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![一种防控烟草病害的复合拮抗菌剂及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/feecf13e3186bceb18e8bb17.png)
专利名称：一种防控烟草病害的复合拮抗菌剂及其应用
专利类型：发明专利
发明人：杨勇,黎妍妍,陈守文,李程,杨小琼,李春黎,马昕,蔡冬波,王勤
申请号：CN202010433191.6
申请日：20200521
公开号：CN111387209A
公开日：
20200710
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种防控烟草病害的复合拮抗菌剂及其应用。
本发明基于前期发现的抗病物质和筛选的拮抗菌，通过开发“增效拮抗菌剂”充分发挥抗病增殖作用并实现防控技术简化，为烟叶生产发展提供技术支撑。
研究发现所开发的增效拮抗菌剂对烟草种子萌发和生长具有促进作用；在盆栽条件下，增效拮抗菌剂能显著性增强土传病害烟草青枯病防治效果，施用增效拮抗菌剂组对青枯病的相对防治效果为60.87％；对黑胫病相对防效为60.32％。
从最大叶长、最大叶宽、株高、茎直径等数据分析，增效拮抗菌剂能显著促进烟株生长。
申请人：湖北大学,湖北省烟草科学研究院
地址：430062 湖北省武汉市武昌区友谊大道368号
国籍：CN
代理机构：北京金智普华知识产权代理有限公司
代理人：杨采良
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几种生物菌剂防治烟草青枯病药效试验1. 引言1.1 研究背景随着人们对环境友好型农药的需求增加，生物菌剂在病害防治中的应用前景也越来越广阔。
开展几种生物菌剂在烟草青枯病防治中的药效试验，评价其防治效果、生长影响及安全性，具有重要的理论和实践意义。
本研究拟以此为目标，探索几种生物菌剂在烟草青枯病防治中的潜力，为绿色环保的病害防治技术提供参考依据。
1.2 研究目的研究目的：本研究旨在通过药效试验评估几种生物菌剂对烟草青枯病的防治效果及对烟草生长发育的影响，从而为烟草青枯病的生物防治提供科学依据。
具体目的包括：1.评估不同生物菌剂对烟草青枯病的防治效果，探讨其防治机制及优势；2.研究生物菌剂在烟草生长发育过程中的对照效果，分析菌剂对烟草植株生长的影响及可能的促进作用；3.评价生物菌剂的安全性，考察其在烟草种植环境中的稳定性和不良反应情况。
通过对不同生物菌剂在烟草青枯病防治中的综合比较，为选择合适的生物防治措施提供科学依据，为提高烟草产量和质量、减少化学农药使用量、保护生态环境等方面提供参考和支持。
1.3 研究意义本研究旨在通过对不同生物菌剂在烟草青枯病防治中的药效试验，评估其对病原真菌的抑制效果以及其对烟草生长发育的影响，为寻找绿色、高效、安全的防治烟草青枯病的方法提供科学依据。
研究结果将为改善烟草生产技术、减轻烟农农药使用量、保护生态环境提供参考，具有重要的理论和实践意义。
通过本研究的开展，我们有望探索出一种新型的烟草青枯病防治方法，为绿色农业的发展贡献力量。
2. 正文2.1 试验设计试验设计是本研究的基础，是确保试验结果可信性和科学性的关键环节。
本次试验分为以下几个步骤：1. 选取实验材料：首先要选择适合本试验的烟草品种，确保实验结果具有代表性。
同时要选择多份烟草青枯病病原菌，以确保试验的全面性和可靠性。
2. 制备菌剂：选择不同的生物菌剂作为试验对象，制备不同浓度的菌液。
3. 设定实验组和对照组：将烟草分为实验组和对照组，对照组不施用任何菌剂，实验组分别施用不同浓度的菌液。
拮抗菌和青枯菌无致病力突变株防控茄科作物青枯病的效应和机理研究青枯病是一种主要的植物病害,对农业生产造成了巨大的危害。
青枯病的病原菌为茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum),可腐生也可寄生,可在土壤中存活很长时间,是一种土壤习居菌。
其传播途径多样,条件适宜时即迅速增殖,造成青枯病的爆发。
由于轮作、套种等耕种措施应用的受限,化学防治对环境的污染且效果微弱,生物防治因此日益受到人们的重视。
青枯病的生物防治主要有利用无致病力青枯菌以及青枯菌的拮抗菌。
使用抗性品种也是较好的防治策略,但抗性品种的培育耗时长,也需要消耗大量的人力物力,而利用植物疫苗工程菌的刺激,诱导植物自身产生系统抗性,成为十分有潜力的防治方法。
青枯菌致病性调控网络复杂,其中PhcA (phenotype conversion A)是该调控网络的核心因子。
PhcA可被青枯菌的胞外信号分子3-羟基棕榈酸甲酯(3-hydroxypalmitic acid methyl ester,3-OH PAME)激活,正向调控胞外多糖EPS I (exopolysaccharides I)、胞外酶Pme (pectin methylesterase,果胶甲酯酶)的产生以及AHL (acyl-homoserine lactone)介导的群体感应系统。
另外,PhcA负向调控嗜铁素的产生、细胞运动及对环境的耐受性。
编码基因phcA位于青枯菌的染色体上,当青枯菌在植物维管束中迅速增殖时,PhcA的活性很高并开启青枯菌相关基因的表达,从而促进青枯菌的大量增殖。
hrp (hypersensitive reaction and pathogenicity)基因簇也是一个重要的与致病相关的基因簇,存在于青枯菌的大质粒上。
