DB22T396.8-2017保健用品毒理学评价程序与检验方法第8部分：小鼠精子畸形试验

保健用品功能学评价程序和检验方法 第1部分：评价程序警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品功能学评价程序和检验方法。

本标准适用于保健用品功能学检验。

2 评价程序2.1 基本要求2.1.1 对受试样品的要求2.1.1.1 应提供受试样品的原料组成或/和尽可能提供受试样品的物理、化学性质(包括化学结构、纯度、稳定性等)有关资料。

2.1.1.2 受试样品必须是规格化的定型产品，即符合既定的配方、生产工艺及产品质量标准。

2.1.1.3 功能学评价的样品与毒理学评价、卫生学检验的样品应为同一批次（安全性毒理学评价和功能学评价试验周期超过受试样品保质期的除外）。

2.1.1.4 受试样品必须是直接或间接作用与人体皮肤表面，并列入本省保健用品类别目录的外用产品。

2.1.2 对试验动物的要求2.1.2.1 根据各种试验的具体要求，合理选择试验动物。

常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系动物。

2.1.2.2 动物的性别、年龄依试验需要进行选择。

动物的数量要求为小鼠每组10只～12只（单一性别），大鼠每组8只～12只（单一性别）。

2.1.2.3 动物应达到SPF级试验动物的要求。

2.1.3 对受试样品剂量及时间的要求2.1.3.1 各种动物试验至少应设对照组、试验组，必要时可设阳性对照组。

受试样品的功能试验剂量必须在毒理学评价确定的安全剂量范围之内。

2.1.3.2 给受试样品的时间应根据委托方提供的使用说明书而定。

2.1.4 对受试样品处理的要求以推荐方式进行前处理。

2.1.5 对受试样品使用方式的要求参照厂家推荐的使用方式。

2.1.6 对合理设置对照组的要求以载体和功效成分（或原料）组成的受试样品，当载体本身可能具有相同功能时，应将该载体作为对照。

2.2 人体试用试验规程2.2.1 试验前的准备2.2.1.1 原则上人体试用试验应在动物功能学试验有效的前提下进行。

保健食品及其原料毒理学评价程序本程序适用于保健食品及其原料的毒理学安全性评价。

1术语1.1保健食品是指声称保健功能，不得对人体产生急性、亚急性或者慢性危害的特别食品。

包括属于补充维生素、矿物质等养分物质的养分素补充剂，以及声称保健功能的产品。

1.2保健食品原料形成保健食品成效成分和配方的初始物料。

2受试物2.1受试物可以是保健食品或保健食品原料。

2.2资料性要求2.2.1应供给受试物的名称、性状、规格、批号、生产日期、保质期、保存条件、申请单位名称、生产企业名称、配方、生产工艺、质量标准、保健功能以及推举摄入量等信息。

2.2.2受试物为保健食品原料时应供给动物和植物类原料的产地和食用部位、微生物类原料的分类学地位和生物学特征、食用条件和方式、食用历史、食用人群等根本信息，以及其他有助于安全性评估的资料。

