离子色谱法测定大蒜多糖的单糖组成和含量
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大蒜多糖的提取分离与分析黄雪松(暨南大学理学院食品科学与工程系,广东 广州 510632)摘 要:目的:提取、分离、纯化大蒜多糖,并对其进行分析。
方法:依次用水提取、过滤、去蛋白、DEAE纤维素层析、冷冻干燥获得大蒜多糖;用薄板层析和气相色谱法测定单糖的组成和比例,高效液相色谱法测定分子量;结合IR和13CNMR确定单糖组成、连接方式和端基碳构型。
结果:从大蒜中得到了纯多糖,其含有85%果糖、14%葡萄糖、1%半乳糖,分子量7100道尔顿,糖苷键为β-2,1-糖苷键。
结论:大蒜多糖是主要含有果糖,葡萄糖和少量半乳糖的大蒜中的β-杂聚糖。
关键词:大蒜;多糖;分离Isolation and Identification of Garlic PolysaccharideHUANG Xue-song(Department of Food Science and Engineering, Jinan University, Guangzhou 510632, China)Abstract :Aim: To isolate and identify the garlic (Allium sativum L.) polysaccharide. Methods: The polysaccharide was gotby the extraction, DEAE chromatography etc. The pure polysaccharide was detected by the HPLC,GC and IR,UV, 13CNMRspectrum were obtained and analysed. Results: The polysaccharide is consisted of 85% fructose, 14% glucose and 1% galactose.Its molecular is 7.1kDa. The saccharides were connected on the β-2,1-glycosides. Conclusion: Polysaccharide is a kind ofheteropolysaccharide which contains fructose, glucose galactose and is connected by β-2,1-glycosides.Key words:garlic(Allium sativum L.);polysaccharide;isolat中图分类号:TS201.23 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2005)09-0048-04收稿日期:2005-06-11基金项目:国家高技术研究发展计划委员会专项(2001AA248021)作者简介:黄雪松(1957-)男,教授,博士,主要从事食品化学与食品加工工艺方面的研究。
离子色谱-脉冲安培法测定口香糖中单双糖食品与发醇科技FoodandFermentationTechnology第46卷(第5期)V o1.46,No.5离子色谱一脉冲安培法测定口香糖中单双糖余娟,王桂华,李家威,郭剑雄,李海乔(广州甘蔗糖业研究所,广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室,国家糖业质量监督检验中心,广州510316)摘要:本文建立了离子色谱一脉冲安培法测定口香糖中单双糖(半乳糖,葡萄糖,木糖,果糖,蔗糖,乳糖)的方法.口香糖经处理后其单双糖含量以CarboPacTMPA10高效阴离子交换柱为分析柱,氢氧化钠为淋洗液,梯度洗脱,脉冲安培检测器(PAD)检测,以保留时间定性,外标法定量.结果表明,半乳糖,葡萄糖,木糖,果糖,蔗糖,乳糖在Car—boPacT~PA10上可以在27min内完成分离,检出限分别为f进样251xL,S/N=3)分别为3~g/L,2~g/L,21~g/L,5~Lg/L,51~g/L和81~g/L,且均具有较宽的线性范围(0.05mg/L一50mg/L).样品测定的相对标准偏差在0.39%一3.78%之间,加标回收率在95.2%一106.3%之间.本方法检测糖简便快捷,分离效果好,无需衍生,灵敏度高,适用于口香糖中单双糖的分析.关键词:离子色谱;脉冲安培检测;口香糖;单糖;双糖中图分类号:TS245.8文献标识码:A文章编号:1674—506X(2叭0)05—0o74一o003 DeterminationofMonosaccharidesandDisaccharidesinChewingGum byIonsChromatographyandPulsedAmperometricDetectionYUJuan,W ANGGui-hua,LIjia-wei,GUOJian-xiong,LIHai-qiaorGuangzhouSugarcaneIndustryResearchInstitute.GuangdongKeyLabofSugarcaneImpr ovementandBio—refinery,ChinaSugarInspectionCenter,Guangzhou51031Abstract:Achromatographicmethodwasdevelopedforthedeterminationofmonosacchari