青枯菌的hp基因簇包含多达23个基因,主要编码青枯菌的关键致病因子——Ⅲ型分泌系统。
在hrp基因簇两侧还分布有与hrp基因有关的调控基因(如植物信号调控相关基因prh)及分泌的效应蛋白编码基因(如popA)。
櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄［４１］ＮｉｕＭ，ＷａｎｇＹＨ，ＷａｎｇＣＭ，ｅｔａｌ．ＡＬＲｅｎｃｏｄｉｎｇｄＣＭＰｄｅａｍｉｎａｓｅｉｓｃｒｉｔｉｃａｌｆｏｒＤＮＡｄａｍａｇｅｒｅｐａｉｒ，ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｌａｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｏｔａｎｙ，２０１７，６８（２１／２２）：５７７３－５７８６．［４２］ＣｈａｎｇＹＸ，ＧｏｎｇＬ，ＹｕａｎＷＹ，ｅｔａｌ．ＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＡ（ＲＰＡ１ａ）ｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｍｅｉｏｔｉｃａｎｄｓｏｍａｔｉｃＤＮＡｒｅｐａｉｒｂｕｔｉｓｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅｆｏｒＤＮＡｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００９，１５１（４）：２１６２－２１７３．［４３］ＩｓｈｉｂａｓｈｉＴ，ＫｉｍｕｒａＳ，ＦｕｒｕｋａｗａＴ，ｅｔａｌ．ＴｗｏｔｙｐｅｓｏｆｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＡ７０ｋＤａｓｕｂｕｎｉｔｉｎｒｉｃｅ，Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｅｌｌｕｌａｒ＆ｔｉｓｓｕｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，２００１，２７２（１／２）：３３５－３４３．［４４］ＷａｔｅｒｗｏｒｔｈＷＭ，ＬａｔｈａｍＲ，ＷａｎｇＤＰ，ｅｔａｌ．ＳｅｅｄＤＮＡｄａｍａｇｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｐｒｏｍｏｔｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｇｒｏｗｔｈｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，２０２２，１１９（３０）：ｅ２２０２１７２１１９．［４５］Ｎｉｓｈｉｚａｗａ－ＹｏｋｏｉＡ，ＭｏｔｏｙａｍａＲ，ＴａｎａｋａＴ，ｅｔａｌ．ＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲＯＦＧＡＭＭＡＲＥＳＰＯＮＳＥ１ｐｌａｙｓｒｉｃｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｒｏｌｅｓｉｎＤＮＡｄａｍａｇｅｒｅｓｐｏｎｓｅａｎｄｒｅｐａｉｒ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０２３，１９１（２）：１２８８－１３０４．［４６］ＭａｈａｐａｔｒａＫ，ＲｏｙＳ．ＳＯＧ１ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｏｎｓｅｔｏｆｅｎｄｏｒｅｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎｕｎｄｅｒｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｐｏｒｔｓ，２０２１，１１（１）：１１６５９．［４７］ＺｈａｎｇＱＦ．Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｇｒｅｅｎｓｕｐｅｒｒｉｃｅ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，２００７，１０４（４２）：１６４０２－１６４０９．［４８］ＩｚａｗａＴ，ＫｏｎｉｓｈｉＳ，ＳｈｏｍｕｒａＡ，ｅｔａｌ．ＤＮＡｃｈａｎｇｅｓｔｅｌｌｕｓａｂｏｕｔｒｉｃｅｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２００９，１２（２）：１８５－１９２．［４９］ＰｅｎｇＹ，ＺｈａｎｇＹＹ，ＧｕｉＹＪ，ｅｔａｌ．Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｒｅｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｆｏｒｑｕｅｎｃｈｉｎｇｇｅｎｏｍｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙｉｎｍｏｄｅｒｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔ，２０１９，１２（１０）：１３９５－１４０７．和国优，郭建伟，孔垂思．生防菌对烟草青枯病控制的研究进展［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（２３）：９－１６．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．２３．００２生防菌对烟草青枯病控制的研究进展和国优１，郭建伟２，孔垂思１，２（１．云南省农业科学院农业环境资源研究所，云南昆明６５０２２１；２．中国科学院昆明植物研究所，云南昆明６５０２０１） 摘要：烟草是我国主要的经济作物之一，其种植面积和产量均居世界首位。
