组培
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组培成功必备的几大要素组织培养(tissue culture)是一种在实验室或生物技术设施中,通过控制环境条件来培养植物组织或细胞的技术。
以下是组织培养成功必备的几大要素:1.无菌环境:无菌环境是组织培养成功的首要条件。
所有用于组织培养的材料,包括外植体、培养基、接种工具等,都必须进行严格的消毒处理,以防止细菌、真菌等微生物的污染。
实验室应配备超净工作台、紫外灯、高压蒸汽灭菌器等设备,确保无菌操作。
2.合适的培养基:植物组织培养的成功与否,很大程度上取决于所使用的培养基。
培养基应含有植物生长所需的营养成分,如糖、氨基酸、微量元素、维生素等,以及适量的植物生长调节剂,如生长素和细胞分裂素。
根据不同的植物种类和培养目的,可以选择不同的培养基。
3.适宜的温度和光照:在组织培养过程中,温度和光照也是影响成功的关键因素。
每种植物都有其最适的生长温度和光照条件。
一般来说,大多数植物在25-30℃的温度下和16-24小时的光照条件下生长良好。
4.外植体选择与处理:选择健康、无病虫害的植物材料作为外植体,并对材料进行适当的预处理,如清洗、消毒等,是组织培养成功的关键步骤。
此外,选择适合的外植体类型也对培养成功至关重要。
5.接种技术:接种是将外植体接入培养基的过程。
熟练的接种技术能够减少对植物组织的损伤,避免污染,并提高组织的存活率。
6.细胞分裂与增殖:在适宜的培养条件下,植物细胞会分裂并增殖形成愈伤组织。
这个过程需要定期观察和记录细胞的生长情况,及时调整培养条件以促进细胞的分裂和增殖。
7.生根与移植:当愈伤组织形成后,可以将其转移到生根培养基中,促使组织产生根系。
当根系形成后,可以将其移植到土壤中或进行其他后续实验。
8.遗传稳定性:为了确保组织培养后得到的植株是纯合的,并保持其遗传稳定性,需要采用适当的遗传检测方法。
这可以通过分子生物学方法,如DNA 指纹分析或基因表达分析来实现。
9.法规与伦理:在进行组织培养实验时,必须遵守相关的法规和伦理准则。
组培专业技术工作总结组织培养(组培)是一种重要的细胞生物学技术,它在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用。
在过去的一年中,我有幸参与了组培专业技术工作,并在这个过程中积累了一些经验和感悟。
在这篇文章中,我将对组培专业技术工作进行总结,并分享一些我所学到的知识和技能。
首先,组培技术工作需要具备一定的实验操作技能。
在进行细胞培养的过程中,需要严格控制培养条件,包括温度、湿度、CO2浓度等。
此外,对于不同类型的细胞,还需要采用不同的培养基和培养条件,以保证细胞的正常生长和增殖。
在我的工作中,我通过反复的练习和实践,逐渐掌握了正确的细胞培养操作技巧,提高了实验的成功率。
其次,组培技术工作需要具备良好的数据分析能力。
在进行细胞培养实验后,我们需要对实验结果进行准确的记录和分析,以便进一步的研究和应用。
在我的工作中,我学会了如何准确地记录实验数据,并通过统计学方法对数据进行分析和解读。
这些数据分析能力不仅帮助我更好地理解实验结果,也为我今后的研究工作打下了良好的基础。
最后,组培技术工作需要具备团队合作精神。
在实验室中,很少有一个人能够完成所有的工作,通常需要与其他同事共同合作。
在我的工作中,我学会了与他人良好地沟通和协作,共同解决实验中遇到的问题。
团队合作不仅提高了工作效率,也增强了我与同事之间的友谊和信任。
总的来说,组培专业技术工作需要具备实验操作技能、数据分析能力和团队合作精神。
