GoldView Ⅰ型核酸染色剂使用说明

进口核酸检测试剂操作方法
1. 根据试剂盒说明书，准备好操作所需的物品和试剂。

包括核酸提取试剂、核酸扩增试剂、酶标仪试剂等。

2. 根据需要的样本类型（如血液、唾液、呼吸道样本等）进行取样，并放置到特定的容器中。

3. 对样本进行核酸提取处理，根据试剂盒说明书进行操作。

可采用手动或自动提取系统，提取的核酸需要稳定保存。

4. 根据需要选择适当的核酸扩增方法，例如PCR扩增、LAMP扩增等。

5. 根据试剂盒说明书，对样品进行扩增反应，分别加入核酸扩增试剂、反应体系和DNA模板，并进行扩增反应。

6. 扩增完成后，将反应体系加入酶标仪试剂中，按照试剂盒说明书进行检测和分析。

7. 根据结果判断样本是否为阳性或阴性，以及病毒载量等相关信息。

8. 对样本进行分类、存档和报告等工作，进行后续处理。

关于电泳GoldViewTM 核酸染料安全性问题GoldViewTM 核酸染料——使用说明“注意事项”中有指出：虽然未发现GoldView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。

最近看到的资料显示goldview的主要成分含有吖叮橙，吖叮橙是不致癌，但却是强烈致突变的物质。

吖啶橙(Acridine Orange，AO)简介3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 ·HCl ·ZnCl2, 分子量438.12 g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。

它与细胞中DNA 和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA 结合量多发桔黄色或桔红色荧光。

该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA 染色。

因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。

吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。

吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。

goldview的染色效果：有人经过实验对比发现，信号不太灵敏，有些条带检不出来，而EB 胶却清晰可见。

关于GoldViewTM 核酸染料中吖叮橙毒性文献The effective ingredient in GoldView is acridine orange (extremely cheap from Aldrich or Sigma at ~100g/$140!)Acridine orange is a known gel stain since 1970s (“Analysis of single- and double-stranded nucleic acids on polyacrylamide and agarose gels by using glyoxal and acridine orange”. Proc Natl Acad Sci U S A. 1977 Nov;74(11):4835-8.Acridine orange is a highly toxic and known mutagen!Selected list of papers on acridine orange toxicity:Web, RB. Mutat Res. 1984 Jul;137(1):1-6.Wugmeister, M. Yale J Biol Med. 1983 Jan-Feb;56(1):9-13.Martin, SE. Mutat Res. 1981 Jun;82(1):41-6.Ashad, R. Letters in Applied Microbiology 2006, 42:94.因此在电泳实验过程中，小心注意点，做好防护工作！！！。

GoldenView使 用 说 明 书GoldenView™ 核酸染料概述GoldenView™是一种可代替溴化乙锭（EB ）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA 时，GoldenV iew™与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB 相当，使用方法与之完全相同。

在100ml 琼脂糖胶溶液中加入5-10µl GoldenV iew™即可。

在紫外透射光下双链DNA 呈现绿色荧光，也可用于染RNA 。

使用方法 1.将100ml 琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。

2. 加入5-10µl GoldenView （如果背景过高可以适当减少用量，如果敏感度过低，可以适当增加用量），轻轻摇匀，避免产生气泡。

3.冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。

4. 电泳完毕在紫外灯下观察。

若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。

注意事项 1.胶厚度不宜超过0.5cm ，胶太厚会影响检测的灵敏度。

2.加入GoldenView 的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。

3. 通过凝胶电泳回收DNA 片段时，建议使用GoldenV iew 染色，在自然光下切割DNA 条带，避免紫外线与EB 对目的DNA 产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。

4. 虽然未发现GoldenView 有致癌作用，但是各种核酸染料的致癌作用学术界一直存在争议，同时GoldenView 对皮肤、眼睛会有一定的刺激，为安全起见，我们强烈建议操作时依然应该每次带手套，不小心接触皮肤后应该立刻清洗，并妥善处理废弃物。