豫南烟区烟草青枯病菌拮抗内生细菌的筛选及其防病效果初探李小杰;李成军;胡亚静;李淑君;邱睿;白静科;陈玉国【摘要】为了获得烟草青枯病菌的稳定拮抗内生细菌菌株,从豫南烟区烟草栽培品种中烟100和云烟87的根茎中共分离到208株细菌,利用平板共培养法筛选出9株对烟草青枯病菌具有拮抗效果的菌株.其中菌株Rsa3对烟草青枯病菌的抑菌效果最好,抑菌圈半径达7 mm,且在转移5～6代后仍具有较强的抑制效果.依据16S rDNA序列,将拮抗菌Rsa3鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens).该细菌发酵液对烟草青枯病菌有明显的抑制作用,其作用主要在于菌体本身,在温室盆栽试验中发酵液的防病效果可达79.17％,同时具有促进烟苗根系生长的能力.以上结果表明,拮抗菌Rsa3对烟草青枯病具有较好的抑菌和防病作用,同时对烟苗的根系有明显的促生长效果,具有潜在的应用价值.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2018(047)005【总页数】6页(P57-61,68)【关键词】豫南烟区;烟草青枯病菌;拮抗内生细菌;筛选;抑菌效果【作者】李小杰;李成军;胡亚静;李淑君;邱睿;白静科;陈玉国【作者单位】河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南许昌461000;河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南许昌461000;河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南许昌461000;河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南许昌461000;河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南许昌461000;河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南许昌461000;河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南许昌461000【正文语种】中文【中图分类】S435.72;S476烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的危害世界烟草生产的重要根茎部细菌性病害，在我国长江流域及其以南烟区普遍发生，造成了巨大损失[1-2]。
烟草拮抗内生细菌的筛选与防病促生长效果杨珍福;吴毅歆;陈映岚;何月秋【摘要】为了获得能促进烟草生长和防治黑胫病的稳定菌株，通过常规方法从烟草茎、叶中分离到478株内生细菌，其中65株能拮抗烟草黑胫病菌，占13.60%。
菌株YN201408、YN201442、YN201448和YN201458对烟草疫霉的抑菌率分别为63.85%、60.82%、64.72%和76.07%，用1.0×107 cfu/mL拮抗菌液浸烟苗根系30 min，移栽后浇灌1次，在温室盆栽试验中控病效果分别为68.24%、65.47%、69.12和41.40%。
YN201448对烟草种子萌芽率和烟草的生长都有促进作用，烟草的发芽率、第5~6真叶期苗高和地上部鲜重分别高于清水对照10.95%、29.31%和67.24%。
依据菌体形态、生理生化特征和16S rDNA序列，YN201408、YN201442和YN201448鉴定为解淀粉芽孢杆菌，YN201458为铜绿假单胞菌。
YN201448因良好的促生长和控病效果而具有继续开发应用的潜力。
%To obtain stable bacterial strains with good growth promotion of tobacco and black shrank disease control effect, 478 endophytic bacterial strains were isolated from tobacco leaves and stems. Among them 65 of strains ( accounting for 13.60%) could inhibit Phytophthora parasitica var. nicotianae by the traditional methodology. Especially, the four strains,YN201408, YN201442, YN201448 and YN201458 inhibited 63.85%, 60.82%, 64.72%and 76.07%of mycelia growth of the pathogen and controlled68.24%, 65.47%, 69.12 and 41.40%of disease severity by soaking the seedling root in 1.0×107cfu/mL