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细胞凋亡及其在免疫中的作用细胞凋亡是一种被认为是自杀的程序性细胞死亡过程。
细胞凋亡不同于坏死，后者是由某些外界或内界的因素引起的非规则性细胞死亡，会导致炎症和组织损伤。
相对于坏死，细胞凋亡引起的形态学改变更为规则，不会导致炎症反应，且保持局部组织结构的完整性。
细胞凋亡对于调节生物体正常细胞增殖和维持有利的细胞群体非常重要，同时也在免疫系统的运作中发挥重要作用。
细胞凋亡的分子机制细胞凋亡是通过一系列分子机制来实现的。
大部分细胞凋亡信号通路都与线粒体有关系。
一般来说，凋亡的信号可以分为两类：内源性和外源性。
外源性信号包括TNF-α、FasL和TRAIL等，它们可以通过受体结合激活的途径使线粒体透漏出一个蛋白质叫做细胞色素c。
细胞色素c进入细胞质后与细胞内调控凋亡的蛋白酶子拟蛋白的一种叫做Apaf-1的分子相结合形成一个复合物，这个复合物被称为凋亡体（apoptosome），可以激活凋亡酶caspase-9，从而使得细胞内发生一系列级联反应，最终引起细胞凋亡。
内源性信号主要来自于细胞内环境的异常，如DNA损伤或代谢物质的积累，与外源性信号不同，它们不能通过受体结合这种方式进入细胞直接激发。
当内源性信号发生时，线粒体的膜电位会下降，导致线粒体通道的开放，细胞色素c进入细胞质形成凋亡体，引发细胞凋亡反应。
细胞凋亡的作用细胞凋亡在生物学上有着广泛的生理和病理性作用。
在正常发育过程中，胚胎发育时就有大量细胞凋亡发生，如胚胎中的神经元、某些胚胎中的感觉细胞等都是通过细胞凋亡来精细调节和控制它们的数量，以便使神经系统和其他器官达到良好的架构和复杂度，从而使得整个生物体能够正常发育。
在成体细胞生命周期中，细胞凋亡也承担着维持生物体正常代谢的重要机能，对于细胞生长和分化起到控制和平衡作用。
同时，在免疫应答过程中，细胞凋亡也是关键的调节因子，他可以协调细胞增殖与温和凋亡，以保持免疫系统的正常运作。
细胞凋亡在免疫应答中的作用在免疫系统中，细胞凋亡在清除具有高度变异的抗原激活的B细胞和T细胞中有着重要的作用。
第 50 卷第 1 期2024年 1 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.50 No.1Jan.2024DOI：10.13481/j.1671‑587X.20240114下调富含脯氨酸蛋白11表达对食管癌耐药细胞EC9706/DDP耐药性的影响及其机制亢春彦1, 张秀芝1, 周慧聪2, 陈洁1（1. 河南医学高等专科学校病理学教研室，河南郑州451191；2. 郑州大学第二附属医院消化内科，河南郑州450000）［摘要］目的目的：探讨下调富含脯氨酸蛋白11（PRR11）表达对食管癌耐药细胞耐药性的影响，阐明其相关机制。
方法方法：采用顺铂（DDP）浓度递增间断刺激人食管癌EC9706细胞建立DDP耐药细胞株EC9706/DDP，MTT法检测EC9706/DDP细胞药敏性，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测EC9706/DDP细胞及其亲本EC9706细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平。
将EC9706/DDP细胞分为对照组、sh-NC组（转染sh-NC）、sh-PRR11组（转染sh-PRR11）、sh-NC+DDP组（转染sh-NC后用4 mg∙L－1DDP处理）和sh-PRR11+DDP组（转染sh-PRR11后用4 mg∙L－1 DDP处理），RT-qPCR法检测各组细胞中PRR11 mRNA表达水平，Western blotting 法检测各组细胞中PRR11、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）p110α、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT （p-AKT）、P-糖蛋白（P-gp）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）蛋白表达水平，流式细胞术检测各组细胞凋亡率。
结果结果：成功获得DDP耐药细胞株EC9706/DDP，耐药指数为7.23±0.86。
与EC9706细胞比较，EC9706/DDP细胞中PRR11mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）。
