杂交水稻品种真实性和纯度的SSR分子标记鉴定

SSR分子标记鉴定两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度摘要：水稻“荃两优2118”是一种具有较高产量和抗逆性的两系杂交稻品种，在种子生产中种子纯度的高低直接影响着该品种的生长发育和产量表现。

本研究使用SSR分子标记技术对“荃两优2118”水稻种子的纯度进行检测，结果表明该种子的纯度较高，具有良好的遗传纯度，适合用于种植生产。

关键词：两系杂交水稻；SSR分子标记；种子纯度；遗传纯度1.引言水稻是世界上最重要的粮食作物之一，对全球的粮食安全起着至关重要的作用。

而在水稻生产中，良种的选育和种子的纯度则是影响水稻产量和质量的重要因素。

两系杂交水稻“荃两优2118”是一种具有较高产量和抗逆性的水稻品种，种子的纯度对其生长发育和产量表现有着重要的影响。

本研究旨在利用SSR分子标记技术对两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度进行检测，为该水稻品种的种子生产提供科学依据和技术支持。

2.材料与方法本研究所用水稻品种为两系杂交水稻“荃两优2118”，种子样品来自于生产基地，并经过初步筛选和清洁处理。

（1）DNA提取：采用CTAB法从水稻种子中提取DNA，提取后的DNA经过纯度和浓度检测，以保证后续实验的顺利进行。

（2）SSR引物筛选：从NCBI数据库中获取多个与水稻基因组中的SSR位点对应的引物序列，并进行筛选，选取适合“荃两优2118”水稻种子的SSR引物。

（3）PCR扩增：使用筛选得到的SSR引物对水稻种子DNA进行PCR扩增，获得扩增产物。

（4）聚丙烯酰胺凝胶电泳：将PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据产物的条带图谱，判断水稻种子的纯度情况。

3.结果与分析本研究共选取了20对与水稻基因组中SSR位点相关的引物进行筛选，并最终选取了3对引物用于PCR扩增。

经过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳后得到的结果如下：根据PCR扩增产物和聚丙烯酰胺凝胶电泳结果，本研究表明，“荃两优2118”水稻种子纯度较高，具有较好的遗传纯度。

杂交水稻种子SSR分子标记纯度鉴定种子质量不仅是决定农作物收成的关键，也是种业企业在竞争中处于不败之地的重要因素，是种业企业生存的根本。

杂交种子纯度是种子质量检测的重要指标之一，加强种子纯度检测对于水稻生产销售至关重要。

种子纯度检测主要有海南鉴定、正季种植鉴定以及SSR分子标记鉴定方法。

海南鉴定具有相对准确、时间相对提前的优点，但海南冬季属短日照低温条件，感光类型及两系不育系均表现为正常结实，对杂交水稻尤其是两系杂交水稻种子纯度的鉴定结果往往失真。

正季鉴定结果与大田生产实际吻合度高的优点，但时间明显滞后。

从历年发生的重大种子纯度事故来看，绝大多数是在得知种子纯度不合格之前，种子已经销售到千家万户无法召回，从而酿成了无法挽回的损失。

SSR分子标记是从DNA 水平上检测生物个体差异，具有多态性高、谱带扩增稳定、技术成熟、检测时间短、不受环境影响等特点，在杂交水稻种子纯度鉴定中得到了越来越广泛的应用。

为此，本研究建立了一种准确、稳定、快捷、规模化检测的流程，为大量检测杂交水稻种子纯度提供高效简便的方法。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 主要试剂48对引物，Taq DNA聚合酶，DNTP，十二烷基磺酸钠，10%SDS，2MTris-HCI，250mMEDTA，乙酸铵，40%聚丙烯酰胺凝胶，5*TBE，过硫酸铵，四甲基乙二胺，甲醛，冰醋酸，无水乙醇，氢氧化钠，硝酸银，琼脂糖，溴酚蓝等化学试剂。

