酵母RNA的提取实验报告

酵母RNA的提取及含量测定一、实验目的与要求1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法；2、了解测量核酸浓度不同方法的原理；3、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法；4、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。

二、实验原理1、RNA提取原理：由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。

一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。

其中苯酚法又是实验是最常用的。

组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。

向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。

上述方法提取的RNA具有生物活性。

工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。

浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。

稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。

酵母含RNA 达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。

2、测定RNA含量的方法：（1）紫外吸收法原理：核酸具有吸收紫外线的性质，在波长260纳米处有最大吸收，且在一定浓度范围内光吸收值与浓度成正比（0—50微克/毫升），符合朗伯-比尔定律。

优点样品用量少，不用显色，测完后样品可以继续使用。

（2）地衣酚显色法：核酸与浓盐酸共热，放生降解，生成糠醛，后者与地衣酚反应，在三价铁离子或二价铜离子作用下，生成鲜绿色的复合物，670纳米处有最大吸收，且光吸收值与浓度成正比，符合朗伯-比尔定律。

缺点反应特异性差，易受干扰。

（3）定磷法：在酸性环境中，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中无机磷酸生成磷钼酸，当有还原剂存在时，磷钼酸立即被还原生成蓝色的还原产物--钼蓝，其最大吸收在660纳米处，当无机磷含量在每毫升1-25微克范围内，光吸收与含磷量成正比。

实验五酵母RNA的提取与鉴定一、实验目的1.掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。

2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。

二、实验原理1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。

2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。

3.用碱液提取的RNA有不同程度的降解三、实验仪器1.离心机2.水浴锅3.电炉4.烧杯5.量筒四、实验试剂1.干酵母粉2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。

3.乙酸4.95%乙醇5.无水乙醚6.10%硫酸7.氨水9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。

1.苔黑酚-三氯化铁溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3.6H2O。

临用时配制。

五、实验步骤1.RNA的提取：（1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。

然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH 试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。

（2）取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。

（3）滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。

（4）洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。

乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。

2.鉴定：（1）取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。

（2）取水解液0.5ml，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。

（3）水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。

六、实验结果加热至沸1分钟后，溶液变成绿色；产生絮状嘌呤银化合物沉淀七、实验分析实验注意事项1.过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来。