2.2.3原料为从动物、植物、微生物中分别的成分时，还需供给当成分的理化特性和化学构造等资料。

2.2.4供给受试物的主要成分、成效成分/标志性成分及可能的有害成分的分析报告。

2.3受试物的特别要求2.3.1保健食品应供给包装完整的定型产品。

毒理学试验所用样品批号应与功能学试验所用样品批号全都，并且为卫生学试验所用三批样品之一〔益生菌、奶制品等产品保质期短于整个试验周期的产品除外〕。

依据技术审评意见要求补做试验的，假设原批号样品已过保质期，可使用批号的样品试验，但应供给批号样品按产品技术要求检验的全工程检验报告。

2.3.2由于推举量较大等缘由不适合直接以定型产品进展试验时，可以对送检样品适当处理，如浓缩、局部去除辅料或安全的食品成分等。

应供给受试样品处理过程的说明和相应的证明文件，处理过程应与原保健食品的主要生产工艺步骤保持全都。

3.毒理学试验的主要工程依据 GB15193 开展以下试验。

3.1急性经口毒性试验3.2遗传毒性试验：细菌回复突变试验，体内哺乳动物红细胞微核试验，哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验，小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验，体外哺乳类细胞 HGPRT 基因突变试验，体外哺乳类细胞 TK 基因突变试验，体外哺乳类细胞染色体畸变试验、啮齿类动物显性致死试验，体外哺乳类细胞 DNA 损伤修复〔非程序性 DNA 合成〕试验，果蝇伴性隐性致死试验。

DB22/T 396.10—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第10部分：致畸试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品毒理学致畸试验评价程序。

本标准适用于保健用品毒理学致畸试验检验方法。

2 致畸试验方法2.1 试剂及其配制（实验用水为纯水）2.1.1 甲醛、冰乙酸、2,4,6-三硝基酚、氢氧化钾、甘油、水合氯醛、茜素红；2.1.2 茜素红贮备液：茜素红-S，50 %乙酸饱和液5.0 mL，甘油10.0 mL，1%水合氯醛溶液60.0 mL 混合，放入棕色瓶中；2.1.3 茜素红应用液：取贮备液3 mL～5 mL，用1 g/100 mL～2g/100 mL氢氧化钾液稀释至l000 mL，存于棕色瓶中；2.1.4 透明液A：甘油200 mL、氢氧化钾10 g、蒸馏水790 mL混合；2.1.5 透明液B：甘油与蒸馏水等量混合；2.1.6 固定液：Bouins液：2,4,6-三硝基酚75份、甲醛20份、冰乙酸5份。

2.2 仪器与设备2.2.1 分析天平：精确度为0.1 g；2.2.2 生物显微镜；2.2.3 体视显微镜；2.2.4 游标卡尺（百分尺）。

2.3 实验动物常用试验动物为大鼠、小鼠和家兔。

传统致畸应选用健康性成熟(90 d～100 d)雌、雄大鼠，雌性应为未交配过的大鼠80 只～90 只。

雄鼠减半。

2.4 剂量分组至少设四个组，一个空白对照组，3个试验组。

剂量原则上可采用1/4、1/16、l/64 LD50，或以长期毒性试验的最大无作用剂量为高剂量组，其1/30左右为低剂量组，在其间设一组。

对某种新的动物，初次试验可设一阳性对照组。

每组至少12 只孕鼠。

常用阳性对照物有敌枯双（0.5 mg/kg～1.0 mg/kg体重）、五氯酚钠阿斯匹林(30 mg/kg体重)及维生素A 25000 IU～40000 IU等。

保健用品毒理学评价程序和检验方法 第4部分：皮肤刺激性试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品毒理学皮肤刺激性试验评价程序。

本标准适用于保健用品毒理学皮肤刺激性试验检验方法。

2 皮肤刺激性试验检验方法2.1 材料2.1.1 动物多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。

应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。

实验动物至少要用4只。

实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。

实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。

选用常规饲料，饮水不限制。

2.1.2 受试物液态受试物一般不需稀释，可直接使用原液，膏状受试物，可直接使用原膏霜。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试动物皮肤刺激性的影响。

受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。

此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD 50小于200 mg/kg BW或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为5000 mg/kg BW 仍未出现皮肤刺激作用也无需进行急性皮肤刺激性试验，LD 50计算见附录B。

2.1.3 仪器2.1.3.1 体重秤,精确到0.1 Kg；2.1.3.2 放大镜。

2.2 试验方法2.2.1 皮肤急性刺激试验（一次皮肤涂抹试验）皮肤急性刺激试验步骤：a)试验前约24 h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3 cm×3 cm；b)取受试物约0.5 mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和一层硫酸纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

DB22/T 396.6—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第6部分：细菌回复突变试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品毒理学细菌回复突变试验评价程序。

