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鸡肾型传染性支气管炎的诊治吴奉明 (日照市东港区奎山街道兽医站 276803) 王海洲 (日照市畜牧局药械站) 肾型传染性支气管炎是由病毒引起的一种传染性疾病。
近几年在日照市及周边地区该病发生率非常普遍,多发生在1～5周龄或10周龄之内的鸡,发病率高,死亡率40%～60%。
该病除有呼吸道型传支的症状外,以肾脏肿大、苍白,肾小管、输尿管扩张,充满尿酸盐,表面呈花斑状为主要特征。
1 发病及流行情况在临床病例中,发病率可达50%,发病日龄多在1～5周龄,一般以40日龄以内的雏鸡多发。
本病一年四季均能发生,但以冬、春季节多发。
2 临床症状雏鸡感染肾型传染性支气管炎病毒后,初始只表现轻微的呼吸道症状,有时只有在夜间安静的时候才听见,因此常被忽视,疏于治疗。
随着时间的延长,病情逐渐加剧,症状非常明显,病鸡拥挤、厌食、排白色粪便,粪便中几乎全是尿酸盐。
病鸡体重减轻,肛门周围羽毛粘满水样白色粪便,死亡率约30%,死亡高峰见于感染后第10天,感染后约3周可停止死亡,部分病鸡可逐渐康复,但增重缓慢。
蛋雏鸡感染后,可引起卵巢和输卵管的损伤,导致产蛋期产蛋率不高,甚至绝产,形成假母鸡。
3 剖检病变肾肿大,肾小管充满尿酸盐结晶,外形呈白色网状,俗称“花斑肾”。
输尿管扩张,充满白色的尿酸盐。
心包及内脏表面都有尿酸盐沉积。
直肠黏膜条状出血,直肠壶腹内有白垩样糊状粪便。
4 鉴别诊断肾传支易与痛风相混淆,痛风一般无呼吸道症状,无传染性,且多与饲料配合不当有关。
通过饲料中蛋白的分析,钙、磷分析即可确定。
该病还极易与法氏囊相混淆,但法氏囊有特殊的病变,即法氏囊肿大、出血,胸、腿肌出血。
5 防治对发病鸡群用肾传支疫苗紧急接种,许多鸡群不能凑效,死亡仍控制不住。
临床诊治用抗病毒药物(如利巴韦林)加抗生素治疗,效果不佳。
几年来笔者在临床实践中总结出了3个行之有效的经验组方。
方一:以板蓝根、浙贝母、桔梗、甘草为主的肾支速效冲剂与左旋氧氟沙星联合应用。
鸡肾变病型传染性支气管炎相似症状：排水样白色稀便;肾脏肿大,颜色变淡,有多量尿酸盐沉着。
（与鸡传染性法氏囊炎、痛风(内脏型)、鸡病毒性肾炎有相似症状）特有症状：多见于3--10周龄鸡，两侧肾脏的等肿胀，有尿酸盐沉着，质地变硬；严重时，内脏器官浆膜有多量尿酸盐沉着；死亡率高；成年鸡产蛋量下降，蛋壳粗糙，蛋型变圆；病鸡康复后产蛋量恢复不到原有水平。
防治措施：1、加强饲养管理，鸡舍要注意通风换气、防止密度过大，同时应注意保暖，减少应激因素，尤其是气温的变化，供给富含维生素和矿物质的优质饲料，作好一般性防疫卫生消毒工作。
2、富道传染性支气管炎（麻株型）弱毒疫苗：简介：本疫苗是采用抗原谱最广的传染性支气管炎病毒——Masachusetts血清型弱毒株，与稳定剂一起冻干而成。
其毒力相当于H120毒株。
适应症：本疫苗用于健康鸡只的免疫接种以预防呼吸道型、肾型、生死道型、肠型的传染性支气管炎。
传染性支气管炎（麻株+康株型）弱毒疫苗剂量和用法：可采用滴眼、滴鼻、喷雾和饮水法免疫。
（1）滴鼻和滴眼免疫法：用于1日龄及1日龄以上健康雏鸡的免疫接种。
（2）饮水免疫法：适用于2日龄以上雏鸡的免疫接种。
（3）喷雾免疫：与新城疫NDW联用，可作1日龄以上鸡只的粗雾滴喷雾免疫：4周龄以上的健康鸡可采用细雾滴喷雾免疫。
夏菲特传染性支气管炎H120疫苗简介：本疫苗由非致病性的传染性支气管炎（IBV）的M型H120株经SPF鸡胚繁殖而成，每一头份疫苗中含IBV103EID50以上及稳定剂。
本疫苗专用于鸡的免疫。
本疫苗为冻干品，密封于加胶塞的小瓶中，每小瓶中含1000或2000头份，每盒10瓶。
保存：本冻干疫苗必须保存于2—8℃。
（5）详情请咨询当地兽医。
（6）消毒衣服和鞋，接触疫苗后彻底洗手。
夏菲特传染性支管炎H52疫苗简介：本疫苗为冻干品，密封于加胶塞的小瓶中，每小瓶中含1000或2000头份，每盒装10瓶。
本疫苗为非致病性的传染性支气管炎（IBV）的M型H52株经SPF鸡胚繁殖而成，每一头份疫苗含IBV103EID50以上及稳定剂。
鸡传染性支气管炎抗体（IBV-Ab）ELISA试剂盒使用说明书南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒首选森贝伽。
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中鸡传染性支气管炎抗体（IBV-Ab）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡传染性支气管炎抗体（IBV-Ab）水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入传染性支气管炎抗体（IBV-Ab），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的传染性支气管炎抗体（IBV-Ab）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡传染性支气管炎抗体（IBV-Ab）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