酵母RNA的提取实验报告实验报告：酵母RNA的提取一、实验目的1.学习和掌握酵母RNA的提取基本原理和方法。

2.了解RNA在生物体内的生物功能及其重要性。

3.培养实验技巧和操作能力，提高实验素养。

二、实验原理RNA（核糖核酸）是生物体内的重要生物分子之一，它参与蛋白质合成、基因表达等重要生命活动。

酵母是一种常用的真核生物模型，其RNA提取方法与人体、植物等真核生物类似。

本实验采用氯仿-异戊醇法提取酵母RNA。

主要步骤包括细胞破碎、离心分离、有机溶剂抽提、乙醇沉淀等。

三、实验步骤1.准备试剂和器材（1）试剂：氯仿、异戊醇、无水乙醇、DEPC水、RNA酶。

（2）器材：研钵、离心管、移液器、玻璃棒、氮气吹干器、分光光度计等。

2.酵母细胞破碎（1）在冰上用研钵将酵母细胞研磨成粉末。

（2）加入适量DEPC水，搅拌均匀。

（3）用玻璃棒将细胞碎片挑出，弃去上清液。

（4）加入适量DEPC水，搅拌均匀，重复上述步骤，直到细胞完全破碎。

3.离心分离（1）将破碎的酵母细胞溶液转移到离心管中。

（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。

4.有机溶剂抽提（1）用移液器将上清液小心地转移到另一个离心管中。

（2）加入等体积的氯仿-异戊醇混合液（氯仿：异戊醇=24：1），用玻璃棒搅拌均匀。

（3）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。

5.乙醇沉淀（1）将上清液转移到新的离心管中，并加入等体积的无水乙醇，用玻璃棒搅拌均匀。

（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。

6.洗涤和干燥（1）用移液器小心地将上清液吸出，留下沉淀物。

（2）加入适量75%乙醇，用玻璃棒搅拌均匀，去除残留的乙醇和水分。

（3）在氮气吹干器下将沉淀物吹干约5分钟。

7.RNA溶解与定量（1）加入适量DEPC水，将沉淀物溶解。

（2）用分光光度计测定RNA溶液的吸光度值（A260nm），计算RNA浓度。

四、实验结果与分析表1：酵母RNA提取结果本实验通过氯仿-异戊醇法成功地提取出了高浓度的酵母RNA。

酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告引言：RNA是一种重要的生物分子，它在细胞内承担着转录和翻译的重要功能。

