液相色谱法

高效液相色谱法在药物分析中的应用与进展

摘要：主要介绍了高效液相色谱法在药物鉴别、药物杂质检查、药物含量测定等方面具体应用以及展望了高效液相色谱法在药物分析中的应用前景。

关键词：高效液相色谱法；HPLC；药物分析；联用技术

Abstract: Mainly introduced the high performance liquid chromatography in drug

discrimination, drug impurity test, determination of the content and concrete

application and the prospect of the high performance liquid chromatography in

pharmaceutical analysis application prospect.

Keywords: high performance liquid chromatography，HPLC ,pharmaceutical

analysis，hyphenated techniques

引言：

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。HPLC在国内和国外的药物分析领域的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来HPLC方法越来越受到重视。HPLC

液相色谱

――Waters液相色谱应用技术研讨会

高效液相色谱法是在60年代末期，从气相色谱和经典液相色谱的基础上发展起来的新型分离、分析技术。从分析原理来讲，它和经典的液相色谱没有本质的差别，但是由于它采用了新型的高压输液、高灵敏度检测器及高效微粒固定相，从而使经典的液相色谱得到更高的的灵敏度、更好的分离效率。

对于任一种色谱分析仪器来说，它的作用是：让我们将样品利用色谱系统，通过检测获得数据，得到我们所要的信息，最后做出决定。我们都知道，仪器对样品的分析有定性与定量分析两种。定量分析的准确性与方法的关系密切，定量分析的精度与仪器的关系密切，数据的精度好坏直接影响对数据的可信度，即对程度的“认可”程度。由此可见为了获得好的决定，必须对仪器及分析方法提出更高的要求。

为了使高效液相色谱的分析充分发展，就必须对高效液相色谱的准确度、精度、重现性和线性提出更高的要求。那么，如何来提高液相色谱系统的数据精度呢？高效液相色谱作为一种分析仪器，主要由贮液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置所组成。从仪器的结构，我们可知高压输液泵和色谱柱是提高精度的关键。

高效液相色谱，顾名思义，就是以液相为流动相。首先，如何得到稳定平稳且重现性好的流速是使色谱分析稳定的关键。因为整体性质检测器，检测从色谱柱中流出的流动相总体物理性质的变化情况。如折光指数检测器（RID）和电导检测器（ECD），它们分别测定柱后流出液总体的折射率和电导率。此类检测器测定的灵敏度低，必须用双流路进行补偿测量；易受温度和流量波动的影响，造成较大的漂移和噪声。此外，有效的流速范围和流速的重现性是进行定量和定性分析的重要条件。输出流动相必须是连续的、恒流量的，但是如果流量产生波动，基线就容易产生波动，就难以进行定量分析。为了解决以上问题，Waters设计了一种带有非圆齿轮的泵，充分利用两泵头非线性运动所产生的加速度变化进行流量及压力的交叉互补。全新设计的溶剂输送系统包括独立控制的柱塞，串联流路及一个双压力传感器反馈回路，因而提供平稳、精确的等比和梯度操作。

高效液相色谱法

高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。

1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱的内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10um。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2um）填充剂的耐超高压、小进样器、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

（1）色谱柱

反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的内径与长度，填充剂的性状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值得检验操作规程 - 2 -

流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。

高效液相色谱法

1 简述

高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵人装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离侧定的色谱方法。注人的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进人检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1.1 对仪器的一般要求

所用的仪器为高效液相色谱仪，由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。色谱柱内径一般为3.9～4.6μm，填充剂粒径为3～10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度的高效液相色谱仪。

1.1.1 色谱柱

反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物符合硅胶和聚合物等；常见的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。

离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氛基键合硅烷和氨基键合硅烷等)也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂;分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂;对映异构体的分离通常使用手性填充剂。