几种水质指示微生物检测方法的研究进展
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饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展饮用水是人类生活中不可或缺的重要资源,在日常生活中,我们每天都会接触和使用饮用水。
饮用水中可能存在着各种致病性微生物,如细菌、病毒、寄生虫等,它们可能对人体健康造成严重危害。
对饮用水中的致病性微生物进行快速检测和准确监测,对于保障人们的饮用水安全至关重要。
PCR技术可以通过扩增目标微生物的DNA片段来进行检测和鉴定。
在饮用水中,常见的致病性微生物包括大肠杆菌、志贺氏菌、霍乱弧菌等。
通过PCR技术,可以选择相应的引物和探针,实现对这些致病性微生物的快速检测和定量分析。
PCR技术还可以结合其他技术,如实时荧光定量PCR、数字PCR等,提高检测的准确性和灵敏度,从而更好地保障饮用水的安全。
二、PCR技术在饮用水中致病性微生物检测中的优势和挑战与传统的微生物学检测方法相比,PCR技术具有检测速度快、准确性高、灵敏度强等优势。
PCR技术还可以实现多种微生物的同时检测,提高了检测的效率和便捷性。
PCR技术在饮用水中的应用也面临着一些挑战,如样品预处理的复杂性、环境因素对PCR反应的影响等。
如何解决这些挑战,进一步完善和优化PCR技术在饮用水中的应用,是当前研究中亟待解决的问题。
随着分子生物学技术的不断进步和发展,PCR技术在饮用水中致病性微生物检测领域也得到了广泛的应用和发展。
未来,基于PCR技术的饮用水中致病性微生物检测将朝着以下几个方向发展:1. 多重PCR技术的应用:将多重PCR技术与不同的微生物标记物结合,实现对多种致病性微生物的同时检测,进一步提高检测的效率和准确性。
2. 自动化检测平台的开发:结合微流控技术和自动化仪器,开发高通量的饮用水中致病性微生物检测平台,实现对大规模样品的快速检测和分析。
3. 环境样品中致病性微生物检测的研究:对于环境中的水样、土壤样品等,开发适用于复杂环境样品的PCR技术,实现对致病性微生物的快速检测和鉴定。
PCR技术在饮用水中致病性微生物检测技术的研究中取得了显著的进展,不断出现新的技术和方法,为保障饮用水安全提供了强有力的技术支持。
微生物在水质监测与处理中的应用探索水是生命之源,对人类的生活和工业生产具有重要意义。
然而,水污染问题日益严重,给人类的健康和环境带来了巨大的威胁。
在水质监测与处理中,微生物的应用得到了广泛的探索和应用。
本文将探讨微生物在水质监测与处理中的应用情况,并讨论其优势和挑战。
一、微生物在水质监测中的应用微生物在水质监测中发挥着至关重要的作用。
首先,微生物可以作为指示生物指示水体的污染程度。
比如,一些微生物对特定的水污染物具有高度敏感性,它们的存在和数量可以提供测定水质的重要信息。
另外,一些微生物在特定的环境中生存和繁殖,可以用来推断水体中的环境条件,从而了解水质的情况。
通过分析水体中微生物的种类和数量,可以准确地评估水质的好坏。
其次,微生物在水质监测中还可以通过分子生物学技术进行快速检测。
传统的水质监测方法通常需要进行培养和筛查,耗时且结果受到污染物种类的限制。
而利用微生物DNA或RNA的分子特征,可以通过聚合酶链反应(PCR)等技术快速检测水体中是否存在特定微生物,从而大大提高水质监测的速度和精确度。
二、微生物在水质处理中的应用除了在水质监测中的应用,微生物在水质处理中也发挥着重要作用。
首先,微生物可以用于废水处理。
传统的废水处理方法主要依靠物理和化学过程,但往往效果不显著且操作复杂。
而利用微生物可以有效地降解有机污染物,例如利用厌氧菌和好氧菌协同作用可以将有机废水中的有机物转化为无机物,从而使废水得到处理。
