毒理学基础实验设计.
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毒理学实验报告毒理学实验报告引言:毒理学是研究毒物对生物体产生的有害效应的科学。
毒理学实验是评估和研究毒物对生物体的毒性的重要手段之一。
本文将介绍一项关于某种化学物质的毒理学实验。
实验目的:本实验的目的是评估化学物质X对小鼠的急性毒性和慢性毒性,并研究其可能的致癌性。
实验设计:1. 急性毒性实验:将实验小鼠分为不同剂量组和对照组,分别给予不同剂量的化学物质X。
观察小鼠在给药后的行为、体重变化、死亡情况等指标,以评估化学物质X的急性毒性。
2. 慢性毒性实验:将实验小鼠分为长期接触组和对照组,长期给予化学物质X。
观察小鼠在长期接触后的行为、体重变化、器官病变等指标,以评估化学物质X的慢性毒性。
3. 致癌性实验:将实验小鼠分为不同剂量组和对照组,长期给予化学物质X。
观察小鼠在长期接触后的肿瘤发生情况,以评估化学物质X的致癌性。
实验结果:1. 急性毒性实验结果显示,高剂量组的小鼠在给药后出现明显的中毒症状,如食欲减退、运动能力下降等。
部分小鼠在给药后短时间内死亡。
低剂量组的小鼠则没有出现明显的中毒症状,但体重增长速度较对照组较慢。
2. 慢性毒性实验结果显示,长期接触化学物质X的小鼠在行为上出现明显的异常,如活动减少、毛发脱落等。
体重增长速度较对照组明显减慢。
解剖观察发现,部分小鼠出现肝脏、肾脏等器官的病变。
3. 致癌性实验结果显示,长期接触高剂量化学物质X的小鼠中出现了肿瘤的发生。
肿瘤种类包括肺癌、肝癌等。
低剂量组和对照组的小鼠中未观察到肿瘤的发生。
讨论:根据实验结果,可以得出以下结论:1. 化学物质X对小鼠具有急性毒性和慢性毒性。
高剂量给药会导致小鼠出现明显的中毒症状和死亡,低剂量给药会导致小鼠体重增长速度减慢。
2. 长期接触化学物质X会引起小鼠行为异常、体重减慢和器官病变。
这表明化学物质X对小鼠的慢性毒性较明显。
3. 长期接触高剂量化学物质X会增加小鼠发生肿瘤的风险,表明化学物质X可能具有致癌性。
结论:本实验结果表明,化学物质X对小鼠具有急性毒性、慢性毒性和致癌性。
食品科学毒理学实验教案一、实验目的1. 让学生了解和掌握毒理学的基本概念、原理和方法。
2. 培养学生对食品安全性的认识,提高防范意识。
3. 通过对食品中毒理学实验的学习,使学生能够识别和判断食品安全风险。
二、实验原理1. 毒理学基本概念:毒理学是研究外源化学物质对生物体产生有害效应的科学。
2. 食品安全性评价:通过对食品中化学污染物、微生物等有害因素的检测和评估,确定食品安全性。
3. 实验方法:主要包括急性毒性实验、慢性毒性实验、遗传毒性实验等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:实验动物(如小鼠、大鼠)、食品样品、试剂等。
2. 实验仪器:显微镜、离心机、分析天平等。
四、实验步骤1. 急性毒性实验:(1)准备实验动物,对其进行体重测量和分类。
(2)将食品样品配制成不同浓度,分别给予实验动物。
(3)观察实验动物的食欲、活动状况、死亡情况等,记录数据。
(4)对实验数据进行统计分析,得出急性毒性LD50值。
2. 慢性毒性实验:(1)准备实验动物,对其进行体重测量和分类。
(2)将食品样品配制成不同浓度,分别给予实验动物。
(3)观察实验动物的生活状况、体重变化、病理变化等,记录数据。
(4)对实验数据进行统计分析,评估慢性毒性影响。
3. 遗传毒性实验:(1)准备实验材料,如细菌、细胞等。
(2)将食品样品配制成不同浓度,分别处理实验材料。
(3)观察实验材料的遗传变异情况,如突变频率、基因损伤等。