desanddisaceharides(galaetose,glucose,xylose,fructose,sucroseandlactose)inchewinggum.CarboPaeWMp A10highperformanceanion—exchangecolumn(HPAEC)assplitter,NaOHaseluent,gradientelution,pulsedamperometri cdetection(PAD),qualitativeanalysiswithretainingtime,quantitativeanalysiswithextemalreferencemethod.Thesesixs accharidescanbeseparateswellin27minbyCarboPaeW~PA10.Thedetectionlimitsofthese(251xLinjection,S/N=3)u singPADwere31~g/L,21xg/L,2L,5t~g/L,5t~s/Land8L,respectively.Moreover,allanalyzeshadawidelinearrange(0.05m g/L一50mg/L),goodrelativestandarddeviations(0.39%-3.78%)andsatisfyingrecoveries(95.2%一106_3%).Thismethodwasquite suitableforthedeterminationofmonosaccharidesanddisaceharidesinChewinggumforitssi mpleandgoodseparationperformanceaswellashighsensitivity.Noderivationisneededintheprocessofdeterminatio n.Keywords:Ionchromatography;pulsedamperometricdetection;chewinggum;monosacch arides:disaccharidesdoi:10.3969/j.issn.1674—506X.2010.05-019口香糖是以天然树胶或甘油树脂为胶体的基础,加入糖浆,薄荷,甜味剂等调和压制而成的一种供人们放人口中嚼咬的糖,自问世以来,广受世界人民喜爱.目前,一种更加健康的新型口香糖越来越受到消费者的欢迎,这就是用木糖醇类代替普通糖浆'加工制成的无糖口香糖.对于"无糖"这一概念,我国《食品营养标签管理规范》"1,《预包装特殊膳食用食品标签通则》嘲与国际食品法典委员会《营养声称使用指南》均规定,将"固体或液体食品:界限(不高于)0.5g/lOOg(100mL)"作收稿日期:2010—08-18作者简介:余娟(1984一),女,硕士研究生,工程师,研究领域:糖品分析方法研究. 第46卷(慧第159明)余娟等:离子色谱一脉冲安培法测定口香糖中单双糖75 为界定预包装食品"无糖(指所有的单糖和双糖)"声称的含量水平标准.国家现行的有关标准中,对食品中单双糖含量的测定大多使用液相色谱法.液相色谱法虽无需衍生但检出限仅达mg/L级,其灵敏度不能满足低糖(或无糖)食品中糖含量的测定要求.离子色谱作为液相色谱的一个分支,其优异的高效阴离子交换分离技术和高灵敏度的脉冲安培检测技术,使其在糖类物质的分析中得到越来越多的应用.本文就离子色谱一脉冲安培测定口香糖中单双糖作了相关的研究.1实验部分1.1仪器和试剂ICS一3000型离子色谱仪,四元梯度泵,ED3O00电化学检测器,AS自动进样器(美国Dionex公司);Milli—Synergy超纯水机(美国);KQ-100E型超声波清洗器;Cs小柱;0.221~m水性滤膜针头滤器.半乳糖(>198.0%,Sigma公司),葡萄糖(≥99.5%,Sigma公司),木糖(I>99.0%,Sigma公司),果糖(≥99.0%,Sigma公司),蔗糖(≥99.5%,Sigma公司),乳糖(≥99.0%,Sigma公司),氢氧化钠溶液(50%,w/w,FisherScientific公司).1.2标准溶液和淋洗液的配制半乳糖,葡萄糖,木糖,果糖,蔗糖,乳糖标准储备液lO00mg/L:准确称取标准物质0.1000g,用超纯水稀释到lOOmL,摇匀备用;氢氧化钠溶液(200mmol/L):在2L淋洗液塑料瓶中加入984mL经过0.221xm尼龙滤膜过滤的超纯水,再移人50%NaOH溶液16.0mL至水面以下,通氮气保护后摇匀备用;所有用水均为电阻率≥18.2MQ?cm的超纯水.1.3前处理方法取均匀粉碎样品1.0g(精确到0.01g)至锥形瓶中,加入50mL超纯水,超声提取30min,每隔5min振摇一次.取lmL清液至100mL容量瓶中(可以根据样品中单双糖含量作调整),稀释至刻度,摇匀后备用.取上述备用液约10mL,通过0.22Ixm水性滤膜针头滤器,C.柱(预先使用2mL甲醇和5mL水活化),弃去前面3mL,收集后面洗脱液待测.1.4测定条件分析柱:CarboPacTMPAl0(4mmx250mm);保护柱:CarboPacTMPAl0(4mmx50mm);ED3000脉冲安培检测(PAD),Au工作电极,Ag/AgC1参比电极模式,糖标准四电位波形见表1.表1糖测定的标准四电位波形Tab.1Standardquadruplepotentialwaveformforcarbohydratesanalysis 淋洗液条件:0min一30min,16mmol/LNaOH;30rain一45min,200mmol/LNaOH;45min-60min,16mmol/LNaOH;流速:1.00mL/min;进样方式:自动进样;进样体积:25~L;柱温:3OcI=.2方法讨论2.1色谱柱选择糖类化合物具有弱酸性及亲水性,在比较强的碱性溶液中以阴离子形态存在131.