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高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量［实验目的］1掌握高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量的基本原理2掌握高效液相色谱仪的操作及注意事项［实验原理］结构特点：苯环（紫外吸收）、芳伯胺基（重氮化-偶合反应）、磺酰胺基上的活泼氢有一定酸性，可与碱成盐或与重金属离子反应。
分子式：C10H11N3O3S 分子质量：253.28。
本品为白色结晶性粉末。
熔点167℃，易溶于稀盐酸；氢氧化钠溶液或氨水，几乎不溶于水。
无臭，味微苦。
外标法是以待测组分的纯品作为对照品，以供试品中待测组分的峰面积或峰高进行定量分析，本实验采用峰面积进行定量。
分别精密量取一定量的对照品和供试品配制成溶液，分别进相同的体积的对照品溶液和供试品溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测定峰面积。
［实验仪器、试剂］仪器：75-4型紫外可见分光光度计 (上海分析仪器厂 )，高效液相色谱仪，色谱柱，超声波清洗仪，紫外吸收检测器，无油隔膜真空泵，抽滤装置，电子分析天枰，称量纸，研钵，容量瓶（100ml,50ml,25ml,10ml），漏斗，滤纸，烧杯，玻璃棒，移液枪试剂：复方磺胺甲噁唑片(山东新华制药股份有限公司 ,批号 0412073 )，甲氧苄啶，磺胺甲噁唑，甲醇（色谱纯）,水（超纯水），乙腈(色谱纯)，三乙胺 (色谱纯)，醋酸溶液（1→100），［实验步骤］1.色谱条件与系统适用性试验：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：水-乙腈-三乙胺（799∶200∶1）（用醋酸溶液（1→100）调节pH值至5.9±0.1）检测波长：254nm流速：1.0mL/min进样量：20ul理论塔板数：按甲氧苄啶计算应不低于2000，甲氧苄啶与磺胺甲噁唑峰之间的分离度应大于 5.0。
甲氧苄啶峰与磺胺甲噁唑峰的拖尾因子均不得过2.0。
2.测定法2-1溶液的配制2-1-1对照品储备液的配制：取磺胺甲噁唑200mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
验证性试验实验十八复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲恶唑的含量测定一、实验目的1.掌握双波长法的基本原理。
2.掌握复方制剂不经分离直接测定各组分含量的方法。
3.熟悉紫外分光光度仪的使用。
二、仪器与试药1.仪器Mettler AL204电子天平 752型紫外－可见分光光度仪研钵定量滤纸（直径10cm）胖肚移液管规格：25mL容量瓶规格：25mL 、100mL 刻度移液管规格：10mL2.试药复方磺胺甲噁唑片规格：含磺胺甲噁唑（SMZ） 0.4g、甲氧苄啶（TMP） 0.08ｇ95%乙醇氢氧化钠硫酸三、实验原理1.双波长分光光度法（1）双波长分光光度法消除干扰吸收的基本原理在干扰组分的吸收光谱上吸收系数相同的两个波长处，若被测组分的吸收系数有显著差异，则可用于消除干扰吸收，即直接测定混合物在此两波长处的吸收度之差值，该差值与被测物浓度成正比，而与干扰物浓度无关。
用数学式表达如下：ΔA（λ1λ2）=A a+b1-A a+b2=A a1-A a2+A b1-A b2=ΔE.a C a.L+ΔE b.C b.L若b为干扰物，所选波长λ1λ2处的E b相等，所以ΔE b=0则ΔA混=ΔE a.C a.L与干扰物浓度无关。
（2）双波长法测定复方磺胺甲噁唑片中SMZ含量的原理复方磺胺甲噁唑片是含磺胺甲基异噁唑（SMZ）及甲氧苄啶（TMP）的复方制剂。
在0.1mol/L 氢氧化钠液中，SMZ在257nm波长处有一最大吸收峰，TMP在257nm和304nm波长处为等吸收点，而SMZ在这两波长处的吸收度差异大，见下图。
所以测得样品在257nm和304nm波长处的吸收度差值ΔA与SMZ浓度成正比，与TMP浓度无关。
四、实验内容1.工作曲线的制备（1）标准贮备液的配制分别精密称取磺胺甲基异噁唑对照品0.1g ，置100mL 容量瓶中，加入50m L 95%乙醇溶解后，以0.1mol/L 氢氧化钠液稀释至刻度，吸取10mL 置100mL 容量瓶中，以0.1mol/L 氢氧化钠液稀释至刻度，得标准贮备液（100μg /mL ）。
典型实验教学案例简介案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。
紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。
紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。
当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。
双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。