在分子生物学研究中，提取RNA是一项常见的实验操作。

本实验旨在通过提取酵母细胞中的RNA，探究RNA的提取方法和应用。

材料与方法：1. 实验材料：酵母细胞、细胞裂解缓冲液、RNA提取试剂盒、异丙醇、氯仿、异丁醇、乙醇、载玻片、显微镜等。

2. 实验步骤：a. 酵母细胞的培养与收获：将酵母细胞培养于培养基中，通过离心将细胞收获。

b. 细胞裂解：将收获的细胞用细胞裂解缓冲液裂解，以释放RNA。

c. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行RNA提取。

d. 纯化RNA：通过异丙醇沉淀和氯仿萃取，去除DNA和蛋白质等杂质。

e. 洗涤与干燥：使用异丁醇和乙醇进行洗涤，最后将RNA干燥。

f. 检测RNA：将提取得到的RNA溶解于适当的缓冲液中，使用紫外可见光谱仪或显微镜观察RNA的浓度和纯度。

结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地提取到了酵母细胞中的RNA。

在实验过程中，我们注意到以下几点：1. 细胞裂解的缓冲液选择：细胞裂解缓冲液的选择对RNA提取至关重要。

合适的缓冲液可以有效地破坏细胞膜，释放细胞内的RNA。

在本实验中，我们选择了一种经充分验证的缓冲液，以确保细胞能够完全裂解。

2. RNA提取试剂盒的使用：RNA提取试剂盒是一种常用的RNA提取方法。

它通过特定的试剂和离心步骤，将RNA从细胞裂解物中分离出来。

在本实验中，我们按照试剂盒的说明书进行操作，成功地提取到了RNA。

3. RNA的纯化：RNA的纯化是为了去除细胞裂解物中的杂质，如DNA和蛋白质。

在本实验中，我们使用了异丙醇沉淀和氯仿萃取的方法，成功地纯化了RNA。

这些方法可以有效地去除DNA和蛋白质，提高RNA的纯度。

4. RNA的检测：在实验中，我们使用紫外可见光谱仪或显微镜对提取得到的RNA进行检测。

通过观察RNA的浓度和纯度，我们可以评估提取的RNA是否适用于后续的实验操作。

实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。

因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。

由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。

工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。

稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。

稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。

浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。

用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。

利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。

若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。

离心收集。

本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。

加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。

2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。

3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。

待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。

随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。

调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。

酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告。

实验目的，通过实验研究酵母RNA的提取方法，为后续的基因表达调控研究提供技术支持。

实验材料与方法：1. 实验材料，酵母细胞培养物、TRIzol试剂、异丙醇、氯仿、乙醇、DEPC水等。

2. 样品制备，取酵母培养物，离心收集酵母细胞，冰上洗涤去除培养基。

3. 细胞破碎，向酵母细胞中加入TRIzol试剂，用离心管摇匀，静置离心管5分钟。

4. RNA提取，加入氯仿，摇匀，离心分离上清液，上清液转移至新离心管中，加入异丙醇沉淀RNA。

5. RNA沉淀，离心沉淀RNA，弃上清液，加入乙醇洗涤RNA，再次离心沉淀RNA。

6. RNA溶解，用DEPC水溶解RNA，测定纯度和浓度。

实验结果：1. 细胞破碎，经过加入TRIzol试剂处理后，酵母细胞成功破碎，形成混浊的混合液。

2. RNA提取，通过氯仿萃取法，成功分离出上清液中的RNA，得到透明的上清液。

3. RNA沉淀，加入异丙醇后，观察到RNA在离心管底部形成白色沉淀。

4. RNA溶解，最终得到溶解度较高的RNA样品，纯度和浓度符合实验要求。

实验分析：本次实验采用的酵母RNA提取方法较为简单，通过TRIzol试剂的使用，成功实现了酵母细胞的破碎和RNA的提取。

氯仿的加入有效分离出RNA，异丙醇的沉淀步骤也取得了良好的效果。

最终得到的RNA样品纯度高，浓度适宜，可以用于后续的实验研究。

实验结论：本实验成功建立了一种适用于酵母细胞的RNA提取方法，为后续的基因表达调控研究提供了可靠的技术支持。

该方法操作简便，提取效果良好，适用于大规模样品的提取工作。

参考文献：1. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem. 1987Apr;162(1):156-9.2. Schmitt ME, Brown TA, Trumpower BL. A rapid and simple method for preparation of RNA from Saccharomyces cerevisiae. Nucleic Acids Res. 1990 Jan25;18(10):3091-2.。

实验四酵母RNA的提取一、原理酵母含有丰富的核酸，其中DNA较少，而RNA较多(约占干重的3-10%)，加之菌体收集容易，所以多用酵母作为提取RNA的材料。

本实验用浓盐法提取RNA，基本过程和原理是：用10%氯化钠使核糖核蛋白中的RNA解聚并溶于盐溶液中，离心除去菌体残渣及变性蛋白质后，调节溶液的pH值至RNA的等电点，RNA即可沉淀析出。

本法提取的RNA已变性并有部分降解，工业上常将其进一步水解，以制备核苷酸、核苷和碱基等。

如要避免RNA降解，可用苯酚法提取。

通过鉴定RNA的组成成分可对RNA定性。

磷酸：磷酸可与钼酸铵作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下被还原为蓝色的钼蓝。

嘌呤碱：它们能与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化物沉淀。

核糖：核糖与酸共热生成糠醛，后者与苔黑酚反应生成绿色化合物。

二、试剂与仪器(一)试剂：1．干酵母2．10%氯化钠溶液3．6摩尔/升盐酸溶液4．乙醚5．10%硫酸溶液6．钼酸铵试剂：2克钼酸铵溶于100毫升10%硫酸7．10%维生素C溶液8．0.1摩尔/升硝酸银溶液9．1摩尔/升氨水。

10．Fe3+-HCL试剂：0.99克硫酸高铁铵〔NH4Fe(S04)2·12H20〕溶1000毫升浓盐酸中。

11.5%苔黑酚乙醇溶液。

(二)仪器：1．沸水浴2．离心机三、操作：1.酵母RNA的提取①干酵母约0.3克置于离心管内，加入10%氯化钠5毫升，搅匀后置沸水浴加热10分钟。

②取出离心管，流水猝冷后，3000rpm离心10分钟，上层即为RNA提取液，下层为菌体残渣及变性蛋白质沉淀。

③将上层清液小心倾入另一离心管中，逐滴加6摩尔/升盐酸，边加边搅拌，随着pH下降，RNA逐渐沉淀析出，当调节pH至2.O-2.5(接近RNA等电点)时，沉淀最多，此时，静置几分钟，然后在3000rpm离心10分钟。

收集RNA沉淀。

用少量乙醚洗涤以除去脂类和色素等杂质。

2.RNA的水解在上述RNA沉淀中，加入10%硫酸5毫升，搅匀，沸水浴加热5分钟，使RNA水解。