生化实验设计 PPT课件

3. 加样15 ul / 样品槽（注意样品编号，加样顺序）； 接冷却管（流速要小）；
4. 电泳：起始电流10 mA/板，分离电流20 mA/板， 电泳4 hr；
5. 染色和制干板 1）剥胶，右上角切一角作标记； 2）將凝胶置培养皿、加染色液、37℃闭光至色带 出现（约15min，染色时间适当）； 3）7％醋酸终止酶促反应； 4）置保存液2—3 hr，制干板。
最后将不同组织上清液分装成100ul/管，做好标记待分析！
第二部分 乳酸脱氢酶同工酶的电泳分离
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一、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶: 是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催 化剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(TEMED)和过硫酸铵(AP)或核黄 素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物 的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
2.分离胶的制备
1号试剂（电泳缓冲液）
2.5ml 1次
2号试剂
5.0ml 1次
双蒸水
2.5ml 1次
3号试剂（凝胶浓度7.5%，Ph8.9） 10ml 2次
➢ 置小烧杯中,混匀,迅速注入到二块玻璃板之间(短玻璃 朝负极),凝胶加至横板的0.3cm处；
➢ 在室温中聚合20-30分钟。 ➢ 注意：acr/bis有神经毒/制胶时避免产生气泡
工酶有哪些相同之处和不同之处？
其他注意事项
爱惜电泳装置，轻拿轻放，避免产生划痕，损坏需 赔偿！
染色液价格昂贵，按量发放（两块胶10mL），随 用随取，注意避光，否则影响染色效果！
实验完成后，将电泳装置洗净，所用配件放回盘中， 老师检查合格后方可离开！
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三、实验报告要求
1. 原理（连续体系电泳分离，活性染色） 2. 操作（简练陈述实际操作） 3. 结果（铅笔绘图：正负极，条带数目、强弱、距

实验流程
1
实验准备
清洗仪器、准备试剂和标本，确保实验顺利进行。
2
实验操作
按照操作步骤进行样本处理、反应和测量。
3
数据记录
准确记录实验数据，便于后续分析和结果展示。
实验方案的制定
目标设定
定义实验目标和预期结果，指导实验方案的制定。
调整量
确保实验中只有一个变量改变，其他条件保持恒定。
《生化实验》PPT课件
探索生化实验的奥秘，了解其应用领域和实验室安全知识。学习实验流程、 制定实验方案和数据分析，解答常见问题。
生化实验简介
1 关键性实验技术
学习DNA测序、蛋白质表达、酶活性等生化 实验技术。
2 学术研究工具
了解生化实验在药物研发、基因工程和医学 诊断等方面的应用。
生化实验的应用
实验改进
提出改进实验方案的建议，优 化实验设计和操作。
数据分析和结果展示
统计分析
使用统计方法对实验数据进行分 析，发现规律和趋势。
图表展示
使用图表和图形呈现实验结果， 直观清晰地展示研究发现。
实验报告
撰写详细的实验报告，包括实验 目的、方法、结果和结论。
常见问题解答
实验失败
分析失败原因，如实验条件、 操作技巧和实验材料等。
结果解释
解释实验结果，讨论研究意义 和可能的应用。
医药研究
开发新药物、研究药物代谢和 毒性，为治疗疾病提供科学依 据。
基因工程
编辑基因序列、合成重组蛋白， 促进生命科学研究的进展。
食品安全
检测食品中的有害物质，确保 食品安全和卫生。
实验室安全
1 个人防护措施
佩戴实验室服装、手套和护目镜，避免与实验物质接触。

2. 血液标本的采集
生化检验用的血液标本可来自于静脉、 动脉或毛细血管。静脉血是最常用的标本， 静脉穿刺是最常用的采血方法。毛细血管采 血主要用于儿童，血气分析多使用动脉血。
（1） 采血前准备
为了使实验室结果有效地用于临床，实验室 应了解在收集标本前和收集标本时，所有会 影响实验室的非患者内在疾病因素。采取各 种措施，提出对患者采集标本前以及采集时 的要求，称之为患者准备。
（2） 注意事项 收集尿液标本的容器必须清洁干燥， 最
好是一次性使用的容器。若容器反复使用， 则须用洗涤液和自来水清洗， 再用蒸馏水冲 洗。尿标本要防止混入月经血、阴道分泌物、 精液、前列腺液、粪便等异物。尿标本收集 后应 12 时内送检，以免细菌作用和化学成分 分解。若不能及时检验（如收集 24 小时尿 液），将标本置冰箱保存，若加入防腐剂， 保存效果更佳。
对不是因操作不当引起的溶血、脂血或胆红 素血，应在检验报告上注明，供医生参考。
尿液、脑脊液和胸腹水等标本常需离心，取 上清液进行分析
Байду номын сангаас
分离后的标本若不能及时检测或需保留以备 复查时，一般应放于4℃冰箱，某些检测项 目的标本存放于-20℃冰箱更稳定。标本存 放时需加塞，以免水分挥发而使标本浓缩。
3.尿液标本的采集
尿液标本的采集 （1） 采集方法 尿液标本有随机新鲜尿、定时尿及 24 小时尿， 根据检查项目选择标本的采集类型。定量生化分析 多收集 24 小时尿液， 24 小时尿标本采集方法如 下：
嘱病人在早晨 8 时排尿弃去，以后每次排尿均 收集于一大容器内，至次日早晨 8 时最后一次尿亦 收集于容器内。测量并记录 24 小时尿液总量，然 后混匀尿液，取适量尿液送检。
通常用量为0．5 ～1．0ml 浓盐酸／100 ml 尿液，适用于24 小时尿儿茶酚胺、秀草 扁桃酸（V M A）、17 －羟皮质类固醇和 17 －酮类固醇等定量测定。

