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紫外分光光度法测定维生素B1片的含量李刚（四川大学华西药学院四川成都）摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。
关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法2.1 测定波长的选择：分别称取维生素B1标准品，维生素B1片粉，维生素B1空白辅料各10mg，平行配制：加盐酸溶液适量溶解后，用盐酸溶液定容至50ml，摇匀后精密量取1ml，盐酸溶液定容至25ml，摇匀后在紫外/可见光区进行全波长扫描，测得不同波长下的吸光度值。
2.2 线性与范围：取五个100ml的容量瓶，精密量取维生素B1对照品（200ug/ml）4.00、5.00、6.00、7.00、8.00ml，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀，每瓶中对照液浓度分别为8.00、10.00、12.00、14.00、16.00ug/ml，在246nm波长处进行吸光度测定，以吸光度与维生素B1对照液浓度进行最小乘法回归分析，得到回归方程，此为标准曲线。
维生素1B 片的含量测定一．实验目的1.掌握标准曲线法测定药物含量的方法；2.熟悉紫外—可见光光度计的原理和操作。
二、实验原理维生素B1结构中的嘧啶环为一芳香杂环，具有紫外吸收。
用维生素B1的标准品的稀释浓度梯度溶液测吸光度，得到标准曲线，再根据所测样品的吸光度求浓度， 求出标示量%=S*m W*n *V *Cx *100%三、实验药品及仪器实验药品：维生素1B 片10片，盐酸溶液，维生素B1标准品实验仪器：紫外—可见光光度计，50ml 容量瓶*10，玻璃棒，漏斗，烧杯 四、实验内容及步骤1. 用分析天平精密称取维生素B1标准品10mg ，于小烧杯中加适量稀盐酸溶解，振摇十分钟至完全溶解，转移至50ml 容量瓶用盐酸定容；2. 分别精密量取溶液1ml ，1.5ml, 2ml,2.5ml, 3ml 于50ml 容量瓶，加盐酸稀释至刻度，用紫外—可见光光度计测得其对应吸光度，得维生素B1标准曲线； 3取维生素B1药片10片，于分析天平称重，得平均片重`W=10m； 4.研细（用研钵），用分析天平精密称取约0.13g （相当于维生素1B 10mg ），于小烧杯中加适量稀盐酸溶解，振摇十分钟至完全溶解，转移至50ml 容量瓶用盐酸定容，摇匀。
5. 用干燥滤纸滤过，精密量取滤液2mL ，置另一50mL 量瓶中，再加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。
再做平行溶液三份；6.分别测三组样品的吸光度，再依据标准曲线求得浓度，再依据公式求得标示量。
五、注意事项1. 仪器的准备（1）开启电源，使仪器预热20分钟；（2）开机前，先确认仪器样品室内是否有东西挡在光路上，以免影响仪器的自检； 2. 仪器的操作步骤（1）设置波长（246nm ）； （2）测定；（3）数据记录与处理。
3. 将比色皿洗净装盒，关机；4. 维生素1B 的紫外吸收峰随溶液pH 的变化而不同，因此要严格控制溶液的pH 值。
5. 本品含维生素1B （HCl OS ClN H C 41712）应为标示量的90.0%~110.0%。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量一、实验目的1、掌握紫外分光光度法的测定原理；2、了解维生素B1片的含量测定方法；3、掌握溶液制备、仪器操作及数据处理方法。
二、实验原理维生素B1 （Thiamine）是维生素B群中十分重要的一种，对人体神经系统、消化系统、心脏以及肝脏的功能有着重要的影响。
现代医学认为缺乏维生素B1易引起多种神经系统和消化系统疾病，如多发性神经炎、骨骼肌炎、胆汁淤积等。
因此，测定维生素B1 的含量对维生素B1 的药品质量控制及医学研究具有重要的意义。
紫外分光光度法是一种比较常用的药物质量控制方法。
维生素B1 的主要吸收峰位于紫外波长区域，适合进行紫外分光光度法测定。
维生素B1 的紫外吸收峰位于约265nm处（ε=7.5×10^3～7.9×10^3L·mol^-1·cm^-1），故以此为测定波长。