在强碱性条件下,糖结构中的羟基等电化学活性基团在适当的电位下可以在金电极表面被氧化而导致电流变化,从而可通过脉冲安培检测器进行检测.用于分离单双糖的阴离子交换色谱柱一般包括3种柱型:CarboPaca~PA1,Car. boPacAl0和CarboPacrMpA20.CarboPacTMpA1存在较明显的溶解氧负峰干扰,从而干扰葡萄糖和果糖的良好分离,而溶解氧在CarboPacYMpA10色谱柱的固定相上保留较强,从而避免了其对常见单糖的干扰.CarboPac删PA20柱容量较低可实现快速分离,但蔗糖与葡萄糖的分离度较差,且其它几种糖类的分离效果也略差于CarboPacTMpAl0柱[41.因此,我们选择CarboPaca~PA10柱进行相关测定.2.2淋洗液条件优化改变淋洗液浓度,可以改变待分离组分的出峰时间和分离度,图1为NaOH浓度等于18mmol/L,16mmol/L,15mmol/L和14mmol/L时半乳糖,葡萄糖,木糖,果糖,蔗糖,乳糖的出峰情况.由图可见,当淋洗液NaOH浓度为18mmol/L时,半乳糖和葡萄糖(图中峰1和峰2)分离效果欠佳;当淋洗液NaOH浓度为14mmol/L时,果糖和蔗糖(图中峰4和峰5)分离效果欠佳;当淋洗液NaOH浓度为16mmol/L和15mmol/L,各组分分离效果较好,综合乳糖(峰6)出峰时间,前者比后者总体效果更好一些.经淋洗条件优化发现,NaOH浓度为16mmol/L76食品与发酵,PI-技2010牟第5期时可保证木糖,果糖,葡萄糖,半乳糖,蔗糖,乳糖的分离.0min一30min,NaOH浓度16mmol/L;30min一45min,NaOH浓度由16mmol/L瞬时升高到200mmol/L 进行柱再生,其后15rain淋洗液浓度保持为16mmol/L使系统平衡后等待下一样品进样.该梯度程序既可保证分析时间较短,亦可获得满意的分离度, 待测糖组分的分离度均大于1.5,分离谱图见图2.7.06.0—504.03.02.01000'鳊8.0j82:8;:83:8Time(min)Time(min)NaOH一15mmo1/L14.0rNaOH一14m1201000806.04.02.000∞r_—03曷∞岛霜曷Time(min)Time(min)蔗糖,乳糖的出峰谱图Fig.1Chromotogramsofsixsaccharidesonthedifferentconcentration0f Na0H8070—60050三4.0《30201000暑c-J等等暑苫器量量兰墨墨量詈蚕詈毒Time(rain)(1一半乳糖,2一葡萄糖,3一木糖,4一果糖,5一蔗糖,6一乳糖) Fig.2Chromotogramsofsixstandardsaccharides(1一galactose,2一glucose,3-xylose,4-fructose,5-sucrose,6-lactose)2.2标准曲线和方法检出限以峰面积为研究对象,半乳糖,葡萄糖,木糖,果糖,蔗糖,乳糖在0.05mg/L一50mg/L范围内,其峰面积Y与其浓度X均有很好的线性关系.根据3倍信噪~B(S/N=3)计算出半乳糖,葡萄糖,木糖,果糖,蔗糖,乳糖的检出限分别为3txg/L,21~g/L,2L,5g/L,5L和8L,见表2.2.3方法重现性和加标回收率在上述实验条件下测定了口香糖样品中单双糖.图3为口香糖样品的分离色谱图.对含糖口香糖进行平行测定,样品间的相对标准偏差在0.39%一表2六种单双糖检出限和线性试验数据Tab.2Umitsofdetectionandlinearityofsixsaccharides3.78%之间,对样品中半乳糖,葡萄糖,木糖,果糖,蔗糖,乳糖进行了加标回收实验,回收率在95.2%一106.3%之间,相对标准偏差和回收率试验数据结果见表3.0∞I'.--o)寸(.0qt.Q■rI卜6粤Ob舞.cD03Time(min)Time(rain)Fig.3Chmmotogramsofchewinggumsamples表3样品测定相对标准偏差和加标回收率试验数据Tab.3Therelativestandarddeviationsandrecoveriesofsample defenT1ination加标回收率试验样品待测物黼/g/l含量OOg样掖~/m澍定g/L(D%mg/Lmg/L%(上接第76页)∞∞{5;∞巧{寻侣∞50第46卷(是第159研)曹喜焕等:木薯干中铅砷汞金属离子在发酵酒精生产过程中的迁移规律研究79酵没有影响.表2不同含量的铅,砷,汞对酒精发酵过程的影响Tab.2InfluenceofdifferentamountofPAsandHgonalcoholfermentation3.2酒精发酵工艺过程中铅,砷,汞的迁移和降解木薯干中铅砷汞在发酵酒精生产过程有三个流向:酒精产品,废水和废渣.我们模拟酒精发酵过程,添加标准限量5O倍的铅,砷,汞混合溶液进行发酵,并按照工艺过程设7个取样检测点:蒸煮前粉浆料,发酵前醪液,发酵后醪液,酒精,蒸馏后酒糟,废渣,废水等7个位点,每个位点取两个样品进行检测.重复上述过程.结果见表3.表3酒精发酵中添加铅,砷,汞元素时各离子检测值单位:mg/kgTab.3ThedetectionofPb,AsandHgonalcoholfermentation(mg/kg)元素及含量蒸煮前发酵前发酵后酒精酒糟废水废渣规律.