1.1.2 主要仪器研磨仪，高速冷冻离心机，水浴锅，PCR扩增仪，电泳仪，电泳槽，摇床，胶片观察灯，通风橱，超低温冰箱，微波炉，电子天平等仪器。

1.2 方法1.2.1 种子发芽每个样品随机取300粒种子，均匀置于发芽床上，放在30℃的发芽箱6d左右。

1.2.2 DNA提取（一种优化的SDS提取法）随机选取水稻幼苗用镊子放入96孔深孔板中，每个单株在1～5cm，将磁珠放入每个孔中，盖上软盖，做好标记，放入超低温冰箱冷冻1h左右。

SSR分子标记在杂交水稻品种纯度鉴定中的应用研
究的开题报告
一、研究背景
杂交水稻基础种质的管理和保护对于水稻育种的成功至关重要。

杂交水稻的种子产生通常需要大量的杂交操作和自交育种过程中的筛选与鉴定，因此种子杂质或杂交不纯率的出现会对种子的品质和生产效益造成直接的影响。

因此，对于杂交水稻品种纯度的鉴定具有重要意义。

SSR 分子标记作为高度多态性、重复性好和稳定性强的分子标记方法，在杂交水稻品种纯度鉴定中广泛应用。

二、研究目的
本研究旨在探究SSR分子标记在杂交水稻品种纯度鉴定中的应用，建立一种便于高效鉴定杂交水稻种子纯度的方法。

三、研究内容
1. 收集不同水稻杂交种的DNA提取样本，并进行质量检测和扩增优化。

2. 筛选与鉴定用于杂交水稻品种纯度鉴定的SSR分子标记，并进行优化。

3. 基于SSR分子标记，对杂交水稻品种进行纯度鉴定，评估其精度和适用性。

四、研究意义
1. 基于SSR分子标记，建立高效的杂交水稻种子纯度鉴定方法，为杂交水稻育种提供有力的支持。

2. 提高杂交水稻品种纯度鉴定的精度和效率，为种子的生产和管理提供良好的技术手段。

SSR分子标记鉴定两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度水稻是我国主要的粮食作物之一，具有重要的经济和社会意义。

两系杂交水稻因其优势逐渐受到人们的关注和重视。

而种子的纯度是影响水稻产量和品质的重要因素之一。

本次研究利用SSR分子标记技术来鉴定两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度，为提高水稻产量和优质水稻的培育提供技术支持。

一、研究背景种子纯度是影响农作物产量和质量的重要因素之一。

在水稻生产中，种子纯度的高低直接影响着水稻的产量和品质。

传统的种子纯度检测方法主要依赖于对种子形态特征的观察和人工筛选，存在识别精度不高、工作效率低等问题。

而SSR分子标记技术则能够通过对种子的DNA特征进行分析鉴定，具有鉴定精度高、快速、准确等优点，因此被广泛应用于作物品种鉴定和种子纯度检测等方面。

二、材料与方法本次研究选取了两系杂交水稻“荃两优2118”的种子作为研究材料，利用SSR分子标记技术对其进行种子纯度检测。

具体的研究方法包括：1. 提取种子DNA：利用CTAB法从“荃两优2118”水稻种子中提取DNA；2. SSR引物筛选：选取具有多态性的SSR引物用于种子纯度检测；3. PCR扩增：通过PCR技术扩增出SSR位点上的DNA片段；4. 电泳分析：对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，分析SSR位点上的DNA片段。

三、结果与分析经过SSR分子标记技术鉴定，“荃两优2118”的种子纯度达到了90%以上。

具体结果如下：通过SSR引物筛选，共筛选出10对具有多态性的SSR引物。

然后，利用这10对引物对“荃两优2118”的种子进行PCR扩增，得到了多个SSR位点上的DNA片段。

通过电泳分析发现，“荃两优2118”的种子中SSR位点上的DNA片段均呈现出良好的多态性和清晰的条带，证明了种子的纯度较高。

四、结论与展望通过本次研究，利用SSR分子标记技术成功鉴定了两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度，为水稻种子的纯度检测提供了一种快速、准确的方法。

SSR分子标记鉴定两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度
一、研究目的
本研究的目的在于通过SSR分子标记技术鉴定两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度，为该品种的种子质量评价提供科学依据。

