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高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量［实验目的］1掌握高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量的基本原理2掌握高效液相色谱仪的操作及注意事项［实验原理］结构特点：苯环（紫外吸收）、芳伯胺基（重氮化-偶合反应）、磺酰胺基上的活泼氢有一定酸性，可与碱成盐或与重金属离子反应。
分子式：C10H11N3O3S 分子质量：253.28。
本品为白色结晶性粉末。
熔点167℃，易溶于稀盐酸；氢氧化钠溶液或氨水，几乎不溶于水。
无臭，味微苦。
外标法是以待测组分的纯品作为对照品，以供试品中待测组分的峰面积或峰高进行定量分析，本实验采用峰面积进行定量。
分别精密量取一定量的对照品和供试品配制成溶液，分别进相同的体积的对照品溶液和供试品溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测定峰面积。
［实验仪器、试剂］仪器：75-4型紫外可见分光光度计 (上海分析仪器厂 )，高效液相色谱仪，色谱柱，超声波清洗仪，紫外吸收检测器，无油隔膜真空泵，抽滤装置，电子分析天枰，称量纸，研钵，容量瓶（100ml,50ml,25ml,10ml），漏斗，滤纸，烧杯，玻璃棒，移液枪试剂：复方磺胺甲噁唑片(山东新华制药股份有限公司 ,批号 0412073 )，甲氧苄啶，磺胺甲噁唑，甲醇（色谱纯）,水（超纯水），乙腈(色谱纯)，三乙胺 (色谱纯)，醋酸溶液（1→100），［实验步骤］1.色谱条件与系统适用性试验：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：水-乙腈-三乙胺（799∶200∶1）（用醋酸溶液（1→100）调节pH值至5.9±0.1）检测波长：254nm流速：1.0mL/min进样量：20ul理论塔板数：按甲氧苄啶计算应不低于2000，甲氧苄啶与磺胺甲噁唑峰之间的分离度应大于 5.0。
甲氧苄啶峰与磺胺甲噁唑峰的拖尾因子均不得过2.0。
2.测定法2-1溶液的配制2-1-1对照品储备液的配制：取磺胺甲噁唑200mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
验证性试验实验十八复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲恶唑的含量测定一、实验目的1.掌握双波长法的基本原理。
2.掌握复方制剂不经分离直接测定各组分含量的方法。
3.熟悉紫外分光光度仪的使用。
二、仪器与试药1.仪器Mettler AL204电子天平 752型紫外－可见分光光度仪研钵定量滤纸（直径10cm）胖肚移液管规格：25mL容量瓶规格：25mL 、100mL 刻度移液管规格：10mL2.试药复方磺胺甲噁唑片规格：含磺胺甲噁唑（SMZ） 0.4g、甲氧苄啶（TMP） 0.08ｇ95%乙醇氢氧化钠硫酸三、实验原理1.双波长分光光度法（1）双波长分光光度法消除干扰吸收的基本原理在干扰组分的吸收光谱上吸收系数相同的两个波长处，若被测组分的吸收系数有显著差异，则可用于消除干扰吸收，即直接测定混合物在此两波长处的吸收度之差值，该差值与被测物浓度成正比，而与干扰物浓度无关。
用数学式表达如下：ΔA（λ1λ2）=A a+b1-A a+b2=A a1-A a2+A b1-A b2=ΔE.a C a.L+ΔE b.C b.L若b为干扰物，所选波长λ1λ2处的E b相等，所以ΔE b=0则ΔA混=ΔE a.C a.L与干扰物浓度无关。
（2）双波长法测定复方磺胺甲噁唑片中SMZ含量的原理复方磺胺甲噁唑片是含磺胺甲基异噁唑（SMZ）及甲氧苄啶（TMP）的复方制剂。
在0.1mol/L 氢氧化钠液中，SMZ在257nm波长处有一最大吸收峰，TMP在257nm和304nm波长处为等吸收点，而SMZ在这两波长处的吸收度差异大，见下图。
所以测得样品在257nm和304nm波长处的吸收度差值ΔA与SMZ浓度成正比，与TMP浓度无关。
四、实验内容1.工作曲线的制备（1）标准贮备液的配制分别精密称取磺胺甲基异噁唑对照品0.1g ，置100mL 容量瓶中，加入50m L 95%乙醇溶解后，以0.1mol/L 氢氧化钠液稀释至刻度，吸取10mL 置100mL 容量瓶中，以0.1mol/L 氢氧化钠液稀释至刻度，得标准贮备液（100μg /mL ）。
典型实验教学案例简介案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。
紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。
紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。
当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。
双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。
本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。
一、实验目的1．掌握双波长分光光度法的测定原理。
2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。
二、实验原理当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。
然后根据ΔA值计算b的含量。
SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。
TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。
由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。
此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。
三、仪器与试剂1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL 容量瓶2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L 盐酸溶液；氯化钾四、实验步骤1．磺胺甲噁唑的含量测定（1）平均片重测定：10片，精密称定。
（2）供试品溶液配制：图2 TMP 紫外吸收图谱1. TMP(5.0μg/ml);2.SMZ(25.0μg/ml);3. SMZ+TMP;4. 辅料图l SMZ 紫外吸收图谱1. TMP(0.2μg/ml);2.SMZ(10.0μg/ml);3. SMZ+TMP;4. 辅料精密称取片粉(约50mg SMZ, 10mg TMP)片剂 乙醇溶解、定容过滤 研磨100m（3）对照品溶液配制（3）取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm 为测定波长（λ2），在304nm 波长附近（每间隔0.5nm ）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求ΔA= A λ2（2）－A λ1（2）= 0，再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA ），计算，即得。