肉鸡养殖厂传染性支气管炎疫苗使用指南导言：- 传染性支气管炎（Infectious Bronchitis）是一种极具传染性的家禽疾病。
养殖户在肉鸡养殖过程中常常面临传染性支气管炎的风险。
- 本文旨在为肉鸡养殖厂提供传染性支气管炎疫苗的使用指南，旨在帮助养殖户采取措施有效预防和控制疾病的传播。
一、认识传染性支气管炎1.1 定义：传染性支气管炎是一种由冠状病毒引起的高度传染性疾病，主要感染呼吸道和生殖道。
1.2 主要症状：可引起肺泡上皮细胞和支气管上皮细胞破坏，导致呼吸道炎症、气喘、咳嗽、打喷嚏、结缔组织病变等。
1.3 传播途径：多通过飞沫和直接接触传播，也可能通过污染的环境、设备和饲料传播。
二、传染性支气管炎疫苗的作用2.1 引起免疫反应：疫苗通过激发机体免疫系统产生相应的抗体以对抗传染性支气管炎病毒。
2.2 预防疾病传播：接种疫苗可以减轻病毒传播，降低发病率，提高养殖厂养殖效益。
三、疫苗接种途径和剂量3.1 口服疫苗：口服疫苗是传染性支气管炎疫苗的主要接种途径，一般使用饮水加药方式。
3.2 疫苗剂量：根据养殖场的具体情况和疫苗的种类，按照标注剂量进行稀释和投药。
四、疫苗接种时间和次数4.1 接种时机：根据养殖周期和病毒流行情况，建议在肉鸡一日龄时进行初始接种，一般在生长过程中的4-6周龄进行加强接种。
4.2 接种次数：根据疫苗的类型和效果，通常推荐进行1-2次初始接种，加强接种可根据情况决定是否需要。
五、疫苗接种注意事项5.1 确保疫苗有效性：在接种前需检查疫苗的生产日期、有效期和保存条件，避免使用过期或保存不当的疫苗。
5.2 卫生防护：接种时需要做好消毒工作，严格遵守卫生要求，防止交叉感染和二次污染。
5.3 种类选择：针对不同病毒株的传染性支气管炎，选择适当的疫苗进行接种。
5.4 遵循使用说明：按照疫苗的使用指南使用，并根据实际情况和专业兽医建议进行调整和补充。
六、疫苗接种后的监测与处理6.1 监测养殖环境：疫苗接种后要及时观察饲养环境，保持清洁卫生，排除病毒扩散的可能。
肉鸡肾型传染性支气管炎的流行特点临床症状鉴别诊断及防控肉鸡肾型传染性支气管炎（IB型传染性支气管炎）是一种由冠状病毒引起的疾病，主要发生在肉鸡中，对肉鸡养殖业造成了严重的危害。
IB型传染性支气管炎在全球范围内都有发生，因此对于养殖场的管理者和兽医来说，了解其流行特点、临床症状、鉴别诊断及防控措施是非常重要的。
一、流行特点1. 流行病学调查显示，IB型传染性支气管炎主要在秋冬季节发生，气温低、湿度大的条件有利于病毒的传播；在温度和湿度较低时传染性支气管炎的流行率更高。
2. 疫情爆发后，肉鸡的生长速度减缓，蛋白质转化率下降，导致产蛋率减少。
同时还会出现肺部病变，呼吸困难，体重下降等症状。
3. 病毒携带者主要为幼鸡、著床后的母鸡和蛋雏，这些鸡的感染率较高，成鸡相对较低。
二、临床症状1. 患鸡出现嗜睡、挤眼闭目、挺立、弓背、呆立、咽喉红溢、呼吸困难症状。
如果疾病较重，肉鸡还会出现气囊炎、瘀斑和腹泻等症状。
2. IB型传染性支气管炎的潜伏期为24～48小时，发病期为3～5天，慢性期表现为呼吸道症状。
主要临床症状为鼻音尖细、髓质粪便、鼻角脓涕及肺炎引起的淡黄色脓痂。
3. 肉鸡在感染后，鼻响、抽搐、向后呼吸、挤眼、暂时性细音为典型的患病临床症状，普遍反映为产蛋率降低。
三、鉴别诊断1. IB型传染性支气管炎在临床症状上与新城疫、传染性喉气管炎和鸡支原体性鸡气囊炎易混淆。
在临床诊断时，要结合发病情况、病死率、肉鸡出现的症状等进行综合判断。
2. 实验室检查是对IB型传染性支气管炎进行鉴别诊断的重要手段，包括病毒分离鉴定、PCR检测、抗体检测等。
通过实验室检查，可以明确病原体的特异性和敏感性，达到准确诊断的目的。
3. 可以利用病原学和免疫学方法，如病毒分离鉴定、血清抗体检测、酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术，对IB型传染性支气管炎进行鉴别诊断。
四、防控措施1. 加强肉鸡的饲养管理，保持鸡舍内的卫生清洁，避免鸡舍内出现湿度过大和通风不良的情况，预防传染性支气管炎的传播。
Poultry Science!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!出血；高峰死亡鸡病理病变不典型。
根据临床症状和解剖病变，结合权威部门发布的信息，可以确诊为低致病性禽流感H 9N 2变异株并发强毒新城疫。
实践中，面对这个暴发型流行病，笔者曾经使用两种治疗方法，均获得较好的疗效。
第1种治疗方法是：用黄芪多糖加大浓度配合浓缩鱼肝油，或用黄芪多糖、金丝桃素、紫雏菊混合制剂配合速补饮水，在饮水的同时用肌肉注射的方法给病鸡群紧急接种新城疫Ⅳ系疫苗；疫苗接种30h 后，再用黄芪多糖配合干扰素连饮2d 或3d ，同时用清瘟败毒散、抚菌消炎药、肾肿解毒药和1%的植物油混合拌料。