大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706增殖及凋亡基因表达的影响分析陈永东;邵中夫【摘要】Objective To explore and analyze the effects of allicin prodrug on proliferation of esophageal cancer cell line Eca9706 and the expression of apoptosis gene.Methods Different concentrations of allicin prodrugs were divided into a total of four groups:A1 group(10μg/mL),A2 group(20μg/mL),A3 group (40 μg/mL),A4 group (normal saline,0 μg/mL),and respectively applicated in esophageal carcinoma cell line Eca9706.After culturing for 1 days,2 days,3 days,cell proliferation was detected by MTT and expression of p53 at the mRNA level was detected by RT-PCR.Results The optimum concentration of proliferation inhibition of allicin prodrug on esophageal cancer cell line Eca9706 was 20μg/mL and the best inhibition time was 2 days;the gene level of esophageal cancer cell line Eca9706 was inhibited with a dose-dependent.Conclusion Allicin prodrugs could effectively inhibit the proliferation of esophageal cancer cell lineEca9706,and control the proliferation of esophageal cancer cells by regulating the expression of apoptosis associated genes,so as to eliminate tumor cells.%目的：研究分析大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706的增殖及对凋亡基因表达的影响。
细胞凋亡相关蛋白研究进展(1)细胞凋亡相关蛋白研究进展细胞凋亡（apoptosis）是指细胞在遭受损伤或发生异常时主动死亡的一种程序性死亡方式。
细胞凋亡不仅有重要的生物学意义，同时也与多种疾病的发生和发展密切相关。
在细胞凋亡的过程中，许多蛋白因子发挥着关键作用，本文将着重介绍细胞凋亡相关蛋白的研究进展。
1. Bcl-2家族蛋白Bcl-2家族蛋白是最早被发现的与细胞凋亡相关的蛋白家族，其中既有促进细胞存活的蛋白（如Bcl-2、Bcl-xL等），也有促进细胞凋亡的蛋白（如Bax、Bak等）。
目前，许多研究表明Bcl-2家族蛋白对人体各种疾病的发生和发展都具有重要影响，并且在癌症治疗方面有着很好的应用前景。
2. caspase家族蛋白caspase家族蛋白是细胞凋亡过程中最重要的蛋白分子。
这一家族的蛋白能够在细胞凋亡的关键时间点上，参与并引导细胞自我消除的过程。
针对caspase家族蛋白的研究，已经为众多疾病的治疗提供了新的方向与策略。
3. p53蛋白p53蛋白是一种重要的转录因子，在细胞凋亡的过程中广泛发挥着抑制肿瘤、促进细胞凋亡等多种作用。
许多研究表明，针对p53蛋白的疾病治疗策略具有广泛应用前景，而且近年来关于p53蛋白的研究也逐渐深入。
4. 凋亡诱导因子（AIF）AIF是一种蛋白质，主要功能是进一步促进细胞凋亡，并能够在细胞发生凋亡时候，通过与线粒体之间的分离作用，从而释放出线粒体内的氧化氢酶等分子物质。
当前许多研究表明，针对AIF的药物开发治疗策略，将对研究许多疾病和疾病治疗的提供有力的支持。
综上所述，细胞凋亡相关蛋白的研究有着重要的科学意义和实用价值。
在未来的研究中，发掘新的有效的抑制机制，并利用已有的针对蛋白的治疗策略得到进一步优化和应用，将极大地推动相关领域的研究进展和新药研发。
Ets2 siRNA 转染对 EC9706细胞增殖、侵袭、周期和凋亡的影响∗杨露;张楠楠;张彦婷;李庆华;许尧;朱相展;薛乐勋;关方霞【摘要】目的：：探讨 Ets2 siRNA 转染对 EC9706细胞增殖、侵袭能力、周期和凋亡的影响。
方法：利用 Western blot检测正常食管上皮细胞系 Het-1A 和食管鳞状细胞癌细胞系(EC1、Eca109、EC9706)中 Ets2蛋白的表达。