此外,微生物还可以利用光合作用来吸收和降解水体中的氮和磷等无机污染物。
其次,微生物在饮用水处理中也具有重要的应用价值。
水源地往往存在着各种细菌、病毒和寄生虫等微生物污染物,对人类的健康构成潜在威胁。
利用微生物可以采用生物膜过滤、微生物颗粒和消化槽等技术,有效去除水体中悬浮物和微生物污染物,保障饮用水的安全性。
三、微生物在水质监测与处理中的优势和挑战微生物在水质监测与处理中的应用具有一些优势,但也存在一些挑战。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展随着人类社会的发展和人口的增加,饮用水质量问题成为全球范围内的重要问题。
饮用水中存在着许多致病性微生物,如钩端螺旋体、沙门氏菌、霍乱弧菌等,这些微生物会引起各种各样的疾病,严重影响人类的健康。
因此,快速、准确、灵敏、可靠的饮用水中致病性微生物的检测技术显得尤为重要。
PCR技术(聚合酶链反应)是一种快速、灵敏、特异性强的检测技术,在饮用水中致病性微生物的检测和监测方面有着重要的应用价值。
本文将重点介绍饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术的研究进展。
1、钩端螺旋体PCR检测技术钩端螺旋体是引发莱姆病的致病性微生物,在饮用水中也可能会出现。
罗氏公司开发了一种快速可靠的PCR检测方法——cobas TaqScreen PCR钩端螺旋体试剂盒,该试剂盒已被荷兰和加拿大的医药监管机构认可,并已在欧洲和北美得到广泛应用。
2、沙门氏菌PCR检测技术沙门氏菌是一种常见的食源性疾病致病菌,在饮用水中也可能会出现。
目前已研发出多种沙门氏菌的PCR检测技术,如SYBR Green I荧光PCR检测和FLAP PCR检测技术等。
霍乱弧菌是引发霍乱疾病的致病菌,与钩端螺旋体和沙门氏菌一样,属于水生致病性微生物。
目前已研发出多种霍乱弧菌的PCR检测技术,如实时荧光PCR技术、Aerosolized Microdroplet PCR技术等。
二、PCR技术在饮用水检测中的优点1、灵敏度高:PCR技术在分子水平上进行检测,具有非常高的灵敏度,能够检测出极少量的微生物。
2、特异性强:由于PCR技术是一种特异性非常强的检测方法,能够清晰地区分出目标微生物。
3、快速:PCR技术可以在几分钟甚至几秒钟内完成目标微生物的检测,比传统方法(如培养法)快得多。
4、自动化:PCR仪器能够进行高通量自动化样本处理,可以同时检测多个样本,大大提高了检测效率。
随着PCR技术的不断进步和完善,饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术将在未来得到更广泛的应用。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展饮用水是人们日常生活中必不可少的资源,其质量对人体健康具有重要影响。
饮用水中常常存在着各种致病性微生物,如大肠杆菌、霍乱弧菌、腺病毒等,可能对人体造成严重的健康危害。
快速准确地检测饮用水中的致病性微生物具有重要的现实意义。
PCR(聚合酶链反应)技术是一种敏感、特异、快速的核酸检测方法,在饮用水中致病性微生物的检测中得到了广泛应用。
PCR技术基于DNA的扩增原理,通过引物与目标DNA 特异性结合,通过酶的作用,在特定温度下进行酶解、扩增。
PCR技术不仅可以对微生物进行定性检测,还可以通过扩增产物的数量来进行定量分析。
近年来,在饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术方面取得了一系列的研究进展。
基于PCR技术的多重引物扩增技术的应用,能够同时检测多个微生物的存在。
研究人员通过设计多个引物对不同的微生物进行扩增,从而实现对水质中多种致病菌的快速检测。