NOT FOR HUMAN OR DRUG USE。

核酸试剂操作方法核酸试剂是用于提取、纯化和测定核酸分子的化学试剂。

核酸试剂的操作方法可以大致分为以下几个步骤：样品处理、溶解、纯化、测定等。

下面我将详细介绍每个步骤的操作方法。

1. 样品处理：在进行核酸提取前，首先需要对样品进行处理。

根据实验的目的和样品的性质，可以选择不同的样品处理方法。

比较常见的样品处理方法包括：细胞裂解、血浆或血清的凝固、骨髓抽提等。

在样品处理过程中要注意采用无菌操作，避免污染。

2. 溶解：将处理后的样品或沉淀加入适当的溶解液中，使核酸完全溶解。

常用的核酸溶解液包括：TE缓冲液、含EDTA的去离子水等。

在样品溶解时，需轻轻摇晃或轻轻慢搅拌，避免生成气泡。

3. 核酸纯化：核酸溶解后，需要进行纯化以去除与核酸有关的杂质，如蛋白质、盐类和酶等。

常用的核酸纯化方法有酚-氯仿法、硅胶柱法、离心柱法等。

不同的纯化方法适用于不同的样品类型和实验需求。

在纯化过程中，需要根据试剂的使用说明进行操作，以保证纯化效果。

4. 核酸测定：核酸纯化后，可以通过一系列测定手段来确定核酸的浓度和纯度。

测定核酸浓度和纯度的方法有：比色法、荧光法、紫外吸收法等。

在进行核酸测定时，需要根据试剂的使用说明和仪器的操作步骤进行操作，确保结果的准确性。

除了上述操作步骤外，核酸试剂的操作还需要注意以下几点：1. 实验室条件：进行核酸实验需要在洁净、无菌的实验环境下进行，避免外源性DNA和RNA的污染。

2. 消毒处理：实验前需要将操作台面、试剂瓶盖、离心管等实验器材进行消毒处理，以避免细菌、病毒的污染。

3. 无菌操作：在进行核酸提取和纯化操作时，需采用无菌技术，包括用纯化的试剂和器皿、带手套、使用滤芯枪头等。

4. 试剂保存：核酸试剂的保存条件需根据试剂的要求进行，常见的存储条件包括-20保存、避光保存等。

5. 操作技巧：在进行核酸试剂操作时，需熟悉试剂的用途和使用方法，并掌握相关实验技巧，以保证试剂的有效使用。

总之，核酸试剂的操作方法涉及样品处理、溶解、纯化和测定等步骤。

1.GeneFinder核酸染料GeneFinder是新型核酸染料，具有安全、灵敏等突出优点，可以代替溴化乙锭(EB)作为各种核酸电泳的染色剂。

与强致癌性的EB不同，GeneFinder毒性很低，使用安全，可有效保护实验操作者和环境。

GeneFinder与dsDNA结合荧光信号可增强800—1000倍，其检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右，与SYBRGreenI染料的灵敏度相当。

另外，该染料同样能引起有机体突变，在使用时候一样要采取适当的保护措施。

1.1.GeneFinder的特点：1. 安全性：GeneFinder核酸染料致突变性远低于EB数倍甚至数十倍2. 灵敏度：检测核酸的灵敏度平均高于EB染色法10倍左右3. 操作简单：本染料有多种使用方法，操作简单4. 适用范围：适用于多种核酸电泳分析，可以对DNA、RNA、及寡核苷酸等进行染色5. 兼容性：对常用酶（如Taq酶、逆转录酶、内切酶、连接酶等）没有抑制作用2.Goldview核酸染料GoldenView是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldenView与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。

在100ml琼脂糖胶溶液中加入5-10µlGoldenView即可。

在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，也可用于染RNA。

无致突变性；而溴化乙锭EB是一种强致癌剂，选用GoldenView代替EB比较明智和安全。

目前尚未发现Geneview有致癌性，但是在使用中发现它有一定的刺激性，在使用过程中应戴上手套。

Goldview对于大片段DNA的染色效果还行，但是对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。

