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鸡抗猪瘟高免卵黄抗体的研制3边传周 邢 钊 李 明 于新和 藏金灿 任 敏 (郑州牧业工程高等专科学校基础部,河南450008)宋庆华 侯艳让 (河南省郑州市畜牧兽医工作站,450002) 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、接触性传染病。
近年来,尽管普遍对猪群用猪瘟兔化弱毒苗进行免疫接种,但免疫失败的现象时常发生,给养猪业造成了很大的经济损失。
为了找到一个治疗猪瘟的经济有效方法,我们开展了鸡抗猪瘟高免卵黄的研制。
1 材料与方法111 试验动物:186日龄罗曼商品蛋鸡,杜洛克仔猪均由郑州牧业工程高等专科学校微生物学教研室饲养。
112 疫苗及毒株 猪瘟兔化弱毒苗由农业部郑州生物药品厂生产;石门系猪瘟强毒购自中国兽药监察所。
113 免疫方法11311 基础免疫 进行二次,第一次每羽肌注猪瘟兔化弱毒苗5头份,7天后,第二次每羽肌注猪瘟兔化弱毒苗10头份。
11312 加强免疫 基础免疫后10天,进行加强免疫,每次间隔10天,共进行3次。
第一次每羽肌注猪瘟血毒2m l,第二次注215m l,第三次注3m l。
114 猪瘟高免血清 由郑州牧业工程高等专科学校微生物学教研室研制,用正向间接血凝试验检测猪瘟抗体效价在1∶32以上。
115 高免卵黄抗体监测 在最后一次免疫后15天,随机取5枚高免蛋,无菌抽取蛋黄各3m l,分别用等量pH712PB S混匀,然后各加入6m l的氯仿,室温下感作30m in, 3000r m in离心20m in,分成三层取上清液分别作猪瘟正向间接血凝实验,检测猪瘟抗体效价。
收集效价在1∶32以上的蛋作高免蛋。
116 高免卵黄抗体制备 用1%新洁尔灭消毒蛋壳,在无菌条件下收集卵黄,置组织捣碎机中用3000r m in匀浆1m in,加等量灭菌生理盐水搅匀后分装于灭菌玻璃瓶中,加青霉 3河南省教委自然科学基金资助研究项目,编号:97230018 收稿日期:1998210211素、链霉素各2000I U(Λg) m l进行常规安全性和无菌检验。
鸡传染性法氏囊高免卵黄IgY抗体不同提取方法的比较郭素琴;吴凤笋【摘要】In order to improve prerention and control of infectious bursal IgY effect of infectious bursal,comparison of different purification method on the high IBD yolk antibody titer of effection. Preparation of hyper-immune eggs and determination of the titer,in the lab, four methods were used for extraction high-yolk antibodies and determination of the titer. They were direct centrifugation, acidfied water extraction, chloroform extraction method and polyethylene glycol method. The results showed that self-prepared yolk antibody titer was 1 : 64, direct centrifugation antibody titer was 1: 128, acidfied water extraction antibody titer was 1: 16, chloroform extraction method antibody titer was 1 : 256, polyethylene glycol method antibody titer was 1 ' 32. The results showed that after using titer chloroform extraction method, the highest titer detected, chloroform extraction method was a common method of clinical extracted antibody.%本试验旨在提高鸡传染性法氏囊卵黄抗体防制鸡传染性法氏囊的效果,比较不同提纯方法对鸡传染性法氏囊高免卵黄抗体效价的影响.制备高免蛋并测定其效价,在实验室通过直接离心法、酸化水提取法、氯仿提取法、聚乙二醇法4种方法分别对高免卵黄抗体提取及抗体效价检测.试验结果表明,自制卵黄抗体效价为1 ∶64;直接离心法的抗体效价为1∶128,酸化水提取法的抗体效价为1∶16,氯仿提取法抗体效价为1∶256,聚乙二醇法的抗体效价是1∶32.试验结果显示,使用氯仿提取法后检测的抗体效价最高,是临床提取抗体的常用方法.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)007【总页数】3页(P238-240)【关键词】法氏囊;高免卵黄;抗体提取;效价检测【作者】郭素琴;吴凤笋【作者单位】郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州 450011;郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州 450011【正文语种】中文【中图分类】S852.4+3传染性法氏囊炎（inf ectious bursal disease，IBD）一直是危害中国禽业的主要传染病之一。
家禽科学２００６．０４从２００５年夏季以来，因为传染性法氏囊病毒野毒毒力增强，鸡舍消毒不严，环境卫生控制差，疫苗选取和使用不当，种鸡免疫程序不合理使雏鸡母源抗体低下等诸多因素导致育雏鸡发病，而且在全国较大范围内雏鸡和肉仔鸡发病呈蔓延和上升趋势。
在治疗时滥用高免卵黄抗体或使用劣质高免卵黄抗体无治疗效果，更有多次因卵黄抗体污染导致鸡只死亡的病例出现。
笔者将多年来对本病的预防和控制经验做一总结，并介绍一下高免卵黄抗体的制作方法，供大家参考。