按维生素B1的相对分子质量和吸光系数计算，摩尔吸光系数ε较小，因此，采用长程比对测定法可以有效地提高测定的精度和准确性。
三、实验步骤(一) 试样的制备称取维生素B1片约0.15g（准确称量），将其放在25mL量瓶中，用0.1mol/L的盐酸溶液溶解，摇均并用0.1mol/L盐酸溶液定容至刻度。
(二) 光度计的操作开启UV-2550型紫外分光光度计的电源，按照使用说明将紫外探测器调至265nm，并进行光谱校验。
进入光度计工作界面，将石英比色皿放入样品室，调节光程，读取空白吸光度。
取紫外分光光度计检测轨道上的纯水作为空白，用0.1mol/L盐酸溶液调整到约pH1.5。
(三) 具体测定操作1、测定工作会进行自动计算，记录吸光度A1。
2、再取一组相同体积的样品溶液，重复第1步操作，记录吸光度A2。
3、若A1、A2之间差异大于0.1，则须重采样求数值，并重复第1、2步操作。
4、根据空白吸光度及上述测定步骤所得的吸光度，计算维生素B1 的含量。
四、实验结果及分析按照上述实验操作，测得A1=0.83，A2=0.85，需进行差异校正，先计算中和点pH：Kb=1.20×10^-6pKb=5.92pH=pKb-log([B]+[BH+])[OH-]=[B][OH-]^2/(C-B)=Kb代入数值得[B]=0.026 mol/LpOH=pKa+log([BH+]/[B])pH=14-pOH从而可得pH=1.5+4.72=6.22校正值：K=（εdA/dl）/X式中X系维生素B1 的摩尔质量，则需要通过水合物计算出来，其分子量为328.81。
简述uv法测定维生素b1片含量的原理维生素B1，也称为硫胺素，是一种水溶性维生素，对维持神经系统和心血管系统的正常功能至关重要。
由于人体无法合成维生素B1，因此需要通过食物来摄入。
为了保证人体充足摄入维生素B1，对药品和食品中维生素B1的含量进行准确测定是非常重要的。
现代药学和食品科学中常用的方法之一是通过紫外-可见光谱法（UV法）来测定维生素B1的含量。
该方法基于维生素B1与碱液或酸液反应生成具有最大吸收峰的产物，通过测定吸收光谱来确定维生素B1的含量。
UV法测定维生素B1的含量的基本原理如下：首先，在适当的碱液条件下，维生素B1（硫胺素）会与硝基苯胺（p-nitroaniline）发生酸碱反应，生成深黄色的络合物。
这个络合物在紫外-可见光区域（200-400 nm）吸收的最大波长为285 nm。
这种络合物的形成是维生素B1定量检测的基础。
然而，硝基苯胺也会在此条件下与其他物质反应，产生类似的吸收峰，因此需要通过对照试验来排除干扰。
对照试验一般使用硫酸作为试剂，通过与硫胺素生成无色络合物来消除干扰。
步骤如下：1. 准备标准溶液：取一定量的纯维生素B1溶于适量的碱液中，加入适量的硝基苯胺。
2. 准备样品：将待测样品（维生素B1片）加入适量的碱液中，加入适量的硝基苯胺。
3. 非特异性对照试验：对照试验组中加入适量的硫酸，与硫胺素反应生成无色络合物，该试剂可消除其他物质对测量的干扰。
4. 测定吸光度：将标准溶液和待测样品的吸光度分别测定于285 nm处。
5. 建立标准曲线：根据标准溶液的吸光度和已知浓度之间的关系，建立标准曲线。
6. 测定样品浓度：根据待测样品的吸光度，对照标准曲线，推算出维生素B1的浓度。
7. 计算含量：根据样品的体积和推算出的浓度，计算出维生素B1的含量。
通过上述的步骤，可以利用紫外-可见光谱法准确测定维生素B1片中维生素B1的含量。
UV法测定维生素B1含量的优点包括操作简单、结果准确可靠、不需要昂贵的仪器设备和试剂，并且测定速度较快。
紫外分光光度法测定LYCD中维生素B1含量的研究
高艳玲;杨迪;路福平;杜连祥
【期刊名称】《化学与生物工程》
【年(卷),期】2008(25)1
【摘要】利用紫外分光光度法测定了LYCD中维生素B1含量,其最佳测试条件为:显色剂用量1.00 mL,显色时间15 min,碱性介质用量1.00 mL,测定波长433 nm.其线性回归方程为y=0.0479x+2.5331,相关系数R2=0.9989,线性范围2.0～10.0 μg·mL-1,平均回收率为100.7%,RSD为1.18%(n=5).该方法简单、易操作、重现性好.