PCR技术的高灵敏度和特异性为饮用水中微生物的检测提供了可靠的手段。
传统的微生物检测方法需要进行细菌培养,并且耗时较长。
而PCR技术能够通过直接扩增微生物的DNA片段,无需进行培养,大大缩短了检测时间。
PCR技术的高灵敏度能够检测到非常低浓度的微生物,从而有效避免了假阴性结果。
PCR技术结合了其他技术,如实时荧光PCR和微流体芯片技术,进一步提高了饮用水中致病性微生物的检测效率和准确性。
实时荧光PCR能够实时监测PCR扩增过程中的产物形成情况,从而判断是否存在目标微生物。
微流体芯片技术能够将PCR扩增和检测过程集成在一个微型芯片中,大大提高了样品处理的效率。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术具有广阔的应用前景。
通过不断的研究和创新,相信该技术在饮用水质量监测中将发挥越来越重要的作用,为人们提供更安全、更健康的饮用水资源。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展饮用水中致病性微生物是公共卫生和水资源管理的重要问题。
传统的饮用水微生物分析方法需要分离和培养目标微生物,需要较长的时间和复杂的实验流程。
PCR快速检测技术可以在短时间内检测和鉴定微生物,因此在饮用水微生物分析中得到了广泛应用。
本文综述了饮用水中常见的细菌、病毒和寄生虫的PCR检测方法及其优缺点,为饮用水微生物检测提供参考。
1. 大肠杆菌大肠杆菌是评价饮用水中肠道污染的重要指标微生物。
PCR方法最早用于大肠杆菌的检测是利用16S或23S rRNA基因进行的。
由于PCR检测基因序列的特异性和灵敏性好,从而产生了嵌合PCR和荧光PCR等PCR技术的新型检测方法。
荧光PCR可以在短时间内检测到大肠杆菌和耐热大肠杆菌。
但是,大肠杆菌可以自然存在于水环境中,因此PCR检测结果需要进一步确认。
2. 肝炎病毒肝炎病毒是严重的传染病,在许多国家成为主要公共卫生问题。
PCR技术可用于检测肝炎病毒RNA,特别是HCV。
PCR方法通常采用RT-PCR并与荧光增强检测结合,从而实现快速、敏感和特异的检测。
但是,PCR方法检测到的肝炎病毒RNA可能不具有感染性,并且在RNA的分解和损伤下容易出现假阴性结果。
3. 诺如病毒诺如病毒是一类肠道病毒,常常通过污染的水和食品传播。
PCR技术可以用于检测诺如病毒,特别是对于难以分离和培养的病毒。
RT-PCR技术已广泛用于诊断和监测诺如病毒感染。
但是,诺如病毒有多个亚型,因此PCR方法需要特异性好,并且需要与其他病毒亚型区分开。
4. 弓形虫弓形虫是引起弓形虫病的一种寄生虫,在许多国家被认为是食品、水和环境守门员的重要来源。
PCR技术可以用于检测弓形虫的DNA,成为一种快速和灵敏的检测方法。
但是,PCR方法的优点在于实验条件严谨和环境污染免疫的前提下才能充分发挥。
总之,PCR技术在饮用水中致病性微生物快速检测方面有着巨大的潜力。
PCR方法的优点包括快速、高灵敏度和高特异性。
微生物在环境监测中的应用与研究进展在我们生活的这个地球上,环境的变化时刻影响着人类的生存和发展。
为了更好地了解和保护我们的环境,科学家们不断探索各种监测手段,其中微生物作为大自然中微小而神奇的存在,在环境监测领域发挥着越来越重要的作用。
微生物之所以能够在环境监测中大展身手,主要得益于它们对环境变化的高度敏感性和特异性。
不同的微生物种类在不同的环境条件下会有不同的生长、代谢和繁殖情况。
通过对这些变化的观察和分析,我们就能获取有关环境质量的重要信息。
在水污染监测方面,微生物可谓是“先锋战士”。
比如,大肠菌群是指示水体受粪便污染的重要微生物指标。
如果在水样中检测出大量的大肠菌群,那就意味着水体可能存在病原菌污染的风险,对人类健康构成威胁。