通过一年的工作经验,我深刻体会到了这些技能的重要性,并在实践中不断地提高和完善自己。
我相信,在今后的工作中,我会继续努力学习和提高自己,为组培技术工作做出更大的贡献。
组培培训计划一、培训目标通过本次培训,参训人员将掌握组培技能和知识,提高工作效率和能力,为企业发展和个人职业发展提供支持和保障。
二、培训内容1. 组培概述2. 组培的作用和意义3. 组培的操作流程4. 组培的注意事项5. 组培的常见问题及解决方法6. 组培的案例分析三、培训方式1. 理论讲解:由专业的讲师进行理论讲解,讲解组培的概念、原理、流程等2. 案例分析:结合实际案例进行分析,帮助参训人员更好地理解组培操作3. 实操演练:安排实际操作环节,让参训人员亲自动手操作,提高实操能力4. 互动讨论:开展讨论环节,促进参训人员之间的交流和学习5. 模拟考核:安排模拟考核环节,检验参训人员的学习效果四、培训时间本次组培培训计划为期3天,每天8小时,具体安排如下:第一天:组培概述、组培的作用和意义第二天:组培的操作流程、注意事项第三天:组培的常见问题及解决方法、案例分析、模拟考核五、培训地点培训地点为公司内部培训室,提供相应的设备和工具以支持培训的顺利进行。
六、培训师资本次培训由公司内部培训师和外部专业讲师共同组成,内外结合,互相补充,确保培训效果。
七、培训对象本次培训对象为公司所有相关岗位的员工,特别是那些需要经常进行组培操作的员工,如实验室技术人员、生物科研人员等。
八、培训计划1. 第一天:上午:组培概述、组培的作用和意义下午:案例分析、互动讨论2. 第二天:上午:组培的操作流程、注意事项下午:实操演练、模拟考核3. 第三天:上午:组培的常见问题及解决方法下午:案例分析、模拟考核、培训总结九、培训效果评估1. 培训前评估:通过问卷调查等方式,了解参训人员在组培方面的基础知识和技能水平,为培训内容的制定提供依据2. 培训中评估:定期进行培训效果评估,收集参训人员的学习情况和意见建议,调整培训方式和内容3. 培训后评估:通过考核和问卷调查等方式,检测参训人员在组培方面的学习成果和能力提升程度,为下一步培训提供参考十、培训后跟踪培训结束后,通过定期跟踪调查、实际操作检查和绩效评估等方式,持续关注参训人员在组培方面的学习和应用情况,及时发现问题并提出改进方案,确保培训效果的持续稳定。
1.连接复合体:在四种细胞联系方式(紧密连接、中间连接、桥粒、缝隙连接)中,有两个或两个以上同时存在,称连接复合体。
2.哈夫斯系统:骨单位是内外环骨板之间的纵行圆筒状结构,由多层同心圆排列的哈夫斯骨板围绕中央管而成,又称哈夫斯系统,中央管内有血管、神经纤维和结缔组织。
数量多,是长骨干的基本结构单位。
★3.同源细胞群:在软骨周边部分有幼稚软骨细胞分布。
越靠近软骨中央,细胞越成熟,体积逐渐增大,而且多为2~8个聚集在一起,它们由一个软骨细胞分裂而来,故称同源细胞群。
4.血象:也叫血液细胞学检查,是检查血细胞形态、数量、比例与血红蛋白等变化。
5.核左移:当机体受细菌严重感染时,大量中性粒细胞从骨髓进入血液,杆状核与2叶核的细胞增多,称为核左移。
★6.肌节:是相邻两条Z线之间的一段肌原纤维,由粗肌丝和细肌丝组成,每个肌节由1∕2I带﹢A带﹢1∕2I带三部分构成,肌节是肌纤维结构和功能的基本单位。
★7.闺盘:是心肌纤维间的连接结构。
光镜下,闺盘呈直线形或阶梯状,着色较深。
电镜下,形成闺盘处的心肌纤维的肌膜密切接触,并形成细胞连接,在横向部位是中间连接和桥粒,使心肌细胞连接牢固,纵向部位是缝隙连接,可以在心肌纤维间传递信息。
8.运动终板:躯体运动神经末梢为分布于骨骼肌内的运动神经末梢。
★9.血-脑屏障:是中枢神经系统中血液与脑实质之间的屏障结构。