所以应该抓紧时间拍照后再观察。

另外Goldview不适用于胶回收。

灵敏度差，本底色严重，不利于回收，不稳定。

GoldViewⅠ型核酸染色剂使用说明货号：G8140规格：1.0ml（10000×）保存：常温保存，有效期至少一年。

产品介绍：GoldViewⅠ是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型DNA染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。

在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。

通过小鼠皮下注射实验，尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。

因此用GoldViewⅠ代替EB不失为一种明智的选择。

使用方法：将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）放入微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手时）后加入10ul GoldViewⅠ核酸染料，轻轻摇匀后倒胶（避免产生气泡），待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。

注意事项：1、胶厚度宜不要超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。

2、加入GoldViewⅠ的琼脂糖凝胶反复融化可能对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。

3、GoldViewⅠ在pH3.6-7.0之间能更好地与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液。

4、由于GoldViewⅠ产生绿色荧光，因此不适于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像系统保存图像。

5、含有GoldViewⅠ的凝胶不适于进行凝胶回收实验。

要进行回收实验，请使用EB或GoldViewⅡ型。

6、GoldViewⅠ特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段,GoldViewⅠ型可能亮度很弱或检测不到。

如果检测小片段的DNA,请选用GoldViewⅡ型核酸染色剂,该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA片段。

7、虽然尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用，但由于GoldViewⅠ溶液酸性较强，因此对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴手套。

应用特点：高效：GoldViewⅠ可以检测50ng级的DNA或RNA片段。

琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立王燕;彭莉萍;罗镇明【摘要】目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染.方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果.结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4％Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳.结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2012(035)004【总页数】3页(P276-278)【关键词】琼脂糖凝胶电泳;核酸染料;Goldview【作者】王燕;彭莉萍;罗镇明【作者单位】遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海 519041【正文语种】中文【中图分类】Q33目前实验室中所用的核酸染料主要有EB(溴化乙啶)、SYBR Green I和Goldview 等。

作为核酸染料它们对人体都存在一定程度的危害。

EB作为一种常规的核酸染料曾广泛的被应用于琼脂糖凝胶[1]和聚丙烯酰胺凝胶[2]中DNA与RNA的观察和检测，但EB是一种诱变剂，可插入核酸相邻碱基平面之间，引起基因突变，具有中等毒性，对人体有潜在的危害性[3]。

SYBR Green I是近些年新推出的一种荧光核酸染料，因其危害性较低而逐渐成为EB的替代品之一[4]，但ssDNA的检测灵敏度不高，效果不好，应用于DNA凝胶电泳中稳定性不高。