此外,通过监测水中藻类的种类和数量变化,也能反映水体的富营养化程度。
当水中营养物质过多时,某些藻类会迅速繁殖,形成水华,不仅影响水质,还可能破坏水生态平衡。
在大气污染监测中,微生物同样也能发挥作用。
一些微生物对特定的大气污染物具有敏感性。
例如,某些真菌在二氧化硫浓度较高的环境中生长会受到抑制。
通过研究这些微生物的生长状况,我们可以间接了解大气中污染物的浓度和分布情况。
土壤中的微生物也是环境监测的重要“情报员”。
土壤微生物的群落结构和多样性会随着土壤污染程度的变化而改变。
比如,重金属污染会导致一些敏感微生物的数量减少,而耐重金属的微生物则可能相对增多。
通过分析土壤微生物的组成和功能变化,我们能够评估土壤的健康状况和污染程度。
微生物在环境监测中的应用方法多种多样。
传统的培养方法虽然操作相对简单,但存在一定的局限性,只能检测到可培养的微生物,而大量不可培养的微生物则容易被忽略。
随着分子生物学技术的飞速发展,基于DNA 和RNA 的检测方法为微生物环境监测打开了新的大门。
聚合酶链式反应(PCR)技术能够特异性地扩增微生物的基因片段,从而实现对目标微生物的快速检测。
荧光原位杂交(FISH)技术则可以在细胞水平上直观地观察微生物的分布和数量。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展饮用水是人类生活中必不可少的资源之一,但由于水源污染和传染病的传播,饮用水中可能存在各种致病性微生物,如细菌、病毒和寄生虫等。
这些致病性微生物对人体健康造成威胁,及时准确地检测饮用水中的致病性微生物是非常重要的。
传统的微生物检测方法需要进行培养和分离,耗时且结果可能受环境因素的影响。
开发一种快速准确的饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术具有重要的研究价值。
PCR(聚合酶链反应)技术是一种在体外扩增DNA片段的方法,该技术具有高度灵敏度和特异性。
目前,PCR技术已被广泛用于饮用水中致病性微生物的检测。
下面将介绍PCR技术在饮用水中细菌、病毒和寄生虫等致病性微生物检测中的应用研究进展。
在饮用水中细菌PCR检测研究中,研究人员常利用特异性引物对细菌的特定基因进行扩增和检测。
Gram阴性菌的通用引物16s rRNA引物对多种Gram阴性菌进行扩增和检测。
研究者还利用病原细菌的特异基因进行检测,如沙门氏菌的invA基因和霍乱弧菌的ctxA基因等。
还有一些病原菌的检测方法已经商业化,如大肠杆菌、耐热大肠杆菌和肠炎弯曲杆菌等。
在饮用水中病毒PCR检测研究中,研究人员主要利用病毒的特定基因进行扩增和检测。
常用的方法包括利用病毒的核酸酶基因进行检测,如诺如病毒的RNA酶H基因和腺病毒的DNA聚合酶基因等。
一些常见的病毒,如诺如病毒、腺病毒和肠道病毒等,已经有商业化产品可供选择。
在饮用水中寄生虫PCR检测研究中,研究人员主要利用寄生虫的特定基因进行扩增和检测。
利用弓形虫的B1基因进行扩增和检测,有助于判断饮用水中是否存在弓形虫感染风险。
类似地,利用血吸虫的内转录间隔区ITS2基因进行扩增和检测,有助于判断饮用水中是否存在血吸虫感染风险。
一些寄生虫的检测方法也已经商业化,如黑线虫、鞭毛虫和滴虫等。
PCR技术在饮用水中致病性微生物的快速检测中具有很高的应用潜力。
目前这一技术仍然面临一些挑战,如PCR引物的设计和优化、样品前处理的复杂性和PCR抑制物的影响等。
环境微生物学技术在水质监测中的应用研究一、引言水是生命之源,是人类生存所必需的资源之一,而随着人口数量的增长和工业化的发展,水资源的污染和短缺已经成为全球性问题。
因此,水质监测成为了保护人类健康和环境的重要措施。
传统的水质监测方法主要依靠化学分析,但是这些方法存在着昂贵、繁琐、时间耗费长等缺点。
