鸡传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

目录

中文摘要 (2)

Abstract (3)

引言 (4)

1 材料与方法 (5)

1.1 材料 (5)

1.1.1 病料 (5)

1.1.2鸡胚、鸡红细胞 (5)

1.1.3 主要试剂 (6)

1.1.4 主要仪器设备 (6)

1.1.5 引物 (6)

1.2 方法 (7)

1.2.1 病料的采集和处理 (7)

1.2.2 病毒的增殖与纯化 (7)

1.2.3 病毒的RT-PCR检测 (7)

1.2.4 鸡胚尿囊液的血凝活性测定 (8)

1.2.5 鸡胚尿囊液的RT-PCR检测 (8)

）的测定 (8)

1.2.6 毒株半数感染量（EID

50

2 结果与分析 (10)

2.1 病鸡剖检结果分析 (10)

2.2 病毒RT-PCR检测结果分析 (10)

2.3 传毒结果 (11)

2.4 传代鸡胚尿囊液的血凝检测结果分析 (11)

2.5 传代鸡胚尿囊液的RT-PCR检测结果 (11)

检测结果分析 (11)

2.6 EID

50

2.6.1 鸡胚胚病变情况 (11)

的计算结果 (12)

2.6.2 EID

50

3 讨论 (12)

致谢 (14)

参考文献 (15)

鸡传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

动物医学专业

指导老师

摘要：2011年4月17日，山东省临沂某大型养鸡厂送检一批疑似感染传染性支气管炎病毒的病（死）鸡，调查得知该鸡群临床上表现咳嗽、甩鼻，食欲不振，精神不佳，脱水，排白色稀粪，爪干、消瘦等症状且死亡率高，现进行病鸡剖检，病变表现为气管出血，“花斑肾”。采集相关病料研磨并反复冻融后，进行RT-PCR检测结果发现IBV阳性，初步诊断该鸡群发生了鸡传染性支气管炎。将病料接种10日龄SPF鸡胚进行盲传，收集各代尿囊液进行血凝试验、RT-PCR检测，同时观察对鸡胚的致病变特征，结果发现血凝试验均呈阴性，RT-PCR结果IBV表现阳性，新城疫（NDV）、禽流感（AIV）等其他外源病毒阴性，鸡胚表现蜷缩、生长阻滞现象，符合IBV的生物学特征，表示成功分离到了1株鸡传染性支气管炎病毒。

关键词：传染性支气管炎病毒；分离鉴定；RT-PCR

Infectious Bronchitis Virus Isolation and Identification

Veterinary Medicine

Tutor

Abstract：April 17, 2011, a number of patients (dead) chickens infected with suspecting infectious bronchitis viruse from a large chicken farm for inspection in Linyi, Shandong Province,survey that the clinical manifestations had cough, thrown nose, loss of appetite, of sorts, dehydration, row of white Xifen, claw dry, weight loss and other symptoms ,and high mortality, now dissect chickens, the lesions showed tracheal bleeding, "spotted kidney ".Acquisition-related disease, repeated freezing and thawing material after grinding, the RT-PCR test was found positive for IBV, the initial diagnosis of the avian infectious bronchitis in chickens was sure preliminarily . The epidemic materials was inoculated to the 10-day-old SPF chick embryo to blind transfer, allantoic fluid collected for the generation of hemagglutination test, RT-PCR test, and observed the characteristics of the embryo-induced lesions,finding that hemagglutination test were negative, the RT –PCR of IBV results showed positive for Newcastle disease (NDV), avian influenza (AIV) and other exogenous virus-negative, chick embryo displayed the phenomenon of curling and growing retardation, in line with the biological characteristics of IBV, it was successful to isolate an avian infectious bronchitis virus .

Key words: IBV ,Separated and identified ,RT-PCR

引言

鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis，IB）是由鸡传染性支气管炎病毒引起的一种急性、高度接触性的传染病，其特征主要为病鸡出现呼吸道症状、产蛋数量和品质下降以及肾脏病变等。鸡传染性支气管炎可以造成非常严重的经济损失，其主要包括：饲料报酬的下降，增重的减少，同时并发感染引起气囊炎，使肉鸡在加工的过程中被淘汰，且产蛋下降和蛋品质下降等。虽然疫苗的使用对鸡传染性支气管炎的流行起到了一定的预防和控制作用，但由于IBV 属于冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus）的代表种，为外被囊膜的单股正链RNA 病毒，其突出的特点是血清型众多，且不同的血清型之间缺乏交叉保护性，并不断出现新的变异株，这一特点使鸡传染性支气管炎在免疫鸡群和非免疫鸡群发生和传播，给养禽业造成了重大的经济损失。鉴于此，各国学者对IBV 的分子生物学研究越来越重视。

鸡传染性支气管炎最初于1930年发现于美国North Dakota，1931年由schalk 和Hawn首次报道【1】，Jungherr【2】等于1956年证实IBV抗原的多样性及其在传染性支气管炎流行病学中的重要性，之后很多国家和地区对该病都有报道【3-5】。1956年Bijlenga第一次确诊IB在荷兰存在。自1978年起，荷兰开始出现新血清型的IBV和变异株；1962年，Cumming在澳大利亚分离出一株肾致病性毒株。1980年到1990年分离的IBV是呼吸型毒株，主要引起病鸡的呼吸道症状。自1987起，IB主要以呼吸型为主，而且病毒的组织嗜性发生变化，由嗜肾型转变为嗜呼吸道型；1986年，El-Houadfi【6】等在摩洛哥首次分离出嗜肠型IBV毒株，主要引起呼吸道、肾脏及肠炎病变等症状。此后，1991年，英国发现一株引起高死亡率的特殊IBV毒株。日本最早于1954年分离到IBV，此后不断有IB的发生【7-9】。1980年以前的IBV分离株主要引起呼吸道症状和蛋鸡产蛋量下降，1980年以后的IBV分离株以肾致病性毒株为主，引起肾脏病变。

1986年韩国首次有关于IB发生的报道，其产蛋鸡表现为呼吸困难，产蛋量及蛋的品质下降，但通过通过免疫接种则很容易控制疾病的爆发。从1990年起产蛋鸡群和肉鸡群开始爆发肾致病型IB。

我国于1953年有呼吸型IB发生的报道。我国首次IB存在的报道是邝荣禄在广东于1972年确诊出，肾型IB的发生是辛朝安于1982年在广东首次报道【10】，之后，李康然与1990年在广西分离出一株肾致病性IBV【11】。随之，国内相继有20多个省市区出现关于肾型IB发生的报道。1995年杜元钊在中国胶东地区分离出嗜