(4)对实验结果进行统计分析,评估遗传毒性影响。
五、实验结果与分析1. 通过对急性毒性实验数据的分析,得出食品样品的急性毒性LD50值。
2. 分析慢性毒性实验数据,评估食品样品对实验动物长期健康的影响。
3. 分析遗传毒性实验结果,判断食品样品是否具有遗传毒性。
注意事项:1. 实验过程中要严格遵守实验室规定,确保实验安全。
2. 对待实验动物要有人道主义精神,确保其福利。
3. 实验数据要真实可靠,避免误差。
1. 实验报告内容:(1)实验目的(2)实验原理(3)实验材料与仪器(4)实验步骤(5)实验结果与分析(6)讨论与结论(7)参考文献2. 实验报告格式:(1)食品科学毒理学实验报告(2)作者:实验者姓名(3)日期:实验完成日期(4)单位:实验所在学校或研究机构七、实验考核与评价1. 实验考核内容:(1)实验操作技能(3)实验结果分析与讨论2. 实验考核方式:(1)实验操作过程观察:占比30%(2)实验报告评分:占比40%(3)实验结果分析与讨论:占比30%八、实验拓展与研究1. 拓展方向:(1)食品毒理学在食品安全评价中的应用(2)新型食品毒性检测技术研究(3)食品安全与健康的关系2. 研究方法:(1)文献综述:查阅相关领域的研究成果和进展。
毒理学实验方案一、实验目的本实验的目的是通过现代毒理学常用的实验方法和技术,了解化学物质对生物体的毒性作用,探究毒物的剂量-效应关系,为毒物的风险评估和毒理学研究提供实验基础。
二、实验原理1. 毒理学基本概念毒理学是研究外源性物质对生物体的有害作用及其机理的学科。
毒性是指有害物质与生物体接触后引起的生物学、生化学或药理学的异常反应。
毒力则是指毒物对生物体的损害能力。
2. 毒物的剂量-效应关系毒物的剂量-效应关系是指毒物剂量与生物体效应之间的关系。
根据剂量-效应曲线,可以推断毒物的最低有效剂量(LDD)和最大耐受剂量(MTD),以及剂量引起半最大效应(ED50)等参数。
3. 毒理学实验方法(1)急性毒性试验:通过给小鼠、大鼠等动物一次性或短期高剂量的毒物暴露,观察其致死率和临床毒理学表现,确定毒物的急性毒性。
(2)亚急性和慢性毒性试验:通过长期低剂量的毒物暴露,观察其对生物体的慢性毒性。
常用的方法包括亚急性口服试验、亚急性皮肤接触试验和慢性吸入试验。
(3)遗传毒性试验:通过检测毒物对遗传物质(DNA和染色体)的损害来评估毒物的遗传毒性。
常用的方法包括热休克试验、微核试验和染色体畸变试验。
三、实验步骤1. 实验前准备(1)选择合适的实验动物,如小鼠、大鼠等。
(2)准备毒物溶液,确定不同浓度的毒物。
(3)配制实验动物的饲料和饮水,保证其营养和水分的摄入。
2. 实验操作(1)急性毒性试验:①将实验动物按随机分组的原则分成不同剂量组和对照组。
②给实验动物灌胃或注射不同剂量的毒物。
③观察实验动物的致死率和临床表现,如体重变化、食欲、精神状态等。
(2)亚急性和慢性毒性试验:①将实验动物按随机分组的原则分成不同剂量组和对照组。
②将不同浓度的毒物溶液涂抹在实验动物的皮肤上,或使实验动物吸入不同浓度的毒物。
③观察实验动物的生长发育、行为、生殖功能等方面的变化,同时进行临床化验和病理学检查。
(3)遗传毒性试验:①将实验动物按随机分组的原则分成不同剂量组和对照组。
实习一毒理学动物实验基础【实验设计的原则】毒理学作为一门动物实验课程,应该遵循动物实验中对照、重复和随机三个基本原则。
【不成文原则】1、保护好自己最重要。
2、经典的步骤只是提供一个符合的大多数人习惯的参考,具体实验时每个人可按照自己的习惯以及现实有的条件来完成操作,只要能够按要求完整地实现相关的操作目的即可。
