内模型中评估其生物学活性。

首先，我们选择了几种具有不同HER2表达水平的乳腺癌细胞株作为实验模型，包括HER2正常表达的细胞株（例如SK-BR-3），HER2低表达的细胞株和HER2过表达的细胞株。

然后，我们构建了一个基于报告基因的系统，其中包含一个报告基因（例如荧光素酶）和一个信号轨迹的启动子（例如NF-κB）。

该启动子被激活后，报告基因的表达水平可被测量。

在体外实验中，我们首先对单抗样品进行了质检，确保其纯度和活性。

然后，我们将单抗与不同HER2表达水平的乳腺癌细胞混合，并接种到细胞培养板中。

细胞吞噬作用的活性可以通过测量报告基因的表达水平来评估。

我们发现，抗HER2单抗可诱导免疫细胞对HER2过表达细胞的ADCC活性，而对HER2低表达或正常表达细胞的作用较小。

为了验证该方法在体内的应用价值，我们采用小鼠模型进行了进一步实验。

我们注射了HER2过表达的乳腺癌细胞到小鼠体内，然后给予抗HER2单抗治疗。

在治疗后，我们收集了小鼠的血样，并检测其中的抗体与细胞间的相互作用。

结果显示，抗HER2单抗能够诱导小鼠体内免疫细胞对肿瘤细胞的ADCC活性，从而抑制肿瘤的生长。

综上所述，我们成功地建立了一种基于报告基因的方法，用于检测抗HER2单抗的ADCC活性。

该方法可以在体外和体内对抗体的生物学活性进行评估，并为抗HER2单抗的临床应用提供了重要的参考依据。

这一方法的建立为进一步研究和开发抗体药物提供了新的途径。

关键词：抗体依赖性细胞吞噬作用，HER2阳性乳腺癌，报告基因，荧光素酶，NF-κB，体外实验，体内实验总之，我们成功地建立了一种基于报告基因的方法来评估抗HER2单抗的ADCC活性。

专利名称：一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：蔡林涛,盛宗海,胡德红,龚萍,张鹏飞,高笃阳
申请号：CN201210279149.9
申请日：20120807
公开号：CN102798724A
公开日：
20121128
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其检测试剂盒。

本发明所提供的试剂盒包括(1)抗体稀释缓冲液，(2)孵育缓冲液，(3)联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体的溶液，(4)无镉量子点的水溶液。

所述的抗体稀释缓冲液为磷酸与NaCl混合配置的磷酸-NaCl缓冲液；所述的孵育缓冲液为所述的抗体稀释缓冲液与胎牛血清混合。

实验证明，本发明的检测乳腺癌HER2基因表达量的方法操作简单，灵敏度高，精确度好。

申请人：深圳先进技术研究院
地址：518055 广东省深圳市南山区西丽大学城学苑大道1068号
国籍：CN
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her2过表达标准关于HER2过表达标准的文章（1500-2000字）引言：HER2基因是一种与乳腺癌发生相关的重要基因，在许多乳腺癌患者中都会出现过表达的情况。

HER2过表达会导致肿瘤的恶性程度增加，并且预示着患者的预后可能较差。

因此，准确判断HER2过表达的标准对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义。

本文将从HER2过表达的定义、检测方法、相关标准和治疗策略等方面逐步解析。

一、HER2过表达的定义：HER2基因位于人体第17号染色体上，是一种编码成蛋白质的基因。

HER2（人体表皮生长因子受体2）是一种细胞膜上的受体蛋白质，参与调控乳腺细胞的生长和分化。

当HER2基因发生异常，出现拷贝数扩增或突变等情况时，会导致HER2过表达。

HER2过表达的乳腺癌细胞具有更强的增殖能力和侵袭能力，从而增加患者的复发风险和死亡率。

二、HER2过表达的检测方法：目前常用的HER2过表达检测方法主要有免疫组化（IHC）和原位杂交（ISH）两种。

1. 免疫组化（IHC）：免疫组化是通过对乳腺癌组织样本进行染色，检测HER2蛋白在肿瘤细胞膜上的表达情况。

根据IHC的染色结果，HER2过表达通常被分为0-3级。

IHC 0级表示无HER2表达，IHC 1+级表示低表达，IHC 2+级表示中等表达，IHC 3+级表示强烈表达。

2. 原位杂交（ISH）：原位杂交是通过对乳腺癌组织样本进行染色，检测HER2基因的扩增情况。

常用的ISH方法包括荧光原位杂交（FISH）和辣根过氧化物酶原位杂交（CISH）。

FISH技术利用荧光标记的探针与HER2基因发生结合，形成特定的荧光信号，从而判断HER2基因是否扩增。

CISH技术则使用酶标标记的DNA探针，通过染色反应形成可见的颜色信号，评估HER2基因扩增的情况。

三、HER2过表达的相关标准：根据乳腺癌患者HER2表达情况的不同，可将HER2分为HER2阴性（-）、HER2低表达（+）、HER2中度表达（2+）和HER2强烈表达（3+）四个等级。

乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗的相关性研究乳腺癌Her2 基因通过抑制凋亡、上调血管内皮生长因子（VEGF）而增加肿瘤细胞的侵袭力，原癌基因Her2过表达见于20% ～30%乳腺癌，Her2过表达与乳腺癌患者预后不良密切相关，Her2分子作为乳腺癌重要的分子生物学标记物之一，是乳腺癌基因治疗的重要靶位点，对乳腺癌的治疗和预后都有极其重要的价值。

本文就目前乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗方面的相关性研究进展作一综述。

标签：Her2基因过表达；乳腺癌；治疗；相关性1 一般资料世界卫生组织癌症研究所最新统计显示，全球每年乳腺癌患者有120万左右，其中新发病例54万，每年因乳腺癌病亡的病例大约50万。

2009年，国内乳腺癌发病率大约为0.02%，居各类癌症之首，每年因乳腺癌死亡人数大约为5万人。

应学翔等人研究结果发现[1]，Her2在很多上皮源性肿瘤领域过表达，且与肿瘤转移、发生及降低放化疗敏感性等具有密切关联性，同时也是非常有发展前途的一种基因治疗靶位[2]。

本文就目前乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗方面的相关性研究进展作一综述。

2 Her2基因分子结构、功能及相关检测2.1 结构染色体17q21中，Her2是具有185KD编码分子量的一种跨膜糖蛋白，该基因分子主要由胞外结构域、跨膜区以及胞内酪氨酸激酶结构域三部分共同组成，同时也极具PTK（蛋白酪氨酸激酶）活性的一种跨膜蛋白，该基因分子是表皮生长因子受体中的重要环节[3-4]。

2.2 功能从根本上说，生长因子受体本身属于一种原癌基因，并由Her3、Her2以及Her1共同组成，该受体在肿瘤出现与发展过程中发挥着极为重要的作用。

如今还没有发现直接结合Her2的相关配体，结合其他受体变为异二聚体后，可以充分发挥其信号转移功能，与没有Her2的二聚体相比，具有更强的信号功能[5]。

此外，Her2本身所具有的异二聚体让表皮生长因子受体（EGFR）在细胞膜中出现过表达，加速了细胞的增殖，导致肿瘤形成和生长加快。

引言概述：乳腺癌作为一种常见的恶性肿瘤，对女性健康造成了巨大的威胁。

在癌症研究领域，Her2基因逐渐引起了人们的关注，该基因的异常表达与乳腺癌的发生和发展密切相关。

本文将结合最近的研究成果，对Her2基因与乳腺癌的关系进行深入探讨，并从分子水平、临床应用等方面进行详细阐述。

正文内容：一、Her2基因的功能和调控机制1.Her2基因的结构和编码蛋白2.Her2基因在细胞生长和分化中的作用3.Her2基因的调控机制：转录水平和翻译后修饰二、Her2基因与乳腺癌的关系1.Her2基因的异常表达在乳腺癌中的高发率2.Her2基因异常表达与乳腺癌的分子亚型3.Her2基因异常表达与乳腺癌的生物学行为4.Her2基因异常表达与乳腺癌的临床预后5.Her2基因异常表达在乳腺癌治疗中的作用三、Her2基因检测方法和进展1.免疫组化检测法及其局限性2.基因表达检测法的发展与应用3.荧光原位杂交技术的优势和应用前景4.微阵列技术在Her2基因检测中的应用5.下一代测序技术在Her2基因检测中的前景四、Her2基因与靶向治疗1.Her2阳性乳腺癌的靶向治疗药物2.Her2阳性乳腺癌的治疗策略3.Her2阳性乳腺癌预防与治疗的新进展4.增强Her2靶向治疗效果的新策略5.Her2阳性乳腺癌治疗中的副作用和安全性问题五、Her2基因在乳腺癌研究中的前景1.Her2基因与乳腺癌干细胞的关系2.Her2基因在乳腺癌预测和早期诊断中的应用3.Her2基因与乳腺癌转移的关系4.Her2基因与乳腺癌免疫治疗的关联5.未来研究方向和挑战总结：Her2基因在乳腺癌的发生和发展中起着至关重要的作用。