本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。
一、实验目的1．掌握双波长分光光度法的测定原理。
2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。
二、实验原理当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。
然后根据ΔA值计算b的含量。
SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。
TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。
由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。
此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。
三、仪器与试剂1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL 容量瓶2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L 盐酸溶液；氯化钾四、实验步骤1．磺胺甲噁唑的含量测定（1）平均片重测定：10片，精密称定。
（2）供试品溶液配制：图2 TMP 紫外吸收图谱1. TMP(5.0μg/ml);2.SMZ(25.0μg/ml);3. SMZ+TMP;4. 辅料图l SMZ 紫外吸收图谱1. TMP(0.2μg/ml);2.SMZ(10.0μg/ml);3. SMZ+TMP;4. 辅料精密称取片粉(约50mg SMZ, 10mg TMP)片剂 乙醇溶解、定容过滤 研磨100m（3）对照品溶液配制（3）取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm 为测定波长（λ2），在304nm 波长附近（每间隔0.5nm ）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求ΔA= A λ2（2）－A λ1（2）= 0，再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA ），计算，即得。
双波长法测定复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑的含量一、实验目的1、掌握等吸收双波长法测定复方片剂组分含量的原理及方法；2、熟悉利用单波长分光光度计进行双波长法测定。
二、实验原理利用等吸收双波长法消除干扰组分的影响，根据在λ1和λ2的A 值通过下式计算：)()(221121b a b a A A A A A A A λλλλλλ+-+=-=∆ 由于 b b A A 21λλ=， 则l C E E A A A a a a a a )(2121λλλλ-=-=∆所以 l E E A l E E A A C a a a a a a a )()(212121λλλλλλ-∆=--=样 三、实验步骤1、对照品和样品溶液的配制TMP 对照品溶液：精密称取105℃干燥至恒重的TMP 约10mg ，乙醇溶解定容到100 ml ， 取上述溶液2.00 ml 加0.1 mol/L 氢氧化钠溶液定容到100 ml ，摇匀。
SMZ 对照品溶液：精密称取105℃干燥至恒重的SMZ 约50mg （m SMZ ），乙醇溶解定容到100.0 ml ，取上述溶液2.00 ml 加0.1 mol/L 氢氧化钠溶液定容到100 ml ，摇匀。
样品溶液：取片剂10片，研细，精密称取相当于SMZ 50 mg 与TMP 10 mg 粉末，乙醇溶解，定容到100.0ml ，过滤，取续滤液2.00 ml 加0.1 mol/L 氢氧化钠溶液定容到100.0 ml 。
2、SMZ 、TMP 标准溶液吸收光谱绘制以及等吸收点寻找和样品的测定（1）以0.1 mol/L 氢氧化钠溶液为参比溶液，分别取SMZ 、TMP 标准溶液进行波长扫描（220nm ~320nm ）。
以SMZ 最大吸收波长为测量波长λ1，再在λ1处分别测量1λSMZ A 、1λTMP A 、1λ样A 。
（2）根据1λTMP A 值，按照TMP 吸收光谱在304 nm 附近寻找等吸收点2λTMP A （1λTMP A =2λTMP A ），以该波长作为参比波长λ2，然后在λ2处分别测量2λSMZ A 和2λ样A 。
双波长法测定复方磺胺甲恶唑含量The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020双波长法测定复方磺胺甲噁唑含量一、目的1.掌握复方制剂的分析特点及赋形剂的干扰与排除方法。
2.掌握双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑与甲氧苄啶含量的原理与方法。
