GelRed-核酸电泳用染料
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环境安全、极其灵敏的核酸凝胶染色试剂GelRed&GelGreen-真正的EB替代者水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成环境污染。
G elRedTM和GelGreenTM是由美国 BIOTIUM 公司开发的两种集高灵敏度、低毒性和超稳定性于一身的,极佳的核酸凝胶荧光染色试剂。
目前,大多数商业化的核酸凝胶染色试剂总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不能完全令人满意。
例如,EB 作为使用最广泛的核酸凝胶染色试剂,能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度,但它是一种高诱变性的化学物质,且染色后背景荧光信号较高(图1)。
SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。
但 SYBR Green I尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。
SYBRsafe 被认为是市场上较为安全的核酸染料,但它的染色效果还远不及 SYBR Green I,且毒性依然较高(图3)。
GelRed和GelGreen无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色,都表现出了极高的灵敏度。
为配合312nm-UV凝胶成像系统而设计的GelRed,在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后(该试验步骤中使用稀释的NaCl溶液替代传统的TBE缓冲溶液),在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold。
但与SYBR Gold 不同,GelRed在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度。
我们新开发的GelGreen可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。
GelGreen 无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当,但不存在后者的稳定性问题。
实际上,GelRed 和 GelGreen ,特别是GelRed非常稳定,可以长期在室温下保存。
由于只需简单温和的物理方法(光照)激发和检测,荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。
这里的荧光核酸染料主要指能特异结合核酸并改变发光特性的化合物,DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料吧。
除了染胶,荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂,它们能以非共价键的方式与DNA/RNA结合从而显示原位杂交中的细胞背景信息。
根据它们能否穿透细胞膜进入活细胞体内,还可分为两大类:通透性核酸染料和非通透性核酸染料。
生物通在此简单比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。
分子生物学常用荧光核酸染料荧光核酸染料在分子生物学最常见的应用无疑是电泳凝胶染色,以及定量PCR。
EBEB(溴化乙锭)本身在紫外下不发光,能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。
因其廉价且灵敏度高,一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。
EB的使用非常简单方便,电泳结束后染色可获得最佳效果,也可以在制胶时加入进行前染。
前染有利于节约时间,但是易出现条带变形拖尾等问题。
EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂,且具有潜在的诱变作用。
虽说以前的实验室里总会有个别做起实验来“精神可嘉,行为可怕”的家伙,一时找不到手套他们敢徒手拿EB胶,但大多数人对EB还是“敬而远之”的,没事谁都不愿靠近实验室里跑胶、看胶那一块地方。
偏偏对于搞分子生物学的人来说,跑胶就像吃饭一样平常,于是大家只能硬着头皮天天和EB打交道,盼望EB的替代品早点出现在实验室。
生物通在此简单回顾一下这几年纷纷登场的EB替代品。
SYBR系列染料说到EB的替代物,首先想到的是Invitrogen旗下Molecular Probes专利持有的SYBR系列。
自1993年SYBR核酸染料推出以来,就因其灵敏度和易用性而迅速大受欢迎,成为明星产品之一。
这一系列包括4种染料:SYBR Safe、SYBR Gold、SYBR Green I和SYBR Green II。
DuRed(同GelRed)核酸染料(10,000× DMSO溶液)DuRed核酸染料特点● 无毒性:DuRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB。
● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
● 稳定性高:适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。
● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
● 操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
● 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
●与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的EB 滤光片或SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在300nm 紫外光附近可得到最佳激发。
但是DuRed不能被488 nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。
对于此类装置,我们推荐您使用DuGreen(Cat# 011或012),它和SYBR Green I的光谱相似,灵敏度相当,但更加稳定。
DuRed使用方法简介1.胶染法(用法同EB)(推荐方法)(1)制胶时加入DuRed 核酸染料(例如:每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL DuRed 10,000×储液,以此比例类推)。
(2)按照常规方法进行电泳。