通过深入了解Her2基因的功能和调控机制，我们可以更好地理解乳腺癌的分子机制。

同时，Her2基因的检测方法和靶向治疗的进展为乳腺癌患者的个体化治疗提供了依据。

随着研究的深入，Her2基因在乳腺癌研究中的应用前景将更为广阔，这将为乳腺癌患者的诊断和治疗带来更多的希望。

乳腺癌HER2neu基因荧光原位杂交诊断体系的建立及应用的开题报告一、研究背景乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，且其发生率不断增加。

HER2/neu基因在乳腺癌乃至其他肿瘤中起着重要作用，是影响恶性肿瘤生长、进展及预后的重要遗传因素之一。

HER2/neu基因的放大或突变可导致其蛋白表达增加，从而导致肿瘤恶化。

因此，针对HER2/neu基因进行诊断和治疗，成为乳腺癌治疗的重要手段。

目前，荧光原位杂交(FISH)是诊断HER2/neu基因的最可靠、最准确的方法之一。

FISH技术可以快速、直观地检测HER2/neu基因有无异常。

因此，建立一种HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系，对于乳腺癌的诊断和治疗都具有重要的临床意义。

二、研究内容本研究拟建立一种HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系，并对其在乳腺癌诊断中的应用进行探究。

主要研究内容包括以下几个方面：1. 建立HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系。

该体系的建立需要考虑多个因素，比如荧光标记、探针合成、FISH实验条件等。

在初步实验基础上，逐步优化体系，并验证其可靠性和准确性。

2. 对HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系在乳腺癌检测中的应用进行探究。

该研究将从临床样本出发，应用HER2/neu基因荧光原位杂交诊断技术，对乳腺癌患者进行检测。

同时，结合其他临床资料，分析其诊断效果及与其他诊断方法的比较，以确定该技术的临床应用价值。

3. 对HER2/neu基因荧光原位杂交诊断致癌机制的研究。

该研究将通过基因测序和表达分析等方法，深入探究HER2/neu基因荧光原位杂交诊断对人类乳腺癌的诱导效应，以及相关的分子机制。

三、研究意义1. 建立HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系，有助于更准确、更快速地诊断乳腺癌，并能为临床治疗提供准确的分子靶向治疗指导。

2. 对HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系在乳腺癌检测中的应用进行探究，能够确定该技术的临床应用价值，并为后续实现该技术的临床推广提供科学依据。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910317012.X(22)申请日 2019.04.19(71)申请人 奥明（杭州）基因科技有限公司地址 310018 浙江省杭州市江干区杭州经济技术开发区白杨街道6号大街452号2幢A1711-A1712号房(72)发明人 童云广　王瓯晨　徐鹭芹　(74)专利代理机构 杭州知见专利代理有限公司33295代理人 赵越剑(51)Int.Cl.C12Q 1/6806(2018.01)C12Q 1/6886(2018.01)C40B 50/06(2006.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称一种用于乳腺癌多基因检测的文库构建方法及试剂盒(57)摘要本发明公开了一种用于乳腺癌多基因检测的文库构建方法及试剂盒，包括(1)样品采集与提取；(2)末端修复/磷酸化/加A；(3)添加含标签的接头序列；(4)捕获前扩增；(5)目的基因杂交捕获；(6)富集；(7)捕获后扩增。

本发明基于二代数字分子标识符(DMI )和双链双标签双重纠错(DSDC)技术，可有效降低深度测序PCR扩增或测序中发生的错误，提高检测灵敏度，同时针对反应体系和杂交洗涤液进行了优化，能对目标基因进行有效富集，降低样本量的要求。

