六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)

G M S-六胺银-真菌GMS –六胺银- GROCOTT'S改良法目的：鉴别真菌。

原理：真菌细胞壁的粘多糖成分被氧化形成醛基。

醛基与硝酸银反应，再将银还原成可见的金属形式。

对照：含有真菌的组织。

由曲霉病和肺结核病的组织块是首选的。

固定：10%甲醛技术：4-5m石蜡切片。

设备：酸清洗玻璃器皿，染色缸，微波炉。

试剂：2% 铬酸：三氧化铬Chromium trioxide 10.0 gm蒸馏水Distilled water 500.0 ml混合溶解，保存期6个月。

警告：腐蚀性酸，可能致癌，避免接触和吸入。

1% 偏重亚硫酸钠Sodium Metabisulfite:偏重亚硫酸钠Sodium metabisulfite 5.0 gm蒸馏水Distilled water 500.0 ml混合溶解，保存期6个月。

5% 硼砂：四硼酸钠Sodium borate 5.0 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml混合溶解，保存期6个月。

六胺银备用液：3% 六亚甲基四胺Methenamine(四氮六甲圜hexamethylenetetramine)100.0 ml5% 硝酸银Silver nitrate 5.0 ml混合，盛于酸清洗过的棕色瓶中，冷藏，保存期3个月。

警告：腐蚀性，可能致癌。

工作液：六胺银备用液Stock Silver Methen. 25.0 ml蒸馏水Distilled water 25.0 ml5% 硼砂Borax 2.5 ml使用前新鲜配制，用后丢弃。

0.5%氯化金：氯化金Gold chloride 0.5 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml混合溶解，盛于酸清洗过的瓶中，冷藏，保存期1年。

警告：避免接触和吸入。

0.2%亮绿：亮绿Light green SF yellow. 0.2 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml冰醋酸Glacial acetic acid 0.2 ml混合溶解。

改良六胺银染色在肾活检病理诊断中的应用
郑洁;叶田;杜园园;陈银凤;汤绚丽
【期刊名称】《浙江临床医学》
【年(卷),期】2024(26)4
【摘要】目的探讨改良六胺银染色方法在肾组织活检病理中的应用价值。

方法随机选取2020年9月至2022年3月80例确诊的肾活检病理穿刺标本(IgA肾病20例,膜性肾病20例,糖尿病肾病20例,微小病变20例)。

采用硫代氨基脲改良六胺银染色法,并与常规六胺银染色法进行比较。

结果采用改良六胺银染色法,肾小球基底膜及肾小管基底膜的染色强度均提升;且不同疾病、不同部位染色强度差异有统计学意义(P<0.05)。

结论采用改良六胺银染色法,能提升染色的敏感性和特异性,具有方便、快捷、可靠等特点,适合临床应用。

【总页数】3页(P569-571)
【作者】郑洁;叶田;杜园园;陈银凤;汤绚丽
【作者单位】浙江中医药大学附属杭州市中医院
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.六胺银加马松三色双重染色在肾穿刺活检组织中的应用
2.改良六胺银套马松三色染色在肾穿刺活检组织染色中的应用
3.自控微波技术在肾穿刺活检六胺银染色中
的应用4.六次甲基四胺银染色法在肾穿活检中应用5.肾穿刺活检组织病理诊断中六胺银染色的改进
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

