有关抗氧化能力分析

一、实验目的1. 探究玉米中的抗氧化成分及其活性。

2. 评估玉米提取物的抗氧化能力。

3. 分析玉米提取物的抗氧化机制。

二、实验材料与仪器材料：- 新鲜玉米（品种：黄玉米）- 无水乙醇- 超声波清洗器- 离心机- 721型分光光度计- 抗氧化活性测定试剂盒仪器：- 电子天平- 超声波处理仪- 恒温水浴锅- 移液器- 试管三、实验方法1. 玉米提取物的制备：- 将新鲜玉米去皮去须，洗净后切成小块。

- 使用无水乙醇对玉米进行超声波提取。

- 提取液经离心后得到玉米提取物。

2. 抗氧化活性测定：- 采用抗氧化活性测定试剂盒对玉米提取物进行活性测定。

- 依据试剂盒说明书进行操作，测定玉米提取物的抗氧化活性。

3. 抗氧化机制分析：- 通过自由基清除实验（DPPH自由基清除实验、超氧阴离子自由基清除实验等）和抗氧化酶活性测定（超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等）来分析玉米提取物的抗氧化机制。

四、实验结果1. 玉米提取物的制备：- 通过超声波提取法，成功制备了玉米提取物。

2. 抗氧化活性测定：- 玉米提取物的抗氧化活性测定结果显示，其DPPH自由基清除率可达70%以上，超氧阴离子自由基清除率可达60%以上。

3. 抗氧化机制分析：- DPPH自由基清除实验结果表明，玉米提取物对DPPH自由基具有较强的清除作用。

- 超氧阴离子自由基清除实验结果表明，玉米提取物对超氧阴离子自由基具有一定的清除作用。

- SOD、GSH-Px活性测定结果显示，玉米提取物能够提高细胞内SOD、GSH-Px活性，从而清除自由基，发挥抗氧化作用。

五、讨论1. 玉米中含有丰富的抗氧化成分，如多酚、黄酮类化合物等，这些成分具有清除自由基、抗氧化、抗炎等作用。

2. 通过超声波提取法，可以有效地提取玉米中的抗氧化成分，提高提取物的抗氧化活性。

3. 玉米提取物对DPPH自由基和超氧阴离子自由基具有较强的清除作用，表明其具有较强的抗氧化活性。

抗氧化剂测定方法的分类抗氧化剂是一类能够延缓或抑制自由基反应的物质，可以有效保护人体免受氧化损伤。

目前，针对抗氧化剂的测定方法主要可以分为化学法、生物学法和物理学法三大类。

下面将对这三类方法进行详细介绍。

一、化学法1.化学分析法：通过化学反应或反应产物的测定来确定抗氧化剂的含量。

常用的化学测定方法包括铁还原能力测定法、嗜氧性猝灭活性测定法、总酚测定法等。

这些方法的基本原理是抗氧化剂与氧化剂发生反应，通过反应后的色变、电流变化或物质的生成来测定抗氧化剂的含量。

2. 高效液相色谱法（HPLC）：是一种利用不同的色谱柱和溶剂系统来分离和测定抗氧化剂的含量的方法。

通常采用紫外-可见光（UV-Vis）检测器进行定量分析，根据抗氧化剂在特定条件下的色谱峰进行定量测定。

3.气相色谱法（GC）：是一种将样品中的抗氧化剂挥发成气态，然后通过气相色谱柱进行分离和测定的方法。

通常需要将样品预处理成蒸馏、萃取或衍生化产物，然后再进行气相色谱分析。

常用的检测器有质谱检测器、火焰离子化检测器等。

二、生物学法1.抗氧化酶活性测定法：通过检测抗氧化酶（如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等）的活性来间接测定抗氧化剂的含量。

这种方法的优势在于能够直接反映生物体内的抗氧化反应，但同时也受到许多因素的干扰，如样品的处理、温度、PH值等。

2.活性氧自由基测定法：通过检测氧自由基的产生或消失来测定抗氧化剂的活性。

常用的方法包括二苯基胺试验法、邻苯二酚试验法等。

这种方法的优势在于可以直接测定抗氧化剂对活性氧自由基的清除能力，但需要较为复杂的实验操作。

三、物理学法1.电化学法：通过利用电流和电势的变化来测定抗氧化剂的含量和活性。

常用的电化学方法包括循环伏安法、计时安培法等。

这种方法的优势在于测定灵敏度高、实时性强，但需要较为复杂的仪器和操作。

2.荧光分析法：通过测定样品中发生的荧光自发射和荧光猝灭现象来测定抗氧化剂的含量和活性。

常用的方法有荧光共振能量转移法、荧光强度比较法等。

机体抗过氧化能力指标
机体抗氧化能力指标是评估生物体对抗氧化应激的能力的指标。

抗氧化能力是指生物体对抗氧化应激的能力，包括清除自由基、修
复氧化损伤、维持氧化还原平衡等方面。

以下是一些常见的机体抗
氧化能力指标：
1. 抗氧化酶活性，包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）等酶的活性。