可用于乳腺癌的靶向治疗、临床试验以及疗效评估涉及基因检测的技术领域。

权利要求书3页 说明书14页序列表6页 附图2页CN 109988820 A 2019.07.09C N 109988820A权　利　要　求　书1/3页CN 109988820 A1.一种用于乳腺癌多基因检测的文库构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品采集与提取：收集外周血，分离血浆，并提取游离核酸DNA；(2)末端修复/磷酸化/加A：对提取到的游离核酸DNA进行末端修复、磷酸化及加A；(3)添加含标签的接头序列：将步骤(2)处理后的游离核酸DNA与含标签的接头序列混合，PCR反应，纯化后得标签-靶标DNA；(4)捕获前扩增：对标签-靶标DNA进行PCR扩增，然后进行纯化，获得基因组DNA文库；(5)目的基因杂交捕获：使用Hyb Block将基因组DNA文库进行杂交前的封闭，然后使用捕获探针与基因组DNA文库进行杂交捕获；(6)富集：对步骤(5)捕获到的靶序列采用磁珠富集法进行富集；(7)捕获后扩增：对步骤(6)富集后的靶序列进行PCR扩增，纯化后获得目的基因文库。

HER-2过表达与乳腺癌治疗的研究进展
王合兵;窦拉加;张成武
【期刊名称】《肿瘤学杂志》
【年(卷),期】2008(14)2
【摘要】人类表皮生长因子受体-2(HER-2)是一种与乳腺癌发生、发展密切相关的癌基因。

HER-2过表达可能预测对内分泌治疗和细胞毒性化疗药物敏感性。

Herceptin是针对HER-2的分子靶向药物,其肿瘤治疗作用受到广泛关注,HER-2过表达乳腺癌病人在肿瘤发展的各个病期中表现为预后差。

全文是根据使用曲妥珠单抗来治疗转移性乳腺癌或作为术后辅助治疗情况下获得的数据来说明HER-2阳性表达在乳腺癌治疗中的作用,或者作为独立的预后因子,或作为预测抗癌治疗反应的一项标志物。

【总页数】3页(P151-153)
【关键词】乳腺肿瘤;HER-2/neu;曲妥珠单抗;Herceptin
【作者】王合兵;窦拉加;张成武
【作者单位】青海大学附属医院
【正文语种】中文
【中图分类】R737.9
【相关文献】
1.Herceptin治疗HER-2过表达性乳腺癌研究进展 [J], 柴雅明;糜漫天;郎海滨
2.曲妥珠单抗1治疗HER-2过表达乳腺癌的研究进展 [J], 陈贤玉（综述）;王昆
华（审校）;
3.曲妥珠单抗1治疗HER-2过表达乳腺癌的研究进展 [J], 陈贤玉(综述);王昆华(审校)
4.TCH新辅助化疗方案治疗HER-2阳性乳腺癌的疗效及对患者ER、PR、HER-2及Ki67表达的影响 [J], 杨文强;刘敏;唐铁雷;王磊
5.乳腺癌HER-2过表达与辅助内分泌治疗的研究进展 [J], 秦少波;牛剀;张蕊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910151700.3(22)申请日 2019.02.28(71)申请人 贵州省人民医院地址 550002 贵州省贵阳市南明区中山东路83号(72)发明人 侯净　魏娜　朱海振　戴民　陈欢　陆婧　(74)专利代理机构 北京栈桥知识产权代理事务所(普通合伙) 11670代理人 潘卫锋(51)Int.Cl.G01N 33/577(2006.01)G01N 33/574(2006.01)(54)发明名称采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法(57)摘要本发明公开了采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法，所述方法包括以下步骤：S1：采集乳腺癌患者的外周血，并将外周血中的乳腺癌循环肿瘤细胞进行分离，得到乳腺癌循环肿瘤细胞；S2：对分离得到的乳腺癌循环肿瘤细胞进行检验，检验其是否存在；S3：对乳腺癌循环肿瘤细胞进行培养扩增；S4：将培养扩增后的乳腺癌循环肿瘤细胞制成检测切片；S5：检测乳腺癌循环肿瘤细胞的HER2表达情况。

本发明方法操作简单，检测准确度高，可以避免假阴性等情况，提高对乳腺癌的排查准确度。

权利要求书2页 说明书8页CN 109781988 A 2019.05.21C N 109781988A权　利　要　求　书1/2页CN 109781988 A1.一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1：采集乳腺癌患者的外周血，并将外周血中的乳腺癌循环肿瘤细胞进行分离，得到乳腺癌循环肿瘤细胞；S2：对分离得到的乳腺癌循环肿瘤细胞进行检验，检验其是否存在；S3：若存在，对乳腺癌循环肿瘤细胞进行培养扩增；若不存在，重复步骤S1～S2；S4：将培养扩增后的乳腺癌循环肿瘤细胞制成检测切片；S5：检测乳腺癌循环肿瘤细胞的HER2表达情况。