注由于测定砷时有价态变化,因此测定结果不是很有4结论4.1木薯干中添加高达50倍标准限量的铅,砷,汞时,对发酵酒精的工艺质量未产生影响.4.2向木薯干中添加5O倍的铅,砷,汞重金属时,其含量在蒸煮前,发酵前的检测结果均接近理论值.经发酵后,酒精中未检出重金属,说明重金属不会在酒精成品中残留,重金属主要残留在酒糟里.4-3将酒糟进行离心分离后,废水与废渣质量比接近1:1.对废水和废渣中铅,砷,汞检测表明,铅,汞主要残留在废渣中;砷则在废水和废渣中均有残留.4,4依据GB8978—1996《污水综合排放标准》,总铅≤lmg/L,总汞≤0.05mg/L,总砷≤0.5mg/L.铅,汞在添加5O倍的限量发酵后,废水中的铅,汞均很低,达到《污水综合排放标准》要求.而砷在添加50倍的限量后,在废水中有残留.4.5依据GB15618—1995(土壤环境质量标准》三级排放标准对重金属限量为:铅~<500mg/kg,汞≤1.5mg/kg,砷<~40mg/kg.试验表明,废渣中铅,砷,汞的排放达到《土壤环境质量标准》要求.参考文献:【1]GB8978—1996(污水综合排放标准》【2]GB15618—1995(土壤环境质量标准》【3】陈同斌,黄启飞,高定等.中国城市污泥的重金属含量及其变化趋势,环境科学,2003(5),P1~4[41俞一统,王榆,刘旭.利用黑曲霉菌发酵食品废物去除污泥重金属,宁波大学(理工版),2010(2),P95—983结论本文研究了用离子色谱一脉冲安培法测定口香糖中单双糖(半乳糖,葡萄糖,木糖,果糖,蔗糖,乳糖)的方法.本方法样品前处理简单,分离效果好,灵敏度高,初步确定可适用于口香糖(包括无糖口香糖)中单双糖的分析.参考文献:[1】中央政府门户网站.卫生部通知印发《食品营养标签管理规范》(全文)IEB】/gzdt/ 2008—01/11/content_856260.htm『2]2GB13432—2004预包装特殊膳食用食品标签通则【s].【3】牟世芬,于泓,蔡亚岐.糖的高效阴离子交换色谱一脉冲安培检测分析fJJ.色谱,2009,5:667—974.[4]李仁勇,梁立娜,牟世芬等.离子色谱一脉冲安培检测白醋和豆腐水中单糖和大豆低聚糖【J1.分析化学研究简报,2009,5:725—728.。
离子交换色谱-积分脉冲安培法测定大蒜中的蒜氨酸李存芝;黄雪松【摘要】为测定新鲜大蒜中蒜氨酸,采用离子交换色谱-积分脉冲安培(IEC-IPA)分析法,以离子交换分离柱分离,积分脉冲安培电化学检测,柱温:30℃;流动相:离子水、250 mmol/L NaOH及1 mol/L醋酸钠进行梯度洗脱:流速:0.25 mL/min.测得结果:蒜氨酸保留时间为5.100~5.200 min,浓度在0.45~3.0μg/mL内线性关系良好,相关系数0.997 9,检测限0.05 μg/mL,加样回收率为96.7%,标准差1.7%;测得的广东蒜及山东蒜的蒜氨酸含量分别是1.262 9%、1.511 4%.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2010(036)012【总页数】4页(P169-172)【关键词】大蒜(Allium sativum L.);蒜氨酸;离子色谱法;积分脉冲安培检测【作者】李存芝;黄雪松【作者单位】暨南大学食品科学与工程系,广东,广州,510632;暨南大学食品科学与工程系,广东,广州,510632【正文语种】中文大蒜(Allium sativum L.)是百合科葱属植物蒜的鳞茎,含有丰富的营养物质[1]。
据报道新鲜大蒜中含有大量大蒜素的前体物质——蒜氨酸(S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜)[2]。
研究亦表明,蒜氨酸是大蒜中的主要活性成分,具有抗氧化、清除自由基、降脂、抗肿瘤、抗血栓等多项功能[3]。
所以测定蒜氨酸的含量已成为评定大蒜及其制品品质的重要指标。
由于大蒜成分的多样性和不稳定性,直接测定蒜氨酸含量存在一定困难,且各种分析结果有很大差异,至今尚未有统一的标准方法测定大蒜中蒜氨酸含量。
传统的定硫法精确度极低;薄层扫描法[4]、高效液相色谱法[5~8]、液质联用法[9]、高效毛细管电泳法[10]、4-MP[11]测定法、高效离子对色谱法[12]、柱前或柱后衍生化后测定[13]等方法前处理复杂,检测周期长,或需特殊的仪器,在应用中受到限制。
大蒜多糖组分A总多糖含量的分光光度法测定作者:余薇,查文良,梁惠敏,吴基良,刘彤云【摘要】目的对大蒜多糖组分A进行提取并测定其含量。
方法采用0.5%草酸铵溶液提取、醇沉的方法分离纯化大蒜多糖组分A,以苯酚-硫酸显色法测定大蒜多糖组分A的含量。
结果在2.0~15.0 μg/ml内,浓度与吸光度呈良好线性关系。
回归方程:A=0.080 6C-0.021 9 (r=0.993 4,n=10),平均回收率为96.14%,RSD%为0.06(n =5)。
大蒜多糖组分A的平均糖含量为77.40% ,RSD%为3.74(n=5)。
结论方法简便,结果准确,为今后对大蒜多糖的药理作用以及其它组分进一步研究奠定良好的基础。
