德国拜发克伦特罗试剂盒

国内外克伦特罗ELISA检测试剂盒评价叶妮;刘智宏;郭文林;闫小峰;赵兵;张纯萍【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2002(036)010【摘要】根据B/Bo-50%抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加检验、实际样品检验等方面的比较结果对两种克伦特罗ELISA 检测试剂盒(A:中国兽医药品监察所研制,B:德国r-Biopharm公司研制)进行评价.结果表明,试剂盒A的50%抑制浓度低于1.0 nG/mL;检测范围在0.10～3.0 ng/mL 之间;标准溶液浓度梯度中包括1.0 ng/mL这一限定值;板内变异系数小于13.7%,板间变异系数小于8.8%;样品回收率在70%～110%之间;实际样品检验和试剂盒B 检样的阳性符合率为95.5%.试验证明,试剂盒A与试剂盒B的水平相当.【总页数】4页(P25-28)【作者】叶妮;刘智宏;郭文林;闫小峰;赵兵;张纯萍【作者单位】中国兽医药品监察所,北京,100081;中国兽医药品监察所,北京,100081;中国兽医药品监察所,北京,100081;北京市兽药监察所,北京,100012;中国兽医药品监察所,北京,100081;中国兽医药品监察所,北京,100081【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.ELISA检测盐酸克伦特罗残留的方法学评价 [J], 陈存社;吕会田;郭凤莲2.克伦特罗酶免检测试剂盒的评价 [J], 李相前;贺铁明;胥传来3.3种ELISA试剂盒检测盐酸克伦特罗效果评价 [J], 梁金华;罗惠玉;李艳荣4.盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒质量的评价 [J], 葛怀礼;王莲;李金卿;郑百芹;李爱军;张建民;董李学5.动物组织中盐酸克伦特罗残留ELISA检测试剂盒的研制 [J], 李平;潘荣生;周洪斌;肖震;方原民;宓晓黎;李利东;丁贵平;袁建兴;成恒嵩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

盐酸克伦特罗酶联免疫检测试剂盒使用说明书一、概要克伦特罗（clenbμterol，CLE）是一种 －肾上腺受体激动剂，此类药品在临床上用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。

因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。

人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。

我国农业部第235号文件规定不得检出。

本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。

二、测定原理本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗体。

检测时，加入标准品或样品溶液及克伦特罗酶结合物，他们竞争性地与克伦特罗抗体结合，形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。

三、试剂盒组成酶标板1块(包被抗克伦特罗抗体)标准液6瓶（1ml/瓶）：0、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb。

酶结合物…………………………7ml显色剂A …………………………7ml显色剂B …………………………7ml终止液…………………………7ml10×浓缩洗涤液…………………50ml说明书……………………………1份四、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂（1）设备……微孔板酶标仪(450nm)……振荡器……离心机……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl……容量瓶：100ml，500ml，1000ml（2）试剂……三氯乙酸……氢氧化钠……叔丁基甲醚色谱级……浓HCl……氯仿……磷酸……Tris……乙酸乙酯……乙腈五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都须注意：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

克伦特罗酶联免疫检测试剂盒(产品编号：CB1418)使用说明书一、试剂盒简介本试剂盒适用于组织、饲料及尿样内所含克伦特罗的定量测试。

试剂盒性能稳定，操作便捷，灵敏度高。

试剂盒包括以下内容：注：所有浓缩液均需稀释后使用，稀释方法见试剂制备及使用检测下限二、CB1418 克伦特罗试剂盒检测原理1、在可拆解成条状的酶标板上，已包被了克伦特罗特异性抗体。

2、标准液或样品中的克伦特罗会和酶标记物争夺酶标板上抗体的结合位点，形成抗体/抗原复合物或抗体/酶标抗原复合物。

3、洗涤酶标板，除去游离的酶标记物。

加上底物/发色剂。

在一定的温度范围内，抗体/酶标抗原复合物催化底物/发色剂发生显色（蓝色）反应。

加入酸后，反应终止，同时反应物的颜色由蓝色转为黄色。

4、颜色的深度与克伦特罗含量成反比。

在450纳米（nm）波长的酶标仪上，可读出相应的吸光度值。

三、样品制备（一）尿液样品制备尿样不用处理，清亮尿样直接测定（如果尿样有比较严重的浑浊，要过滤或离心直至得到清亮尿样）（二）组织样品制备（肝、肾、肌肉、视网膜）所需要的试剂：50mmol/L 盐酸：一般购买的浓盐酸为10mol/L，所以用蒸馏水按体积比1（浓盐酸）：199（蒸馏水）进行稀释即可500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：例如用6.8g磷酸二氢钾固体溶于100mL蒸馏水中，再用强酸调pH值到3.050mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：用500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释十倍，再检查pH值是否为3.01 mol/L氢氧化钠：例如用4.0g氢氧化钠固体溶于100mL蒸馏水甲醇(100%)：一般市场上购买的产品达到分析纯即可所需要的仪器：冷冻离心机：要有50mL的离心管和相应的转子均质器：要求转数在4000转以上样品前处理步骤：1.5g 粉碎的样品与25mL 50mmol/L HCL混合，振荡1.5小时，以达到均质的目的。

