正相液相色谱法

第八章- 1 - 第八章 高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatograph)

第一节 概述（Generalization）

以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。HPLC是20世纪70年代初发展起来的一种新的色谱分离分析技术。具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）的特点，适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的分离分析。

HPLC基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、或数据处理系统记录色谱信号再进行数据处理而得到分析结果。

高效液相色谱法按固定相不同可分为液－液色谱法和液－固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液－液色谱）和吸附色谱法（液－固色谱）等。目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，具有固定液不易流失的特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。C18（ODS）是最常使用的化学键合相。

根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。

《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用HPLC法，在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。

一、 高效液相色谱法的特点

目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采用脱机或非连续检测。经典LC填料缺陷，通常是填料粒度大、范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻力大，谱带展宽加大。它存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。HPLC填料（高效固定相）颗粒细、直径范围窄、能承受高压。达到传质阻力小，分离效率高。早期HPLC的固定相用涂渍的方法制备，液膜厚度df大，这和GC一样，会大大降低色谱柱的柱效。现代HPLC填料大多采用键合固定相，其固定相膜很薄，因而大大提高了柱效。高效固定相会带来什么新问题呢？使用高效填料带来两个新问题：一是柱流动阻力大大增大，因此需要采用高压泵输液；二是表面能很大，要采用专业的装柱技术。

色谱基础和HPLC的常用术语

1、气相色谱法（GC）—gas chromatography用气体做为流动相的色法。

2、气液色谱法（GLC）—gas liquid chromatography 将固定液涂在载体上作

为固定相的气相色谱法。

3、气固色谱法（GSC）—gas solid chromatography 用固体（一般指吸附剂）

作固定相的气相色谱法。

4、程序升温气相色谱法—programmed temperature gas chromatography 色谱

柱按照预定的程序连续地或分阶段地进升温的气相色谱法。

5、反应气相色谱法—reaction gas chromatography 试样以过色谱前、后的反

应区进行化学反应的气相色谱法。

6、裂解气相色谱法—pyrolysis gas chromatography 试样经过高温、激光、

电弧等途径，裂解为较小分子后进入色谱柱的气相色谱法。

7、顶空报相色谱法—haed （应为head -编者注）space gas chromatography d

在密闭的容器中与液体（或）固体）试样处于势力学平衡（应为热力学平衡 -

编者注）状态的气相组分，是间接测定试样中挥发性组分的一种方法。

8、毛细管气相色谱法—capillary gas chromatography 使用具有高分离效能

的毛细管柱的气相色谱法。

9、多维气相色谱法—multidimensional gas chromatography 将两个或多个色

谱柱组合，通过切换，可进行正吹、反吹或切割等的气相色谱法。

10、制备气相色谱法—preparative gas chromatography 用能处理较大量试样

的色谱系统，进行分离、切割和收集组分，以提纯化全物的气相色谱法。

11、 色谱柱：chromatographic column内有固定相用以分离混合组分的柱管。

12、 填充柱：packed cklumn （应为column-编者注）填充了固定相的色谱柱。

- 1 - 正相液相色谱法

正相液相色谱法（LC）是一种理想的检测技术，它可以用于分离、鉴定和测定各种有机物或非有机物在任何体系中的组分。简而言之，正相液相色谱法是一种分离技术，它通过将被测物质进行分离，以确定它们的组成，可以用它来测定各种物质的组成，这种方法由许多类型的仪器组成，如摇床、流变机、色谱柱、检测器等。

正相液相色谱法的机理基于物质在不同溶剂中的溶解性差异，可以利用固定体积的流体（溶剂）来将溶剂内物质分离开来，这样就可以分离出想要测定的物质，这种分离的机制是利用物质的溶解性差异而实现的。

LC的原理可以分为两部分：一部分是物质的迁移，即物质在溶剂中的迁移，另一部分是物质在色谱柱中的分离，即将物质在色谱柱中的迁移和分离相结合。

LC的物理原理在于物质的溶解性差异。与其他方法相比，LC的最大优势在于它可以在低温条件下对物质进行分离，因此它可以检测有机物和非有机物。此外，LC还可以检测体系中的复杂物质，如蛋白质、多糖、脂肪、等。

LC的应用非常广泛，它可以用于化学分析、药物评价、食品安全和环境监测等多个领域中。例如，在化学分析领域，LC可以用来检测有机组分，比如芳香族化合物、氨基酸、酶、抗药物等。在药物评价领域，LC可以用来测定抗肿瘤药物、药物代谢组分、抗感染药物、血液分析仪测定等。在食品安全监测领域，LC可以应用于检测 - 2 - 食品添加物、化学污染物、营养成分等。在环境监测领域，LC可用来检测水体中的有害物质，如铅、镉、氰化物等有毒物质。

正相液相色谱法是一种非常有效的分离技术，它在化学分析、药物评价、食品安全和环境监测等领域中发挥着重要的作用。它的原理是利用物质的溶解性差异，将溶解于不同溶剂中的物质分开，以确定它们的成分。此外，LC仪器对用户友好，它可以实现高灵敏度、高精度、低成本等，这使得它在多种领域得到广泛应用。总之，正相液相色谱法是一种十分有效且可靠的分离技术，它在许多领域中发挥着重要作用。

正相反相高效液相色谱法的定义

正相液相色谱法（Reverse Phase Liquid Chromatography，简称RPLC）是一种液相色谱分离技术，它利用非极性或弱极性的固定相和极性的流动相进行分离。在正相液相色谱法中，固定相是疏水性的，而流动相是极性的，这与传统的正相色谱相反，因此称为“正相相反”。这种技术常用于分离极性化合物，如蛋白质、药物、生物分子等。

正相液相色谱法的定义可以从以下几个角度进行解释：

1. 工作原理，正相液相色谱法利用固定相和流动相之间的亲疏水性相互作用来实现样品分离。样品在流动相的作用下通过固定相，不同成分因其与固定相的亲疏水性不同而在固定相中产生不同程度的滞留，从而实现分离。

2. 应用领域，正相液相色谱法在生物化学、药物分析、环境监测等领域具有广泛的应用。例如，在药物分析中，可以用于分离和鉴定药物成分；在生物化学中，可以用于分离蛋白质、核酸等生物大分子。

3. 优点和局限性，正相液相色谱法具有分离效率高、分析速度快、对样品的要求较低等优点，但也存在固定相易受污染、不适用于分离非极性物质等局限性。

总之，正相液相色谱法是一种重要的液相色谱分离技术，通过固定相和流动相之间的亲疏水性相互作用实现样品的分离，具有广泛的应用前景和理论研究价值。