【关键词】大蒜多糖组分A; Sevage法; 苯酚-硫酸法;多糖Abstract:ObjectiveThe polysaccharides A were extracted from garlic and the content was determined. MethodsPolysaccharides A was extracted and purified through 0.5% ammonium oxalate and ethanol precipitation, the content was determined by phenol-sulfuric acid under 485 nm. ResultsFrom the range of 2.0-15.0μɡ/ml, there was an excellent linear shape between the concentration and absorbency. The regressionequation: A=0.0806C~0.0219,(r=0.9934,n=10).The average recovery was 96.14% with RSD=0.06% (n=5). The average polysaccharides content from garlic was 77.40%,RSD=3.74% (n=5). ConclusionThe method is simple and accurate.Key words:Garlic polysaccharides A; Sevage; Phenol-sulfuric acid大蒜为百合科葱属多年生草本植物,明代《本草纲目》记载大蒜有散痛肿、除风邪、杀毒气、祛风湿、疗毒癣、健脾胃、止霍乱、解瘟疫等功效[1],可治疗数十种疾病。
蒜头果多糖的提取及含量测定袁燕;杨文清;李彬;高路【摘要】[目的]研究蒜头果多糖的提取及含量测定.[方法]采用水提醇沉法从蒜头果中提取多糖,并用硫酸-苯酚法测定其含量.[结果]蒜头果中平均多糖含量为0.600%.[结论]为蒜头果多糖的开发利用提供理论依据.%[Objective] The aim was to extract and deferwhue the content of polysaccharide from M. Oleifera seeds. [ Method ] Polysaccharide was extracted from M. Oleifera seeds with water extraction and ethanol precipitation method and its content was determined by phenol - sulfuric acid method. [Result] The result showed that it contains polysaccharide in M. Oleifera,and the polysaccharide content was 0.600%. [Conclusion] It was provided the reference for the exploitation of M. Oleifera.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)022【总页数】2页(P13508,13526)【关键词】蒜头果;多糖;苯酚-硫酸法;含量测定【作者】袁燕;杨文清;李彬;高路【作者单位】昆明学院生命科学与技术系,云南昆明650214;云南民族大学民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室,云南昆明650031;云南师范大学生命科学学院,云南昆明650092;云南民族大学民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室,云南昆明650031;云南民族大学民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室,云南昆明650031【正文语种】中文【中图分类】TS207.3多糖是一类具有广泛生物活性的生物大分子,具有抗病毒、抗肿瘤、延缓衰老、降血压、抗凝血、增强免疫力、促进活性等生物功能[1]。
离子色谱法测定大蒜多糖的单糖组成和含量目的建立测定大蒜多糖的单糖组成和含量的离子色谱法。
方法以氨基酸分离柱,氢氧化钠/醋酸钠溶液梯度洗脱,脉冲积分安培检测器(Au为工作电极,Ag/AgCl为参比电极)检测,测定大蒜多糖水解产生的单糖组成及含量。
结果大蒜多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖等单糖组成,各单糖基本达到分离,线性关系良好,相关系数均>0.998,平均回收率均在95%~105%之间。
结论所建立的方法准确、简单,可用于大蒜多糖中单糖的含量测定和质量控制。
Abstract:Objective To establish a method to analyze the composition and content of monoses in the garlic polysaccharide by ion chromatography. Methods The monoses in the solution of garlic polysaccharide hydrolysised by trifluoroacetic acid were determined by amino PAC column,eluted by gradient hydroxide sodium and identified by ampere detector (AU as working electrode,Ag/AgCl