而环境微生物学技术的出现为水质监测带来了新的解决方案。
二、环境微生物学技术的基本原理环境微生物学技术主要是指利用微生物生长特性和代谢产物来监测水体中的污染物。
微生物是一种非常敏感的生物指示器,可以快速反应污染物的变化。
这种技术可通过现场测水和实验室分析两种方法进行。
现场测水的主要方法是利用微生物生长对显微镜下细菌形态及数量的变化来读取污染物的浓度和种类。
实验室分析的主要方法是利用微生物鉴别技术,通过筛选出特定的菌株来检测特定的污染物。
三、环境微生物学技术在水质监测中的应用1.有机物检测有机物是水体中常见的污染物,环境微生物学技术可以通过检测微生物在有机物存在下的生长情况、特定微生物对有机物的分解等方式来确定有机物的浓度和种类。
2. 铜、锌检测铜、锌是水中常见的重金属元素,这些元素对人类健康和环境都有不良的影响。
通过利用某些特定细菌对铜、锌等重金属元素敏感的生长特性和代谢产物,可以快速检测水中重金属的含量和种类。
3. 氮、磷检测氮、磷是水中营养物质的重要组成部分,但其含量过高会引起海藻、水屑、细菌等的繁殖,进而导致水体中生态系统的破坏。
环境微生物学技术可以通过检测水域中有机物质分解的速率及对氮、磷的摄取量等方式来测定水域中氮、磷含量。
四、环境微生物学技术在水质监测中的优势1. 减少化学试剂的使用传统的水质检测方法需要大量的化学试剂,而大量使用化学试剂会对环境造成负面影响,而环境微生物学技术将化学试剂的使用降到了最低。
2. 试验量减小由于环境微生物学检测方法不需要进行大量的繁琐试验,所以其试验量减少,能够减少实验室的工作量。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展饮用水中致病性微生物是指能够引起人体疾病的微生物,包括细菌、病毒和寄生虫等。
它们存在于水体中,如果饮用水中存在这些致病性微生物,会对人体健康造成严重威胁。
对饮用水中致病性微生物的快速检测技术的研究具有重要的意义。
PCR(聚合酶链反应)是一种在实验室中扩增DNA片段的方法,可以快速、特异地检测目标微生物。
在饮用水中致病性微生物的PCR快速检测技术研究中,主要包括以下几个方面的进展。
PCR技术的引入使得饮用水中致病性微生物的检测更加快速和高效。
传统的微生物培养方法需要耗费很长时间,而PCR技术可以在几小时内完成检测,提高了检测的速度。
PCR 技术可以同时检测多种细菌、病毒和寄生虫,具有较高的特异性和敏感性。
PCR技术的改进提高了饮用水中致病性微生物的检测的准确性。
随着PCR技术的不断改进,引入了新的基因探针和引物设计策略,可以更准确地区分不同的致病性微生物。
PCR技术还可以与其他检测技术结合使用,如脱落试验、高通量测序和流式细胞术等,进一步提高检测的准确性。
PCR技术在饮用水中致病性微生物的监测和预警中起到了重要的作用。
通过定期对饮用水中的微生物进行PCR检测,可以及时发现并处理潜在的危害物质,保障饮用水的安全。
在突发事件和灾难中,PCR技术可以进行快速检测,预警并采取相应措施,减少对人体的伤害。
PCR技术还在饮用水中致病性微生物的病因学研究中得到了广泛应用。
通过分析饮用水中致病性微生物的DNA序列,可以揭示不同病原微生物的种类、分布和传播方式等信息,为疾病的预防和控制提供科学依据。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术的研究进展为饮用水安全提供了可靠的检测手段。
随着PCR技术的不断改进和应用,相信在未来会有更多的突破和进展,为饮用水的安全保障提供更多的支持。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展饮用水中微生物污染是一种严重的环境问题,可能导致多种疾病的发生和传播。