改进或更换
思考题
1.什么是干扰试验？怎样理解干扰试验是 测定恒定系统误差？
2.为什么不能计算不同浓度下的平均干扰 率？
干扰试验
是测定实验方法特异性误差和干扰引起 的误差
首先确定被试物质是否引起误差，再探 讨误差的来源是方法特异性差还是干扰
是衡量方法准确度的方法学评价试验之 一，在加入一定浓度干扰物的条件下,形 成恒定误差,干扰物浓度不同,误差大小不 同.
目的要求
掌握：干扰试验的原理和用途 熟悉：1.干扰准确。 ★加入物体积应只占很小的比例（小于1/10）。 ★可疑干扰物浓度，加入的干扰物的浓度明显干扰
常见浓度上限，尤其是达到病理标本最高值。 ★分析物溶液可使用标准液，最好采用病人标本。
★增加测定次数，减少随机误差。
消除干扰的常用方法
设立试剂空白和标本空白 用物理或化学方法，除去干扰物 双波长或多波长检测排除干扰 误差较大又无法消除，则需对方法进行
2.干扰值和干扰率的计算 了解：注意事项和消除干扰的常用方法
检测原理
干扰试验对干扰物不作分析，只测定它对方法的 干扰作用，以评价分析方法的准确性。
干扰物产生的误差属恒定系统误差，它的大小随 干扰物的浓度而异。
常见干扰物有：血红蛋白、甘油三酯、胆红素、 肌酐、防腐剂、抗凝剂、药物如 VC等。
检测原理
胆红素、维生素C、尿 酸、Hb负干扰
实验准备
标本 ： 肝素抗凝血浆
仪器 ： 半自动生化分析仪(型号)
校准品：胆固醇标准液 5.17 mmol/L
干扰物： VC溶液
1.浓度50.0mg/dl 2.浓度100.0mg/dl
3.浓度200.0mg/dl
【器材】
半自动生化分析仪、试管、吸管、加样器

值得注意的是，在洗脱时，会有少许配基与蛋白 质一同被洗脱下来，因此常在其后加一凝胶层析 以除去小分子的配基。
凝胶层析法属最常用的蛋白质分离方法。系混合
物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时， 混合物中各物质因分子大小不同而被分离的技术。 在洗柱过程中，分子量最大的物质不能进入凝胶 网孔而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外。分子 量最小的物质因能进入凝胶网孔而受阻滞，流速 缓慢，致使最后流出柱外。
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当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁 移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式： logMW=K-bX，
式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常 数若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子 量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质 在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即 可在标准曲线上求得分子量。
玻璃匀浆机
b、细胞器的分离
细胞器的分离一般采用差速离心法。细 胞经过破碎后，在适当介质中进行差速 离心。
三、蛋白质粗提取
从破碎材料或细胞器提出的蛋白质是不纯的， 需进一步纯化。纯化包括将蛋白质与非蛋白质 分开，将各种不同的蛋白质分开。选择提取条 件时，就要考虑尽量除去非蛋白质。一般总是 有其它物质伴随混入提取液中。但有些杂质 （如脂肪）以事先除去为宜。先除去便于以后 操作。常用有机溶剂提取除去。
二、a 细胞的破碎
⑴机械方法 主要通过机械切力的作用使组织细胞破 坏。常用器械有： ①玻璃匀浆器（用两个磨砂面相 互摩擦，将细胞磨碎） ②高速组织捣碎机（转速可 达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于 动物内脏组织的破碎 ⑵物理方法 主要通过各种物理因素的作用，使组织 细胞破碎的方法。 Ⅰ反复冻融法 Ⅱ冷热变替法 Ⅲ超 声波法 ⑶化学及生物化学方法