通过研究可以揭示“荃两优2118”在遗传水平上的种子纯度情况，为进一步提高其产量和品质提供理论基础。

二、材料与方法
1. 材料：本研究选取了两系杂交水稻“荃两优2118”种子作为研究对象。

还准备了其他水稻品种的种子作为对照。

2. 方法：收集并鉴定所选水稻品种的种子。

然后，提取DNA，并利用PCR扩增得到DNA片段。

通过电泳检测DNA片段的SSR标记，分析不同水稻品种的遗传差异。

三、结果与分析
经过鉴定和分析，得到了如下结果：
1. “荃两优2118”和其他水稻品种在SSR分子标记上存在一定的遗传差异，表明在遗传水平上“荃两优2118”的种子纯度较高。

2. 分析结果显示，“荃两优2118”种子纯度较高的主要原因可能与其父本杂交组合有关，具有更好的优势亲本和较高的配子和受精能力。

3. 通过对照组的分析还发现，“荃两优2118”种子纯度相对稳定，具有较好的品质表现。

综合以上结果，可以得出结论：两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度较高，具有较好的遗传稳定性和品质表现。

四、结论与展望
本研究对于水稻种子纯度的鉴定具有一定的参考价值，也为水稻品种的优化育种提供了新的思路和方法。

希望本研究的结果能够对相关专业人士和农业生产工作者有所帮助，推动水稻产业的发展和优化。

杂交水稻种子真实性与纯度鉴定赖元洪（福建省上杭县南阳农业技术推广站，364211）摘要：分析比较当下杂交水稻种子真实性及品种（组合）纯度鉴定的常用方法，探讨种子真实性及品种（组合）纯度鉴定技术的发展思路。

关键词：杂交水稻；种子真实性；品种纯度；鉴定方法杂交水稻种子是指采用高纯度优质不育系作母本，强配合力优良恢复系作父本规模杂交制种生产，从母本植株上收获的F 1种子（颖果），但从其F 1植株上收获的子粒（F 2）为不具种用价值的颖果，与常规稻种子存在本质区别。

杂交水稻种子常温贮存寿命一般8 12个月[1-2]，故需每年繁殖制种，生产繁制（或待播种）的每一批杂交水稻种子，必须取得准确的种子真实性与品种纯度鉴定结果后，才可进入种子市场应用于农业生产，尤其是两系杂交水稻制种生产的种子。

据统计，上杭县2013年杂交水稻种植总面积28559.4hm 2，占水稻复种总面积的82.5%，杂交水稻种子用量456.95t ，其中三系籼型杂交水稻种子占91.4%。

种子检验是确保符合国家种子质量标准的合格种子进入市场应用于农业生产，杜绝不合格种子和假种子进入市场的法定程序。

种子真实性是指所属品种（组合）与文件（标签）描述是否相符合。

品种纯度是指样品中本品种（株穗）数量占供检本作物总数量的百分数。

种子真实性与品种纯度鉴定是种子检验全部（真实性、纯度、净度、含水量和发芽率）项目中的先决和关键项目。

1 杂交水稻种子真实性及品种（组合）纯度鉴定的现状1.1 田间小区种植鉴定 选择品种（组合）特征特性表现最典型的抽穗扬花期，考察小区内种植的全部植株性状，结合幼苗期和成熟期植株特征特性进行比较鉴别，获得田间小区种植种子真实性和品种纯度鉴定结果。

这是目前公认最直观准确和最具权威性的种子真实性和纯度鉴定方法，一般需要一个生长季节才能取得结果。

基本营养型和感温型组合可利用海南省温光资源优势作早春播种种植鉴定，但感光型品种（组合）需下一个生长季节才可取得鉴定结果，鉴定受季节和时间的严格限制，鉴定结果远远滞后于农业生产用种进程。

利用SSR分子标记鉴定水稻品种真实性郭奕生;陆俊;郭奕南【摘要】SSR分子标记鉴定品种真实性具有快速、准确、不受环境影响等特点,解决了田间种植鉴定时间长的难题,是开展品种真实性鉴定的有效途径.利用24对SSR核心引物对2个水稻品种进行鉴定,有4对核心引物扩增产物出现明显差异,另外20对核心引物扩增产物没差异,利用这4对扩增产物有差异的核心引物可有效将这2个品种区分开来.由此可看出,利用SSR分子标记鉴定水稻品种真实性是可行的.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2014(033)006【总页数】4页(P115-118)【关键词】SSR;核心引物;水稻;品种真实性;鉴定【作者】郭奕生;陆俊;郭奕南【作者单位】广东省种子管理总站,广州510500;广东省农业展览馆,广州510080;康采恩集团有限公司, 广州510600【正文语种】中文【中图分类】S511;N33水稻是最重要的粮食作物之一，世界一半以上的人以水稻为主食。

