很多方法可用于测定血浆胆固醇和甘油三酯及脂蛋白成份。其中包括化学方 法和以高效液相色谱分析及液-气色谱分析法为基础的方法。然而这些方法一般 很费时, 并需用毒性化学物质, 需要很长的提取和清除过程。对临床而言, 以酶 学技术为基础的分析方法可能更适用。他们简单易行, 快速准确。易于自动化分 析, 多个厂家可生产所需的成套药盒。酶学法测定分析胆固醇和甘油三酯的原理 是:通过特殊氧化酶使底物生成过氧化氢, 然后经过氧化酶使他们结合成色原 (生色团)。因生色原生成量可用比色法进行测定, 所以产生的颜色与分析物的量 成比例。据此先绘出已知分析物量的标准曲线, 然后进行待测分析物的测定。
公司的 Wolfson 实验室全部使用"国家外部质控评估方案"; 在美国此项工作由" 疾病控制中心(Centers for Disease Control, CDC)"完成。他们通过提供已知 胆固醇和甘油三酯浓度的样本来对各实验室所测结果的可靠性进行定期评估。
二、 脂质测定的重复性和准确性 目前, 对于用于临床疾病研究的脂质(特别是胆固醇)分析的重要性已被进 一步受到重视。这是因为测量结果有细微的误差就会产生本质的差别而将病人归 于不同的治疗组。应该注意, 血清胆固醇值的生物学变异比实验室误差更为明显。 因此,不要把单次的测定值作为重要临床决策的依据。 根据美国国家胆固醇教育计划实验室标准化专家组(NCEP-LSP)的要求, 血 浆总胆固醇、甘油三酯和 HDL-C 的测定结果离靶值的偏差分别不得超过±3%、±5% 和±10%, 实验室间测定值的不精密度(CV)分别不得在于 3%、5%和 6%。
过氧化酶 2H2O2+4-氨基安替比林+4-氯酚────→亚胺醌+HCl+H2O 应注意到此反应式中甘油同时被测定。因此象糖尿病控制不佳引起高甘油三 酯血症的情况是潜在的误差来源。略去脂酯反应步骤的(空白)对照测定有助于消 除这一误差。 一、操作要点 (一)、不论是用于测定游离或总胆固醇和甘油三酯, 每个药盒都配有详细的 厂家说明。为了保证结果的准确性和重复性, 务必严格遵照操作规程。酯化胆固 醇为总胆固醇和游离胆固醇的差值。 (二)、分析的线性范围是有限的, 所测结果位于标准曲线之外的样本应用 0.15M NaCl 稀释并重新分析。这在高脂血症的血清样本尤其如此。在测总胆固 醇时或测甘油三酯前, 这些样本分别常规进行 1:3 和 1:4 的稀释。 (三)、分离的脂蛋白所含胆固醇和甘油三酯浓度的测定与血清中的胆固醇和 甘油三酯测定完全一样。将含脂蛋白成分的待测溶液用上述方法分析即可。但在 测定分离的脂蛋白中胆固醇和甘油三酯时可能会遇到两个问题: 1. 在某些脂蛋白中(如 VLDL)胆固醇和甘油三酯水平较低会导致测定不准 确。为解决这个问题, 可加入 TBHBA(2.4.5─3 溴─3─羟基苯甲酸)以加强颜色 反应。TBHBA 加入胆固醇颜色反应剂中, 使其混合浓度为 0.5%(W/V)而反应剂按 正常量配制。在进行测定时也要绘出同含 TBHBA 样本的标准曲线。 2.在测定由沉淀法制备的 HDL 样本中的胆固醇时, 沉淀法用的金属离子(特 别是锰离子)干扰胆固醇的氧化反应, 可通过在胆固醇测定试剂中加入 EDTA 来 解 决 这 一 问 题 。 通 常 是 在 试 剂 即 将 使 用 前 于 48ml 胆 固 醇 试 剂 中 加 2ml EDTA(4.17gNa2EDTA 和 3.54g Na3EDTA 溶于 100ml 蒸馏水中)。 (四)、为避免分析中的日常变化及保证结果的准确性和重复性, 在每组分析 样本中应设置几个样本(每 10-15 个待测样本中设 1 个质控样本), 作为组内对照 的已知胆固醇和甘油三酯浓度的质控血清有许多厂家提供。另外, 还有一系列外 部质控方案。Wellcome Diagnostics 公司制定的国际性方案; 在英国 Birmingham