传统的微生物检测方法需要培养和分离样本中的微生物,耗时且操作繁琐,检测效果受样本环境和处理方法等多种因素影响。
PCR技术是一种常用的无需培养微生物即可快速检测其DNA 序列的方法,已经在饮用水中致病性微生物的检测中得到广泛应用。
本文将从PCR技术的优势、PCR饮用水微生物检测的几种主要方法和近年来的技术研究进展等方面进行综述。
一、PCR技术的优势PCR技术是一种快速、敏感和特异性很高的微生物检测方法,具有以下优势:①样品处理简便,可以直接从水样中提取DNA进行检测;②检测灵敏度高,可以检测到极低浓度的微生物;③检测特异性高,可以鉴定靶标微生物所含的特异DNA序列,避免错检或漏检的情况;④检测速度快,不需要等待微生物培养,可在几小时内得到检测结果;⑤检测过程可以自动化、标准化,减少人为误差和操作难度。
二、PCR饮用水微生物检测的几种主要方法1. 基于紫外线照射的PCR检测方法此方法将饮用水样进样到一个微小的PCR管中,通过定量紫外线照射快速杀死微生物,然后提取DNA进行PCR扩增。
由于PCR检测前的紫外线照射可以有效杀死在水样中的大多数生物体,可以抑制PCR反应前的污染和背景音。
然而,此方法要求饮用水中的微生物浓度较低以获得更好的检测结果。
此方法先将饮用水样通过0.2微米的滤膜过滤,过滤后的膜上附着的微生物与膜一起处理,直接从膜上提取DNA进行PCR扩增。
这种方法不仅可以减少水样处理中的背景干扰,而且检测结果更加真实和准确。
同时,膜过滤后的膜可以保存供后期定量、定性分析、识别和鉴定使用。
该方法使用一些高通量微生物芯片收集饮用水样品,选择性地捕获靶标微生物DNA,并在芯片上进行高通量PCR扩增和鉴定,以实现饮用水样中靶标微生物的快速检测,为饮用水中微生物污染进行细化检测提供了新思路和平台。
几种水质指示微生物检测方法的研究进展
发表时间:2016-02-01T16:26:25.957Z 来源:《健康世界》2015年11期供稿作者:孙菊华帕提古丽.要力大西[导读] 新疆阿图什市疾病预防控制中心本文就大肠杆菌。
产气荚膜梭菌及脊髓灰质炎病毒的检测方法、进展及前景做了综述
新疆阿图什市疾病预防控制中心 845350
摘要:检测水中指示微生物是估计污染状况的重要途径,本文就大肠杆菌。
产气荚膜梭菌及脊髓灰质炎病毒的检测方法、进展及前景做了综述
关键词:大肠杆菌;产气荚膜梭菌;脊髓灰质炎病毒;检测方法
水中致病微生物种类繁多,现在还不能用单一方法来分离和鉴定水中微生物,也没有课从饮用水中定量分离出数量很少病原体的有效方法,所以,通常以水中指示微生物代替致病微生物进行检测,从而估计污染状况,已提出的指示微生物包括大肠杆菌,细菌总数,产气荚膜梭菌、大肠杆菌噬菌体及枯草芽孢黑色变种、脊髓灰质炎病毒,其中大肠杆菌一直被作为常规水质细菌学指标;产气荚膜梭菌为厌氧菌,用做指示菌有其独特之处;脊髓灰质炎病毒近年来微生物被提出有可能成为水病毒的较好指标,故本文选择这三种指示微生物,对他们的检测方法及其优缺点和进展进行综述。
1.大肠菌群
大肠菌群作为粪便污染及评价消毒效果的指标已有80余年的历史,目前各国水质卫生标准将其作为水细菌群的常规检测方法比较普及1.1 经典方法
1.1.1 多管发酵法将适量水样接种于一系列有培养基的试管中进行培养,根据产生阳性反应的试管数量来估计原始水样中菌的最大可能数(MPN),其中培养基主要有:矿质改良的谷氨酸盐培养基(MMGM),麦康凯氏胆盐肉汤。
此法可用于各种类型的水,特别是浊度较高的水,而且所需设备价廉、简便,阳性结果易于辨认;又受固有误差的限制,在确定阳性结果之前还要做确证试验,故费事(约72h)、费力。
1.1.2 滤膜过滤法 100ml水样通过滤膜过滤后,将滤膜置于选择性培养基表面进行培养,然后计数并鉴定滤膜上的菌落。