目前琼脂糖凝胶电泳中Goldview已被广泛使用，其染色效果和灵敏度与EB相近，且未证实有致癌性[5]，是EB较理想的替代品。

核酸染料安全操作及保养规程核酸染料是生物学实验中广泛使用的化学试剂，但其使用过程中需要特别注意安全操作和保养。

以下是关于核酸染料的安全操作及保养规程。

安全操作规程1. 佩戴个人防护装备在使用核酸染料前，必须佩戴个人防护装备，包括实验室常规的实验手套、实验服、护目镜和口罩。

这些装备可以有效地保护实验人员在操作时的安全。

2. 避免直接接触核酸染料必须避免直接接触皮肤、眼睛和呼吸道，也不能食用。

在使用前，应该阅读核酸染料的物质安全数据表（SDS）并按照要求操作。

3. 避免液体飞溅在使用核酸染料的过程中，应该避免液体飞溅。

为了避免此类情况发生，建议使用带盖的试管和离心管、用滤纸吸去冷却液或分离液上的余液、避免用力搅拌等。

4. 存储与使用环境核酸染料的保存与使用，需要满足相应的环境要求。

一般来说，应该存储在低温（-20°C）和干燥的地方，远离明火和热源。

5. 废弃核酸染料在使用过程中产生的废弃物应该按照相关标准进行处理。

废弃物通常应放入特定的废物容器中，以免对环境和人体健康造成危害。

保养规程1. 冰冻保存核酸染料得以长期保存的关键是冰冻保存。

在从高温环境中取出试剂后，应该尽量避免反复冷却和融化。

存储时应置于 -20°C 的冰箱中，保存时注意不要与空气接触。

2. 避免粘附核酸染料使用后，必须清理其容器并在温水中反复冲洗。

此外，在使用之前应确保试剂容器是干燥的。

避免在容器壁上形成固体附着。

粘附物可能对试剂、其他化学物质以及实验人员的安全产生影响。

3. 交替使用在使用核酸染料时，应该尽可能地避免交替使用同一支试剂。

为了防止多次开盖或多次洗涤容器，可以使用多个标签在容器上标记，将每支试剂和其对应的标签放在一起，以避免混淆。

4. 防水保护对于带有防水特性的核酸染料，需要注意不要破坏其防水性。

在使用过程中，应该保持容器的密封性和防水性，以避免试剂受潮而不能使用。

5. 管理使用期限核酸染料的使用期限应该严格管理。

SYBR GreenⅠ核酸染料（10000×）使用说明货号：SY1020规格：50/100ul保存：-20℃避光保存，有效期12个月。

产品简介：采用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺电泳方法检测双链DNA时，SYBR GreenⅠ是最灵敏的荧光染料，当其结合到核酸上时，会产生很强的荧光及高量子产额，DNA/SYBR GreenⅠ复合物的量子产额均为0.8。

由于与核酸结合后能产生很强的信号，背景极低，并且对核酸的亲和力高，因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。

SYBR GreenⅠ的最低检出限：20pg DNA(254nm);60pg DNA(300nm紫外透射)；此外，SYBR GreenⅠ还可以用于检测寡核苷酸(1-2ng,300nm紫外透射)，比EB灵敏20至100倍。

SYBR GreenⅠ用于电泳检测DNA时，既可预染，也可电泳后再进行染色。

SYBR Green Ⅰ用于琼脂糖电泳检测DNA后，可直接将DNA转移至膜上，进行后续核酸印迹杂交反应。

此外，SYBR GreenⅠ与DNA的结合对多种常用的限制性内切酶活性无抑制作用，可直接进行消化或连接。

使用说明：该产品使用方法同EB.点染法：用于琼脂糖凝胶电泳：取原液1ul加入TE缓冲液或灭菌双蒸水1ml，再加入6×DNA Loading buffer上样缓冲液1ml混匀，(此时溶液为1：2000稀释，即为工作液)电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后静置5min后直接上样。

胶染法：常规配置琼脂糖凝胶100ml，加热至融化，待温度将至50-70℃（感觉不烫手）加入该原液10ul。

待胶凝固后即可电泳，电泳结束后即可在紫外照射下观察。

注意事项：1.SYBR GreenⅠ应避光存放，原液保存于-20℃；建议分装冻存，短期可以4℃保存。

2.胶染法灵敏度较高，须将商品化的DNA marker稀释5-10倍后使用。

3.在预染色方法中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。

信噪比高的核酸染料的使用方法
要使用信噪比高的核酸染料，通常需要按照以下步骤进行操作：
1. 准备样品：准备用核酸染料染色的核酸样品。

可以是DNA、RNA或其他核酸。

2. 核酸染色：根据染料的使用说明，将核酸样品与核酸染料混合。

通常，核酸染料会选择性地与核酸结合，使其发出荧光。

3. 反应时间：根据核酸染料的说明，让核酸和染料反应一段时间，以确保充分的染色。

4. 洗涤：根据核酸染料的说明，将未结合的染料或其他杂质洗掉。

可以使用洗涤缓冲液、混悬液或洗涤剂等。

5. 显微镜观察：将染色后的核酸样品置于显微镜下观察。

通常，使用荧光显微镜或荧光成像设备可以更清晰地观察到核酸的荧光信号。

值得注意的是，不同的核酸染料在使用方法上可能会有所不同，因此请仔细阅读染料的使用说明，并按照指导进行操作。

此外，如果使用核酸染料在定量分析中，还需要根据实验需要进行稀释或标准曲线浓度调整等步骤。