这些酶能够清
除自由基，减少氧化损伤。

2. 抗氧化物质含量，包括维生素C、维生素E、谷胱甘肽、类
胡萝卜素等抗氧化物质的含量。

这些物质能够中和自由基，减少氧
化损伤。

3. 氧化应激标志物，包括丙二醛（MDA）、羟基自由基（·OH）等氧化应激标志物的含量。

这些标志物的含量可以反映机体的氧化
损伤程度。

4. 抗氧化基因表达，包括抗氧化相关基因（如SOD、CAT、GPx
等基因）的表达水平。

这些基因的表达可以影响抗氧化能力。

5. 细胞膜的稳定性，包括细胞膜的流动性、渗透性等指标，稳定的细胞膜可以减少氧化损伤。

综上所述，机体抗氧化能力指标涉及到酶活性、抗氧化物质含量、氧化应激标志物、抗氧化基因表达以及细胞膜的稳定性等多个方面，通过综合评估这些指标可以全面了解机体对抗氧化应激的能力。

抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法法:铁离子还原抗氧化能力测定法[1]FRAP(ferric ion reducing antioxidant power)方法，在低pH值的溶液中，Fe3+-TPTz(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成有色的Fe2+-TPTZ。

反应的结果常以Fe2+当量或标准物质的抗氧化能力表示。

该法快速简便、易于操作、重复性好，但FRAP反应属于电子转移(SET)反应，因此FRAP方法不能够测定氢转移反应(HAT)起作用的物质。

而且该法实际测定的是待测生物活性物质将Fe3+还原为Fe2+的能力，因此没有抗氧化能力的生物学相关性。

法(trolox equivalent antioxidant capacity)ABTS(2,2'-amino-di(2-ethyl-benzothiazoline sulphonic acid-6)ammonium salt,2,2'氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐)与过氧化物酶和氢过氧化物在一起形成ABTS+阳离子自基。

在抗氧化剂存在时，这种自基混合物的光吸收值下降，下降程度取决于抗氧化剂的抗氧化能力，测得的结果以TEAC表示，即被测抗氧化剂清除ABTS·+的能力(吸光度大小的变化)与标准抗氧化剂trolox(VE的水溶性类似物)清除ABTS·+的能力的比值。

TEAC法十分简单，适用于大量样品的分析检测。

但是，ABTS·+并非生理自基，缺乏生理相关性，而且与FRAP方法相似，ABTS·+与不同抗氧化剂问的氧化反应时间不同，因此，只能定性不能定量评价样品的抗氧化能力。

法[2，3](2，2-diphenyt-l-picrylhydrazyl radical scavenging capacity) DPPH·(二苯代苦味肼基自基)法是较常用的方法之一。

DPPH·是一种稳定的以氮为中心的自基，其醇溶液呈深紫色,在517nm 处有一吸收峰。

超氧阴离子（O2-·）清除能力的测定
采用邻苯三酚自氧化法，略有修改。

25℃恒温条件下，在10mL容量瓶中依次加入pH为8.3的0.05mol/L Tris-HCl 溶液5.0mL，加不同浓度的样品液0.5mL，加入蒸馏水3.3mL，加入2mmol/L邻苯三酚0.2mL，总体积共9mL。

以二次蒸馏水作对照，邻苯三酚最后加入，迅速混匀后，测定A322，每隔1min测一次，直到反应后第5min，求斜率V。

VC和BHA做样品对照。

清除率K(%)=（V s-V）/V s×100%
式中：Vs——0.5mL蒸馏水与反应体系反应的速率
V——0.5mL样品液与反应体系反应的速率
羟基自由基（·OH）清除能力的测定
本实验采用羟基自由基试剂盒的方法测定。

原理：Fenton反应是最常见的产生羟基自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton产生的.OH量成正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与.OH的多少成正比关系。

抑制率K1(%)=（OD1-OD2）/ OD1×100%
式中：OD1——对照管吸光度
OD2——样品管吸光度。

1.3.5.3 抗氧化活性分析（1） DPPH 清除力1,1-二苯基-2-苦基肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ，DPPH ）是一种稳定自由基，在可见光区有特征吸收，利用其在可见光区吸光值的变化可以有效评价物质的抗氧化活性。

本实验分别取0.005 mL 、0.01 mL 、0.02 mL 、0.03 mL 、0.04 mL 的样品，加入蒸馏水稀释到0.2 mL ，加入3 mL 0.06 mM 的DPPH （溶于无水乙醇中），手动混匀，室温下避光反应0.5 h ，然后在517 nm 处测定其吸光值，设定无水乙醇为空白对照组，0.5 g/L BHA 为阳性对照。

DPPH 清除率计算如下：DPPH 清除率（%）=（1-A 样品/A 空白）×100%式中：A 样品——样品吸光值，A 空白——为对照组吸光值（2）还原力物质还原能力即以该物质将Fe 3+还原为Fe 2+的能力为衡量指标，该能力与抗氧化活性有关。