其中选择性培养基主要有:伊红美蓝琼脂、品红亚硫酸钠琼脂,此法能迅速的获得结果(48h)手续简便,尤其在检查大量水样时可现场过滤,将滤膜放于培养基上带回实验室,不仅可避免携带水样等繁琐手续,而且缩短时间;但此法不能分辨发酵乳糖的细菌是否产气,其次如果非大肠菌群生长过多,则会干扰大肠菌群生长,此外它不适用于混浊度高的水。
2.产气荚膜梭菌
产气荚膜梭菌属于梭状芽孢杆菌属,为革兰氏阳性短粗杆菌,专性厌氧,有荚膜,芽孢椭圆形,一般位于次极端,但很少见,由于产气荚膜梭菌的特性,作为水质污染微生物,但产气荚膜梭菌的检测方法得以解决。
2.1 经典方法
2.1.1 MPN 法将适量水样接种于一系列有培养基(增菌性梭状芽孢杆菌培养基)的试管中进行厌氧培养48h,根据产生阳性反应(培养管变黑)的试管数量来估算原始水样中的MPN此法可用于各种类型的水;但仅能提供水样中含菌量的估计值,易受固有误差限制,在确定阳性结果前还需做确证实验故费(约72h)费力。
2.1.2 倾注法将0.5ml水样接种于有选择性培养基的培养皿中,干燥倾注上层选择培养基,凝固后进行厌氧培养24h,然后计数并鉴定培养基上生长的菌落,选择性培养基主要有:SFP培养基,TSC培养基等,此法能较迅速地获得结果,较简单,尤其在大量水样检查时可现场完成,从而避免携带水样等繁琐手续,但不适于浑浊度较高的水。
2.2 其他方法
2.2.1 免疫学方法 Bartholomew[8]用ELISA方法检测产气荚膜梭菌,以兔抗体产气荚膜梭菌外毒素(CPE)血清与产气荚膜梭菌反应,结果表明该法较敏感(检出5ng/g)特异性强,而且仅需24h;但需要专业人员和特殊设备。
Berry[9]提出用反相被动乳胶凝集试验(LAT)检测产气荚膜梭菌,试验结果发现LAT与ELIAS敏感性和特异性相似,却省时。
无需特殊设备。
但需孵育过夜。
以后又有学者[10]报道用竞争性红细胞免疫法(ELIAS)法更敏感,(检出2ug/L),且方法为用免疫学检测环境水中产气荚膜梭菌提供条件。
2.2.2 分子生物学方法有报道[11]用合成的DNA探针检测肠毒性产气荚膜梭菌;Fach 和Guillon[12]用PCR法扩增产气荚膜梭菌的α-外毒素基因,凝胶电泳进行检测,发现PCR法特异性,敏感(检出250fg/g)快速(约4h);产气荚膜梭菌外毒素基因已被克隆,核酸测序表达于E.coli中,这分子生物方法为水中产气荚膜梭菌的检测开辟了新途径,使敏感.特异、快速地检测中产气荚膜梭菌为可能。
脊髓水质炎病毒呈园颗粒,核心为单分子正链RNA,病毒RNA蛋白衣壳所包围,无囊膜,蛋白衣壳由60非共价键连接的衣壳子粒组成,构成一个方对称的20面体,PV在天然水中存在相对比较普遍[13]抵抗力较其它肠道病毒强。
被提出可能作为水病毒污染的指示微生物,检测水中PV前一般要经过水样的浓缩,浓缩方法常用的有微孔滤膜吸附洗脱法,氢化铝吸附沉淀和聚乙二醇脱水透析法,它的检测方法主要有以下几种。
2.1 蚀斑试验法
繁殖20-40瓶Hep-2或RD细胞,将瓶中的液体吸出,加浓缩后的病毒悬液于每瓶细胞面上,并使其均匀分布,放置1-2h,然后倒置于35°C培养一周,观察蚀斑形成,进行计数,此法相对简单易做,可以定量,但耗费力,不经济。
检测水中指标微生物方法很多,一般分为经典方法。
免疫学方法、分子生物学方法三类;经典方法历史悠久,比较熟悉且克精确计数,但费时费力;免疫学方法和分子生物学方法发展迅速,逐步应用,这两种方法都能缩短检测时间,但不能准确计数,分子生物学方法更敏感、特异、简便、随着新技术的不断发展,将会为水中指示微生物提供更迅速可靠的检测手段,从而更有效地确定污染状况。
以保证水质卫生安全。
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