单纯固定液甲醛：能固定类脂和脂类，但必须冷冻切。

也可固定高尔基体、线粒。

是糖的保护剂。

体除去甲醛色素的方法：Verocay法，乙醇配氨水；Schride法。

重铬酸钾Zenker，Helly，Maximov，Regaud。

苦味酸：易燃易爆，强酸，糖类；可以软化皮肤，易于切片。

不宜用火棉胶包埋。

70%乙醇中加浓氨水去除固定产生的黄色。

三氯醋酸：SUSa液的主要成分，使蛋白沉淀，良好的脱钙剂。

升汞：针状结晶，组织收缩明显。

不能固定类脂和糖类。

可固定蛋白，固定后需用碘液脱汞乙醇：固定兼有脱水作用，糖原的固定，纤维蛋白和弹性纤维固定。

浓度80-95%。

醋酸：固定染色体，清楚的显示细胞核，但组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白。

铬酸避光保存。

不能固定脂肪。

固定后流水冲洗大于24h。

饿酸延长固定时间，脆性增加，对染色不力。

1%高锰酸钾脱碘，固定后流水冲洗12-24h。

丙酮：酶组织化学。

丙酮对组织块的收缩作用强于乙醇，对糖原无固定作用。

异丙醇：是乙醇良好的替代品，组织收缩小，硬化作用较弱；不能再用于火棉胶的包埋。

叔丁醇：脱水后可不经透明，直接浸蜡。

电镜标本中常用作中间脱水剂。

环氧己烷：不引起组织收缩和硬化，常用于植物标本制作，价格贵。

四氢呋喃：既是脱水剂，又可以作为封片溶媒。

环己酮：代替乙醇作脱水剂和随后的浸蜡和包埋。

混合固定液B-5固定液：固定淋巴组织，配方无水醋酸钠-升汞-甲醛，染色前脱汞处理；Muller液：媒染和硬化神经组织，需常更换液体，固定作用缓慢。

Bouin液：结缔组织比较差。

不适宜长期固定（12-24h）。

固定后组织被染成黄色需用70%-80%乙醇洗涤。

Orth：胚胎，神经，脂肪均可。

需在暗处固定24h。

Carnoy液：胞质和胞核，染色体，糖原保存，尼氏体；不能保存脂类。

Helly固定液：含有氧化剂和还原剂，临时配制，久置失效。

PFG：肽类抗原固定，用于免疫电镜研究。

PLP和PLPD（含有过碘酸钠）Rossman：Zenker固定液：形态学研究常用固定液。

病理制片技术——常用特殊染色一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。

2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。

3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。

4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。

(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。

二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。

2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。

3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。

(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。

(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。

三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。

・232•临床与实验病理学杂志J CCc Exp Pathnl2261Feb；37(6)网络出版时间：2061-6-2217/0网络出版地址：httyi：//dus.vski.ueW9cms/deWiU34.1073.R.40610222.1667.025.html提高Grocott六胺银染色质量的几点细节陈世梁，吴文川，胡莎莎，卢志承关键词:六胺银染色;改良;真菌中图分类号:R446；R379文献标志码：B文章编号2001-7302(2241)06-0632-06dol:10.18314/ju cud/cjcep.4061•06•026真菌感染是临床上较常见的感染性疾病,部分真菌感染病灶和炎症、结核、肿瘤病灶难以鉴别，常用G/ch t六胺银染色检测组织中的真菌来确诊。

近年来由于环境恶化和广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂的广泛使用，以及临床上侵入性操作的普遍开展，使人体抵抗力下降，导致真菌感染性疾病日益增多。

因此,G/ch t六胺银染色检测真菌的应用越来越广泛，这就需要更高质量的染色效果。

为提高染色质量，本文对传统方法进行了改良,在实践工作中取得了比较满意的效果,现介绍如下。

1材料与方法H材料选取海南省人民医院送检真菌感染的活检标本29例,其中肺4例，鼻部4例,扁桃体3例,淋巴结3例，足6例，肝-例，角膜-例。

所有标本均经4%中性福尔马林固定，常规取材、脱水、透明、浸蜡、包埋。

1.4主要仪器GZX-GF-MBS电热恒温鼓风干燥箱，购自上海跃进医疗器械公司;LEICA CM2225切片机，购自德国徕卡公司;樱花VIPA脱水机，购自日本。

1.3试剂及配制(1)六胺银原液:将5%硝酸银5mL加接受日期:2020-09-22作者单位:海南省人民医院病理科，海口577311作者简介：陈世梁，男，副主任技师。

E-mail：cyebshikagl68@ 迈新二□技术交流入到3%六次甲基四胺40mL内，即形成白色沉淀,慢慢摇动至沉淀溶解变清，用棕色瓶装3t保存5]。

、概述真菌是指具有真正细胞核、产生孢子、不含叶绿素，以寄生或腐生方式吸取养料，能进行有性和(或)无性繁殖，具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。

真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、TB、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X线照射；免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件．近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转为致病真菌。

因此，真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。

真菌分为浅部真菌和深部真菌。

浅部真菌：主要侵犯机体皮肤，寄生和腐生于表皮，毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病，简称癣病。

临床最多见的浅部真菌病有：体癣、股癣、手癣和足癣。

深部真菌：指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.；按生物学性状的不同又分为：酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。

深部真菌常见的有：念珠菌，隐球菌，组织胞浆菌,马尔尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌,孢子菌丝等。

二、常见真菌的形态特征真菌的大小差异悬殊，大者如碗口，不属微生物范畴，例如灵芝；小者肉眼看不到，只能用显微镜观察。

真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型，单细胞真菌呈圆形或卵圆性，常见于酵母菌和酵母样菌；多细胞真菌多呈丝状，分枝交织成团，也称为丝状菌，即一般通称为霉菌。

三、真菌的基本结构真菌由菌丝和孢子构成。

孢子是真菌的生殖结构，分为有性孢子和无性孢子。

在适宜条件下，菌丝是由孢子生出芽管，逐渐延长呈丝状，生物学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。

四.真菌的染色方法真菌用H-E染色一般着色不良，因此需用特殊的染色方法来显色，六胺银法（GMS）用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。