注意事项:◆此方法染色染料用量相对较少。
500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。
◆由于DuRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。
摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。
常见核酸染料选择浅析(李路军河南农业职业学院植物科学系河南郑州450000)摘要:由于只需简单温和的物理方法(光照)激发和检测,荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。
DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料。
除了染胶,荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂。
下面比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。
关键词:核酸染料、EB、GeneFinder、Goldview、SYBER greenI、GelRed、GelGreen引言:作为生物体内的重要的大分子,核酸是研究生命现象与本质的物质基础,通过对它们的理化性质、复制与转录、表达与调控等的研究,可以了解生命有关的本质规律。
因此,对核酸的研究具有及其重要的意义。
但核酸肉眼不可见,对其的研究主要是借助一定的仪器来观察它的形态、大小、表达量,其中最常见的也是最简单的是琼脂糖凝胶电泳。
EB(溴化乙锭)是实验室最常用的核酸染料,有着简单、快速、灵敏度高的特点,但是由于其有着强烈的致突变能力和中度致癌性,对实验者和周围环境都有着较大的危害。
溴化乙锭(EB)是分子生物学实验室常用的一种核酸荧光染料。
但是,由于EB是一种强烈的致癌物,因此,如何消除EB对实验室的污染,是分子生物学实验室安全所必须面对的一个难题。
A bstract:Because only needs the simple temperate physical method(illumination)to stimulate and the examination,the fluorescent dye studies the biology microcosm is when specially the nucleic acid one of most commonly used tracing tools.After DNA electrophoresis,examines the gelatin EB is the fluorescence nucleic acid dye which probably the most person knew very well. Except dyes the rubber,the fluorescence nucleic acid dye may also use in the fluorescence home position hybrid taking the common counterstain.Following compares in the molecular biology experiment and the cytology experiment the commonly used fluorescent dye.Key word:Nucleic acid dye,EB,GeneFinder,Goldview,SYBER greenI,GelRed,GelGreenIntroduction:In the achievement organism's important macro-molecule,the nucleic acid is studies the biological phenomena and the essential material base,through to their physics and chemistry nature,the duplication and the duplication,the expression and the regulation and so on research,may understand the life related essence rule.Therefore,has and the vital significance to the nucleic acid research.But the nucleic acid naked eye is not obvious,is mainly draws support from certain instrument to its research to observe its shape,the size,the expression quantity,what most common is also the simple is the agarose gel electrophoresis.EB(bromination second grade spindle)is the laboratory most commonly used nucleic acid dye,has simply,fast,the sensitivity high characteristic,but because it has intense sends the sudden change ability and the moderatecarcinogenicity,has the big harm to the laboratory technician and the environment.Bromination second grade spindle(EB)is the molecular biology laboratory commonly used one kind of nucleic acid fluorescent dye.But,because EB is one kind of intense careinogen,therefore,how to eliminate EB to the laboratory pollution,is a difficult problem which the molecular biology laboratory security must face.1.EB核酸染料溴化乙锭(EB)是一种常规核酸染料,被广泛应用于观察、检测琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶中的DNA或RNA。
1.GeneFinder核酸染料GeneFinder是新型核酸染料,具有安全、灵敏等突出优点,可以代替溴化乙锭(EB)作为各种核酸电泳的染色剂。
