铁皮石斛原球茎生长分化及生根壮苗研究
- 格式:pdf
- 大小:187.83 KB
- 文档页数:4
铁皮石斛组织培养研究进展1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6,改良N6,MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6,White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响,除残外,所有的基本培养基均优于其减半培养基,其中以N6最好,SH 、Kn 、MS 次之,l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养,得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。
罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响,30d 种子发芽率均达到95 % ,但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。
1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发,浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长,过高起抑制作用。
2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大,当浓度超过1mg/L 时,对胚萌发和成苗起抑制作用。
ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用,但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量,浓度以0.5mg/L为最佳。
1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发,但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响,干扰其正常发育过程。
1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭,可以吸附代谢过程中产生的废弃物,防止组织褐变,并刺激胚胎的发生与生根,可加人2 %蔗糖。
曾宋君等在改良N6+NAA 0.2mg/L 的最适培养基上,发现以白糖、片糖为炭源时,胚萌发和成苗的效果比蔗糖好,这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS,MS等作为基本培养基。
不同有机附加物对铁皮石斛原球茎增殖和组培苗生根壮苗的影响徐玲;陈自宏;杨晓娜;杨丽华【摘要】有机附加物在铁皮石斛组培过程中起着重要作用,扩大天然有机物种类的研究范围将有可能挖掘到更多促进生长的附加物.本研究在铁皮石斛原球茎增殖和组培苗生根壮苗过程中,将多种天然有机物进行组合添加,探索具促进作用的有机附加物新种类和新组合.在原球茎增殖培养基中添加100 g/L土豆汁与100 g/L其他有机物(香蕉汁、玉米汁、西瓜汁、荔枝汁及小麦面粉),以土豆汁与玉米汁对增殖的促进效果最佳(平均增殖5.66倍,鲜重提高4.12倍),而分化程度较低(分化率67.9%,排第3),适合作为原球茎继代培养前期的添加成分.添加土豆汁与小麦面粉,原球茎分化率(平均95.1%)和鲜重增加(平均5.35倍)最高,分化苗健壮度最高,适合作为原球茎继代培养后期的添加成分.在组培苗生根壮苗期间,添加100 g/L香蕉汁与100 g/L其他有机物(土豆汁、玉米汁、西瓜汁、荔枝汁及小麦面粉),以香蕉汁与小麦面粉为最佳有机附加物,平均生根率96.6%,平均根长4.82 cm,与其他组合差异极显著;组培苗健壮度、整齐度也最高.玉米汁和小麦面粉都是取材于种子,富含多种营养物质,其在石斛组培过程的促进作用尚未有人报道过.本研究结果将对提高铁皮石斛瓶苗质量,缩短培养周期具有一定现实意义.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2016(031)002【总页数】7页(P250-256)【关键词】有机附加物;铁皮石斛;组培苗;原球茎【作者】徐玲;陈自宏;杨晓娜;杨丽华【作者单位】保山学院,云南保山678000;保山学院,云南保山678000;保山学院,云南保山678000;保山学院,云南保山678000【正文语种】中文【中图分类】S567.906.2铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科石斛属附生草本植物,具有滋阴清热、生津养胃、调节免疫力等功效,是中国传统名贵中药之一[1]。
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要:近年来,对铁皮石斛的需求日趋增加,而野生资源难以满足市场需求,组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。
从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况,并展望了发展前景。
铁皮石斛为兰科石斛属植物,是传统名贵中药材。
《神农本草经》列为上品,具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。