将 EC9706细胞分为4组：阴性对照组、空白对照组、转染试剂对照组和 Ets2 siRNA 组,处理48 h 后,采用 EdU 荧光标记法和CCK-8法检测4组细胞增殖率和增殖抑制率,Transwell 小室法检测细胞侵袭能力,Western blot 检测 E-cadherin、Caspase-3和 Bcl-2蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V-FITC/ PI 双染法检测早期细胞凋亡。
结果：与 Het-1A 细胞相比,EC1、Eca109和EC9706细胞中 Ets2蛋白的表达量增加(F =1177.764,P <0.001),且EC9706细胞中增加最为显著。
转染后,与阴性对照组相比,Ets2 siRNA 组细胞增殖率降低、增殖抑制率升高(F =64.733和144.741,P <0.05),侵袭能力减弱(F =104.065,P<0.001),细胞周期无明显变化(P >0.05),早期凋亡细胞增加(F =37.986,P<0.001),E-cadherin 蛋白和 Caspase-3蛋白表达增加(F =62.223和81.015,P <0.05),而Bcl-2蛋白表达减少(F =104.439,P <0.001)。
结论：Ets2下调后能有效抑制 EC9706细胞增殖,降低侵袭能力,诱导凋亡；Ets2可能成为食管鳞状细胞癌的有效治疗靶点。
RNA干扰食管鳞癌Ec9706细胞中Bit1的表达的开题报告一、研究目的RNA干扰技术可以通过靶向特定基因的mRNA测序来实现基因沉默和靶点基因的研究。
本研究旨在利用RNA干扰技术，研究Bit1基因在食管鳞癌Ec9706细胞中的表达及其在肿瘤细胞增殖和侵袭中的作用。
二、研究意义食管鳞癌是一种多因素影响的癌症。
许多分子调控机制与其发病息息相关。
Bit1是一种亚细胞级别的负调控蛋白，其在肿瘤细胞凋亡、增殖和侵袭中发挥重要作用。
因此，研究其在食管鳞癌Ec9706细胞中的表达及其对肿瘤细胞生长和侵袭的影响，有助于深入探究其作用机制，为相关疾病的治疗提供新思路和目标。
三、研究内容及步骤1.构建siRNA载体使用pSilencer™2.1-U6-puro载体，将针对Bit1基因的siRNA序列克隆到载体中，构建Bit1靶向siRNA表达载体。
2.细胞培养及转染使用食管鳞癌Ec9706细胞，采用Lipofectamine™ 2000转染剂，将Bit1 siRNA载体转染至细胞中。
根据不同实验组的需要，分为siRNA转染组、空载体转染组以及未转染组。
3.蛋白质分析收集不同实验组的细胞，提取蛋白质，并利用西方印迹分析法检测Bit1蛋白表达情况。
4.细胞增殖实验使用MTT法和细胞计数法，检测不同实验组在不同时间点的细胞增殖情况，分析Bit1基因沉默对细胞增殖的影响。
5.细胞侵袭实验利用Transwell®实验室小室，检测不同实验组的细胞侵袭能力，研究Bit1基因沉默对细胞侵袭的作用。
四、预期结果通过RNA干扰技术，成功实现了Bit1基因沉默，在食管鳞癌Ec9706细胞中检测到Bit1蛋白表达水平的下降。
细胞增殖实验和细胞侵袭实验结果表明，Bit1基因沉默可以抑制食管鳞癌Ec9706细胞增殖和侵袭能力，说明Bit1基因在肿瘤细胞増生和侵袭中发挥了重要作用。
第29卷第3期河南大学学报(医学版)Vol.29 No.3 2010年8月Journal of Henan University(Medical Science)Aug.2010Beta2微管蛋白ⅢA SODN对Ec9706/P21细胞凋亡的影响卢 红(河南大学淮河医院肿瘤科,河南开封475000)摘 要:目的:观察β2微管蛋白Ⅲ(β2TubulinⅢ,TUBB3)反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASODN)对Ec9706/P21细胞凋亡的影响。
方法:以体外诱导的人食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P21为模型,设ASODN组和无关序列寡核苷酸(Nonsense oligonucleotide,NSODN)组,应用免疫细胞化学方法检测N F2κBppabp65、Bcl22和Caspase23蛋白的表达;采用逆转录-多聚酶链反应(R T2PCR)检测N F2κBppabp65、bcl22和caspase23mRNA的表达;采用DNA凝胶电泳和吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡变化。