饮水投药5d ，拌料投药7d ，配合严格的管理措施，一般3d 后见效，5d 后病情明显好转，7d 后鸡群进入康复期。
第2种治疗方法是：用上述方法饮水，拌料，用新城疫Ⅳ系疫苗加禽用核糖核酸混合生理盐水给鸡群肌肉注射，病轻者注射1次即可，病重者可1次/d ，连续注射2d ；倘若病情十分严重，2次注射效果仍不理想，可用蛋黄抗体加核糖核酸加头孢曲松钠再增加注射1次。
2思考在笔者涉足的领域内，即便是在同一个县市内，地理环境相同，气候条件也相同，常常是这里的疾病流行势不可挡，那里安康平静无事；甚至在疾病流行的地区内，却令人惊叹地保留一方净土。
这是为什么呢？笔者在拜访这些平安鸡场时发现，他们的共同之处是都有健全、科学的管理制度，饲养环境清洁、卫生、空气质量好，场地几乎都是选在远离人家的旷野处。
这些鸡场重视使用生物安全控制技术，更注重场地周边生态环境的建设。
不但保证了饲养大环境的优良，更有效地控制着饲养鸡舍内小环境的温度、湿度、空气的适宜。
他们想方设法避免不利于鸡群的应激发生。
坚持带鸡消毒、坚持病弱残鸡淘汰的同时，特别关注鸡群的精神状态，个体体重和均匀度的保持。
他们不但重视药物对疾病的预防工作，更重视用流行病学的观点加强重点疾病的免疫工作。
的诊疗2023-11-06CATALOGUE 目录•鸡肾型传染性支气管炎的概述•鸡肾型传染性支气管炎的诊断•鸡肾型传染性支气管炎的治疗•鸡肾型传染性支气管炎的预防•鸡肾型传染性支气管炎的案例分析01鸡肾型传染性支气管炎的概述鸡肾型传染性支气管炎是一种由冠状病毒引起的急性、高度接触性传染病，对鸡的肾脏和其他内脏器官造成损害。
该病主要发生在20日龄至60日龄的鸡中，以肾小管变性、坏死和尿酸盐沉积为主要病理特征。
鸡肾型传染性支气管炎的简介鸡肾型传染性支气管炎的流行病学特点该病在鸡群中传播迅速，通常在感染后1-2天内即可波及全群。
鸡肾型传染性支气管炎没有明显的季节性，但冬春季节易发。
鸡肾型传染性支气管炎主要通过空气传播，病鸡和带菌鸡是主要的传染源。
鸡肾型传染性支气管炎的临床症状鸡肾型传染性支气管炎的潜伏期通常为2-3天，发病后病鸡出现食欲减退、精神沉郁、羽毛蓬乱、双翅下垂等症状。
随着病情的发展，病鸡出现腹泻、尿酸盐排泄增加、肾脏肿大、尿量减少等症状。
病鸡的呼吸道症状明显，表现为咳嗽、气喘、气管啰音等。
后期病鸡常常因脱水、衰竭而死亡。
02鸡肾型传染性支气管炎的诊断临床症状观察鸡群是否出现食欲减退、精神沉郁、羽毛蓬乱、翅下垂等症状，以及呼吸急促、咳嗽、气管啰音等呼吸道症状。
病理变化检查鸡只是否存在气管和支气管炎症，以及肾脏肿大、苍白、有出血点等病变。
临床诊断从病鸡中采集气管和肾脏样本，在实验室进行病原分离和鉴定，确认是否为鸡肾型传染性支气管炎病毒。
病原分离鉴定采集鸡群血清样本，进行抗体检测，了解鸡群抗体水平及免疫状态。
血清学检测实验室诊断鉴别诊断与其他呼吸道疾病的鉴别鸡肾型传染性支气管炎易与其他呼吸道疾病混淆，如鸡新城疫、鸡慢性呼吸道疾病等，需通过临床症状、病理变化和实验室诊断进行鉴别。
与其他肾脏疾病的鉴别鸡肾型传染性支气管炎还需与其他肾脏疾病进行鉴别，如鸡肾炎、鸡痛风等，需根据临床症状和病理变化进行鉴别。
鸡肾型传染性支气管炎抗体(K-IBV Ab)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T3.0ng/L -80 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中肾型传染性支气管炎抗体(K-IBV Ab)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡肾型传染性支气管炎抗体(K-IBV Ab)水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入肾型传染性支气管炎抗体(K-IBV Ab)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肾型传染性支气管炎抗体(K-IBV Ab)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡肾型传染性支气管炎抗体(K-IBV Ab)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（160ng/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80 ng/L 5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液40 ng/L 4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液20 ng/L 