该屏障结构主要由脑毛细血管的内皮细胞、血管基膜和星形角质细胞突起末端扩大的脚板共同构成。
10.W-P小体:是血管内皮细胞特有的一种杆状细胞器,有膜包囊,内含若干平行细管,与vWF因子的贮存有关。
11.单核吞噬细胞系统:单核细胞和由其分化而来的具有吞噬功能的细胞称为单核吞噬细胞系统,包括单核细胞、疏松结缔组织和淋巴组织中的巨噬细胞,骨组织中的破骨细胞,神经组织中的小胶质细胞,肝巨噬细胞,肺巨噬细胞等。
★12.血-胸腺屏障:胸腺皮质的毛细血管与周围的胸腺组织之间形成的一独特的屏障结构。
组培的概念组培是一种生物技术,其目的是将细胞或组织在体外培养并组合起来,以形成三维的结构。
这种技术旨在模拟生体环境,提供细胞发育和生长所需的物理和化学环境,并增强细胞结构和功能。
组培技术广泛应用于生物医学研究和药物测试,以及组织工程等领域。
组培的主要目标是在精细控制的条件下构建三维的生物体系,这将更好的模拟生体环境,并为细胞发育和生长提供必要的物理和化学环境。
组培的临床应用范围也非常广泛,从某种程度上可以说组织工程领域的策略一定程度上应用了组织培养技巧的基础。
组织工程是一种利用组培技术重构或制造人体组织的新颖技术。
组织工程需要先将细胞或细胞重构结构培养在体外,之后将这些结构移植到一个接受体中。
这样的技术可以用于修复和治疗多种组织的损伤或缺陷,并被广泛地应用于移植和康复领域。
例如,组培技术可用于重建神经、骨骼、肌肉和心脏等组织。
组培受到许多因素的影响,包括细胞的类型、种类和来源,培养基成分和配方、培养时间、培养温度、培养条件、培养器具和培养介质、pH 值和氧气等。
由于这些因素的影响,组培技术着重实验条件的严格控制,以保证细胞生长和发育的最佳情况。
组培所用到的细胞可以分为两类:原代细胞和细胞系。
原代细胞指从酒精消毒或酶溶解的较新鲜组织中分离出的细胞,这些细胞在培养基中只可以存活三到四天。
细胞系是在实验室中长期生长下来的细胞,可在培养基中不断地传代生长。
大部分的细胞系是由人类或动物组织中的癌细胞分离出来的,它们在稳定的实验条件下,长期生长和复制。
组培技术在生物医学研究方面也有重要应用。
例如,它被用于开发和测试新的药物的疗效和安全性。
这些药物可以直接加入固体或液体培养基中,检验药物对细胞质结构和代谢活性的影响,从而实现对药物的预测,节省药物研发时间。
这种方法比使用动物模型进行药物测试更加有效和有效梳理,这是在评估药物副作用和疗效方面的一种新的策略。
而且,还有一种常用的组培实验技术就是我较为熟悉的细胞冻存,是指将悬浮或附着生长的细胞在明胶、甘油(或DMEM,培养基)等特殊培养基添加细胞保护剂后,冷冻保存以维持存储状态的一种方法。
组培知识点总结一、组织培养的定义及原理组织培养是一种无菌条件下,通过营养培养基为载体,结合适当条件使细胞或组织在体外生长、分化的生物技术方法。
它是一种通过控制培养条件(包括培养基成分、温度、湿度、光照等)来调控细胞或组织的生长与分化的技术手段。
组织培养的成功依赖于对培养细胞或组织的营养需求和生长特性有所了解,通过提供适宜的培养条件,促进其生长和分化。
二、组织培养的分类根据培养的细胞或组织的来源,组织培养可以分为植物组培和动物组培两大类。
1.植物组培植物组培是指利用植物的组织、细胞等在无菌条件下进行培养,促进其生长、分化和再生的技术。
植物组培可以分为植物器官培养、胚胎培养、愈伤组织培养、植物细胞悬浮培养等多种类型。
2.动物组培动物组培是指对动物体内的细胞或组织在无菌条件下进行培养,促进其生长、增殖和分化,主要包括动物组织培养、动物细胞培养等。