本标准适用于保健用品毒理学细菌回复突变试验检验方法。

2 鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验（Ames试验）2.1 菌株常用组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌(Samomlla typhimurium)TA98、TA100、TA97和TA102，经检定符合要求，-80 ℃或液氮冻存备用。

2.2 仪器和设备2.2.1 培养箱。

2.2.2 恒温水浴。

2.2.3 压力蒸汽消毒器。

2.2.4 干烤箱。

2.2.5 低温冰箱(-80℃)或液态生物容器、普通冰箱。

2.2.6 天平(精确度0.1g或0.0001g)。

2.2.7 菌落计数仪。

2.2.8 低温高速离心机。

2.2.9 玻璃器皿等。

2.3 培养基与试剂2.3.1 营养肉汤培养基牛肉膏 5.0g胰胨（或混合蛋白胨） 5.0g氯化钠 2.5g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） 1.3g蒸馏水 500ml加热溶解，调节pH至7.4，分装后0.103 MPa20min灭菌，普通冰箱保存备用，保存期不超过半年。

2.3.2 营养肉汤琼脂培养基1DB22/T 396.6—20172 用作a.基因型鉴定的结晶紫敏感试验，抗氨苄青霉素和四环素试验，紫外线敏感性试验。

b.细菌活力鉴定。

琼脂粉 1.5g营养肉汤培养基 100ml加热融化后调pH至7.4，0.103 MPa20min灭菌。

2.3.3 底层培养基所需试剂及配置方法2.3.3.1 磷酸盐储备液磷酸氢钠铵（NaNH4HPO4·4H2O） 17.5g柠檬酸（C6H8O7·H2O） 10.0g磷酸氢二钾(K2HPO4 ) 50.0g硫酸镁 (MgSO4·7H2O) 1.0g加蒸馏水至100 ml，0.103MPa20min灭菌。

保健食品安全性毒理学评价规范 Toxicological Assessment Standardfor Health Food目录第一部分 评价程序一、主题内容与适用范围.... ... (2)二、对受试物的要求 (2)三、对受试物处理的要求 (2)四、保健食品安全性毒理学评价试验的四个阶段和内容 (3)五、不同保健食品选择毒性试验的原则要求 (3)六、保健食品安全性毒理学评价试验的目的和结果判定 (4)七、保健食品毒理学安全性评价时应考虑的问题 (7)第二部分 评价方法一、急性毒性试验 (11)二、鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验 (24)三、骨髓微核试验 (34)四、哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 (37)五、小鼠精子畸变试验 (40)六、小鼠睾丸染色体畸变试验 (42)七、显性致死试验 (45)八、非程序性DNA合成试验 (47)九、果蝇伴性隐性致死试验 (53)十、体外哺乳类细胞（V79/HGPRT）基因突变试验 (55)十一、TK基因突变试验 (58)十二、30天和90天喂养试验 (61)十三、致畸试验 (63)十四、繁殖试验................................... . (68)十五、代谢试验................................ . (73)十六、慢性毒性和致癌试验 (76)十七、日容许摄入量（ADI）的制定.............. .. (80)十八、致突变物，致畸物和致癌物的处理方法 (82)第一部分Part 1评价程序 Assessment Procedures1 主题内容与适用范围本程序规定了保健食品安全性毒理学评价的统一规程。

本程序适用于保健食品的安全性评价。

2 对受试物的要求2.1 以单一已知化学成分为原料的受试物，应提供受试物（必要时包括其杂质）的物理、化学性质（包括化学结构、纯度、稳定性等）。

含有多种原料的配方产品，应提供受试物的配方，必要时应提供受试物各组成成分，特别是功效成分或代表性成分的物理、化学性质（包括化学名称、结构、纯度、稳定性、溶解度等）及检测报告等有关资料。