of the bacterial suspension for 30 min and drenching once after transplanting in the pot experiment in the greenhouse, respectively. YN201448 could promote seed germination andgrowth of tobacco, showing 10.95%, 29.31%and 67.24%higher than water control in germination rate, seedling height during 5-6 leaf stage and fresh weight on the ground. YN201408, YN201442 and YN201448 were classified into Bacillus amyloliquefaciens, and YN201458 into Pseudomonas aeruginosa based on their morphology, physiological and biochemical traits and 16S rDNA sequences. YN201448 showed good potential for application based on its growth promotion and disease control effect.【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】6页(P48-53)【关键词】烟草;黑胫病菌;解淀粉芽孢杆菌;生物防治;促生长【作者】杨珍福;吴毅歆;陈映岚;何月秋【作者单位】云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程研究中心，昆明650201;云南农业大学农学与生物技术学院，昆明 650201; 微生物菌种筛选与应用国家地方联合工程研究中心，昆明 650217;云南省禄劝县农业技术推广总站，云南禄劝 651500;云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程研究中心，昆明 650201; 云南农业大学农学与生物技术学院，昆明 650201【正文语种】中文【中图分类】S572.08烟草黑胫病是由烟草疫霉（ Phytophthora parasitica var. nicotianae）引起的烟草真菌性土传病害之一。
烟草青枯病拮抗菌的筛选、鉴定和防病潜力评价何玉安;刘书凯;时宏书;王林玉;江彤;齐永霞;丁婷【摘要】为进一步丰富烟草青枯病的生防资源,通过平板稀释法,对贵州省黔南州4个烟区的健康烟株及根际土壤进行烟草内生细菌及根际细菌的分离纯化,共得到烟草内生细菌103株,根际细菌73株.利用抑菌圈法,筛选出抗青枯病菌的内生细菌LSN02和根际细菌LLGJ04,其抑菌圈直径分别为29.96和38.65 mm.进化分析结果表明,LSN02和LLGJ04均属于芽孢杆菌属且具有趋化性.盆栽试验中,LSN02和LLGJ04可有效增强烟株对青枯病的抗病能力.用中浓度(1×108 cfu/mL)和高浓度(2×108 cfu/mL)的LSN02菌株处理烟株时,烟草青枯病的病株率显著降低.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2018(051)009【总页数】6页(P1-6)【关键词】烟草;青枯病;拮抗细菌;芽孢杆菌;生防潜力【作者】何玉安;刘书凯;时宏书;王林玉;江彤;齐永霞;丁婷【作者单位】贵州省烟草公司黔南州公司,贵州省都匀市迎宾路8号 558000;贵州省烟草公司黔南州公司,贵州省都匀市迎宾路8号 558000;贵州省烟草公司黔南州公司,贵州省都匀市迎宾路8号 558000;贵州省烟草公司黔南州公司,贵州省都匀市迎宾路8号 558000;安徽农业大学植物保护学院,合肥市长江西路130号 230036;安徽农业大学植物保护学院,合肥市长江西路130号 230036;安徽农业大学植物保护学院,合肥市长江西路130号 230036【正文语种】中文【中图分类】S435.72烟草青枯病作为一种重要的土传病害，随着烟草连作年限的延长以及耕作制度、烟草品种的变化，为害日益严重［1］。
目前，烟草青枯病的防治以化学药剂为主，但化学药剂的大量施用不利于生态环境的保护和农业的可持续发展［2］，生物防治则在烟草病害防治中发挥着越来越重要的作用。
抗青枯内生细菌的筛选及其对烟草青枯病的防治效果姜乾坤;彭阁;王瑞;谭军;邸慧慧;向必坤;赵秀云;彭五星;董善余【摘要】烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌引起的一种土传细菌性烟草病害,主要危害烟草的根茎,严重影响烟草的产量.从青枯病发病田健康烟株分离内生细菌55个,通过平板拮抗实验筛选,R-3、R-7、R-9菌株对青枯雷尔氏菌有明显的拮抗作用.gyrB 基因序列分析表明,R-3、R-7、R-9均为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis).3个菌株的发酵液经115℃高温处理均能保持对青枯雷尔氏菌的抑制活性,说明3株贝莱斯芽胞杆菌可产生耐高温的抑菌物质.田间试验结果表明,R-3、R-7和R-9均可长期定殖于烟草根和茎中,对青枯病的防治效果分别为55.72%、48.34%和50.71%.