三、组织培养的应用领域由于组织培养技术具有操作简单、时间短、成本低等优点,因此在植物学、生物学、医学等领域得到了广泛的应用。
1.植物组培的应用(1)植物育种。
利用植物组织培养技术,可以实现无性系的繁殖、筛选和改良。
比如,在农业上可以利用植物组培技术进行无性系育种、快速繁殖、病毒、真菌和细菌病害的抗性的筛选。
(2)植物生物技术。
通过植物组培技术,可以实现植物的再生和转基因的导入,以及对植物的基因编辑等,为植物生物技术的研究和应用提供了重要的手段。
2.动物组培的应用(1)生物医学研究。
通过动物组织培养和动物细胞培养技术,可以进行动物细胞的分离、培养和扩增,从而为生物医学研究提供了重要的研究材料,并在体外实验模型中得到了广泛的应用。
(2)生物药物研发。
利用动物细胞培养的技术,可以实现重组蛋白的大规模生产,为生物制药的研发提供了重要的技术支持。
(3)细胞治疗。
利用动物干细胞和其它动物细胞培养技术,可以实现疾病治疗的干细胞移植和细胞治疗等,为医学临床治疗提供了新的思路和手段。
1、组培:用无菌方法是植物体的离体器官、组织和细胞在人为提供的条件下,生长和发育的所有培养技术的总称。
2、细胞全能性:植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质,在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。
3、脱分化:将以分化的不分裂的静止细胞放在培养基上培养后,细胞重新进入分裂状态。
4、再分化:将脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类群,形成完整植株的过程。
5、外植体:由活体植物体上切取下来的,用于组培的各种接种材料。
6、愈伤组织:在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。
7、植物生长调节物质:生长素类,细胞分裂素类,赤霉素,乙烯8、组培植株再生的途径:外植体-(脱分化)-愈伤组织-(再分化-)9、器官发生途径:由外植体或愈伤组织诱导形成不定根或不定芽再获得再生植株的方法10茎尖培养:切取茎的先端部分或茎的分生组织部分进行无菌培养。
11、离体受精:在离体环境中完成被子植物的精、卵结合且利用受精所产生的“离体合子”培养再生植株,做到整个受精与胚胎发育过程完全在离体条件下完成。
12、单倍体植物:用离体培养花药的方法使花粉发育成一个完整的植株。
13、生长素作用:诱导愈伤组织形成,促进外植体脱分化,促进细胞生长,促进生根。
14、细胞分裂素作用:诱导细胞分裂,诱导芽分化,促进侧芽萌发,使茎增粗,抑制茎生长,抑制根分化15、原生质体:去掉细胞壁的由质膜包裹具有生活力的裸露细胞。
16、原生质体融合:从同一个种或不同种分离得到的原生质体在适当的条件下融合得到细胞核物质和细胞质物质的混合。
17、原生质体再生过程:分离,纯化的原生质体在适当的培养方法和培养条件下,恢复细胞壁,再生细胞持续分裂形成细胞团,最后通过愈伤组织或胚状体分化出物质植株的过程。
1、组培的特点:⑴培养条件可人为控制⑵生长周期短,繁殖率高⑶管理方便,利于工厂化生产和自动化控制2、组培的类型:植株,胚胎,器官,细胞,原生质体3、组培应用步骤:⑴获得无菌外植体,建立无菌培养体系⑵进行增殖,不断产生不定芽或胚状体⑶生根培养⑷试管苗移栽。
组培育苗的流程一、准备工作1.1 场地选择咱搞组培育苗啊,首先得找个合适的场地。
这场地呢,得干净整洁,就像咱家里来客人之前要大扫除一样,不能脏兮兮的。
最好是那种专门的实验室或者经过严格消毒处理的空间。
这个空间要能够控制温度、湿度和光照等条件,就像给小幼苗们盖了一个能调节环境的小房子。
