微生物鉴定系统

微生物自动化鉴定系统的工作原理微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。

数码分类技术集数学、计算机、信息及自动化分析为一体，采用商品化和标准化的配套鉴定和抗菌药物敏感试验卡或条板，可快速准确地对临床数百种常见分离菌进行自动分析鉴定和药敏试验。

目前自动化微生物鉴定和药敏分析系统已在世界范围内临床实验室中广泛应用。

一、微生物数码鉴定法早在七十年代中期，一些国外公司就研究出借助生物信息编码鉴定细菌的新方法。

这些技术的应用，为医学微生物检验工作提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序，大大提高了细菌鉴定的准确性。

目前，微生物编码鉴定技术已经得到普遍应用，并早已商品化和形成独特的不同细菌鉴定系统。

如API、Micro-ID、RapID、Enterotube和Minitek 等系统。

这种鉴定系统是自动化鉴定系统的基础。

(一)数码鉴定法基本原理数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式，给每种细菌的反应模式赋予一组数码，建立数据库或编成检索本。

通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字（编码），查阅检索本或数据库，得到细菌名称。

其基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。

随着电脑技术的进步，这一过程已变得非常容易。

1．简要介绍计算步骤：(1)出现频率（概率）的计算：将记录成阳性或阴性结果转换成出现频率：①对阳性特征，则除以100即得。

②对阴性特征，除以100的商被1减去即可。

③说明：对“0”和“100”，因这2个数太超量，为了使结果不出现过小或过大，而用相似值0.01或0.99值代替。

(2)在每一个分类单位中，将所有测定项目的出现频率相乘，得出总出现频率。

(3)在每个分类菌群中的所有菌的总出现频率相加，除以一个分类单位的总出现频率，乘100，即得鉴定%（%id）(4)在每个菌群中，再按%id值大小顺序重新排列。

将未知菌单次总发生频率除以最典型反应模式单次总发生频率，得到模式频率T值，代表个体与总体的近似值。

微生物鉴定系统安全操作及保养规程前言微生物鉴定是一项关键的工作，它需要高度谨慎的操作和精密的仪器保障。

为保证微生物鉴定系统的安全运行和维护设备的长期可靠性，制定安全操作规程和保养规程是至关重要的。

本文将从微生物鉴定系统的安全操作、设备保养、维护等方面进行详细的说明和讲解，以提高使用人员的工作效率和仪器设备的服务寿命。

安全操作规程微生物鉴定系统属于高精度仪器设备，因此在使用过程中需要特别注意以下事项：1.操作前请认真阅读用户手册，并按照操作规程正确操作仪器。

2.使用前请检查仪器外观，确认无破损、变形、松动等情况，并通知相关人员。

3.严禁在操作过程中进行任何的混乱、滑稽，严格按要求操作仪器，确保安全。

4.为了避免误操作和设备故障，操作人员应确保操作区域整洁清爽，设备周围不要放置杂物。

5.严禁在工作时进行抽烟、饮食等行为，家庭紧急情况，请尽量在非工作时间解决。

6.使用完毕后，关机、断电，清理好周边环境和操作平台，确保设备长期可靠性和安全性。

设备保养规程设备保养在设备使用寿命和工作效率方面至关重要。

本节将从设备清洁、零部件维护、运输、储存等方面对这些情况进行详细说明：设备清洁设备使用时间长，周边环境杂乱无章，难免会有锈迹、污垢等脏污物质；为了保证设备工作效率和长期可靠性，必须定期清洁设备。

1.清洁中请勿使用酒精、汽油、盐酸等有害化学物质，以避免对设备造成腐蚀等损害。

2.建议使用湿布、清洁剂、吸尘器、清洁棉等物品进行清洁，定期清洁机器内部、外部和周围环境。

3.清洁后，请勿颠倒设备、避免磨损和撞击。

零部件维护维护零部件是设备保养的重要环节之一。

因为，设备中零部件一旦出现故障，将会对设备的正常使用产生严重影响。

为了保证设备长期可靠性，建议注意以下维护细节：1.设备维护需由专业维护人员进行，不得随意拆卸、维修和更换零部件。

2.定期检查和更换机器内部部件、系统软件和硬件。

3.配件、工具、零部件、软件等存储在干燥、通风，无灰尘的环境中。

Biolog微生物鉴定步骤一检测原理Biolog微生物鉴定系统测试的是微生物在鉴定板中利用或氧化化和物的能力。

测试会产生特征性的紫色孔模式，组成代谢指纹。

所有必需的营养物质和生化试剂都预先加进96孔板中，四唑紫是一种氧化还原染料，指示碳源的利用情况。

.鉴定步骤非常简单，纯化分离到的菌株经扩大培养，再制成接种液加到鉴定板中。

在培养过程中，一些孔中的化学物质能被氧化并将显色物质成紫色，对照孔（A-1）和阴性孔仍然为无色。

鉴定板在相应的培养条件下培养4-6小时或16-24小时即可形成代谢模式。

系统软件自动和数据库对比，如果能找到合适的匹配，就可以得出一个鉴定结果。

二所需器材和消耗品：培养基、接种液、巯基乙酸钠、长棉签、接种棒、储液槽、八道移液器、移液器头、浊度仪、浊度标准品、控温培养箱和相应的鉴定板。

其中接种液自行配制，接种棒、储液槽可选用国产品牌代替。

三鉴定步骤：第一步：在用户自己的培养基上纯化菌株，如果菌株为冻干或冷冻样品，需要传代培养2-3代，让菌株恢复活力。

对纯化好的菌株做革兰氏染色，确定菌株是革兰氏阴性还是阳性。

观察菌落外部形态或用显微镜观察菌株形态，确定是酵母还是丝状真菌，是球菌还是杆菌。

如果是革兰氏阴性菌，还需要最终确认是肠道菌、非肠道菌或苛生菌。

方法是，氧化酶阳性或氧化酶阴性但三糖铁实验为K/K或K/A w，则该菌株为非肠道菌(GN-NENT)，氧化酶阴性以及三糖铁实验为A/A或K/A，则该菌株为肠道菌(GN-ENT)。