%Tobacco bacterial wilt is a soil-borne bacterial disease caused by Ralstonia solanacearum, which is mainly harmful to the roots and stems of tobacco and seriously affects tobacco yield. Fifty-five endophytic bacterial strains were isolated from healthy tobacco planted in diseased soils. Among them, strains R-3, R-7 and R-9 had obvious antagonistic effects on R. solanacearum in plate antagonistic experiments. Based on gyrB gene sequence, R-3, R-7 and R-9 all belong to Bacillus velezensis. After heated at 115 ℃, the liquid fermentation of the 3 strains still had antibacterial activities, indicating that these strains produced heat resistant substances. Field experiments showed that R-3, R-7 and R-9 were all able to chronically colonize in the root and stem of tobacco, and their control efficiency against bacterial wilt were 55.72%, 48.34% and 50.71%, respectively.【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2017(038)005【总页数】6页(P13-17,31)【关键词】烟草青枯病;植物内生菌;贝莱斯芽胞杆菌;定殖能力;防治效果【作者】姜乾坤;彭阁;王瑞;谭军;邸慧慧;向必坤;赵秀云;彭五星;董善余【作者单位】华中农业大学农业生命科学技术学院,武汉 430070;华中农业大学农业生命科学技术学院,武汉 430070;湖北省烟草公司恩施州公司,湖北恩施 445000;湖北省烟草公司恩施州公司,湖北恩施 445000;湖北省烟草公司恩施州公司,湖北恩施 445000;湖北省烟草公司恩施州公司,湖北恩施 445000;华中农业大学农业生命科学技术学院,武汉 430070;湖北省烟草公司恩施州公司宣恩县烟叶分公司,湖北宣恩 445500;湖北省烟草公司宜昌市公司湖北宜昌 443000【正文语种】中文【中图分类】S435.72烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的一种土传细菌性烟草病害，是典型的维管束病害，主要危害烟草的根、茎。
河南农业科学，2018,47(5):57-61，68Journal of Henan Agricultural Sciences d〇i：10. 15933/ki. 1004-3268.2018.05.011豫南烟区烟草青枯病菌拮抗内生细菌的筛选及其防病效果初探李小杰，李成军，胡亚静，李淑君，邱睿，白静科，陈玉国(河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室，河南许昌461000)摘要：为了获得烟草青枯病菌的稳定拮抗内生细菌菌株，从豫南烟区烟草栽培品种中烟100和云烟87的根茎中共分离到208株细菌，利用平板共培养法筛选出9株对烟草青枯病菌具有拮抗效果的菌株。
其中菌株Rsa3对烟草青枯病菌的抑菌效果最好，抑菌圈半径达7 mm，且在转移5 ~6代后仍具有较强的抑制效果。
依据16S rDNA序列，将拮抗菌R s3鉴定为荧光假单胞菌（+$01%〇)(。
该细菌发酵液对烟草青枯病菌有明显的抑制作用，其作用主要在于菌体本身，在温室盆栽试验中发酵液的防病效果可达79. 17%，同时具有促进烟苗根系生长的能力。
以上结果表明，拮抗菌Rsa3对烟草青枯病具有较好的抑菌和防病作用，同时对烟苗的根系有明显的促生长效果，具有潜在的应用价值。
关键词：豫南烟区；烟草青枯病菌'拮抗内生细菌；筛选；抑菌效果中图分类号：S435.72;S476 文献标志码：A文章编号％ 1004 -3268(2018)05 -0057 -06 Screening and Disease Control Effect of Antagonistic Endophytic Bacteriain Tobacco against R alstonia solanacearum in Southern Henan ProvinceLI Xiaojie，LI Chengjnn，HU Yajing，LI Shujun，QIU Rui，BAI Jingke，CHEN Yuguo(Key Laboratory fo r Green Preservation &C ontrol of Tobacco Diseases and Pests in H uanghuai Growing A re a，Tobacco Research In stitu te of