现代药理研究表明,石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。
由于石斛自然繁殖力低,种子需与真菌共生才能萌发,加上长期采挖,使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭,成为濒危植物,被列为国家重点保护的野生药材品种。
为了满足市场的需求,国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。
1种子萌发1.1胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。
叶秀嶙等取铁皮石斛6个月种龄的种子进行组织培养发现,种龄愈长,萌发率愈高。
2个月种龄的种子接入改良N6培养基中,萌发率仅为6 % ; 3个月种龄的种子接入改良叹培养基中,培养2周后开始萌发,萌发率为87 % ; 4 一 6个月种龄的种子接入培养基中,只要培养一周即可萌发,萌发率为95 %。
曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良N6培养基中进行组织培养,亦得到相似的结论,幼胚胚龄在60d以下时,萌发率极低,随着胚龄的增长,其萌发期逐渐缩短,萌发率逐渐升高,成苗率也逐渐升高,但到达一定的胚龄后,差异并不明显。
1.2基本培养基铁皮石斛种子在N6,改良N6, MS , 1 / 2 MS , SH、KS、VW、KundsonC , 1 / 2N6, White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响,除残外,所有的基本培养基均优于其减半培养基,其中以N6最好,SH、Kn、MS次之,1 /2MS、1 / 2 Vw最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH、改良N6、MS、KS、VW、KundsonC培养基中培养,得出最适培养基为改良N6 或自制PT培养基。
由于石斛自然繁殖力极弱,生长缓慢,加之人们掠夺性采挖,资源已严重枯竭。
而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题,故石斛药源一直处于紧张状态。
因此,组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大,甚为迫切。
石斛的组织培养,可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体,但以种子进行组培快繁的为多。
原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键,因此,研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。
特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗,是解决其种苗与发展生产的有效途径。
铁皮石斛的组织培养铁皮石斛,又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。
野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物(三级)。
由于其生长环境要求特殊,野生资源已濒临灭绝。
现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功,月出苗量50万瓶以上,为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。
1 胚培养(种子培养):取人工授粉的铁皮石斛果实,用75%的乙醇表面消毒,30s后再用0.1%升汞溶液消毒8min,无菌水冲洗4~5次。
在无菌操作下,把果实切成0.1mm见方的小块,接种到培养基上,每瓶3~5块。
研究结果表明,N6培养基对种子萌发和生长最好,蔗糖浓度2%最佳,NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长;种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用;而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用,生根和壮苗培养中不加入NAA,只用N6+10%香蕉汁,苗长得更粗壮。
培养温度25~28℃,光照强度1600~2000lx,每日10~12h。
种子萌发后,转管3~4次,当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时,可将试管苗进行炼苗后移栽。
在实验中尚发现,石斛原球茎的增殖与胚龄相关,不同胚龄培养,其萌发率不同:胚龄45天以下,萌发率极低,萌发时间长;60天胚龄的胚具34个细胞,萌发率为6%;90天胚龄的胚细胞为74个,萌发率为87%;120天胚龄的细胞数为90个,萌发率95%以上。
一••琴••零••零••琴••琴■■琴丨••琴丨■■琴••琴丨■■琴••琴••零••琴••琴丨■■琴••琴丨■■琴••琴••零••琴••琴••琴••琴••零••零■•零■•零■•零■•琴■•琴■•琴f文章编号:1002-0659 (2018) 02-0036-05I|铁皮石斛原球茎组织培养研究进展i专题综述t张鑫!(天津创世生态景观建设股份有限公司,天津南开300000)摘要:铁皮石斛是我国传统的名贵中药材,具有很高的药用价值,其所含的主要成分为石斛多糖和生 物碱。