保健食品安全性毒理学评价试验的四个阶段和内容
毒理试验的四个阶段和内容
1第一阶段：急性毒性试验
经口急性毒性：LD50，联合急性毒性，一次最大耐受
量试验。

2第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致
畸试验
2.1基因突变试验：鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验）为首选，其次考虑选用V79/HGPRT基因突变试验，必要时可另选其它试验。

2.2骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸
变试验。

2.3TK基因突变试验。

2.4小鼠精子畸形分析或睾丸染色体畸变分析。

2.5其它备选遗传毒性试验：显性致死试验、果蝇伴
性隐性致死试验，非程序性DNA合成试验。

2.630天喂养试验。

2.7传统致畸试验。

3第三阶段：亚慢性毒性试验----90天喂养试验、繁
殖试验、代谢试验
4第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）
1、药物的毒性试验分为两类，其一特殊毒性试验，包含致癌、致残、致突变，号称三致试验；作此试验的单位必须是国家指定并认可的；一般单位即使做了也不被国家认可！通常一类创新药必须做的。

无论一个药物的药效如何好，只要含有三致试验的特殊毒性（动物若干代繁殖后，查看），该药物将不会允许上市的。

2、其二，一般毒性试验，通常用老鼠或兔子去做，主要是测定半数致死量；若某个药物的半数致死量是有效使用剂量的2倍以上，通常认为是临床使用安全的，若半数致死量比有效剂量略大一点，那就谁也不敢使用了，万一略微超一点量就会导致患者死亡！。

DB22/T 396.7—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第7部分：啮齿动物微核试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能得安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施。

并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品啮齿动物微核试验评价程序。

本标准适用于保健用品啮齿动物微核试验检验方法。

2 啮齿动物微核试验2.1 实验动物常选用小鼠，建议首选NIH小鼠，也可用BALB/C或昆明种等其他小鼠。

一般每组10 只～12 只，雌雄各半；或至少每组6 只性成熟雄性小鼠。

试验前在实验动物房至少适应3 d～5 d2.2 仪器和试剂2.2.1 仪器2.2.1.1 生物显微镜；2.2.1.2 解剖器械；2.2.1.3 注射器；2.2.1.4 载玻片、盖玻片；2.2.1.5 纱布、滤纸等；2.2.2 试剂2.2.2.1 小牛血清（灭活）将滤菌的小牛血清置于56 ℃恒温水浴保温30 min 灭活。

灭活的小牛血清通常保存于冰箱冷冻室里。

2.2.2.2 姬姆萨（Giemsa）染液成分：Giemsa 染料 3.8 g甲醇 375 mL甘油 125 mL配制：将染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至 375 mL 和甘油，混合均匀，放置 37 ℃恒温箱中保温 48 h。

保温期间，振摇数次，促使染料的充分溶解，取出过滤，两周后用。

2.2.2.3 1/15 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）磷酸二氢钾（KH 2 PO4） 4.50 g1DB22/T 396.7—20172 磷酸氢二钠（Na 2 HPO4·12H2O） 11.81 g 加蒸馏水至 1000 mL2.2.2.4 Giemsa 应用液取一份 Giemsa 染液与 6 份 1/15 mol/L 磷酸盐缓冲液混合而成。

现用现配。

2.3 受试物给予途径和方法给受试物途径尽可能同实际应用一致。

DB22/T 396.11—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法第11部分：致癌试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品毒理学致癌试验评价程序。