【实验动物】大鼠(价格低廉,同时相比小鼠,大鼠的生理生化过程与人类较为接近,故在毒理学实验中常用)【大鼠的捕捉及固定】大鼠的门齿很长,在抓取方法不当而受到惊吓或激怒时易将操作者手指咬伤,所以,不要突然袭击式地去抓它,取用时应轻轻抓住其尾巴后提起,置于实验台上,用玻璃钟罩扣住或置于大鼠固定盒内,这样即可进行尾静脉取血或注射。
如要作腹腔注射或灌胃等操作时,实验者应戴上手套(有经验者也可不戴),右手轻轻抓住大鼠的尾巴向后拉,但要避免抓其尖端,以防尾巴尖端皮肤脱落,左手抓紧鼠两耳和头颈部的皮肤,并将大鼠固定在左手中,右手即可进行操作。
【大鼠性别的鉴定】动物性别不同对毒物的敏感性也不同,因此,要根据实验要求选择性别,一般实验如对性别无特殊要求者,以选用雌雄动物各半。
大鼠、小鼠主要以肛门与生殖空间的距离区分,间距大者为雄性,小者为雌性。
成年雄鼠卧位时可见到睾丸,雌性在腹部可见乳头。
【实验动物的编号及标记方法】好的标记应达到清晰、耐久、简便适用的要求。
常用的方法有化学染色法,耳缘剪口法或打小孔法,挂牌法及烙印法。
1. 化学染色法: 染色标记法是用毛笔或棉签蘸取化学药品,在实验动物体表不同部位涂上斑点,以示不同编号。
常用染色液:3%~5%的苦味酸溶液(染成黄色);0.5%的中性品红溶液(染成红色)(1)用一种染色剂染动物的不同部位,颜色可标记1~10号(10号不标记)。
如图:(2)若用两种颜色的染液配合使用,其中一种颜色代表个位数,另一种颜色代表十位数,可编到99号。
例如要标记12号,就可以在左前腿涂上红色,左腹部涂上黄色。
毒理学基础案例讨论(二)【目的要求】1.掌握致畸、致癌、致突变的基本概念。
2.熟悉生殖和发育毒性的评价方法【案例1】上世纪60年代初,欧洲各国陆续发生了一种可怕的现象:许多刚出生的婴儿出现一种罕见的畸形,他们的手脚比正常人短,甚至根本没有,很像海豹的鳍足, 这种症状被称为海豹肢症。
1957年到1962年间,联邦德国就有5500名海豹肢症患儿出生,英国则高达8000多名。
恐慌在蔓延,人们急切地寻找着其中的原因。
此时,澳大利亚的产科医生威廉·麦克布里德也发现了类似的患儿。
经调查,相关产妇都曾服用过早期妊娠止吐药物沙利度胺(即反应停) 。
他的第一反应就是两者肯定有内在联系,深入的调查更是证实了他的猜想。
1961年,英国著名杂志《柳叶刀》刊登了威廉的来信。
信中指出,反应停是导致海豹肢症的罪魁祸首,海豹肢症患儿是药物检测失控带来的灾难性后果。
【问题讨论1】 1. 什么是生殖毒性?2. 什么是发育毒性?发育毒性有哪些具体的表现?3. 出生缺陷包括哪些?“反应停”在1957年作为镇静催眠剂上市。
美国一家小制药公司梅里尔公司获得“反应停”的经销权,梅里尔公司研究过“反应停”对怀孕大鼠和孕妇的影响,并没有发现异常。
人们后来才知道,大鼠和人不一样,体内缺少一种把“反应停”转化成有害异构体的酶,不会引起畸胎。
“反应停”的副作用则发生于怀孕初期(怀孕前三个月),即婴儿四肢形成的时期,梅里尔公司所试验的孕妇都是怀孕后期的。
经过调查证实,母亲从停止月经算起,34-54天之内,服用此药后,迟早会出现各种不同的症状。
基因上的生命密码在正常情况下,手脚的长度,以及5个手指等都应当按照指令有规律地形成。
可是反应停能使这种指令在某一部位受到障碍,其结果就产生畸形儿。
通过对数十种不同种属动物进行的致畸试验表明,反应停对大约15个种属的动物有不同程度的致畸作用,并且致畸作用有明显的种属差异。
小鼠和大鼠的大部分种系不敏感。
家兔的几个种系和绝大部分灵长类动物较敏感,并可观察到与人相似的缺肢或短肢畸形。
毒理学实验设计模板一、引言毒理学实验是研究化学物质或其他物质对生物体的毒性作用的一种方法,其目的是评估化学物质或其他物质对人类和环境的潜在危害性。