1.2 材料准备材料可不能马虎。
首先是植物的外植体,这就好比是咱组培育苗的“种子选手”。
要选择健康、无病虫害的植物组织,像茎尖、叶片或者幼嫩的芽等。
然后就是培养基的配制啦,这培养基就像小幼苗的“营养大餐”。
里面要有各种营养成分,像氮、磷、钾这些基本的营养元素那是必不可少的,还得加上一些植物生长调节剂,就像给小幼苗加了点“助长剂”。
二、接种过程2.1 外植体消毒外植体采回来可不能直接用,得消毒。
这就像是给外植体洗个干干净净的澡。
不过这澡可不好洗,要用合适的消毒剂,像次氯酸钠溶液之类的,按照一定的比例来配。
消毒的时间也要把握好,不能太长也不能太短,太长了外植体可能就被“毒死”了,太短了又消不干净,就像做菜放盐,多了少了都不行。
2.2 接种操作消毒后的外植体要赶快接种到培养基上。
这个过程就像把小宝贝小心翼翼地放到摇篮里一样。
操作人员得在无菌的环境下操作,就像医生做手术一样,一点细菌都不能带进去。
接种的时候动作要轻,要准,把外植体稳稳地放在培养基上,可不能毛毛躁躁的,不然外植体可能就长不好啦。
三、培养阶段3.1 环境调控这小幼苗在培养基里开始生长啦,咱们得给它们创造一个好的环境。
温度要适宜,不同的植物对温度要求不一样,就像人穿衣服,冬天穿棉袄,夏天穿短袖,植物也有自己的“温度喜好”。
湿度也得控制好,不能太干也不能太湿,太干了小幼苗会渴死,太湿了又容易生病,这就叫“过犹不及”。
光照也很关键,有的植物喜欢强光,有的喜欢弱光,得根据植物的习性来调整,就像因材施教一样。
3.2 观察与管理在培养的过程中,咱们得像照顾自己的孩子一样时刻观察着小幼苗的生长情况。
组培注意事项组培(Group Study)是指一组人聚集在一起,共同学习和讨论学习内容的一种学习方式。
组培能够提高学习效率,帮助解决学习中的问题,但在进行组培时需要注意一些事项,以确保组培的效果和顺利进行。
首先,选择合适的组员是组培成功的基础。
组员之间应该有共同的学习目标和学习习惯,具备良好的沟通和合作能力。
组员之间的能力水平相差不要太大,以确保大家在学习过程中能够互相帮助和共同成长。
此外,组员应该有一定的时间安排上的弹性,能够按时参与组培活动,并主动承担起自己的学习任务。
其次,组培的活动应该有明确的目标和规划。
在组培开始之前,组员们应该商定学习内容和学习计划,并确定学习的时间和地点。
在组培过程中,组员们应该遵守学习计划,按时参加组培活动,并积极提出问题和交流想法。
同时,组员们应该相互鼓励和支持,建立积极向上的学习氛围。
此外,组培活动中的互动要有组织和纪律性。
组员们应该尊重彼此的意见和观点,善于倾听和思考。
在讨论问题时,组员们应该遵循一定的规则,轮番发言,不能打断他人,不能批评和攻击他人的观点。
同时,组员们应该尽量专注于讨论的内容,避免分散注意力或胡思乱想。
最后,组培进行过程中需要及时总结和反思。
在每次组培活动结束之后,组员们应该对学习效果进行总结和评估,检查是否达到了预期的学习目标。
同时,组员们应该讨论和反思组培活动中存在的问题和不足,以便于下一次的组培能够更加顺利和有效。
总之,组培是一种有效的学习方式,但在进行组培时需要注意一些事项。
选择合适的组员,制定明确的学习目标和规划,有组织和纪律性的互动,以及及时总结和反思,都是确保组培顺利进行和取得良好效果的关键。
在组培的过程中,组员们应该相互协作,共同进步,为实现自己的学习目标而努力。
一、名词解释1.植物组织培养:指在无菌和人工控制的环境条件下,利用值当的培养基,对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养,使其再生细胞或完整植株的技术。