本标准适用于保健用品毒理学致癌试验检验方法。

2 致癌试验方法2.1 致癌试验的预试验经致突变试验阳性者，应进行本试验。

预备试验的目的是确定致癌试验的最高剂量。

致癌试验的最高剂量应是经过三个月的亚急性毒性试验无中毒死亡，其体重增长不低于对照组10%，机体一般状况和实验室检查变化不大的剂量。

如果经过急性毒性和长期毒性试验，有足够的实验数据可以确定这一剂量时；或毒性很小，长期毒性试验未发现任何毒性反应时，这一阶段的试验可以免作。

2.2 动物与正式试验相同，最好用两种动物。

2.2.1 剂量和分组应选用肿瘤自发率低、对致癌物质较敏感的动物种属和品系，首选用大鼠，一般周龄6 周-8 周。

试验开始时，每个性别动物体重差异不应超过平均体重的20%。

2.2.2 受试物给予周期连续给受试物90 d。

2.2.3 受试物及给予途径受试物涂抹或贴服后以适当的方法固定，如用无刺激性纱布、胶布或有孔尼龙绷带固定。

2.2.4 仪器与器械2.2.4.1 实验室常用解剖器械；2.2.4.2 动物天平：精确0.1 g ；2.2.4.3 生物显微镜；2.2.4.4 生化分析仪；2.2.4.5 血细胞分析仪；2.2.4.6 离心机；2.2.4.7 病理相关仪器。

1DB22/T 396.11—20172.2.5 观察与检查每天观察动物一般状况，每周一次测量动物体重。

对死亡动物及试验期末动物，均需剖检并作病理解剖记录，肉眼观察认为有病变，或可疑病变的脏器，应进行病理组织学检查。

2.2.6 结果评价以无死亡、无明显毒性症状、体重增长不低于对照组10%的最高剂量，作为致癌试验的最高剂量。

保健用品功能学评价程序和检验方法 第1部分：评价程序警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品功能学评价程序和检验方法。

本标准适用于保健用品功能学检验。

2 评价程序2.1 基本要求2.1.1 对受试样品的要求2.1.1.1 应提供受试样品的原料组成或/和尽可能提供受试样品的物理、化学性质(包括化学结构、纯度、稳定性等)有关资料。

2.1.1.2 受试样品必须是规格化的定型产品，即符合既定的配方、生产工艺及产品质量标准。

2.1.1.3 功能学评价的样品与毒理学评价、卫生学检验的样品应为同一批次（安全性毒理学评价和功能学评价试验周期超过受试样品保质期的除外）。

2.1.1.4 受试样品必须是直接或间接作用与人体皮肤表面，并列入本省保健用品类别目录的外用产品。

2.1.2 对试验动物的要求2.1.2.1 根据各种试验的具体要求，合理选择试验动物。

常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系动物。

2.1.2.2 动物的性别、年龄依试验需要进行选择。

动物的数量要求为小鼠每组10只～12只（单一性别），大鼠每组8只～12只（单一性别）。

2.1.2.3 动物应达到SPF级试验动物的要求。

2.1.3 对受试样品剂量及时间的要求2.1.3.1 各种动物试验至少应设对照组、试验组，必要时可设阳性对照组。

受试样品的功能试验剂量必须在毒理学评价确定的安全剂量范围之内。

2.1.3.2 给受试样品的时间应根据委托方提供的使用说明书而定。

2.1.4 对受试样品处理的要求以推荐方式进行前处理。

2.1.5 对受试样品使用方式的要求参照厂家推荐的使用方式。

2.1.6 对合理设置对照组的要求以载体和功效成分（或原料）组成的受试样品，当载体本身可能具有相同功能时，应将该载体作为对照。

2.2 人体试用试验规程2.2.1 试验前的准备2.2.1.1 原则上人体试用试验应在动物功能学试验有效的前提下进行。

DB22/T 396.9—2017保健用品毒理学评价程序与检验方法 第9部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品毒理学哺乳动物培养细胞染色体畸变试验评价程序。