本文将介绍毒理学实验设计模板,以帮助研究者更好地设计毒理学实验。
二、实验设计1. 实验目的明确实验目的是设计一个成功的毒理学实验的关键。
在确定实验目的时,需要考虑以下几个方面:(1)所要评估的化学物质或其他物质;(2)所要评估的生物体;(3)所要评估的毒性效应;(4)所要达到的结果。
2. 实验类型根据实验目的和需要评估的化学物质或其他物质,可以选择以下几种类型的毒理学实验:(1)急性毒性试验:评估单次暴露下化学物质或其他物质对生物体产生致死或致残效应。
(2)亚急性毒性试验:评估连续暴露下化学物质或其他物质对生物体产生致死、致残或亚致死效应。
(3)慢性毒性试验:评估长期暴露下化学物质或其他物质对生物体产生致癌、致畸或其他慢性毒性效应。
3. 实验方法根据实验类型和实验目的,选择合适的实验方法。
常用的实验方法包括:(1)口服试验:将化学物质或其他物质加入动物饮水或食物中,评估其对生物体的毒性效应。
(2)皮肤接触试验:将化学物质或其他物质涂抹在动物皮肤上,评估其对生物体的毒性效应。
(3)吸入试验:将化学物质或其他物质喷雾至动物呼吸道中,评估其对生物体的毒性效应。
4. 动物模型选择合适的动物模型是评估化学物质或其他物质对生物体毒性效应的关键。
常用的动物模型包括:(1)小鼠;(2)大鼠;(3)兔子;(4)犬。
5. 实验设计要点在设计毒理学实验时需要考虑以下几个要点:(1)样本量:确定足够数量的样本以确保结果具有统计显著性。
(2)对照组:使用对照组以比较实验组的结果。
(3)剂量:确定合适的剂量以评估化学物质或其他物质的毒性效应。
(4)实验时间:确定合适的实验时间以评估化学物质或其他物质对生物体的毒性效应。
三、数据分析1. 数据收集在进行毒理学实验后,需要收集实验数据。
四氯化碳毒理学的基础实验设计生化系食品082 200800602052 黄瑞锦引言:在进行某一种受试物毒理学的基础实验设计前要先认识和了解其有关知识。
所以,要进行四氯化碳毒理学的基础实验设计先认识和了解有关性质。
一、理化性质四氯化碳 (carbon tetrachloride,CCl4),化学式CCl4,又称四氯甲烷(tetrachloromethane)。
是一种比水重,无色、易挥发、不易燃,易流动的液体。
具氯仿的微甜气味,并具有一种令人愉快的气味。
相对分子量153.84,相对密度1.595g/cm3(20/4℃),沸点76.74℃,熔点-22.8℃,蒸气压15.27kPa(25℃),蒸气密度5.3g/L。
四氯化碳的蒸气有毒,它的麻醉性较氯仿为低,但毒性较高。
吸入人体2~4ml就可使人死亡。
四氯化碳在水中的溶解度很小,且遇湿气及光即逐渐分解生成盐酸。
易溶于各种有机溶剂,能与醇、醚、氯仿、苯等任意混合。
对于脂肪、油类及多种有机化合物为一极优良的溶剂。
四氯化碳用作灭火剂时,不能灭活泼金属的火,因为活泼金属可以与之反应。
也会在高温下与水反应生成有毒物质。
遇火或炽热物可分解为二氧化碳、氯化氢、光气和氯气等。
二.污染来源四氯化碳(CCl4)是较常用的有机溶剂。
在工业生产中用作萃取剂、清洗剂、脱脂剂、制冷剂、灭火剂和驱虫剂等。
在医学上用作麻药剂。
在日常生活中,用作衣服的洗涤及去脂等。
在生产和使用过程中,四氯化碳可释入空气而污染环境。
近年来,美国对供水系统中CCl4的检测结果发现,约2000万人饮用的水源被CCl4污染。
据估计美国有近400万人在生产中暴露于CCl4中。
三.毒性作用CCl4可经消化道、呼吸道和皮肤进入机体。
吸入量的20%~35%可被人及动物机体吸收。
CCl4在血液中的浓度与脑中的含量接近,脂肪组织蓄积的量为血液中的2~8倍。