2.称6g均质物（相当于1g肝脏），加入离心瓶中3.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉）4.转移上清液到另一个离心瓶中，加300uL 1 mol/L氢氧化钠混合15分钟.5.加入4mL 500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液pH 3.0，简单的混合并在4O℃保存至少1. 5小时或过夜6.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉），分离全部上清液（应该是清亮的，非常重要），使其升至室温（20-25℃），然后用以下方法进行C-18柱纯化C-18 柱纯化方法：（1）用3mL甲醇（100%）洗涤柱子，流速为1滴/每秒（2）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒（3）样品进柱（肝，肉，或组织的全部上清液），流速为1滴/4每秒（4）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒（5）用正压去除残留的流体并且用空气或氮气吹2分钟干燥柱子（6）用1mL甲醇（100%）洗脱样品，流速为1滴/4每秒（7）在50-60℃并且在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇（8）用1mL蒸馏水溶解干燥的残留物进行分析注意:A.所有试剂和样品处理必须在室温条件下（20-25℃）并严格控制过柱时的流速B.在第（7）步中如果很难蒸发干甲醇，说明含有一定的水分，原因主要出在第（5）步中没有吹干柱子或甲醇本身有质量问题C.最后处理完的样品可能有黄色，属于正常现象，不影响以后的实验D.未处理的样品冷冻保存E.HCL均质后的样品在2-8℃稳定3天F.以磷酸二氢钾缓冲液提取后的样品（C18 柱纯化之前）在2-8℃稳定2天,使用前离心G.C-18 柱纯化步骤6所获得的甲醇洗脱物可以冷冻保存数周, 在2-8℃稳定2周视网膜样品应该采用以下方法快速抽提：1)称取0.1g视网膜，加入贴有标签的聚苯乙烯容器中或玻璃试管中。

克伦特罗检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3003一、概要:克伦特罗(Clenbuterol)，俗称瘦肉精，是一种β2兴奋剂。

能提高动物体内的瘦肉的比例，并加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，然而其会残留在动物体内，人类食用后会产生严重的副作用，轻则导致心跳及心率不正常，重则可引发心脏病。

目前，许多国家政府已明令禁止其使用于动物饲料中。

本公司研发生产的克伦特罗检测试剂盒的检测结果准确、稳定，可检测存在于动物的尿液、血清、血浆、组织(肌肉、心脏、肝脏等)、及动物饲料樣本中的克伦特罗。

样品前处理方式简单、方便，适用于各级政府食品安全检测机构、各类屠宰企业、肉类食品加工及饲料生产企业等。

二、检测原理:本试剂盒利用竞争酶联免疫方法，预先在微孔中包被羊抗兔抗体，实验时先后加入克伦特罗标准品，或待测样本，克伦特罗酶标抗原和兔抗克伦特罗抗体。

经过室温温育，反应液中的兔抗克伦特罗抗体与微孔板上的羊抗兔抗体结合，待测样品中的克伦特罗与克伦特罗酶标抗原竞争微孔板上的兔抗克伦特罗抗体。

洗涤后，没有与抗体结合的待测样品中的克伦特罗或酶标抗原被洗去，再加入反应底物，结合的酶标抗原的酶将底物转化为蓝色产物，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色。

反应完成后，样品中克伦特罗含量越多，反应呈色就越浅；反之，样品中克伦特罗含量越少，则呈色越深。

利用标准曲线可计算出样品中克伦特罗含量。

三、试剂盒提供试剂:1.羊抗兔抗体包被的微孔板:96孔。

2.克伦特罗参考标准品:0，0.05，0.25，1.00，2.50，5.00ppb (ng/ml);1.5ml/瓶，一套共6瓶。

3.克伦特罗酶标抗原试剂(1X):7ml/瓶。

4.兔抗克伦特罗抗体:7ml/瓶。

5.样品稀释液：100ml/瓶。

6.显色剂/底物：11ml/瓶。

7.反应终止液：11ml/瓶。

8.洗涤液(20X)：50ml/瓶，使用前稀释20倍。

四、其它试剂和仪器:1.试剂∙盐酸(5mM,10mM )∙氢氧化钠溶液(2.0M )2.仪器∙均质机(Ultra-turrax)∙微孔板酶标仪∙振荡器∙离心机∙氮气吹干仪或旋转蒸发器∙超声波破碎仪∙20µl,50µl,100µl,200µl,及1ml 移液器五、待测样品处理方法:1.尿液将样品在室温(18-25ºC)以4,000转离心10分钟后取上清液或者过滤后取滤液100克伦特罗检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3003μl,加入样品稀释液400μl （5倍稀释），用于下一步检测。