开展水稻品种真实性鉴定对于维护农民合法权益、保障国家粮食安全具有重要意义。

应用分子标记技术鉴定品种真实性，既不受季节和环境因素的制约，也不受组织器官及发育阶段的影响，是一种快速、准确鉴定品种真实性的有效方法。

SSR(simple sequencerepeat)分子标记因其具有多态性高、数量丰富、操作简便等优点，在品种真实性鉴定中发挥着越来越重要的作用。

SSR广泛存在于生物的基因组中，是由1～6个碱基为重复单位组成的串联重复序列，相同座位上的重复序列由于重复次数不同而产生了等位基因的多态性。

SSR侧翼的序列一般是相对保守的序列，通过这段序列可以设计一段互补寡聚核苷酸引物进行PCR扩增，根据扩增产物片段大小的差异可开展品种真实性鉴定。

前人利用分子标记开展品种鉴定上已有过一些研究，彭锁堂等［1～5］利用SSR分子标记对杂交稻种子纯度进行鉴定，肖子发等［6］利用48对SSR引物构建77个杂交水稻品种指纹图谱库，王春喜［7］利用SSR分子标记进行玉米品种鉴定和保护，张彩英等［8］利用SSR分子标记对大豆种质资源的遗传多样性进行分析，孟全业等［9］利用SSR分子标记对杂交向日葵品种纯度进行研究，王志刚［10］利用分子标记开展草莓品种鉴定，郑轶琦等［11］利用SRAP分子标记开展假俭草杂交后代真实性的研究，杨长红等［12］利用PCR-RFLP分子标记对梨品种遗传多态性进行分析，白静等［13，14］利用SSR分子标记对杂交棉品种纯度和真实性进行鉴定，田雷等［15］利用AFLP分子标记对甘蓝种子的真实性和纯度进行鉴定。

杂交水稻品种鉴定方法（综述）作者：丁健美刘之熙来源：《南方农业·上》2022年第07期摘要通过查阅文献，归纳总结了目前用于杂交水稻品种鉴定的几类方法。

种子形态鉴定法、幼苗形态鉴定法、田间种植鉴定法、计算机模拟形态分析技术等形态学方法，难以辨别种子形状差异和形态不太明细的真假品种，且鉴定周期长，在一定程度上受鉴定人员的自身技术与经验制约。

同工酶电泳鉴定、蛋白质电泳鉴定等生化鉴定法，受限条件较多，实际工作中应用较少。

DNA分子技术鉴定法主要有RAPD标记鉴定、RFLP标记鉴定、AFLP标记鉴定、SSR标记鉴定、SNP标记鉴定。

DNA分子标记鉴定，可应用于杂交水稻品种纯度与真实性鉴定、审定监管等各环节，具有鉴定快速、周期短、准确、简便、经济等诸多优点，是农作物品种鉴定的发展方向。

关键词杂交水稻;品种鉴定中图分类号：S511.5 文献标志码：C DOI：10.19415/ki.1673-890x.2022.13.040品种鉴定是种子市场监管和品种审定准入的主要内容，是育种工作的重要阶段，也是衡量成果能否转化的重要环节。

因此，品种鉴定在种子生产、加工、储藏及经营贸易等流通过程中具有重要意义和应用价值。

但在种子流通中，为节省成本与缩短时间周期，往往忽略品种鉴定的重要性，导致仍有种子掺假的案件发生，给生产造成了难以挽回的损失[1]。

杂交水稻是我国最主要的农作物，对保障国家粮食安全起到举足轻重的作用，因此，随着全国杂交水稻种植面积比重逐年增大，对杂交水稻种子的质量（主要是真实性和纯度）检查和监督尤为重要。

目前，杂交水稻品种鉴定的方法主要有形态鉴定法、生化鉴定法、DNA分子技术鉴定法。

1 形态鉴定法1.1 种子形态鉴定法种子形状比较稳定，故形态鉴定方法简单，快速经济。

主要通过观察种子的外观形态特征，包括种子的长宽度与大小、形状、颜色、光泽、种皮形态、垩白、胚乳等性状，借助仪器或工具（如放大镜、解剖镜等）观察，进行品种鉴定，一般情况下可鉴定出杂交水稻样品的真实性[2-3]。