H enan Academ y of A g ric u ltu ra l S cie n ccs，Xuchang 461000,C h in a) Abstract%I n o rder to obtain stable antagonistic strains of tobacco bacterial wilt，208 strains of bacteriawere isolated from tobacco roots and stems of Zhongyan 100 and Yunyan 87 in southern Henan province，and nine strains witli antagonistic effect on R a ls t o n ia s o la n a c e a ru m were screened using the metliod ofplate confrontation.Among them，strain Rsa3 had a strongest antibacterial activity to R a ls t o n ia sola n a c e a r u m.The radius of inhibition zone reached7 m m and the inhibitory effect was still strong after5—6generations.The antagonistic bacterium strain Rsa3 was identified as P s e u d o m o n a s f to the16S rDNA sequence.The fermented liquid of Rsa3 could obviously inhibit R a ls t o n ia s o la n a c e a ru mand the function mainly lay in the bacterium itself.The disease control effect of fermented liquid reached79. 17%in the greenhouse pot experiment.Simultaneously，it also had the ability to promote the rootgrowth of tobacco seedlings.The above results indicate that the antagonistic bacterium Rsa3 bacterial and antidisease effects o n tobacco bacterial wilt，and has obvious growth promoting effect on theroot system of tobacco seedlings，showing potential application valiue.Key words：Tobacco area of southern Henan province;R a ls t o n ia s o la n a c e a r u m；Antagonistic endophyticbacteria；Screening；I nhibitory effect收稿日期：2017 -10-23基金项目：河南省财政预算项目（豫财预[2017 *76 -4);河南省烟草公司科技项目（H Y K J201407);河南省烟草公司重点项目(H Y K J201610)作者简介：李小杰（1983 -)，女，河南许昌人，助理研究员，博士，主要从事烟草病理研究。
拮抗菌株混合发酵液对烟草黑胫病和青枯病的防治作用罗政刚;车永梅;刘知祥;王耀斌;叶青;李伟;刘新【期刊名称】《青岛农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2024(41)1【摘要】黑胫病和青枯病是危害烟草生长的主要土传病害,解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株F012和F028对烟草黑胫病和青枯病等多种植物致病菌具有较强拮抗作用。
用平板对峙法和盆栽试验研究F012和F028混合发酵液对烟草黑胫病和青枯病的防治作用及机制。
结果表明:平板对峙试验中混合发酵液对烟草黑胫病病原菌抑菌率为77.91%,对烟草青枯病病原菌的抑菌圈直径为31.7 mm;盆栽试验中对烟草黑胫病和青枯病防效分别为74.49%和77.27%;混合发酵液能显著上调烟草叶片抗病关键基因NtPAL、NtEDS1、NtPR1和NtPR2的表达,提高苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶和多酚氧化酶等保护酶活性。
由以上结果可知,F012和F028混合发酵液可以激活烟草防御系统,提高烟草对黑胫病和青枯病的抵抗能力。
F012和F028菌株将是研制复合微生物菌剂的理想原料。
【总页数】8页(P1-8)【作者】罗政刚;车永梅;刘知祥;王耀斌;叶青;李伟;刘新【作者单位】山东潍坊烟草有限公司安丘分公司;青岛农业大学生命科学学院/山东省高校植物生物技术重点实验室;山东青岛烟草有限公司【正文语种】中文【中图分类】Q945【相关文献】1.烟草黑胫病与青枯病的识别与防治2.大蒜提取液对烟草黑胫病和青枯病的防治效果初探3.赣中烟草黑胫病与青枯病发生原因及防治对策4.腐殖酸和菜籽饼肥与微生物菌剂协同作用对烟草青枯病和黑胫病的调控作用5.一种配方药肥防治烟草黑胫病、青枯病的试验初报因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