部分CCl4在肝微粒体细胞色素P450的催化作用下,通过脱卤素和氧化作用,解离成Cl·和CCl3·自由基,后者能使生物膜脂质过氧化,扰乱干细胞脂质代谢,引起干细胞坏死。
四氯化碳毒理学的基础实验设计生化系食品082 200800602052 黄瑞锦引言:在进行某一种受试物毒理学的基础实验设计前要先认识和了解其有关知识。
所以,要进行四氯化碳毒理学的基础实验设计先认识和了解有关性质。
一、理化性质四氯化碳 (carbon tetrachloride,CCl4),化学式CCl4,又称四氯甲烷(tetrachloromethane)。
是一种比水重,无色、易挥发、不易燃,易流动的液体。
具氯仿的微甜气味,并具有一种令人愉快的气味。
相对分子量153.84,相对密度1.595g/cm3(20/4℃),沸点76.74℃,熔点-22.8℃,蒸气压15.27kPa(25℃),蒸气密度5.3g/L。
四氯化碳的蒸气有毒,它的麻醉性较氯仿为低,但毒性较高。
吸入人体2~4ml就可使人死亡。
四氯化碳在水中的溶解度很小,且遇湿气及光即逐渐分解生成盐酸。
易溶于各种有机溶剂,能与醇、醚、氯仿、苯等任意混合。
对于脂肪、油类及多种有机化合物为一极优良的溶剂。
四氯化碳用作灭火剂时,不能灭活泼金属的火,因为活泼金属可以与之反应。
也会在高温下与水反应生成有毒物质。
遇火或炽热物可分解为二氧化碳、氯化氢、光气和氯气等。
二.污染来源四氯化碳(CCl4)是较常用的有机溶剂。
在工业生产中用作萃取剂、清洗剂、脱脂剂、制冷剂、灭火剂和驱虫剂等。
在医学上用作麻药剂。
在日常生活中,用作衣服的洗涤及去脂等。
在生产和使用过程中,四氯化碳可释入空气而污染环境。
近年来,美国对供水系统中CCl4的检测结果发现,约2000万人饮用的水源被CCl4污染。
据估计美国有近400万人在生产中暴露于CCl4中。
三.毒性作用CCl4可经消化道、呼吸道和皮肤进入机体。
吸入量的20%~35%可被人及动物机体吸收。
CCl4在血液中的浓度与脑中的含量接近,脂肪组织蓄积的量为血液中的2~8倍。
部分CCl4在肝微粒体细胞色素P450的催化作用下,通过脱卤素和氧化作用,解离成Cl·和CCl3·自由基,后者能使生物膜脂质过氧化,扰乱干细胞脂质代谢,引起干细胞坏死。
CCl4是典型的肝脏毒物,通过各种途径进入人体后,均可引起肝脏的严重损伤,如中心小叶坏死及脂肪变性。
同时受损的还有肾脏、肺泡膜及肺血管。
肾脏及肺的损伤不及肝脏,通常发生于肝脏损害之后,因全身代谢失调而发生。
吸入四氯化碳蒸气时若饮酒、冷冻或提高空气中的含氧量,均可加重毒性作用。
另外,四氯化碳可增加心肌对肾上腺素的敏感性,引起严重心律失常。
人对四氯化碳的个体易感性差异较大,有报道口服3~5ml 即可中毒,29.5ml即可致死。
在160~2OOmg/m3浓度下可发生中毒。
但也有在1~2g/m3浓度下接触3Omin方出现轻度中毒。
目前认为四氯化碳无致畸和致突变作用,但具有胚胎毒性。
根据IARCl972及1979年资料,四氯化碳长期作用可以引起啮齿动物的肝癌,被列为"对人类有致癌可能"一类的化学物。
CCl4能引起皮炎,也可引起湿疹及麻疹。
对皮肤刺激性比苯强。
CCl4可经烧伤皮肤多量进入机体。
皮肤与CCl4接触30min相当于浓度为0.063mg/L的CCl4被人体吸入3h.动物实验发现,小鼠、大鼠、豚鼠及家兔急性中毒时血液中蛋白质含量减低、各种蛋白质比例失调、血清多种酶(转氨酶、醛缩酶、精氨酸酶、黄嘌呤氧化酶、谷酰胺酶、氨基移换酶等)活性增加。
组织学检查显示,肝脏出现脂肪性肝硬化和肾管状上皮退化等。
这些现象与细胞膜渗透性或肝脏本身酶反应过程的破坏有关。