由于长期的采挖,自然资源日益枯竭,现阶段铁皮石斛的种苗主要通过组织培养方法获得,但 在培养过程中存在诸多问题如出苗的成本过高,幼苗移栽成活率低,工厂化生产效率低等。
鉴于以上 问题,对于铁皮石斛原球茎的研究日益广泛,原球茎中含有同石斛苗相同的药用成分,通过大规模培 养来提取,同样可以满足药材市场对石斛的需求。
本文通过对相关文献的查阅,阐述了有关铁皮石斛 原球茎的组织培养方面的研究概况。
关键词:铁皮石斛;原球组织培养;多糖中图分类号:S682.1+9 文献标识码:A铁皮石斛(■O e/zdraW M m q^dna/e Kimura et Migo)是兰科(Orchidaceae)石斜属(Dendrobium)多年生附生草本植物,因其老基外呈黑色,又名为黑节草,是名贵中药,居“中华九大仙草”之首,所含的主要成分为石斛多糖及生物碱,另外,还 有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等。
现 代药理研究证明石斛多糖具有抗肿瘤、增强免疫 力的功能。
但由于铁皮石斛生长环境特殊,以及 长期采挖,自然资源日趋枯竭,已被国家列为重 点保护的野生药材。
从20世纪中期开始就有关 于铁皮石斛的研究,主要涉及组织培养方法、有 效成分含量和药理作用方面的研究。
随着研究的 深人,发现铁皮石斛在组织快繁过程中存在一些 问题,例如通过组培生产出苗的成本过高,幼苗 移栽成活率低,工厂化生产效率低。
第30卷第6期2010年12月 上饶师范学院学报J OURNAL O F SHANGR AO NOR MAL UNIVERSITY Vol 30,No 6Dec 2010收稿日期:2009-12-14基金项目:2009年江西省高校省级教改立项项目(编号:J XJG-09-16-10);上饶师范学院校级教改课题(SR1018)作者简介:李丹(1988-),女,生命科学系06生物科学(1)本科在读学生,研究方向为植物组织培养。
黑节铁皮石斛原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根的初步研究李 丹,王馨彩,尹明华(上饶师范学院,江西上饶334001)摘 要:对黑节铁皮石斛的原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根进行了初步的研究,以期为黑节铁皮石斛的人工繁殖提供理论指导。
采用植物组织培养和单因子试验的方法,获得了黑节铁皮石斛带芽茎段最佳的消毒方式为70%酒精处理30s 后再用0.1%HgCl 2处理20min 。
黑节铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS+KT1mg/L +NAA0.1mg/L 。
黑节铁皮石斛带芽茎段原球茎再分化的最佳培养基为MS+KT2mg /L+NAA0.5mg/L 。
黑节铁皮石斛带芽茎段腋芽萌发的最佳培养基为MS+KT 2mg/L+NAA0.5mg/L 。
黑节铁皮石斛带芽茎段生根的最佳培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L 。
这些实验结果为黑节铁皮石斛试管苗的工厂化生产奠定了技术基础。
关键词:黑节铁皮石斛;原球茎;腋芽;生根中图分类号:S567.23.9 文献标识码:A 文章编号:1004-2237(2010)06-0073-06DOI:10.3969/j.issn.1004-2237.2010.06.015铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.)为兰科石斛属植物,不仅是中国的特有种,也是传统的名贵中药材[1]。
石斛的主要药用成分为石斛多糖和石斛碱[2],具有养阴生津、润肺明目、抗癌防老等功效[3]。
铁皮石斛生根壮苗培养基及炼苗技术研究作者:崔现亮来源:《现代农业科技》2015年第01期摘要研究了不同激素水平对铁皮石斛壮苗生根、闭瓶炼苗天数及炼苗季节对铁皮石斛幼苗成活率的影响,结果表明,激素水平对幼苗的根数、根长、根粗和茎长均有显著的影响,对生物量和茎粗没有影响。
当激素水平为NAA 0.2 g/L+IBA 0.3 g/L时,幼苗的生物量、根粗、叶片数、茎长最好;根的数量、茎粗指标在激素水平为IBA 0.5 g/L时最高。
闭瓶炼苗0 d时,所有3个季节的幼苗成活率均最低,随着炼苗时间的增减成活率不断升高,但也有时间上限;8—9月炼苗时幼苗的成活率要高于其他2个季节。
关键词铁皮石斛;生根壮苗培养基;炼苗技术中图分类号 S567.239 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2015)01-0104-01铁皮石斛是兰科石斛属植物,是目前最受欢迎的、研究较多的药用石斛之一,主要分布于云南、广东、浙江等地[1-3]。
种子符合大多兰科植物的特点,量大、个体小,自然发芽率极低[4],很难满足生产栽培需要。
本试验主要研究了不同激素配比对铁皮石斛壮苗生根、闭瓶炼苗天数和炼苗季节对铁皮石斛幼苗成活率的影响,以期为实现铁皮石斛的产业化生产提供理论依据。
1 材料与方法1.1 试验材料研究材料采自云南省普洱市江城县,材料采集后经过常规消毒,取茎尖进行试管苗的培养,经过初代、增殖、成苗培养后获得大量试管苗供研究使用。