与强致癌性的EB不同,GeneFinder毒性很低,使用安全,可有效保护实验操作者和环境。
GeneFinder与dsDNA结合荧光信号可增强800—1000倍,其检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右,与SYBRGreenI染料的灵敏度相当。
另外,该染料同样能引起有机体突变,在使用时候一样要采取适当的保护措施。
1.1.GeneFinder的特点:1. 安全性:GeneFinder核酸染料致突变性远低于EB数倍甚至数十倍2. 灵敏度:检测核酸的灵敏度平均高于EB染色法10倍左右3. 操作简单:本染料有多种使用方法,操作简单4. 适用范围:适用于多种核酸电泳分析,可以对DNA、RNA、及寡核苷酸等进行染色5. 兼容性:对常用酶(如Taq酶、逆转录酶、内切酶、连接酶等)没有抑制作用2.Goldview核酸染料GoldenView是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA时,GoldenView与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。
在100ml琼脂糖胶溶液中加入5-10µlGoldenView即可。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,也可用于染RNA。
无致突变性;而溴化乙锭EB是一种强致癌剂,选用GoldenView代替EB比较明智和安全。
目前尚未发现Geneview有致癌性,但是在使用中发现它有一定的刺激性,在使用过程中应戴上手套。
Goldview对于大片段DNA的染色效果还行,但是对于500bp以下的片段效果不是很好,还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭,一般5-10min条带就会消失。
所以应该抓紧时间拍照后再观察。
另外Goldview不适用于胶回收。
灵敏度差,本底色严重,不利于回收,不稳定。
核酸染料!EB?Gelred?你还有其他选择!EB替代品!你还只知道Gelred的吗?那么你已经out了!新型核酸染料强势来袭!本人郑重推荐两款全进口核酸染料有两个分类,全都是安全无毒的花青类的染料。
第一类:RS-138Safe DNA Stain(核酸安全染色剂)1经Ames-test测试,不透过细胞膜,安全无毒,美国认证;2与EB使用方法一致,灵敏度高,在紫外光及蓝光下均可观察实验结果,发出绿色荧光,效果好;3耐热,可加在缓冲液里,100℃溶解凝胶,防止染色剂没充分混匀;4电泳时染色均匀,靠近负极凝胶和靠近正极端的亮度一样;5稳定性好,不像EB、Goldview放久(一天)了会淬灭,电泳时间过长(>30min)会变暗;6含有Safe DNA Stain的琼脂糖凝胶在4℃可存放7天;7无毒性,不进入细胞内,是花菁染料成分;8EB替代品,与之使用方法一样,可前染,可后染第二类:Red/Green Safe DNA Loading Dye特色:1安全无毒(Ames-test污染物致突变性检测),可替代EB;2电泳时有3条指示带:蓝(4000bp),紫(300bp),黄(50bp),一般的只含有两种3无需添加额外的上样液,只需将本品与DNA按1:5的比例混合直接上样即可;4在紫色或蓝色荧光灯下均可视,条带清晰、明亮;5Red Safe DNA Loading Dye显示红色荧光,Green Safe DNA Loading Dye显示绿色荧光。
优势价格某公司gelred促销信息Table A.促销信息Cat#Product Name Unit Size Unit Price促销价品牌41001GelRedTM Nucleic Acid Gel Stain''3X in water 4.0L¥2411¥1326Biotium 41002GelRedTM Nucleic Acid Gel Stain''10''000X in DMSO0.5mL¥1176¥647Biotium 41003GelRedTM Nucleic Acid Gel Stain''10''000X in water0.5mL¥1235¥679Biotium 41003-1GelRedTM10''000X solution in water''bulk pack10mL¥19757¥10866Biotium 41004GelGreenTM Nucleic Acid Gel Stain''10''000X in DMSO0.5mL¥1058¥582Biotium 41005GelGreenTM Nucleic Acid Gel Stain''10''000X in water0.5mL¥1176¥647Biotium Table B.以下标签可以极好地配合以上产品使用:Cat#Product Name Unit Size Unit Price促销价品牌310211KB DNA Ladder(100ng/uL)30ug/300ul¥647¥517Biotium 31022Ready-to-Use1KB DNA Ladder150applications(1.5ml)¥764¥612Biotium创英生物产品价格:Catlog No.Product Name Size Official Price RS-138Safe DNA Stain Reagent0.5ml520RSG Green Safe DNA Loading Dye1ml780RSG-100Green Safe100bp DNA Loading Dye1ml Marker+1ml Dye860RSG-1KB Green Safe1KB DNA Loading Dye1ml Marker+1ml Dye860 RSR Red Safe DNA Loading Dye1ml780RSR-100Red Safe100bp DNA Loading Dye1ml Marker+1ml Dye860RSR-1KB Red Safe1KB DNA Loading Dye1ml Marker+1ml Dye860可以明显的比较出来,gelred的价格促销后的价格仍然比较贵,而此的两款产品价格比较亲民!欢迎大家选购!。
常用的核酸染料有哪些EB(溴化乙锭):溴化乙锭是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂,为强致癌诱变剂,但价格便宜。
它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。
EB的这种特性使其成为一种核酸染料,常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色。
溴化乙锭在紫外区302nm和366nm处有吸收峰,在紫外光的照射下,溴化乙锭可被激发出橙红色的荧光(590nm)。
结合有DNA的溴化乙锭复合物的荧光强度要比没有结合DNA的染料高出20-30倍,因此溴化乙锭可检测到少至10ng的DNA条带,非常灵敏。