PAS法用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。

号为鲜红色。

本组实验对两种不同显色方法进行对比，结果示DAB显色操作比较简单，室温下即可显色，显色时间较快；显色后切片可用二甲苯透明，切片较干净，组织透明度较好；透明后用中性树胶封固，可较长时间保留切片，一般不会掉色；AEC显色颜色比较鲜艳，背景比较淡，敏感性和表达部位显色效果较好。

相比之下，DAB显示的颜色比较暗，背景颜色比较重，敏感性和表达的部位不如AEC显色效果好；DAB有致癌性，使用时务必有防毒意识和防毒措施。

而AEC显色需在37ħ烤箱中进行，不利于对显色结果进行判断；显色后不能用二甲苯进行透明处理，影响切片的透明度和清晰度；使用水溶性封片剂或甘油等封片不利于切片的长期保存，需及时观察、采集图像并进行统计学分析。

两种显色剂和显色方法各有优缺点。

文献［1］报道DAB和AEC两种显色剂易受以下因素影响，如组织固定（固定液的温度、pH值和不同组织）、制片过程（浸蜡温度、包埋温度、烤片温度）、IHC染色过程（如抗原修复的方法、时间、温度、pH值，封闭内源性过氧化物酶的方法、步骤等）和ISH染色过程（如酶蛋白消化的时间、探针的敏感度）等，这些因素对染色结果影响很大。

Graham等［2］研究发现使用氧化物酶组织化学的显色剂，可以使显色时间持续更久。

上述两种显色方法对IHC和ISH显色结果进行有效区别，若实验中仅采用其中一种方法时，DAB显色是首选，如果同时选用两种技术进行科学研究时，建议一种技术选用DAB显色，另一种技术选用AEC显色，因为DAB显色结果为棕黄色，EAC显色结果为红色，两种不同的显色颜色有利于操作人员进行视觉鉴别，避免混淆。

在今后的工作中，我们建议实验操作人员要从习惯采用DAB显色逐步实践或过度到采用AEC显色，将更有利于环保和健康。

参考文献：［1］熊正文，李春光，丁华野，等．影响免疫组化敏感性反应的因素分析及对策［J］．中国组织化学与细胞化学杂志，1999，8（2）：236－9．［2］Graham R C，Jr Karnowsky M J．The early stage of absorption of injected horseradish peroxidase in the proximal tubules of mouse kidney：ultrastructural cytochemistry by a new technique［J］．J Histochem Cytochem，1966，14（4）：291－302．肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改良吕增华，张杨杨，朱玉红关键词：肾穿刺活检；六胺银染色套染Masson染色法中图分类号：R446文献标志码：B文章编号：1001－7399（2012）11－1289－02肾穿刺活检是目前诊断肾小球肾炎最可靠的手段，在肾脏穿刺活检病理诊断中，六胺银染色套染Masson染色［1］能精确显示病变肾小球内各种免疫复合物的形态与定位，对诊断肾小球疾病起着至关重要的作用。

ICS65.020.30B44中国实验动物学会团体标准T/CALAS x-201x 实验动物六胺银染色方法Laboratory animal-Methenamine silver stain method（征求意见稿）201x-xx-xx发布201x-xx-xx实施中国实验动物学会发布前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。

本标准由中国实验动物学会归口。

本标准由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281）技术审查。

本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。

本标准主要起草单位：浙江大学动物科学学院、浙江省医学科学院。

本标准主要起草人：吴旧生、刘月环。

实验动物六胺银染色方法1范围本标准规定了实验动物组织切片六铵银染色方法。

本标准适用于实验动物组织中细菌、真菌和肾小球基膜等多糖成分的病理检测。

2基本原理利用氧化剂氧化细菌和真菌内的细胞壁内的粘多糖等成分而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。

同理，肾小球基膜内含有一些多糖成分，易于被氧化露出醛基而被染色。

3主要试剂3.11%过碘酸溶液，4℃可保存一个月。

3.2六氨银工作液。

5%硝酸银水溶液 2.5ml5%四硼酸钠水溶液 2.5ml3%乌铬托品水溶液12.5ml蒸馏水12.5ml先将蒸馏水与乌铬托品水溶液混合在一起，再加入硝酸银水溶液，此时将呈现乳白色，搅拌后即可消失，加入四硼酸钠水溶液后，即可使用。

3.30.1%氯化金溶液。

3.45%硫代硫酸钠溶液。

3.50.5%亮绿溶液。

4实验步骤4.1切片经二甲苯5min*2、无水乙醇5min*2、95％乙醇5min*2、85％乙醇5min、70％乙醇5min完成脱蜡。

脱蜡后自来水洗5min。

4.2加入1%过碘酸水溶液中作用10min。

自来水洗，然后蒸馏水洗二次，每次3min。

4.3六氨银液预热至65℃，切片放入其中浸染75min，蒸馏水洗二次，每次3min。