１鸡传染性法氏囊病的发病原因分析、诊断要点和治疗方法１．１发病的主要原因分析１．１．１强毒力和超强毒力野毒的存在养鸡场、鸡舍等环境强毒力或超强毒力传染性法氏囊病病毒野毒的广泛存在以及近几年中等毒力疫苗株的广泛使用，使鸡只的免疫压力增强，经常出现对弱毒力疫苗的不应答。
同时中等毒力疫苗株在鸡群使用后还出现毒力返强现象，如果鸡舍环境消毒不严，极易导致强毒力野毒的大量存在。
这是本病发生的主要原因。
１．１．２消毒不严是发病的另一重要原因养鸡场没有建立良好的消毒程序，特别是育雏鸡舍空舍后没有进行彻底清洗、冲刷和熏蒸消毒。
鸡粪和鸡毛清除冲刷不干净，再消毒不严，羽毛和粪便存留病毒，一批发病后极易造成同一舍的批批发病。
如果鸡场对粪便和路面环境消毒不严，会导致鸡场内每个鸡舍都发病。
有的肉鸡场鸡舍在空舍后从来不进行福尔马林和高锰酸钾的熏蒸消毒，因消毒不严大大增加了传染性法氏囊病的发病机会。
在饲养过程中若不经常带鸡消毒，该病的发病机会也增多。
所以，必须经常进行带鸡喷雾消毒、饮水消毒和清粪后的地面和粪盘消毒。
１．１．３疫苗选用和免疫方法不当应选用质量好的国产疫苗或进口疫苗，一般情况下蛋雏鸡和肉仔鸡要免疫两次，两次间隔１周或１０ｄ。
如果两次都选用国产弱毒苗或都选用进口的中等毒力疫苗，发病机会也会加大，临床上这种情况发病较多。
选用疫苗以适用和免疫效果好、不发病为原则，国产质量好的疫苗也很好。
滥用进口中等毒力疫苗不仅不能防止发生本病，而且如果两次都使用进口中等毒力疫苗时容易造成法氏囊的破坏，更容易继发新城疫、肾型传染性支气管炎、大肠杆菌病和败血支原体病等。
抗传染性法氏囊病高免卵黄抗体的使用温建新 沈 敏 钟发刚 王新华 (新疆农垦科学院畜牧兽医所,石河子832000) 法氏囊病(I BD)是鸡的一种急性病毒性传染病,在临诊实践中,使用抗I BD高免卵黄抗体来防治法氏囊病有一定效果。
在此,对抗I BD高免卵黄抗体的使用及注意问题,提出以下几点想法。
1 应用111 用于I BD预防 卵黄抗体是经2～3次主动免疫后,采集高免蛋经过一定制作工艺而生产出生物免疫增强剂,抗体通过琼扩实验测定具有较高的免疫效价,对I BDV有很好的针对性。
可以说,高免卵黄抗体可起到预防I BDV感染的被动免疫作用。
由于3～6周龄的雏鸡对I BD最易感,3周龄之前的鸡群接种I BD疫苗免疫应答往往不理想,可试行在14日龄注射抗I BD高免卵黄抗体,预防期达10～15天,2周后再接种I BD疫苗,,鸡舍定期消毒,这样可有效地避免I BD的发生。
112 用于I BD病鸡的治疗 对于已感染I BDV的鸡群,高免卵黄抗体能较好地阻止I BDV对雏鸡免疫器官的病理组织学损伤,并促使其再生和修复。
试验证明:抗I BD高免卵黄抗体经皮下或肌肉注射入机体,吸收扩散到全身,直接中和体内I BDV,起到了被动免疫作用,见效快。
对发生I BD的鸡群,及早给每只鸡皮下或肌肉注射1～2m l抗I BD 高免卵黄抗体,如果并发其它疾病,可同时对症治疗,总有效率在95%以上。
凡对发生I BD病鸡早期使用抗体者,一般用后2～3天鸡群停止发病,比其它药物治疗降低死亡率714%左右。
2 易出现的问题211 多种鸡病病原体抗原在母体内、胚胎形成过程中进入鸡蛋内而垂直传播,如鸡白痢杆菌、支原体、鸡传染性贫血等。
而目前国内用于制造高免卵黄抗体的鸡群一般都不是SPF鸡,因而就有可能携带通过胚胎传递性的鸡病病原。
即使在卵黄抗体中添加了一定 收稿日期:1998209206浓度的防腐剂和抗生素,但这对病毒是无作用的。
因此某些垂直传播性病原体随抗体的使用而迅速传播的危险是存在的。
卵黄抗体的制作卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。
目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。
制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。
待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。
卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。
是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。
保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。
这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。
沉淀系数7S，分子量160000-180000，含糖2.5%。
现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。
具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。
由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。
卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。
卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。
卵黄抗体的制作 This manuscript was revised by the office on December 10, 2020.卵黄抗体的制作卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。
目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。
制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。
待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。
卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。
是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。