2.胚胎培养:对植物体的成熟和未成熟胚以及具胚器官进行离体培养的方法。
3.愈伤组织:指外植体因受伤或在离体培养时,其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。
4.植物细胞的全能性:指植物的体细胞在适当条件下,具有不断分裂、繁殖和发育成完整植株的能力。
5.人工种子:指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽,被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中,从而形成能发芽出苗的颗粒体。
6.细胞分化:是指导致细胞形成不同结构,引起功能改变或潜在的发育方式改变的过程。
7.原生质体培养:对分离出的原生质体进行培养,使其分裂分化直至形成完整植株的技术。
8.植物分生组织培养:是指对植物的分生组织进行离体培养的技术,包括植物根尖、茎尖等顶端分生组织和形成层组织的培养。
9.初代培养:10.植物细胞培养:对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞或小细胞团进行培养,形成单细胞无性系或再生植株的技术。
11.外植体:12.脱分化:是指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态,形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程。
13.再分化:离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化,形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官,甚至形成完整植株的过程。
二、简答题1、简述无菌操作的具体步骤?1)实验前20min将超净工作台的紫外灯打开,进行灭菌。
试验时关闭紫外灯,避免人员被紫外线照射。
2)用酒精喷壶或酒精棉将超净工作台消毒,然后实验操作者的手和小臂也用70%酒精消毒。
实验器具用酒精喷壶消毒之后,放入装有95%酒精的广口瓶中。
3)点燃超净工作台上的酒精灯,将广口瓶中的镊子和剪刀等器械取出,在酒精灯上灼烧,放置在灭菌支架上冷却后使用;镊子和剪刀等器械也可以用灭菌器灭菌,由于灭菌器温度为300℃,故器械在灭菌器中灭菌1-2min,然后放在灭菌支架上冷却后使用。
4)需要接转的培养瓶或新培养瓶均应在酒精灯下方处打开瓶盖,且培养瓶的瓶口须在酒精灯上灼烧,然后用冷却的无菌器械将材料切割后,植入新培养基上,快速将瓶盖等封口材料在酒精灯上燎烧,盖上瓶盖等封口材料。
记录材料类型和接种日期,放置培养架上2、简述茎尖作为外植体进行初代培养的培养基配方和培养环境特点?3、简述胚胎培养的应用领域?(一)克服远缘杂交不亲和性远缘杂交中由于胚乳发育不正常或杂种胚与胚乳之间生理上的不协调,造成杂种胚早期夭折。
将早期幼胚进行离体培养进行胚挽救,可克服这种受精后障碍,产生远缘杂种。
,(二)打破种子休眠。
缩短育种周期许多植物的种子发育不完全或有抑制物存在而影响种胚发芽。
通过幼胚培养,可促使这些植物的幼胚达到生理和形态上的成熟而提早萌发形成植株。
(三)提高种子萌发率长期营养繁殖的植物,虽具有形成种子的能力,但其生活力较低,萌发成苗率低下,胚培养可促进这类种子萌发和形成幼苗。
4、简述生长素的种类及其在组培中的主要生理作用?吲哚乙酸、萘乙酸、2,4-氯苯氧乙酸。
作用:植物组织培养中,生长素在诱导愈伤组织形成和生根方面起着重要的作用。