研究者可以知道三叶斑潜蝇在中国的空间分布趋势,有助于理解三叶斑潜蝇的空间传播分布,为三叶斑潜蝇在中国的风险分析和检疫控制提供依据;也可以根据预测结果为各地区防治三叶斑潜蝇提供参考,各地区可以根据该害虫未来扩展的范围来制定检疫控制方案,做好防治的准备,避免或降低三叶斑潜蝇发生的风险。
参考文献[1] 雷仲仁,朱灿健,张长青.重大外来入侵害虫三叶斑潜蝇在中国的风险性分析[J ].植物保护,2007,33(1):37241.[2] 吴佳教,梁广勤,梁帆,等.三叶斑潜蝇的检疫处理[J ].植物检疫,1992,13(2):84286.[3] 肖良.三叶草斑潜蝇[J ].中国进出境动植检,1994(2):39240.[4] MA YWALD G F ,SU T H ERST R er ’s guide to CL IM 2EX :a computer programm comparing climates in ecology[M ].2nd ed.Melbourne :Commonwealt h Scientific and Industrial Research Organism ,1991:124.[5] 荆玉栋,张润志,任丽.褐纹甘蔗象在中国的适生性分析[J ].昆虫知识,2003,40(5):4462449.[6] LAW TON J H.Small eart hquakes in Chile and climate change[J ].Oikos ,1998,82:2092211.收稿日期: 2007206204基金项目: 国家烟草专卖局项目(110200201008);北京市科技计划项目(D0706005000091);生物资源保护与利用湖北省重点实验室开放基金(2007006)3通讯作者拮抗细菌对烟草青枯病的温室防病及促生效果王 静1,2, 赵廷昌13, 孔凡玉2, 何月秋3,张成省2, 刘建华4, 刘伟成4(1.中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京 100094;2.中国农业科学院烟草研究所,青岛 266101; 3.云南农业大学植物保护学院,昆明 650201;4.北京市农林科学研究院植物保护环境保护研究所,北京 100089)摘要 从福建、贵州两省烟草青枯病流行区烟株根围土样筛选得到的对青枯病有较好拮抗作用的细菌菌株,测定了其温室防效和促生作用。
试验获得了控病效果表现较好的短小芽孢杆菌(B acill us p umil us )AR03菌株,2次重复防效试验表明其防效均在50%以上,且该菌株能促进烟株的生长。
关键词 烟草青枯病; 筛选; 防治效果; 促生作用中图分类号 S 435.72Disease 2preventing and grow th 2promoting effects of antif ungal bacteria against tobacco wiltWang Jing 1,2, Zhao Tingchang 1, K ong Fanyu 2, He Yueqiu 3,Zhang Chengsheng 1, Liu Jianhua 4, Liu Weicheng 4(1.S tate Key L aboratory f or B iolog y of Plant Diseases and I nsect Pests ,I nstitute of Plant Protection , CA A S ,B ei j ing 100094,China; 2.I nstitute of Tobacco Research ,CA A S ,Qi ng dao 266101,China;3.College of Plant Protection ,Yunnan A gricultural University ,Kunming 650201,China;4.Institute of Plant and Envi ronment Protection ,B ei j ing A cadem y of A g riculture &Forest ry S ciences ,B ei j ing 100089,China )Abstract Control effects and plant growth 2promoting experiments on some bacterial strains ,screened f rom rhizos 2pheric soil samples f rom Fujian and Guizhou Provinces ,were conducted.Strain AR03of B acill us p umil us was se 2lected as potential biocontrol agents ,the control effects of which reached over 50%in two repeat tests.In plant growth 2promoting experiments ,strain AR03was the most effective.K ey w ords Ralstonia solanacearum ; screening ; control effect ; promote growth 烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌(R alstoni a so 2l anacearum )引起的一种土传病害,该菌寄主范围广,・301・调查研究PLAN T PRO TECTION Vol.33No.5(2007)喜高温,加之缺乏抗源,易暴发流行,防治非常困难。