1.2 试验设计试验设3个因素,激素设置3个水平,分别为NAA 0.5 g/L、IBA 0.5 g/L、NAA 0.2g/L+IBA 0.3 g/L;炼苗天数设置4个水平,分别为0、5、10、15 d;炼苗季节设置3个水平,分别为4—5月、8—9月、11—12月。
3次重复。
生根壮苗培养基:MS营养液+蔗糖20 g/L+活性炭0.6 g/L+琼脂5.3 g/L+香蕉30 g/L+土豆30 g/L。
1.3 试验方法选择激素水平为NAA 0.2 g/L+IBA 0.3 g/L的苗进行炼苗,移栽时,将选好的出瓶苗移至温室大棚闭盖炼苗,再松盖炼苗3 d后,轻轻取出试管苗。
探究铁皮石斛原球茎的生长和分化孙一然张晗杜剑峰指导老师:孙红泽一、研究意义铁皮石斛(学名:Dendrobium officinale Kimura et Migo),又名:黑节草、云南铁皮。
属微子目,兰科多年生附生草本植物。
茎直立,圆柱形,长9-35厘米,粗2-4毫米,萼片和花瓣黄绿色,近相似,长圆状披针形,长约1.8cm,宽4~5mm,花期3~6月。
主要分布于中国安徽、浙江、福建等地。
其茎入药,属补益药中的补阴药:益胃生津,滋阴清热。
铁皮石斛适宜在凉爽、湿润、空气畅通的环境生长。
生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上,喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境,不耐寒。
分布于安徽西南部(大别山)、浙江东部(鄞县、天台、仙居)、福建西部(宁化)、广西西北部(天峨)、四川、云南东南部(石屏、文山、麻栗坡、西畴)。
1987年国务院发布的《野生药材资源保护管理条例》将铁皮石斛列为三级保护品种;1992年在《中国植物红皮书》中被收载为濒危植物。
性味功效:味甘,性微寒。
生津养胃;滋阴清热;润肺益肾;明目强腰。
药理作用:生津作用:铁皮石斛石斛具有生津作用,主要表现为促进腺体分泌和脏器运动。
降血糖作用:铁皮石斛对可降低链脲霉素诱发糖尿血糖值。
增强机体免疫力:铁皮石斛颗粒(TPSH)可促进荷瘤动物巨噬细胞的吞噬功能,增强T 淋巴细胞的增殖和分化及NK细胞的活性,并能明显提高荷瘤动物的血清溶血素值,提示TPSH无论是对非特异性免疫功能,或是特异性细胞免疫以及体液免疫功能,均有一定的提高作用。
自然条件下,铁皮石斛繁殖率低,生长速度缓慢,其种子细如粉尘,必须与真菌共生才能萌发,自然条件下发芽率低,多年来一直靠采挖野生植株供应市场,采挖量远大于生长量。
目前,铁皮石斛已成为濒危植物,被列为国家重点保护的药材品种。
为保护该物种的繁衍,有效利用和开发这一珍稀的名贵中药材,20世纪70年代开始国家相关部门投入了大量科研资金对其进行研究,在总结前人的研究经验下,本文针对扩大繁殖系数,提高瓶苗质量等方面作了研究。
关于铁皮石斛组织培养与栽培技术的报告1培养基1.1配方根据不同阶段,培养基配方有所差异。
如表1表1 各种培养基配方不同阶段培养基备注愈伤组织(原球茎)的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8 原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂pH =5.8原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.61.2配制(以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例)10%香蕉(w/w)+MS +3%蔗糖(w/w)+0.8%琼脂(w/w)+2.0mg/L NAA1)量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中,加热至沸腾;2)准确称量100g香蕉果肉,切成碎片状,并倒入上述烧杯中,加热煮沸5min,其间搅拌使之充分溶解;3)按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序,量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯,混合均匀;4)将2)和3)的溶液混合,然后加入30g蔗糖,并移取2ml NAA(0.1mg/ml),混合均匀;5)加热至沸腾,加入8g琼脂并煮沸5min,其间不断搅拌使之充分溶解;6)冷却至50±5℃时,调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内,33.3ml/瓶。
注意事项①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多,以确保香蕉各种成分完全溶解;②各种母液混合时,要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序;③煮沸时,小心溶液溢出;④分装时不要污染培养瓶瓶口。
1.3灭菌1)检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表,确保灭菌锅各指标和功能的正常,以防事故发生;2)把带灭菌的培养基装入锅内,盖上锅盖,对称而均匀地扭紧螺丝;3)打开电源和排气阀,调节电压至220V;4)待排气阀排除水蒸气30s—1min后,关闭排气阀;5)当温度上升到121℃后,调节电压至135V,保持20min;6)关闭电源,使之自动降温至0℃。