分别取0.05 mL 、0.1 mL 、0.2 mL 、0.3mL 、0.4 mL 、0.5 mL 的样品，用蒸馏水稀释至0.5 mL ，加入2.5 mL 磷酸盐缓冲溶液（0.2 M ，pH 6.6）和2.5 mL 1%（w/v ）铁氰化钾溶液，将混合物在50o C 反应20 min ，再加入10% 三氯乙酸（w/v ），4000 r/min ，离心10 min ，取上清2.5 mL 加入2.5 mL 蒸馏水和0.5 mL 0.1%铁氰化钾反应10 min ，在700 nm 处测定其吸光值，蒸馏水为空白对照，0.5 g/L BHA 为阳性对照。

（3）螯合力过渡金属离子Fe 2+可以催化活性氧自由基的形成及促进脂质的过氧化作用，从而对细胞和组织造成损伤，如果将这些金属离子耦合即可消除其催化作用，提高抗氧化活性。

分别取0.03 mL 、0.05 mL 、0.07 mL 、0.09 mL 、0.1 mL 样品用蒸馏水稀释至2.5 mL ，然后加入0.05 mL 2 mM Fe S O 4，0.1 mL 5mM 菲啰嗪溶液，反应10 min ，在562 nm 处测定吸光值，蒸馏水作为对照组，0.28 g/mL 的柠檬酸作为阳性对照。

抗氧化能力分析方法抗氧化能力分析方法是评估物质对氧化损伤的抵抗能力的一种方法。

氧化损伤是指由于自由基和其他氧化物质的作用而导致的细胞和组织的损伤，与许多疾病的发展有关。

抗氧化能力分析方法可以帮助我们了解物质的抗氧化能力，进而在食品、医药和化妆品等领域中的应用。

以下是几种常用的抗氧化能力分析方法：1.自由基清除能力分析法：自由基清除能力是物质对自由基的消除能力，常用的分析方法包括DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法和超氧阴离子自由基清除法等。

这些方法通过测定物质与自由基反应后的颜色变化来评估其抗氧化能力。

2.还原能力分析法：还原能力是物质还原氧化剂的能力，可以通过测定物质与还原剂反应后的颜色变化来评估。

常用的方法有铁还原能力法、铁螯合能力法和硫酸钼蓝法等。

3.抗氧化酶活性分析法：抗氧化酶是一类能够清除自由基和其他氧化物质的酶，包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽还原酶（GR）等。

通过测定这些酶的活性，可以评估物质对氧化损伤的抵抗能力。

4.氧化指标分析法：氧化指标是反映物质氧化损伤程度的指标，通常通过测定脂质过氧化产物、蛋白质氧化产物和DNA氧化产物等来评估。

常用的方法有TBARS法、氧化还原电位法和免疫学方法等。

5.细胞实验分析法：细胞实验可以模拟体内环境，通过测定细胞对氧化损伤的抵抗能力来评估物质的抗氧化能力。

常用的方法有细胞存活率测定法、DNA损伤测定法和细胞色素C释放法等。

综上所述，抗氧化能力分析方法有多种不同的方法，可以通过测定自由基清除能力、还原能力、抗氧化酶活性、氧化指标和细胞实验等来评估物质的抗氧化能力。

这些方法在食品、医药和化妆品等领域中的应用，有助于筛选和评估具有抗氧化性能的物质，为开发新的抗氧化剂提供科学依据。

正常人视网膜抗氧化能力的分析
人视网膜是视网膜结构中最薄的一层，最外层细胞薄达一个红细胞厚度，处于紫外线，热量，氧化物等影响下，容易受到损伤。

因此，抗氧化剂的作用在保护视网膜机能中起着
至关重要的作用。

抗氧化剂在眼睛中的作用主要有三个方面：首先，它能预防视网膜中多巴胺释放到外
界的过程；其次，它可以使细胞防止氧化应激；最后，它可以抑制视网膜衰老。

首先，抗氧化剂可以预防视网膜内多巴胺的释放过程。

大量的证据表明，细胞中的抗
氧化剂可以有效地减少多巴胺的释放，以减少视网膜的损伤。

此外，抗氧化剂还可以抑制
视网膜中多巴胺氧化而产生的毒性。

其次，抗氧化剂可以使视网膜细胞免受氧化应激的损害。

研究发现，抗氧化剂的抗氧
化活性可以有效抑制氧化应激所导致的细胞损伤，从而延缓眼睛的衰老。

总之，正常人视网膜的抗氧化能力对视力的保护是至关重要的，因此建议采取多种有
效措施，以保护眼睛的抗氧化能力，防止视网膜损伤，提高眼睛的整体健康状态。

此外，
人们可以通过科学饮食，合理用眼和充分休息等方式来改善视网膜的抗氧化能力。