as reference electrode). Results The garlic polysaccharide was mainly composed by arabinose,galactose,glucose,xylose and fructose. Good resolution could be achieved among the above mentioned five kinds of monoses. Their linear correlations over the investigated concentration were above 0.998,while the average recovery rates were in the range of 95%-105%. Conclusion The ion chromatography method is fast,accurate,simple and reliable,and can be applied in the content determination and quality control of garlic polysaccharide.Key words:ion chromatography;garlic polysaccharide;monose;galactose;glucose;xylose;fructose大蒜多糖具有增强免疫[1]、抗氧化[2]、治疗高脂血症[3]、防护紫外线损伤[4]、润肠通便[5]、心肌保护[6]、抗炎保肝[7]等作用,兼具药用和保健作用,有很高的开发价值。
大蒜多糖的提取分离及含量测定分析索朗桑姆(西藏农牧学院林学系)摘 要 多糖是由单糖组成的天然高分子化合物。
到目前为止,已从自然界提出好几百种多糖。
经过近十多年的大量研究证明,多糖有许多生物活性,尤其有增强人体免疫能力和抗肿瘤的功能。
大蒜多糖是大蒜中的重要活性成分,本文主要进行了大蒜多糖提取及分离纯化,并对得到的多糖作了初步的结构与性质分析。
关键词 大蒜多糖 提取 分离纯化 大蒜(AlliumSativum L1)又名胡蒜、葫、独蒜、独头蒜,为百合科葱属植物。
由于它富含生物活性成分和营养成分(见表1),五千多年前,人们就利用大蒜防病。
《旧约全书—古埃及记》提到,古埃及人为了让奴隶身体强壮,就让他们多吃大蒜。
我国使用大蒜防病、治病也有悠久的历史,《别录》、《古今注》、《普济方》、《本草纲目》等均有记载,指出大蒜具有“通五脏、达诸窍、去寒湿、避邪恶、消臃肿、化积食”等功能。
现代医学研究表明,大蒜还具有很多全新的用途。
在当今返本求真、回归自然的国际食品潮流中,掀起了一股“大蒜热”。
1989年2月在西德召开了“大蒜的化学、药理和应用专题讨论会”;1990年8月在美国召开了“大蒜的保健意义及其成分”国际会议;1991年7月在美国又举行了一次“大蒜功能研讨会”,更加推动了这股世界热潮。
大蒜是我国民间常用的食物,实验已经证明它具有抗菌消炎、抗血凝、降血脂、预防动脉粥样硬化、保护肝功能和抑制肿瘤生长等多方面的药理作用。
1990年8月在美国召开的关于大蒜保健意义及其成分的首届会议证实了大蒜能在不同程度上防治结肠癌、膀胱癌、皮肤癌和肝癌。
大蒜多糖是蒜中有效成分,它集蒜的多种功能于一身。
在药理作用方面,临床显示大蒜多糖具有抗菌消炎、抗血凝、降血脂和预防动脉粥样硬化的功效。
有资料报道大蒜多糖还具有抗糖尿、保护肝功能、抗肿瘤和预防衰老等作用。
表1 新鲜磷茎每100g含有成分T ablel主成分Major(g)水分water蛋白protein脂肪Lipid碳水化合物Carbohydrate粗纤维Cellulose挥发油Volstileoil 7041401223017012微量成分Minor(mg)钙Ca磷P铁Fe硒(μg)Se锗G eS OD 5440144475141716核黄酸尼克酸抗坏血酸硫氨素010*********221 材料试剂及仪器111 材料及试剂大蒜(西藏)、015%草酸铵、乙醚、石油醚、冰醋酸,丙酮、氨水、95%乙醇、无水乙醇、浓硫酸、均为国产分析纯试剂,80%苯酚溶液、6%苯酚溶液(临用前以80%苯酚溶液配制)DE AE纤维素、NaC1,葡萄糖、木糖、半乳糖、树胶醛糖112 主要仪器日本岛津FIIR—8001红外光谱议、J E NW AY6305UV/VIS紫外分光光度计、调温电热套、8302型恒温水浴锅、分析电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)、DHG—9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海益恒实验仪器有限公司)、PHS—2C型酸度计、S JD28—5多功能电磨机、RE—52C 型旋转蒸发器(巩义市英峪予华仪器厂)。
离子色谱法测定大蒜多糖的单糖组成和含量作者:柏冬等来源:《中国中医药信息》2014年第10期摘要:目的建立测定大蒜多糖的单糖组成和含量的离子色谱法。
方法以氨基酸分离柱,氢氧化钠/醋酸钠溶液梯度洗脱,脉冲积分安培检测器(Au为工作电极,Ag/AgCl为参比电极)检测,测定大蒜多糖水解产生的单糖组成及含量。
结果大蒜多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖等单糖组成,各单糖基本达到分离,线性关系良好,相关系数均>0.998,平均回收率均在95%~105%之间。
结论所建立的方法准确、简单,可用于大蒜多糖中单糖的含量测定和质量控制。