3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液10 ng/L 2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液5.0 ng/L 1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月Chicken Interleukin 2FOR RESEARCH USE ONLYAssay range：15 ng/L -300 ng/L 96 determinations PurposeThis kit allows for the determination of IL-2 concentrations in Chicken serum, cell culture supernates and other biological fluidsPrinciple of the assayT he kit assay Chicken IL-2 level in the sample，use Purified Chicken IL-2 antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add IL-2 to wells, Combined antibody which With HRP labeled goat anti- chicken become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of IL-2 in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kit1 wash solution20ml×1bottle7 Stopp Solution6ml×1 bottle2 HRP-Conjugate reagent 6ml×1 bottle8 Standard（360ng/L）0.5ml×1 bottle3 Microelisa stripplate12well×8strips9 Standard diluent 1.5ml×1bottle4 Sample diluent6ml×1 bottle10 Instruction15 Chromogen Solution A6ml×1 bottle11 Closure plate membrane26 Chromogen Solution B6ml×1 bottle12 Sealed bags 1 Specimen requirementsRD1.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.2.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:240 ng/L 5 Standard150µl Original density Standard+150µl Standard diluent160 ng/L 4 Standard150µl 5 Standard+150µl Standard diluent80 ng/L 3 Standard150µl 4 Standard+150µl Standard diluent40 ng/L 2 Standard150µl 3 Standard +150µl Standard diluent20 ng/L 1 Standard150µl 2 Standard +150µl Standard diluent2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40µl to testing sample well, then add testing sample 10µl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50µl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50µl to each well, Stop the reaction(the blue colorchange to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution andwithin 15min.Steps descriptionStandard, Sample diluentcalculateCalculateTake the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight lineregression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.Storage and validity1．Storage：2-8℃.2．validity：six months.。