2,4-D在某些植物的组织培养中,还会诱导不定根的形成。
生长素与细胞分裂素的配合使用,对于器官形成和植株再生可以起到调控作用。
高浓度的生长素对芽的形成往往有抑制作用。
5、简述细胞分裂素的种类及其在组培中的主要生理作用?激动素(KT)、玉米素、6-苄基腺嘌呤(TDZ)、2-异戊烯腺嘌呤。
作用:促进细胞分裂,诱导愈伤组织、不定芽、不定胚的产生。
高浓度的细胞分裂素会抑制根的产生。
6、以植物茎尖为外植体,简述外植体灭菌的一般过程?1)材料处理:从田间取回的材料,用自来水冲洗10分钟,洗去泥土等污垢,剪去残伤部分,再用自来水冲洗数次。
剪成小段放入烧杯中。
2)灭菌剂配置:开启超净工作台,用70%酒精彻底消毒。
将次氯酸钠或氯化汞等灭菌剂从冰箱内取出,在超净工作台上配置成所需浓度。
为了使灭菌剂湿润整个组织,还需要在药液中加入数滴表面活性剂。
3)材料灭菌:把经过前处理的材料放入70%酒精中,进行表面消毒。
取出后立即放入次氯酸钠中灭菌。
数分钟后取出,放入无菌水中冲洗3-5次。
然后将材料放入装有湿滤纸的无菌培养基中进行适当切割分离,接入装有培养基的培养瓶中。
操作过程中,镊子、剪子等器具要随时灭菌。
7、简述植物组织培养与田间植株常规繁殖技术相比,具有哪些优越性表现?1)外植体遗传背景一致性高。
再生植株的外植体可以来自细胞、组织、器官等,个体微小,可来源于同一植物体,遗传性状一致性高,试验精度得到提高。
2)经济方便。
外植体培养和繁殖为微型化和精密化,来源广泛,易管理,成本低。
3)培养材料生长条件可控制。
培养材料生长所需的条件,即培养基和环境条件均可处于人人工控制下,植株生长发育所需条件一致性高,试验误差低。
4)生长周期短。
外植体生长处于优化条件下,其生长和繁殖速度快。
5)周年生长且规模化生产。
不受季节影响,可周年进行工厂化大规模生产,保障了产品的质量和数量。
8、简述铁皮石斛(或马铃薯)试管苗的移栽驯化操作技术程序?移栽前,打开瓶盖炼苗2-3天。
当试管苗高约3㎝并有3-4条1㎝左右的新根时,即可进行移栽。
移栽前,洗净组培苗根上的培养基,用0.1%灭菌灵消毒,以防止栽培后的石斛苗根腐烂。
基质可采用经过灭菌处理的蛭石。
移栽后最初几天,要将空气湿度保持在85%-95%,先进行遮阴,遮光率为60%,逐渐增加光照强度。
环境温度控制在18-22℃。
经1-2月的管理,即可定植于由泥炭、碎砖屑以体积3:2所配成的混合基质中。
石斛喜湿润的土壤环境,在管理期间应多喷水。
基质无需追肥。
当小苗完全适应外界环境后,可每隔1-2周在其叶面喷施一次1/4MS培养基作为追肥。
石斛喜温暖,怕低湿,最好将环境温度保持在15-25℃。
9、简述MS培养基的特点?无机盐浓度高,特别是硝酸盐、钾离子和铵离子含量丰富;元素平衡较好,缓冲性能好;微量元素和有机成分含量齐全且较丰富,是目前使用最广泛的培养基。
10、简述茎尖培养的优越性?茎尖生长速度快,繁殖率高,不容易产生遗传变异,而且茎尖培养时获得无病毒苗木的有效途径。
三、论述题1、综合分析产生植物组培室污染的原因,并提出控制污染的措施?a)培养基及各种接种器皿灭菌不彻底b)外植体灭菌不彻底c)操作时认为带入d)环境不清洁e)超净工作区域不清洁f)环境湿度过大措施:a)灭菌前充分排尽灭菌锅内冷空气,当灭菌锅压强达 1.03X105-1.38X105Pa、温度为121-126℃时,应保持灭菌时间20-30分钟b)接种器具每次使用后应有酒精灼烧或灭菌器灭菌c)污染的外植体材料应及时淘汰,若果种源有限,对外植体材料可进行二次灭菌d)操作人员接种时应用75%酒精擦拭双手和培养瓶表面,操作室内不要放入过多待用培养瓶,防止气流被挡住e)接种环境应定期用福尔马林等熏蒸灭菌,经常打开紫外灯照射灭菌f)超净工作台应定期对初过滤器清洗和更换,提前15-20分钟打开紫外灯,并用75%酒精擦拭整个工作台g)控制环境湿度2、综合论述植物组织培养在生产中的应用领域?1)植物离体快速繁殖植物离体快速繁殖是植物组织培养在生产上应用最广泛、产生经济效益较大的一项技术。