关键词:离子色谱法;大蒜多糖;单糖;半乳糖;葡萄糖;甘露醇;果糖Abstract:Objective To establish a method to analyze the composition and content of monoses in the garlic polysaccharide by ion chromatography. Methods The monoses in the solution of garlic polysaccharide hydrolysised by trifluoroacetic acid were determined by amino PAC column, eluted by gradient hydroxide sodium and identified by ampere detector (AU as working electrode,Ag/AgCl as reference electrode). Results The garlic polysaccharide was mainly composed by arabinose, galactose, glucose, xylose and fructose. Good resolution could be achieved among the above mentioned five kinds of monoses. Their linear correlations over the investigated concentration were above 0.998, while the average recovery rates were in the range of 95%-105%. Conclusion The ion chromatography method is fast, accurate, simple and reliable, and can be applied in the content determination and quality control of garlic polysaccharide.Key words:ion chromatography;garlic polysaccharide;monose;galactose;glucose;xylose;fructose大蒜多糖具有增强免疫[1]、抗氧化[2]、治疗高脂血症[3]、防护紫外线损伤[4]、润肠通便[5]、心肌保护[6]、抗炎保肝[7]等作用,兼具药用和保健作用,有很高的开发价值。
目前主要利用比色法测定植物中多糖[8],本课题组前期已建立了利用比色法测定大蒜多糖含量的方法[9]。
但该方法专属性较差,样品中其他类成分可能会造成干扰。
多糖是由单糖通过糖苷键结合而成,准确测定多糖的单糖组成以及各单糖的含量,对于多糖的质量控制具有一定意义。
离子色谱法与比色法相比,不仅对组成多糖的单糖可以直接分离并进行含量测定[10],而且灵敏度高、重现性好。
已有文献报道利用离子色谱法测定大蒜多糖中的单糖组成和含量[11-12]。
本研究对该方法进一步优化,采用离子色谱法建立大蒜多糖的质量控制方法。
1 仪器与试药ICS 3000离子色谱仪(戴安公司,美国),配置脉冲安培检测器(Au电极,S/N 0050150,糖四电位波形)。
单糖对照品阿拉伯糖(批号111506-200001)、半乳糖(批号100226-201105)、葡萄糖(批号110833- 200904)、木糖(批号111508-200404)、果糖(批号111504-200001)均购自中国食品药品检定研究院,大蒜多糖为本实验室自制。
2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备取阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖对照品,用蒸馏水溶解,配制成各单糖浓度分别为1.5、1.5、15、1.5、75 mg/mL的单糖储备液。
使用时,用蒸馏水按标准曲线使用浓度稀释。
2.2 供试品溶液的制备取样品15 mg,精密称定,精密加入2 mol/L三氟乙酸溶液10 mL,摇匀,密闭,80 ℃水解4 h。
放至室温后,精密吸取100 μL,加水稀释至20 mL,0.22 μm滤膜过滤,即得。
2.3 色谱条件色谱柱:CarboPac PA20分析柱(150 mm×3 mm, S/N 003654),CarboPac PA20保护柱(50 mm×3 mm, S/N 003405);以氢氧化钠溶液梯度洗脱(0~25 min, 2 mmol/L NaOH;25.1~30 min,100 mmol/L NaOH, 300 mmol/L NaAc;30.1~40 min,200 mmol/L NaOH;40.1~50 min,2 mmol/L NaOH);流速:0.45 mL/min。
精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液5 μL,按“2.3”项下色谱条件分析,色谱图见图1。
可见,大蒜多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖5种单糖组成,在该色谱条件下均可得到良好分离,基线平稳。
2.6 精密度试验精密吸取“2.5”项下单糖对照品溶液(阿拉伯糖、半乳糖、木糖均为0.75 mg/L,葡萄糖7.5 mg/L,果糖37.5 mg/L),按“2.3”项下色谱条件连续进样6次。