保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。
这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。
沉淀系数7S，分子量，含糖%。
现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。
具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。
由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。
卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。
卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。
卵黄抗体的制作卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。
目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。
制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。
待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。
卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。
是母体血液中小分子抗体IgG 通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。
保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。
这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。
沉淀系数7S，分子量160000-180000，含糖2.5%。
现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。
具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。
由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。
卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。
卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。
鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备和检验鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备和检验【实训目标】（1）学习和掌握卵黄抗体的制各方法。
（2）学习和掌握卵黄抗体的检验方法。
【实训材料】1、材料（1）抗原与血清：鸡传染性法氏囊强毒油乳剂灭活苗；传染性法氏囊病毒阴、阳性血清。
（2）动物：4～8周龄SPF鸡或4～8周龄健康鸡、健康产蛋母鸡及其所产蛋；小鼠。
（3）主要器材；超净工作台、恒温箱、高压锅、离心机、微量加样器、平皿、酒精灯、烧杯、吸管、玻棒、三角瓶、纱布、记号笔、碘酒棉、酒精棉、镊子、1～5ml注射器和pH 试纸等。
2、试剂0.2%～0.5%新洁尔灭、5%碘酊、75%酒精、灭菌生理盐水、青霉索、链霉索、氯仿、琼脂糖；鲜血琼脂平板、马丁肉汤和厌氧肉肝培养基等。
【内容与方法】（一）鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备1、高免鸡蛋的准备选择SPF或临诊健康产蛋鸡，每只皮下或肌肉注射鸡传染性法氏囊强毒油乳剂灭活苗1ml，一般免疫2～3次，每次间隔10～14d，待卵黄抗体的琼脂扩散实验（AGP）效价达1：128以上即可收蛋。
收集所产蛋，置4℃冰箱保存（不宜超过1周）。
2、卵黄抗体的制备收集一定数量的高免蛋后，用0 2%～0.5%的新洁尔灭或高锰酸钾水溶液洗净蛋壳表面，再用5%碘酊消毒，最后用75%的酒精脱碘两次。
在无菌条件下打开蛋壳，分离卵黄，将卵黄移至无菌量杯或有刻度的烧杯中，加入等量灭菌生理盐水混合。
粗制卵黄抗体：将生理盐水与卵黄的等量混合物，加青霉素、链霉索、硫柳汞，使其终浓度分别为1 000IU／ml、100ug／ml和0.01%.充分搅拌。
—20℃储存备用。
（二）卵黄抗体的检验1、理化性状粗制卵黄抗体：鲜黄色，冰冻溶解后有少量卵黄沉淀。
2、无菌检验取高免卵黄抗体0.2ml，分别接种于鲜血琼脂平板、马丁肉汤和厌氧肉肝培养基，37℃培养48h，均应无菌生长。
3、安全检驻用体重18-22g小鼠5只，每只皮下注射本品0.5ml；用14日龄SPF雏鸡5只，每只皮下注射本品10ml；观察l0d小鼠和雏鸡均应全部健活。
专利名称：超强毒传染性法氏囊病毒高免蛋黄抗体制备方法专利类型：发明专利
发明人：詹丽娥,刘华栋,陆冰洋,王采先,唐娟,詹海杰
申请号：CN201310042001.8
申请日：20130127
公开号：CN103172733A
公开日：
20130626
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种超强毒传染性法氏囊病毒(vvIBDV)高免蛋黄抗体制备方法，通过走访不同地区养殖场，对发病鸡群采样、病原的分离培养、设计引物扩增vp2基因序列、利用鉴定、分型、回收、测序方法和技术将扩增产物与国际上超强毒株固有特征进行比对，确定其属于超超强毒株。
利用我们分离的超强毒传染性法氏囊病毒株，研制高免蛋黄抗体治疗剂，来治疗鸡群感染超强毒传染性法氏囊病。
本发明提供的超强毒传染性法氏囊病毒高免蛋黄抗体制备方法，采用高免技术制备高免蛋黄抗体，接种于传染性法氏囊病的鸡群，使鸡群在短时间内产生传染性法氏病病毒抗体，在24小内中和体内的法氏囊病毒，达到治疗的目的。
申请人：山西省农科院畜牧兽医研究所
地址：030032 山西省太原市小店区平阳南路150号
国籍：CN
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