结果:免疫细胞化学方法显示ASODN组NF2κBppabp65蛋白表达率与NSODN组比较差异无统计学意义(P>0.05),ASODN组Bcl22蛋白表达率与NSODN 组比较差异有统计学意义(P<0.05),ASODN组Caspase23蛋白表达率与NSODN组比较,差异有统计学意义(P<0.05);R T2PCR法显示ASODN组caspase23mRNA条带亮度强于NSODN组,bcl22mRNA条带亮度低于NSODN组,ASODN组NF2κBppab mRNA条带亮度与NSODN组相近;DNA凝胶电泳显示紫杉醇作用后ASODN 组有凋亡特征的DNA改变,而NSODN组细胞却未出现;吖啶橙荧光染色法表明ASODN组凋亡率与NSODN组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:TUBB3反义寡核苷酸增加了紫杉醇对Ec9706/P21细胞的诱导凋亡能力,证明了Bcl22和Caspase23的表达变化很可能是产生紫杉醇耐药的主要机制之一。
关键词:β2微管蛋白Ⅲ;食管癌;耐药;凋亡中图分类号:R735.1 文献标识码:A文章编号:1672-7606(2010)03-0164-06E ffect ofβ2tubulinⅢantisense oligonucleotides on E c9706/P21cells ap2 optosisL U Hong(De partment of Oncology,H uai he hos pital of Henan Universit y,Kai f eng,Henan475000,China)Abstract:Objective: T o investigate the effect ofβ2tubulinⅢantisense oligonucleotides on Ec9706/P21cells apoptosis, study the expression of NF2κBppabp65、Bcl22and Caspase23,and to investigate the possible mechanism of acquired resistance of Paclitaxel2resistant human esophageal carcinoma cell line Ec9706/P21.Methods: There were2groups in this study: antisense oligonucleotides(ASODN)group and oligodeoxynucleotides(NSODN)group.Immunohistochemistry assay was performed to detect the expression of Bcl22protein,caspase23protein and NF2κBppab protein in Ec9706/P21cells.The expression level of Bcl22mRNA,caspase23mRNA and NF2κBppabmRNA were detected by semi-quantity RT2PCR assay.DNA fragments were resolved by agarose gel electrophoresis to detect cell apoptosis.Apoptosis rates and morphology were detected by arcading orange(AO)staining.R esults: The expression rate of Bcl22protein in ASODN group was lower than that in NSODN group statistically(P<0.05).The expression rate of caspase23protein in ASODN group was higher than that in NSODN group statistically(P<0.05).There was no significant difference in the expression of NF2κBppab protein between ASODN group and NSODN group(P>0.05).The expression level of Bcl22mRNA in ASODN group was lower than that in NSODN group statistically(P<0.05).The expression level of caspase23mRNA in ASODN group decreased significantly compared with that of NSODN group(P<0.05).There was no significant difference in the expression of NF2κBppab mRNA between ASODN group and NSODN group(P>0.05).There was obvious apoptosis characteristic DNA ladder in ASODN group induced by Paclitaxel but not in NSODN group.The apoptosis rate in NSODN group was lower 收稿日期:2010205210 作者简介:卢红(1973-),女,河南开封人,博士,主治医师,副教授,从事恶性肿瘤综合治疗的工作。