结果阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖的平均峰面积的RSD(n=6)分别为0.31%、0.56%、0.46%、0.31%、0.54%。
2.7 稳定性试验取同一供试品溶液,于制备0、2、4、6、8、10 h进样测定,结果阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖的平均峰面积RSD(n=6)分别为1.50%、1.28%、1.31%、3.57%、2.11%。
表明供试品溶液中各成分在10 h内稳定性基本良好2.8 重复性试验精密称取同一大蒜多糖样品6份,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.3”项下色谱条件进样测定含量。
结果样品中阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖的平均含量(n=6)分别为0.32%、0.14%、5.14%、0.18%、70.67%,RSD分别为8.3%、15.8%、7.2%、10.7%、3.3%。
表明供试品中总糖及含量较高的果糖重复性良好,由于影响样品水解因素较多,对于样品中含量较低的阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和木糖其重复性略差。
2.9 加样回收率试验精密称取“2.8”项下已测知含量的样品6份,每份15 mg。
精密加入10 mmol/L三氟乙酸溶液10 mL,摇匀,密闭,80 ℃水解4 h。
放至室温,精密量取50 μL,加入单糖对照品溶液50 μL,用蒸馏水稀释至20 mL,0.22 μm滤膜过滤。
按“2.3”项下色谱条件进样分析,计算回收率,结果见表3。
各单糖平均回收率在95%~105%之间,表明该方法基本可行,但由于影响样品水解因素较多,各单糖回收率RSD值均相对较大。
3 讨论传统单糖的测定方法基本是衍生化后利用气相、液相色谱进行分离、检测。
由于需要衍生化,样品处理过程繁琐,测定结果准确性、重复性较差,待测成分易被干扰,而且衍生化试剂一般具有毒性。
离子色谱法不需要衍生化即可直接分析几乎所有的单糖和大部分的寡糖及低聚糖[10],节省了操作步骤和时间,提高了检测的准确性、重复性,由于不使用衍生化试剂,提高了试验的安全性。
本研究采用离子色谱法测定大蒜水解液中的单糖组成,结果与文献报道的大蒜多糖由半乳糖、葡萄糖、甘露醇和果糖[12]组成有所不同,本试验测定结果显示大蒜多糖由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖组成。
其可能原因主要有几点:①文献报道的大蒜多糖提取工艺与本试验不同,得到的大蒜多糖的质量不完全相同;②本试验提高了检测的灵敏度,测定出含量较低的阿拉伯糖;③本试验方法提高了分离能力,将原本不易分开的木糖和甘露糖分离。
通过离子色谱测定大蒜多糖的单糖组成,不仅可以分析多糖的构成,而且准确测定了各单糖的含量,单糖含量之和可以用来衡量对比多糖的质量。
与传统比色法测定总多糖相比,消除了非糖类成分的干扰,提高了检测的专属性,结果更加真实,同时为其他多糖的质量控制提供了借鉴。
参考文献:[1] 薛欣,张立石,柏冬,等.大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞的杀伤作用[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(14):152-155.[2] 包永芬,单士刚.大蒜多糖对甲醛所致人胚肝细胞损伤的保护作用[J].河北医药,2013,35(1):16-17.[3] 向宏.魔芋大蒜多糖胶囊治疗高脂血症的临床疗效观察[J].医学信息:中旬刊,2011,25(2):652-653.[4] 史毓杰,江振友,陈琛,等.大蒜多糖对中波紫外线辐射后HaCaT细胞凋亡的影响[J].中国老年学杂志,2011,31(9):1590-1591.[5] 张民,毕华,纪绪前,等.大蒜多糖提取物组成成分分析及通便功效研究[J].中国食品添加剂,2012,13(4):75-79.[6] 余薇,李璐,姚社,等.蒜多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用[J].中国药理学通报,2010,26(5):697-699.[7] 姜中毅,程富胜,苏鹏.大蒜多糖对四氯化碳致小鼠肝炎血清及组织转氨酶影响[J].甘肃农业大学学报,2008,50(4):40-42.[8] 梁存权.比色法测定植物多糖含量方法概述[J].北方药学,2011,8(12):4,86.[9] 王瑞海,柏冬,刘丽梅.比色法测定大蒜多糖提取物中总多糖含量[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(10):158-161.[10] 刘庆生,范志影.离子色谱法检测糖[J].现代科学仪器,2005,22(1):75-78.[11] 欧云付,尹平河,赵玲,等.离子色谱法测定大蒜中的糖[J].光谱实验室,2006,23(3):629-632.[12] 李国强,尹平河,赵玲,等.离子色谱-积分脉冲安培检测法测定大蒜多糖的单糖组成[J].分析测试学报,2007,26(3):401-403,408.(收稿日期:2013-12-04;编辑:陈静)。