如果菌株①需要在巧克力培养基上或需要6.5% CO2培养，②在BUG+B培养基上生长非常差，形成针尖大小的菌落，那么可以认为这些菌是苛生菌(GN-FAS)。

大多数苛生菌都是从哺乳动物的呼吸道里分离出来的，如Actinobacillus, Alysiella, Brucella, Capnocytophaga, CDC Group DF-3, CDC Group EF-4, Eikenella, Haemophilus, Kingella, Moraxella, Neisseria, Simonsiella, Suttonella,和Taylorella。

微生物基因分型鉴定系统背景：分子生物学技术在近几年的迅速发展和普及，使得微生物学鉴定得以摆脱传统生化鉴定方法的局限，跨入新的历史进程。

较上世纪已经出现的生化鉴定法，基于分子生物学技术的微生物鉴定系统的优越性主要表现为：可鉴定的种属范围均大大扩展；可靠性和灵敏度显著提升；整体检测时间降低。

ThermoFisher 公司的MicroSEQ®自动微生物基因分型鉴定系统分型系统是目前技术最为成熟、应用最为广泛的基因分析鉴定系统，现已广泛应用在药品、食品及工业微生物的鉴定分析上，以下内容将对这一系统做更为全面的介绍。

2015版药典中指出，测序是微生物鉴定的最终解释方法1.在药品微生物鉴定领域的应用2008年度全球排名前25位的制药集团中，有22家集团已经将ThermoFisher公司的MicmSEQ®自动微生物基因分析鉴定系统用于其日常微生物检测中。

美国FDA在对生产无菌制剂和生物药品的指导性纲要《工业指南用无菌工艺生产的无菌产品一现行GMP》中更是明确提出“快速遗传类型测定方法被建议用于鉴别目的，因为这种方法已经证明比生物化学方法和表型技术更精确和准确。

”除美国之外，澳大利亚、日本及欧盟的药典中也已明确推荐使用基因分析的方法用于微生物的鉴定。

2.微生物鉴定基本原理:16S rRNA基因是伯杰氏手册(Bergey’Manual)细菌菌种分类的客观基础，也是DNA测序鉴定分型的基础。

MicroSEQ®微生物鉴定系统是专门为微生物测序分型所设计，结合最新的DNA测序技术、强大的分析软件，通过对细菌共有的16S rRNA基因进行自动化测序得到细菌鉴定结果；而对于真菌鉴定则通过对真菌26S rRNA基因上的D2基因片段进行测序。

3.检测平台：Applied Biosystems™基因分析仪以可靠性和值得信赖的结果为立足点。

作为Applied Biosystems™毛细管电泳(CE)基因分析仪产品系列的最新成员，SeqStudio基因分析仪同样基于这一理念，但同时又追求易用、易维护，易于存取和便于分享数据。

全自动微生物药敏鉴定系统操作规程1.开机确认仪器所接电源符合要求打开交流电源（AC）开关在ON的位置仪器按程序进行初始化。

仪器孵育转盘温度上升（约需要5-15分钟），以达到测试卡培养所需要的温度。

2.卡片选择◆鉴定卡GN：革兰阴性杆菌鉴定卡GP：革兰阳性球菌鉴定卡NH：奈瑟嗜血杆菌鉴定卡YST：酵母菌鉴定卡ANC：厌氧+棒状杆菌鉴定卡◆药敏卡AST-GN：革兰阴性菌药敏卡AST-GP：革兰阳性菌药敏卡AST-YST：真菌药敏卡3.配置菌悬液◆悬浮液：0.45% NaCL，PH 4.5-7.2。

每管中加入3ml 0.45% NaCl溶液◆菌悬液的配置：1)鉴定卡GN: 0.5 - 0.63 麦氏单位GP: 0.5 - 0.63 麦氏单位NH: 2.7 - 3.30 麦氏单位YST: 1.8 - 2.20 麦氏单位ANC: 2.7 - 3.30 麦氏单位2)2、药敏卡AST-GN: 3.0ml 盐水+ 145µl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液AST-GP:3.0ml 盐水+ 280µl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液AST-YST：3.0ml 盐水+ 280µl 1.8 –2.20 麦氏单位菌悬液4.上机操作流程◆18-24小时分纯细菌（新鲜菌）。

◆根据细菌先卡片（参照表一）◆使用前将卡片和盐水瓶从冰箱取出，放室温15-20分钟，充分复温。

◆在载卡架上放一次性塑料试管，每管中加入3ml0.45%NaCl溶液。

◆用比浊仪校正管(Ref 93059)校正比浊仪，测定的数值应在规定范围内。

◆按表一建议配制菌悬液，并用比浊仪测定菌液浓度。

◆将卡片按顺序放在载卡架上，输样管插入到菌液管中。

药敏卡应放在配对鉴定卡的后面。

◆进入仪器应用软件主界面，扫描载卡架条码（或者直接选取卡架号）。

扫描度卡条码，将鉴定试卡与药敏试卡链接，并输入标本信息。

5.结果处理◆鉴定卡的结果1)一般仅给出单一结果，无需进行补充试验，可给出结果的可信度评估。