二、实验内容1.供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50mg（20片平均片重的8分之一）与甲氧苄啶10mg（20片平均片重的8分之一）)，置于100ml量瓶中，加乙醇适量，振摇15分钟磺胺甲口恶唑与甲氧苄啶溶解，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的磺胺甲噁唑对照品50mg（按原料药95%含量计）与甲氧苄啶对照品10mg（按原料药95%含量计），分置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液(1)与对照品溶液(2)。
3.磺胺甲噁唑的测定精密量取供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各2ml，分置100ml量瓶中，各加％氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀。
取对照品溶液(2)的稀释液；以257nm为测定波长(λ2)，在304nm波长附近(每间隔选择等吸收点波长为参与波长(λ1)，要求△A=Aλ2－Aλ1=0。
再在λ2与λ1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液(1)的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值(△A)，计算，即得。
4.甲氧苄啶的测定精密量取上述供试品溶液与对照品溶液(1)(2)各5ml，分置100ml量瓶中，各加盐酸-氯化钾溶液 [取盐酸液L)75ml与氯化钾6.9g，加水至1000ml摇匀] 稀释至刻度，摇匀。
取对照品溶液(1)的稀释液，以为测定波长(λ2)，在295nm波长附近(每间隔选择等吸收点波长为参比波长(λ1)，要求△A=Aλ2－Aλ1=0。
单波少法测定复圆磺胺甲噁唑含量之阳早格格创做一、手段1.掌握复圆造剂的分解特性及赋形剂的搞扰与排除要领.2.掌握单波少分光光度法测定复圆磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑与甲氧苄啶含量的本理与要领.两、真验真质与本品20片，粗稀称定，研细，粗稀称与适量(约相称于磺胺甲噁唑50mg（20片仄衡片沉的8分之一）与甲氧苄啶10mg（20片仄衡片沉的8分之一）)，置于100ml量瓶中，加乙醇适量，振摇15分钟磺胺甲心恶唑与甲氧苄啶溶解，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，与绝滤液动做供试品溶液.粗稀称与105℃搞燥至恒沉的磺胺甲噁唑对于照品50mg（按本料药95%含量计）与甲氧苄啶对于照品10mg（按本料药95%含量计），分置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别动做对于照品溶液(1)与对于照品溶液(2).3.磺胺甲噁唑的测定粗稀量与供试品溶液与对于照品溶液(1)、(2)各2ml，分置100ml量瓶中，各加0.4％氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀.与对于照品溶液(2)的稀释液；以257nm为测定波少(λ2)，正在304nm波少附近(每隔断0.5nm)采用等吸支面波少为介进波少(λ1)，央供△A=Aλ2－Aλ1=0.再正在λ2与λ1波少处分别测定供试品溶液的稀释液与对于照品溶液(1)的稀释液的吸支度，供出各自的吸支度好值(△A)，估计，即得.粗稀量与上述供试品溶液与对于照品溶液(1)(2)各5ml，分置100ml量瓶中，各加盐酸-氯化钾溶液[与盐酸液(0.1mol/L)75ml与氯化钾，加火至1000ml摇匀] 稀释至刻度，摇匀.与对于照品溶液(1)的稀释液，以239.0nm为测定波少(λ2)，正在295nm波少附近(每隔断0.2nm)采用等吸支面波少为参比波少(λ1)，央供△A=Aλ2－Aλ1=0.再正在λ2与λ1波少处分别测定供试品溶液的稀释液与对于照品溶液(2)的稀释液的吸支度，供出各自的吸支度好值(△A)，估计，即得.本品每片中含磺胺甲噁唑(C10H11N3O2S)应为0.360～0.440g，含甲氧苄啶(C14H12N4O3)应为72.0～88.0mg.三证明1.磺胺甲噁唑与甲氧苄啶的结构分别为：SMZ与TMP的紫中吸支图谱分别为：1 TMP(2.0μg/ml)；2 SMZ(10.0μg/ml) 1 TMP(5.0μg/ml)；2 SMZ(25.0μg/m l)3 SMZ＋TMP；4 辅料3 SMZ＋TMP； 4 辅料2.复圆磺胺甲噁唑片的处圆为：磺胺甲噁唑400g甲氧苄啶80g造成1000片3.本真验采与单波少分光光度法测定SMZ战TMP的含量.由于搞扰组分正在测定波少战参比波少处吸支度相等，可正在估计△A时消去，所以应用本法不妨没有经分散，曲交测定复圆造剂中SMZ战TMP的含量.四、思索题1.试简述单波少分光光度法的本理.2.试查阅本品的其余分解要领，从中相识复圆造剂分解的特性及生少趋势.注意：1、与20片后要算一片的仄衡沉量，而后根据那一片去与八分之一沉量.2、1,2步调动做母液配造，不妨喊博门三组完毕，3步调由单数组完毕，4步调由单数组完毕.3、利用紫中测定时屡屡换一个波少便要将空黑对于照液吸支值沉新归整，预防出现背数值情况.。