离体快繁的特点:繁殖系数大、周年生产、繁殖速度快、苗木整齐一致等,所以利用这项技术可以使一个单株一年繁殖几万到几百万个植株。
目前,观赏植物、园艺作物,经济林木、无性繁殖作物等大部分都用离体快繁提供苗木,试管苗在国内外市场产上形成产业化。
2)无病毒苗木培育很多农作物都带有病毒,特别是无性繁殖植物,如马铃薯、大蒜等,病毒在体内积累,影响其生长和产量,对生产造成极大损失。
利用组织培养方法,取一定大小的茎尖进行培养,直接培养或结合高温和抗病毒药剂使用,再生植株就可以脱除病毒。
3)培育新品种或创制新种质a)培育远缘杂种:由于受精障碍,导致远缘杂交植物不孕,使得植物的种间和远缘杂交常难以成功。
采用胚的早期离体培养可以使杂种胚正常发育,产生远缘杂交后代,从而育成新物种。
b)离体选择突变体:培养的细胞,无论是愈伤组织还是悬浮细胞,由于处在分裂状态,易受培养条件和诱变因素的影响而产生变异。
目前,在植物抗性育种与生理研究中应用体细胞无性系变异最为成功的是抗病性育种,其次是抗旱。
抗盐和抗除草剂等品种。
c)单倍体育种:由于具有所有基因均能表现、基因型可快速纯合等优点,单倍体育种始终是人们关注的一种育种手段。
d)转基因育种:改技术是利用目的基因进行植物相关性状的改良,从而使植物的特定性状得到快速改良。
4)次生代谢物的生产利用组织或细胞的大规模培养,可以生产人类需要的一些天然有机化合物,如蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱及其他活性化合物。
5)植物种质资源的离体保存许多植物在离体条件下,通过抑制生长或超低温储存的方法,使培养材料能长期保存,并保持其生活力。
6)人工种子a)人工种子结构结构完整,体积小,繁便于储藏与运输,可直接播种和机械化操作;b)不受季节和环境限制,胚状体数量多,繁殖快,利于工厂化生产c)利于繁殖生育周期长、自交不亲和、珍贵稀有的一些植物,也可大量繁殖无病毒材料d)可在人工种子中加入抗生素、菌肥、农药等成分,提高种子活力和品质e)体细胞胚由无性繁殖体系产生,可以固定杂种优势。
2、综合论述如何实现组培厂的提质增效?a)提高劳动生产率:按工作性质进行操作人员分工,实行岗位责任制,或定额管理计件工资b)减少设备投资,延长使用寿命:定期检查设备,及时维修c)降低消耗:用耐高温的器皿、尽量使用自然光照和温度,充分利用培养室空间d)降低污染,提高繁殖率和成活率:e)简化培养基:白糖代替蔗糖,自来水代替蒸馏水3、综合论述培养基的制备操作步骤?1)取出母液按顺序放好,将有机营养物质母液溶解待用。
将洁净的各种玻璃器皿如量筒、烧杯、移液管、移液枪和玻璃棒等放在指定位置。
2)取出一只烧杯,放入1/3左右蒸馏水,将母液按顺序加入,并不断搅拌。
3)加入植物生长调节剂和蔗糖,待糖溶解后定容。
4)将定容的培养基倒入容器中,称重并记住重量。
加入琼脂,并加热使其完全溶解。
再称重,用蒸馏水补充由于蒸发而损失的水分。
5)调整pH,用预先配好的氢氧化钠或稀盐酸进行pH调整。
6)将培养基分装到培养皿中,封瓶口。
7)灭菌,用高压蒸汽灭菌锅灭菌或过滤除菌。
8)灭菌后待高压锅压力降为0时,打开灭菌锅,取出培养瓶,平放凝固后待用。
4、培养基母液配制倍数、培养基制备中用量的计算方法。