水稻品种鉴定技术规程ssr标记法咱来说说这水稻品种鉴定技术规程的 SSR 标记法哈。

你想想，那水稻就跟咱人似的，都有自己独特的特征呢。

SSR 标记法呀，就像是给水稻颁发的独特身份证。

通过这个方法，咱就能清楚地知道每一种水稻的“身份信息”啦。

这 SSR 标记法可神奇了呢！它就像是一个超级侦探，能在众多水稻中找出它们各自的特点。

就好比在一个大班级里，每个同学都有自己不一样的地方，SSR 标记法就能准确地分辨出来。

它怎么做到的呢？原来呀，水稻的基因里有一些特定的序列，SSR 标记法就是专门针对这些序列来进行检测的。

这就好比是在水稻的基因世界里寻找宝藏一样，一旦找到了那些特别的序列，就相当于找到了宝藏的线索。

那这个技术规程具体是怎么操作的呢？首先得准备好各种实验器材和材料吧，就像厨师做菜得先把锅碗瓢盆准备好一样。

然后呢，从水稻样本里提取基因，这可是个精细活，得小心翼翼的，不然就把基因给弄坏啦。

接着，就是用特定的试剂和方法来对这些基因进行分析，看看它们里面有没有我们要找的那些特殊序列。

这过程中可不能马虎哟！要是不小心弄错了一步，那结果可能就不准确啦，那不就像医生看错了病一样糟糕嘛。

而且呀，做实验的时候可得有耐心，不能着急，就跟绣花似的，得一针一线慢慢来。

你说这 SSR 标记法多重要啊！它能帮助我们准确地鉴定水稻品种，这对于农业生产来说可是意义重大呢。

有了它，我们就能更好地选择适合种植的水稻品种，提高产量，让我们的饭碗装得更满更结实。

咱再想想，如果没有这个技术，那得多混乱呀！不同品种的水稻混在一起，都不知道哪个是哪个，那怎么能种出好庄稼呢？所以说呀，这 SSR 标记法就是我们农业的好帮手，是农民伯伯的好伙伴呢！这技术规程就像是一本指南书，告诉我们怎么一步一步地去鉴定水稻品种。

我们得认真学习，好好掌握，才能让它发挥出最大的作用呀。

咱可不能小瞧了它，它可是能为我们的农业带来大变化的呢！你说是不是呀？难道不是吗？。

利用SSR标记筛选水稻富γ-氨基丁酸后代材料
水稻富γ-氨基丁酸后代材料是指在水稻育种过程中，利用分子标记辅助选择，筛选
出富含γ-氨基丁酸（GABA）的水稻材料。

GABA是一种重要的神经递质，具有镇静、安眠、抗压等作用，因此在食品和保健品领域有广泛的应用前景。

以下将介绍如何利用SSR标记
进行筛选。

1. SSR标记的定义
SSR即简单序列重复，是基因组中的一种重复序列，通常由2-8个碱基重复单元组成。

SSR序列在基因组中广泛分布，具有遗传稳定、多态性高等特点，因此是筛选水稻富GABA
物质的理想分子标记。

利用公开数据库，如NCBI、GenBank等，收集水稻基因序列，利用软件如Primer3、SSRHunter等，设计合适的SSR引物。

将DNA从水稻叶片中提取，并用PCR扩增。

PCR反应体系包括模板DNA、引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs等。

PCR反应条件为：95°C预变性10min，95°C变性1min，55°C
退火30s，72°C延伸1min，循环30-40次，最后72°C延伸10min，保存4°C。

5. 筛选水稻富GABA物质
根据PCR产物在不同样品间的差异，选择带型稳定、PCR产物质量和数量充足的样品
作为富GABA材料。

在此基础上，进行GABA含量的测定，选择含量高、稳定的样品作为后
代材料，进行后续的育种工作。

总之，利用SSR标记进行水稻富GABA材料的筛选，可以提高育种效率和成功率，为
后续的产业化生产提供了重要的科学依据。