对于该病害的防治,通过改进栽培措施、使用抗病品种和杀菌剂能取得一定效果,但都有其局限性。
在土壤中引入拮抗性微生物来防治土传病害已有70多年的研究历史,有很多报道都认为生物防治在未来农业生产中具有重要地位[123]。
原北京农业大学陈延熙教授研制的增产菌已在全国10多个省推广使用,主要用于防治水稻稻瘟病、小麦纹枯病和油菜菌核病等,田间增产率达10%～50%。
魏春妹、张春明等研制出番茄青枯病和烟草青枯病的生防制剂青枯散,田间试验证明该制剂对番茄青枯病、烟草青枯病有70%和80%的防治效果,且能增产10%,表现具有发芽势高和壮苗的作用[4]。
我国可利用的生防微生物资源很丰富,但被利用的较少,尤其是对植物病害即有拮抗作用又有促进植物生长的微生物研究与开发不足。
有试验表明[526],拮抗细菌种类多,繁殖速度快,广泛分布于植物根围,可与植物建立密切的关系,其中一些细菌还能促进植物生长。
因此,根围拮抗细菌防治土传病害有很大潜力。
作者2004、2005年在福建、贵州两省青枯病流行区采集的烟田根际土样中筛选到一批拮抗细菌[7],本研究对其进行了温室防病和促生效果的测定,结果报道如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试拮抗细菌菌株及来源供试细菌:AR01、AR02和AR04菌株(细菌常规鉴定为芽孢杆菌属B acillus sp.),AR03(细菌常规鉴定和16s rDNA序列测定为短小芽孢杆菌(B acillus pumi2 lus),均分离自福建、贵州两省青枯病流行区的烟草根际土样。
测试菌为青枯雷尔氏菌菌株,由广东省农业科学院植物保护研究所提供的烟草青枯病病原菌。
1.1.2 供试烟草心叶烟:感病品种,本实验室保存。
1.2 根际拮抗细菌温室盆栽控病试验盆栽试验于温室内进行,试验用土为灭菌的混配营养土V(土壤)∶V(营养土)=1∶1。
1.2.1 初测将供试拮抗细菌菌株分批进行盆栽测试。
每次试验设空白对照CK1(仅接清水)和发病对照CK(仅接青枯病菌);每处理设3次重复,每重复5～6株烟苗。
将灭菌土培育烟苗至5～6叶期,将幼苗取出,于待测生防菌悬液(108cfu/mL)中浸根30min,移栽至苗钵;对照CK1浸根于清水中。
1d后,将预先繁殖的青枯菌配制成1×106cfu/mL的菌悬液,采取灌根接种的方法,接种量为5mL/株,其他按照温室常规管理。
出现病株即开始调查,以后每隔5天调查1次,共调查3次。
分别调查发病情况,计算病指和防效。
1.2.2 复测方法将初测试验中效果较好的4株拮抗菌株进行复测。
样本量略扩大,每重复10株,共3次重复。
(1)幼苗浸根:取5～6片真叶烟苗于盆钵中拔出,浸根于预先配制好的供试生防菌菌悬液(菌量为1×108cf u/mL)中,30～40min后取出并移栽于装有灭菌土的花盆中。
(2)再次灌菌:缓苗后约3d,于根际接种拮抗菌菌悬液。
用移液枪头在烟株根际土壤呈正方形钻穴,(深约3cm),每株共4个。
将菌悬液注入穴中,1mL/穴,另取1mL淋于茎基部,充分保护烟株根际。
如上述方法重复接种2次,间隔为5d。
对照接入等量清水。
(3)接种发病:1d后,将繁殖的R.S配制成5×107cf u/mL的菌悬液,接种方法同上,接种部位相同,接种量共为5mL/株;C K1接等量清水。
完成后,将烟株用适量清水保湿,以利发病。
(4)观察记录:置放于温室28～36℃条件下观察烟株发病情况。
见病株后,每日观察记录发病株数。
植株可见明显青枯病症状,即为发病株。
以接种病原菌日为起点日,共观察25～30d。
分级标准按全国烟草行业烟草病害调查分级标准Yc/T392 1996进行。
病情指数和防治效果按烟草病害药效试验方法Yc/T4021996计算。
1.3 拮抗细菌浸根对烟草苗期促生作用的测定试验采用营养钵种植方式,分别于无菌土和自然土中进行。
将大田壤土:农家肥:蛭石按照体积比7∶2∶1比例配制基质,分别将灭菌和自然土(不灭菌)填装于育苗钵中。
小心挖出5～6片真叶的烟苗,轻轻抖落附着于根部的土壤,并将其浸泡于预选配制好的待测生防菌菌悬液(菌量约为1×108cfu/mL)中,30～40min后取出,分别移栽于装有灭菌土和自然土的苗钵中。
每处理12株,3次重复,随机排列,于温室30℃保湿培养。
待烟苗长至30d后,随机选取10株烟苗,小心将苗整株挖出,洗去根部泥土,测量其株高、整株鲜质量、根鲜质量等指标。
然后180℃烘干至恒重,测整株干质量及根干质量。
对各处理的促生效果采用邓肯氏新复极差法进行方差分析。
2 结果与分析2.1 温室盆栽防效试验2.1.1 初测防效经不同批次的盆栽试验初测,获得了4株控病作用较好的生防菌株(GK 122222、GK 122221、BT8226和X 12),防治效果分别为:60.1%、54.9%、52.6%和45%。
2.1.2 复测防效将初测结果选出的4个菌株(将GK122221、GK122222、B T8226和X12菌株重新编号,分别命名为AR01、AR02、AR03和AR04)进行重复测试,AR01、A R02和AR03仍然表现稳定良好的防病效果,分别为99.4%、99.4%和99.1%,且能有效地推迟发病时间(表1)。