本标准适用于保健用品毒理学哺乳动物培养细胞染色体畸变试验检验方法。

2 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验2.1 细胞哺乳动物原代或传代培养细胞。

建议首选中国仓鼠肺细胞（CHL）。

2.2 剂量至少用三种不同剂量进行测试。

一般以50 %细胞生长抑制浓度（ID50）为测试的最高剂量。

为此，在测试之前，应测定受试物对培养细胞ID50，以受试物作用24 h为准。

对于无细胞毒性的化合物，最高浓度应是5 μl/ml,5 mg/ml或0.01mol/L，用倍量稀释法确定中、低剂量。

2.3 代谢活化应用诱导剂处理后的哺乳动物肝微粒体酶（S9），进行体外代谢活化试验，即在加S9mix和不加S9mix 平行的条件下测试。

2.4 受试物作用时间受试物和细胞需接触适当时间后进行观察。

非活化一般在接触24 h和48 h后收获细胞，代谢活化作用6 h以上。

2.5 对照组设置a)空白对照：即受试物浓度为0的对照；b)溶剂对照：生理盐水或受试物的溶剂对照；c)阳性对照：可采用环磷酰胺、丝裂霉素等已知染色体畸变试验阳性的化合物；d)S9mix对照作对照。

2.6 标本制作2.6.1 消化1DB22/T 396.9—20172 用0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞，待细胞脱落后，加入含10%胎牛或小牛血清的培养液终止胰蛋白酶的作用，混匀，放入离心管以800 r/min～1000 r/min的速度离心5 min，弃去上清液。

2.6.2 低渗加入0.075 mol/L氯化钾溶液2 ml,用滴管将细胞轻轻地混匀，放入37 ℃细胞培养箱中低渗处理30 min～40 min。

DB22/T 396.1—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第1部分：评价程序
警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围
本标准规定了保健用品毒理学评价程序和检验方法。

本标准适用于保健用品毒理学检验。

2 评价程序
2.1 评价阶段
2.1.1 第一阶段：急性经皮毒性和皮肤刺激试验
2.1.1.1 急性经皮毒性试验
2.1.1.2 刺激试验包括下列试验：
a)皮肤刺激性试验；
b)皮肤过敏试验。

2.1.2 第二阶段：长期经皮毒性和致突变试验
2.1.2.1 长期经皮毒性试验
2.1.2.2 致突变试验包括下列试验：
a)鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）；
b)啮齿动物微核试验；
c)小鼠精子畸形试验；
d)哺乳动物培养细胞染色体畸变试验。

2.1.3 第三阶段：致畸试验
2.1.4 第四阶段：致癌试验
2.1.5 第五阶段：人体皮肤斑贴试验
2.2 评价阶段的选用原则
2.2.1 保健用品的材料为常用原料，使用期限不超过二周者，仅进行第一阶段试验；使用期限二周或超过二周者，需作第一和第二阶段的试验。

2.2.2 保健用品材料中含有新材料者，需作第一、二阶段试验。

2.2.3 保健用品的受试人群与妊娠或儿童有关，影响胎儿及子代发育，在长期毒试验中发现对生殖系统有毒性，以及在致突变试验中显示阳性结果者，需作第三阶段试验。

1。

DB22/T 397.8—2017
保健用品功能学评价程序与检验方法 第8部分：辅助改善微循环功
能检验方法
警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围
本标准规定了保健用品功能学辅助改善微循环功能评价程序。

本标准适用于保健用品功能学辅助改善微循环功能检验方法。

2 保健用品辅助改善微循环功能评价方法
2.1 动物试验项目
a)小鼠耳微动脉的毛细血管数；
b)小鼠耳静脉毛细血管数。

2.2 动物试验原则
a)检测指标均为必做项目；
b)在进行动物试验时，必须遵循随机化原则，设立阳性对照组。

2.3 结果判定
微动脉、静脉口径（µm）和直径为0.2 mm范围内的毛细血管数三项指标中有两项阳性即可判定有效。

3 保健用品辅助改善微循环功能检验方法
3.1 材料和方法
3.1.1 试验动物选用
SPF级ICR雄性小鼠30 只，小鼠体重18.0 g～22.0 g。

动物购买后适应环境至少3 天～5 天。

3.1.2 试剂
3.1.2.1 戊巴比妥钠，配成1% 浓度备用；
3.1.2.2 肾上腺素，配成0.1% 浓度备用。

3.1.3 主要仪器
微循环显微镜系统。

1。