【总页数】3页(P73-75)
【作者】高艳玲;杨迪;路福平;杜连祥
【作者单位】天津科技大学生物工程学院,天津市工业微生物重点实验室,天
津,300457;天津科技大学生物工程学院,天津市工业微生物重点实验室,天
津,300457;天津科技大学生物工程学院,天津市工业微生物重点实验室,天
津,300457;天津科技大学生物工程学院,天津市工业微生物重点实验室,天
津,300457
【正文语种】中文
【中图分类】O657.32
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4.紫外分光光度法测定维生素 B1注射液含量的不确定度评价 [J], 马秋冉;张璐;董玲玲;杨星;赵富华;于晓辉
5.紫外分光光度法测定维生素B1散的含量 [J], 王娅芳
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紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量项⽬五紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量（2学时）⼀实验⽬的1 掌握紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚含量的实验⽅法和操作技能；2 掌握⽚剂的取样⽅法，并正确计算⽚粉的取样范围；熟悉样品前处理⽅法；3 学会采⽤紫外分光光度计测定药物含量的操作⽅法和注意事项。
⼆实验原理维⽣素B1分⼦中具有共轭双键结构，在紫外光区有特征吸收。
在pH2时，最⼤吸收在246nm处,据此，可⽤紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量。
三材料与仪器盐酸溶液（9→1000）、电⼦天平、紫外分光光度计、研钵、维⽣素B1⽚四实验内容取本品20⽚，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维⽣素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约7ml，振摇15分钟使维⽣素B1溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释⾄刻度，摇匀，⽤⼲燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另⼀100ml量瓶中，再加盐酸溶液（9→1000）稀释⾄刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）。
在 246nm的波长处测定吸光度，按C12H17ClN4OS·HCl的吸收系数（E1cm1%）为421计算，即得。
本品含维⽣素B1应为标⽰量的90.0%~110.0%。
五注意事项1 ⽚剂取样量的计算：取样量=（1±10%）×主药规定量×平均⽚重/每⽚标⽰量2 结果计算式中 A-------供试品溶液的吸光度；E 1cm 1%-------供试品溶液的百分吸收系数；标⽰量（%）=W×100%标⽰量A ×1%×D ×VE1cm 1%×L×WL--------吸收池的厚度；D--------供试品的稀释倍数；V--------供试品溶液的体积；W--------供试品的取样量；W--------⽚剂的平均⽚重。
2 ⽚剂中不溶性辅料对测定有⼲扰，需滤过消除辅料的⼲扰；3 本法采⽤吸收系数法定量，所⽤的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸光度精度要进⾏校正。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量前言维生素B1又称盐酸硫胺或抗神经炎素, 化学名为４-甲基-３-［（２-甲基-４-氨基-５-嘧啶基）甲基］-５-（２-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐。
为白色结晶或结晶性粉末。
在酸性溶液中很稳定, 在碱性溶液中易被氧化和受热破坏。
遇光和热效价下降，故应置于遮光、凉处保存, 且不宜久贮, 具有维持正常糖代谢的作用，在临床上常用于防治缺乏维生素B1所致的脚气病，也用于神经炎、消化不良等症的辅助治疗[1] 。
近年来测定维生素B1片含量的方法较多，如高效液相法[2] 、荧光分光光度法[3] 、毛细管电泳电化学法[4] 、氧瓶燃烧电位滴定法[5] 等。
这些方法操作麻烦、实验时间较长。
紫外分光光度法仪器较便宜，普及度高且操作较简便，此外，维生素B1是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵类化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐[6] 。
维生素B1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收峰，故本次选用紫外分光光度法测定维生素B1含量，根据朗伯-比尔定律，利用紫外吸收光谱来进行定量分析，方法准确、简便、重复性好。
1. 仪器与试药1.1仪器紫外分光光度仪，分析天平，25mL棕色容量瓶，移液管。
1.2 试药维生素B1片；维生素B1生化试剂BR；0.1mol·L -1 HCl（自制）2．实验方法与结果2.1 样品预处理取维生素B1片20片（标示量为10.0mg），总重为1.23921g，其平均质量为61.96mg，充分研磨并混匀，称取3份样品置于25mL棕色容量瓶中，3份样品质量各为10.53mg、10.28mg、10.27mg，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL备用。
2.2对照品溶液配制维生素B1对照溶液：在分析天平上精密称取维生素B1 10.90mg置于25mL 棕色容量瓶，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL，作为维生素B1对照品储备液。
紫外分光光度法测定维生素B1片含量的不确定度分析
莫姿丽;黄诺嘉
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2009(21)6
【摘要】目的建立维生素B1片含量测定的不确定度评定方法.方法采用<中国药典>2005年版二部的方法测定维生素B1片含量,对紫外分光光度法测定中的各影响因素进行分析.结果量化了各分量的相对标准不确定度,并计算出合成标准不确定度,取k=2(置信概率95%),得出扩展不确定度.结论在现有条件下使测定结果受控,并可通过分析各分量的相对标准不确定度的大小来优化实验,使测定结果更加可靠.【总页数】3页(P87-89)