卢 红:Beta2微管蛋白ⅢASODN对Ec9706/P21细胞凋亡的影响165 significantly than that in ASODN group(P<0.05).Conclusion: TUBB3ASODN increases the apoptosis of Ec9706/P21 cells induced by Paclitaxel.It is proved that Bcl22and caspase23may be one of the main mechanisms of acquired resistance of Paclitaxel2resistant human esophageal carcinoma cell line Ec9706/P21.K ey w ords:β2TubulinⅢEsophageal;Carcinoma;Drug2resistance;Apoptosis 食管癌在我国发病率较高,尤以河南省林州市为高发区之一,严重威胁着人民的生命健康。
食管癌预后较差,紫杉醇是化疗有效药物之一,但其产生的获得性耐药使得许多患者失去了治疗机会。
我们已成功建立食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P21,并对其耐药性进行了鉴定[1],发现β2微管蛋白Ⅲ(β2Tubu2 linⅢ,TUBB3)的高表达可能是其产生获得性耐药的主要原因之一[2]。
为进一步探讨其他可能机制,我们拟采用β2微管蛋白Ⅲ反义寡核苷酸(Antisense oligo2 nucleotide,ASODN)脂质体转染技术,观察Ec9706/ P21细胞凋亡及其相关蛋白的变化。
1 材料与方法1.1 细胞及培养人食管鳞癌细胞株EC9706由中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室惠赠,Ec9706/ P21由作者建立并保存[1],均培养于含体积分数为15% FCS胎牛血清、100U/L青霉素和100g/L链霉素的RPMI1640培养基中,置于37℃、体积分数为5%CO2培养箱中培养。
1.2 药物及试剂紫杉醇(Paclitaxel)购于四川太极制药厂;脂质体转染试剂(Lipofectamin2000)购于Invit rogen公司;SP29000免疫组化试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司;细胞凋亡2DNALadder抽提试剂盒(离心柱式)购于碧云天生物技术研究所;One2step R T2PCR试剂盒购于北京赛百盛公司;Caspase23兔抗人多克隆抗体购于北京博奥森生物技术有限公司; N Fkappab2p65兔抗人多克隆抗体购于武汉博士得生物工程有限公司;Bcl22鼠抗人多克隆抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 寡核苷酸(Oligonucleotide,ODN)序列及合成TUBB3ASODN参照文献[3]的方法,由北京赛百盛公司合成,全程硫代修饰,序列为:5′2ACGT2 GGGCGAC TCGG23′,并设计与其碱基组成相同,但碱基顺序随机排列的无义寡核昔酸序列(nonsense oligodeoxynucleotides,NSODN)作为对照,由北京赛百盛公司合成,全程硫代修饰,其序列为:5′2 GGC GAC GT GC GTC GA23′。
在Genbank中行证实ASODN仅与TUBB3基因相应位点匹配,NSODN 与任何已知哺乳动物基因无匹配。
1.4 细胞分组及预处理分为ASODN组和NSODN组:取对数生长期细胞,细胞贴壁至50%～60%,体积分数为0.25%胰蛋白酶消化,反复吹打后收集细胞,PBS液洗涤1次,于37℃、体积分数为5%CO2培养箱中过夜,弃去细胞培养液,并用无血清无双抗的RPM I1640培养液洗涤细胞1次,将形成ASODN2L F2000和NSODN2 L F2000的浓度为1.0μmol/L的复合物加入相应细胞中,轻轻混匀,37℃、体积分数为5%CO2培养箱培养6h,弃去转染液,加入完全1640培养液,继续培养20h,各组细胞以紫杉醇终浓度1.0mg/L作用8 h,开始实验。