Gel Green和Gel Red:GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
其特点有:高灵敏度:GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料之一;稳定性极好:可以使用微波炉加热,可以在室温下保存;更安全:艾姆斯氏试验结果表明,该染料的诱变性远小于溴化乙锭(EB);广泛的适应性:适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色;染色过程简单:与EB一样,在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗;对DNA 和RNA 的迁移影响小:对核酸迁移的影响小于SYBR Green 。
与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容:使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时,GelRed 可以完美的替代EB;使用254nm 激发的UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时,GelGreen 足以替代任意一种SYB染料。
但该染料会使小片段DNA迁移慢一些(与EB相比).Gold View I型/II型:Goldview对于大片段DNA的染色效果良好,但是在对于500bp 以下的片段效果不是很好,还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭,一般5-10min条带就会消失。
gelred核酸染料原理GelRed核酸染料是一种广泛应用于核酸电泳和凝胶成像的荧光染料。
GelRed核酸染料具有高灵敏度、高特异性和低毒性等优点,成为了生物科学研究中不可或缺的工具之一。
那么,GelRed核酸染料的原理是什么呢?GelRed核酸染料的原理主要基于其与DNA分子的相互作用。
DNA分子具有负电荷,而GelRed核酸染料则是一种阳离子染料。
当GelRed核酸染料与DNA分子接触时,它们之间会发生静电相互作用,从而使GelRed核酸染料能够与DNA分子结合。
这种结合过程通过静电相互作用和氢键等力的作用来完成。
GelRed核酸染料与DNA分子结合后,GelRed核酸染料的荧光特性会发生变化。
在自由状态下,GelRed核酸染料的荧光量子产率较低,荧光强度较弱。
而当GelRed核酸染料与DNA结合后,由于DNA分子的环境改变,GelRed核酸染料的荧光量子产率得到提高,荧光强度也会增加。
这使得我们可以通过测量荧光信号来检测和定量DNA分子。
GelRed核酸染料的特点之一是其高灵敏度。
GelRed核酸染料与DNA结合后,其荧光强度与DNA的浓度呈正相关关系。
因此,通过测量荧光信号的强度,我们可以推断出DNA的浓度。
而且,GelRed核酸染料具有低背景荧光的特点,这使得它能够在低浓度的DNA样品中提供清晰的荧光信号。
除了高灵敏度外,GelRed核酸染料还具有高特异性。
它对DNA分子有很强的亲和力,而对其他生物分子的亲和力较低。
这意味着GelRed核酸染料在染色过程中不会与其他生物分子发生非特异性结合,从而减少了假阳性的可能性。
GelRed核酸染料还具有低毒性的特点。
与传统的核酸染料相比,GelRed核酸染料对细胞和组织的毒性较低,可以在活细胞中使用。
这使得GelRed核酸染料成为了细胞和组织成像研究的理想选择。
总的来说,GelRed核酸染料的原理是基于其与DNA分子的相互作用。
通过静电相互作用和氢键等力的作用,GelRed核酸染料能够与DNA分子结合。
GelRed核酸染料(10,000×水溶液)
GelRed核酸染料特点
● 无毒性:GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB。
● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
● 稳定性高:适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳
定,耐光性强。
● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
● 操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟
且无需脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
● 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙
烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA 或 ssDNA 或 RNA 染色。
●无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的
普通紫外凝胶透射仪观察即可,在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。
GelRed使用方法简介
1.胶染法(用法同EB)(推荐方法)
(1)制胶时加入GelRed核酸染料。
每50mL胶中加入5μL GelRed 核酸染料。
(2)按照常规方法进行电泳即可。
◆注:此方法染色染料用量相对较少。
500 μL染料大约可以做100块50mL的胶。
当染料稀释
在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时可以使用微波炉加热,从而与通常制备预制凝胶的方法相同。
含有染料的预制凝胶可以成批制备,并可以长期保存直到使用。
2.泡染法
(1)按照常规方法进行电泳。
(2)用0.1M的NaCl水溶液按照3300﹕1的比例稀释GelRed浓缩液,混匀,制成3×GelRed染色溶液。
(例如:在45mL水溶液中加入5mL 1M的NaCl溶液及15μL10,000× GelRed水溶液。
)
(3)将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。
室温振荡染色30分钟左右,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。
聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。
玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
◆注:用泡染法染色时,染料用量较多。
单次制备的染色溶液可重复使用3次左右。
几种核酸染料比较
特别提醒:如果您使用的是紫外成像仪,请选择GelRed;如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测,请选择GelGreen。