四.临床表现1.急性中毒急性CCl4中毒的病理改变主要在肝脏,同时累及神经系统和肾脏。
另外也可发生心肌炎、支气管炎以及大脑中毒退行性病变。
临床症状有:(1)潜伏期: 一般为1~3天,也有短至数分钟者。
潜伏期长短与接触剂量及侵入途径有关。
经呼吸道或胃肠道吸收中毒的临床表现类似;均可出现中枢神经系统麻醉及肝、肾损害症状。
(2)神经系统症状: 可有头晕、头痛、乏力、精神恍惚、步态蹒珊、短暂意识障碍或昏迷等。
极高浓度吸入时,可因延髓受抑制而迅速出现昏迷、抽搐,甚至突然死亡。
(3)消化道症状: 口服中毒时较明显。
可有恶心、呕吐、食欲减退、腹痛、腹泻及黄疸、肝大、肝区压痛、肝功能异常等中毒性肝病征象。
严重者可发生暴发性肝功能衰竭。
肝损害症状多于发病第2~4天出现。
(4)肾损害症状: 可出现蛋白尿、红细胞尿、管型尿。
严重者出现少尿、无尿、氮质血症等急性肾功能衰竭表现。
(5)其他: 少数患者可有心肌损害、心律失常。
心室颤动及呼吸中枢麻痹多为致死原因。
(6)吸入中毒者常伴有眼及上呼吸道刺激症状。
有时可引起肺水肿。
2.慢性中毒慢性接触CCl4的病变也主要在肝脏。
慢性中毒的报道较为少见。
长期反复接触四氯化碳,可有头晕、乏力、失眠、记忆力减退、食欲不振、恶心、腹泻和腹痛等。
可有肝大、肝功能异常。
严重者可发展为门脉性肝硬化。
少数患者发生球后视神经炎,出现视野缩小,视力减退。
此外,国外还有报道可引起听力障碍、耳蜗前庭系统功能障碍及再生障碍性贫血等。
皮肤长期接触,可因脱脂而出现干燥、脱屑和皲裂等。
五.紧急处理方法吸入:迅速脱离现场至新鲜空气处。
保持呼吸道通畅。
如呼吸困难,给输氧。
如呼吸停止,立即进行人工呼吸。
就医。
误食:饮足量温水,催吐,洗胃。
就医。
皮肤接触:立即脱去被污染衣着,用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。
就医。
眼睛接触:立即提起眼睑,用流动清水或生理盐水冲洗。
就医。
六.治疗方法目前尚无特效解毒剂,主要按一般急救措施及对症治疗。
(1)急性中毒时,应将患者迅速移出现场。
脱去被污染的衣物。
皮肤、眼睛受污染时可用清水或2%碳酸氢钠溶液冲洗,至少l5min以上。
口服中毒者必须及早洗胃,洗胃前,先用液体石蜡或植物油以溶解四氯化碳。
(2)患者应卧床休息,密切观察3~4 天,要注意尿常规、尿量、血肌酐及肝功能情况,及早发现肝、肾损害征象。
(3)早期给氧,给予高热量,高维生素及低脂饮食。
(4)积极防治神经系统及肝、肾功能损害,治疗原则同内科。
出现少尿、无尿时应及早作血液透析或腹膜透析,以防治尿毒症、高钾血症等。
(5)忌用肾上腺素及含乙醇药物。
(6)近年国外曾报道及早应用乙醚半胱氨酸可防止或减轻肝、肾功能损害。
还有以高压氧治疗有效的报道。
实验结果认为高压氧可减少四氯化碳在肝内自由基的形成,从而降低脂质过氧化作用,减轻肝损害。
但国内尚未见报道。
七.基础实验设计1.四氯化碳急性毒性实验设计1.1实验目的为了测试和求出四氯化碳对SD(sprague-dawley)大鼠的致死量(以LD50表示),提供四氯化碳的急性毒作用性质、可能的靶器官和致死原因、剂量-反应关系,提供四氯化碳的进行中毒资料,初步评价对人体产生损害的危险性,为慢性实验以及其他道路学实验提供接触剂量和观察指标选择的依据。
1.2实验方法及步骤通过四氯化碳(CCl4)急性毒性实验设计来进行其对机体的毒性效应的研究。
CCl4作为外源化合物,它的毒性作用也是通过生物体表现出来的,所以生物体对四氯化碳的吸收、排泄及代谢转化过程和生物体本身的种属品系、年龄、营养及健康等机体状态也是影响其毒性作用的重要因素。