【作者】莫姿丽;黄诺嘉
【作者单位】广东省汕头市药品检验所,汕头,515041;广东省汕头市药品检验所,汕头,515041
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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3.紫外分光光度法测定维生素B1片含量以及方法验证 [J], 高青
4.紫外分光光度法测定维生素 B1注射液含量的不确定度评价 [J], 马秋冉;张璐;董玲玲;杨星;赵富华;于晓辉
5.紫外-可见分光光度法测定维生素B_1片含量的不确定度分析 [J], 李会轻;庞靖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂
1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，
2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法
处方分析：
组成处方量(g) 比例(%)
维生素B110 16.39
淀粉20 32.78
糊精30 49.18
硬脂酸镁 1.0 1.639
生产1000片
根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：
取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，
按C
12H
17
ClN
4
OS.HCl的吸收系数（1%
1cm
E）为421计算，即得。
2、方法验证
2.1.线性和范围
精密称取维生素B
1
对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀
释至刻度，制备成含维生素B
1
250μg/ml的对照溶液。
分别精密量取该溶液3、4、5、6、7ml
置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，以吸收度（A）对浓度（C）回归处理，得标准曲线和回归方程。
2.2.回收试验（准确度试验）
对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同2.1项下。
精制原料约0.25g，置50ml量瓶中，加入盐酸溶供试品溶液的制备：精密称取维生素B
1
溶液储备液；分别精密量取该溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，制成5.0mg/m维生素B
1
液4、5、6ml置已加入比例量辅料（0.15g，1/100天平）的100ml量瓶中（一式三份），加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，摇匀，得高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，用对照品比较法计算含量。
2.3、精密度试验
取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），一式5份，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）适量，振摇15min，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）
12.5ug/ml的供试品溶液。
稀释至刻度，摇匀，即得约含维生素B
1
对照品适量，用盐酸溶液（9→1000）稀释制成12.5μg/ml的对照品溶液。
另取维生素B
1
照分光光度法（ChP2005二部附录IV A）在246nm处分别测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度，用百分吸光度和对照品比较法分别进行计算，即得。
表1 维生素B1标准曲线的制备
编号 1 2 3 4 5
对照液浓度7.50 10.00 12.50 15.00 17.50
（ug/ml）
吸光度A 0.312 0.391 0.480 0.559 0.640
图2 维生素B1标准曲线图
由图2可得，采用此法进行维生素B1含量的测定，在浓度为8.00-16.00ug/ml 范围内线性关系较好（R²=0.9997）。
表2 维生素B1片回收率实验结果
编号加入量
（mg）
对照液浓
度（ug/ml）
吸光
度A
测得对照
液浓度
（ug/ml）
回收率（%）
1 10.00 10.00 0.370 9.26 92.6
2 10.00 10.00 0.370 9.26 92.6
3 10.00 10.00 0.370 9.26 92.6
4 12.50 12.50 0.45
5 11.84 94.7
5 12.50 12.50 0.45
6 11.8
7 95.0
6 12.50 12.50 0.455 11.84 94.7
7 15.00 15.00 0.539 14.38 95.9
8 15.00 15.00 0.539 14.38 95.9
9 15.00 15.00 0.541 14.44 96.3
回收率平均值(%)=94.48%
RSD=1.6%
由表2可得，采用此法进行维生素B1含量的测定，加入量在10.00-15.00mg范围内，对照液浓度在10.00-15.00ug/ml范围内时，回收率较高。
表3 维生素B1片精密度考察实验结果
编号加入片粉量（g）吸光度A 浓度（ug/ml）百分吸光度
法（%）对照品比较法（%）标准曲
线%
1 0.1724 0.431 12.57 81.44 95.88 88.38
2 0.1730 0.427 12.61 80.4
3 94.69 87.14
3 0.1723 0.428 12.61 80.62 94.91 87.38
4 0.1716 0.42
5 12.51 80.70 95.00 87.35
5 0.1723 0.433 12.5
6 81.89 96.40 89.03
对照
品
0.447 12.50
当m=0.1715g 维B1浓度12.50ug/ml
RSD1（百分吸光度法）=0.8%
RSD2（对照品比较法）=0.8%
RSD3（标准曲线法）=0.9%
表4 维生素B1片含量测定结果
测定方法含量为标示量的百分数范围含量为标示量的百分数均值
百分吸光度法84.43%-81.89% 81.02%
对照品比较法标准曲线法94.69%-96.40%
87.14%-89.03%
95.38%
87.86%
百分吸光度法：含量不符合规定标准。
对照品比较法：含量符合规定标准。
标准曲线法：含量符合规定标准。
高效液相色谱法测定维生素B1的含量。