因此,对四氯化碳的急性毒性实验设计包括实验动物的选择及分组、四氯化碳进入机体的剂量和方式及时间发布、观察指标和LD50的计算等内容。
1.2.1实验动物的选择及饲养管理本实验选用SD大鼠作为研究对象。
因为大鼠在代谢和毒性反应上与人类较为接近,并且大鼠的繁殖能力较强、价格较低、体积小(占地少、易操作)、寿命短(实验期短)食谱与人相似(杂食动物)及具有便于分析明确的生物指标。
因此,我们选用60只雌雄各半,体重为200g左右(相差不超过10g),未交配和未受孕的健康成年的SD大鼠作为实验对象。
而且试验前要进行1~2周的检疫观察和适应期,剔除临床异常者,所选用的饲料要能满足实验动物的营养需求。
观察期间的喂养大鼠和小鼠的室温控制在(22±3)℃,相对湿度为30%~70%。
饲养密度为每笼2只,无对流风,人工昼夜环境,饮水、饲料清洁,保持室内卫生。
1.2.2实验动物分组为尽量降低和消除动物的个体差异对实验结果的影响,我们将60只雌雄各半的SD大鼠随机分成6组,1个对照组和5个不同药物剂量组,每组10只SD大鼠(雌雄各半)。
1.2.3染毒方法及周期将四氯化碳用0.1%~1%橄榄油或精致花生油配制所需浓度,采用灌胃方法(灌药前要隔夜禁食,灌药后2~4h复食),实验组按0.5ml/100g体重1次给受试物,对照组按0.5ml/100g体重一次给0.1%~1%橄榄油或精致花生油。
观察期为14d.1.2.4剂量选择查相关资料已知四氯化碳的半数致死量为2.92g/kg(大鼠,经口),本实验以此作为计算四氯化碳对SD大鼠一次灌胃的半数致死量LD的中间剂量。
50为2。
92g/kg(大鼠,经口)可知,四由四氯化碳对SD大鼠的半数致死量LD50氯化碳属低毒物质,剂量选择时组距应较大,所以本实验的组距对数值选lg1.6=0.2,上下各推两个剂量组,则四氯化碳SD大鼠灌胃一次实验的剂量设计见下表。
表1 四氯化碳SD大鼠灌胃一次实验的剂量设计1.3毒性观察1.3.1中毒症状全面观察中毒的发生、发展过程和规律以及中毒特点和毒作用的靶器官。
观察的系统包括:表2 啮齿类动物急性中毒表现的观察内容1.3.2死亡与死亡时间给药后立即观察并记录动物的中毒表现,症状出现和消失的时间及死亡时间,重点观察和记录每只动物的死亡时间,特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。
给药当日应连续观察,其后,每日至少观察2次,观察期为14d.1.3.3体重给药前、死亡时各称量以体重、观察期间每3d称量一次。
1.3.4病理检查及时剖检死亡动物,肉眼观察主要脏器的大小、外观、色泽、有无充血、出血、水肿或其他病变,对有病理变化的组织及脏器应做组织病理学检查。
试验结束时,对各剂量组存活动物和对照组动物也应该进行病理学检查。
根据文献,本实验需进行的病理学检验项目有:(1)检测、比较不同染毒剂量组及对照组之间反映肝坏死损伤的指标如血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)活力和反应脂肪变性损伤的指标如肝甘油三酯(TG)的含量。
(2)检测、比较不同染毒剂量组及对照组之间肝脏抗氧化指标如氧化物歧化酶(SOD)活力和还原性谷胱甘肽(GSH)含量及肝脏过氧化指标如脂质过氧化(LPO)含量。
分析脂质过氧化指标变化与肝损伤指标变化之间的关系。
(3)检测、比较不同染毒剂量组及对照组之间血液中蛋白质含量、各种蛋白质含量、血清多种酶(转氨酶、醛缩酶、精氨酸酶、黄嘌呤氧化酶、谷酰胺酶、氨基移换酶等)活性。
1.4实验数据记录及LD50的计算根据各组的大鼠死亡数,用改良寇式法法计算动物半数死亡剂量(LD50)及其95%的可信限。