《植物生理生化实验》PPT 课件
目录
• 植物生理生化实验概述 • 植物生理实验 • 生化实验 • 实验数据处理与分析 • 实验安全与注意事项
01
植物生理生化实验概述
植物生理生化的定义与重要性
植物生理生化定义
植物生理生化是研究植物生命活动规律及其与环境相互关系的科学，主要涉及植物生理学和生物化学两个领域 。
通过t检验、p值等指标，判断实 验组与对照组之间的差异是否具 有统计学显著性。
结果解释与报告撰写
结果解释
根据统计分析结果，解释实验组与对照组之间 的差异及其生物学意义。
报告撰写
按照规范的格式和要求，撰写实验报告，包括 实验目的、方法、结果、结论等部分。
图表制作
根据需要制作表格、柱状图、折线图等图表，直观展示实验结果和分析。
植物生长与发育实验
总结词
研究植物生长和发育的规律和影 响因素
详细描述
通过实验测定植物生长速率、发 育阶段和生理生化指标，探究光 照、温度、水分和营养等因素对 植物生长和发育的影响。
03
生化实验
酶活性测定实验
总结词
了解酶活性测定的基本原理和实验方法
详细描述
了解酶活性测定的基本原理和实验方法
植物组织中DNA和RNA的提取与检测实验
05
实验安全与注意事项
实验室安全规定
禁止在实验室内吸烟、饮食、喧 哗。
实验结束后，必须清洗双手并离 开实验室。
01
进入实验室必须穿实验服，不得 穿短裤、短裙或赤脚进入实验室 。
02
03
04
实验室内禁止使用手机等通讯设 备。
实验器材的使用与保养
01 使用实验器材前应仔细阅读说明书，按照 操作规程进行操作。

CHAPTER
04
结果分析与讨论
数据记录与整理
数据记录的准确性
确保实验过程中所有数据都被准确记 录，包括但不限于温度、压力、流量 、重量等。
数据整理的规范性
将实验数据整理成表格或图表，便于 分析和对比。
结果分析
数据对比分析
将实验数据与理论值进行对比，分析 偏差产生的原因。
趋势分析
分析实验数据的变化趋势，预测未来 可能的结果。
根据选择的分离方法，设计合理 的分离流程。
控制分离过程中的温度、pH值 、浓度等参数，确保分离效果。
监测分离过程中的关键指标，如 目标成分的纯度和收率。
产物检测与鉴定
利用生化分析方法（如光谱分析、质谱分析、电泳等）对分离得到的产物进行检测 与鉴定。
比较实验结果与预期目标，评估实验的分离效果。
分析实验误差来源，提出改进措施，优化实验方案。
有机溶剂
用于提取和纯化目标产物 的有机溶剂。
实验器具与设备
发酵罐
用于进行微生物发酵的容器。
离心机
用于分离和纯化目标产物的设备。
层析柱
用于进行色谱分离的柱状设备。
CHAPTER
03
实验方法与步骤
样品处理与制备
样品收集
样品纯化
选择具有代表性的样品，确保样品新 鲜、无污染。
去除样品中的杂质，提高目标生化成 分的纯度。
误差分析
系统误差分析
分析实验过程中由于仪器、设备等因素导致的误差。
随机误差分析
分析实验过程中由于环境、操作等因素导致的误差。
CHAPTER
05
实验结论与总结
实验结论
实验结果分析
对实验过程中收集的数据进行分析，对比实验结果与预期结果的差异，评估实验 的准确性和可靠性。

透析袋中，将透析袋放入
盛有300ml的物质的量浓度
为20mmol/L的磷酸缓冲液
中，pH为7.0，透析12小时，
目的是除去样品中分子量
较小的杂质或用于更换样
品中的缓冲液。透析袋一
般用硝酸纤维素制成，又
称玻璃纸。
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纯化
a、凝胶色谱柱的制作：①取长40厘米，内径1.6厘米
的玻璃管，两端需用砂纸磨平。②底塞的制作：打孔 →挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100 目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端。（注意事项：底 塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面， 否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分 离不彻底。③顶塞的制作：打孔→安装玻璃管。）④ 组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。⑤安 装其他附属结构。
凝胶色谱法原理 凝胶电泳法原理标准比色法原理
当不同蛋白质通过凝胶时相对分子质 量较小 的蛋白 质容易 进入凝 胶的内 部通道 ，而相 对分子 质量较 大的蛋 白质无 法进入 内部通 道只能 在凝胶 外部移 动，路 程较短 ，移动 速度较 快，相 对分子 质量不 同的蛋 白质因 此得以 分离。
。
不同蛋白质的带电性质、电量、形状 和大小 不一样 ，在电 场中受 到的作 用力大 小、方 向、阻 力不同 ，导致 不同蛋 白质在 电场中 的运动 方向和 运动速 度不一 样
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在一定量的血液中， 血红蛋白经少量的盐 酸的作用，使亚铁血 红素变成高铁血红素 。呈现较稳定的棕色 ，用水稀释后与标准 色比较，即可得出每 100ml血液中的含量
实验试剂
1、0.9%的氯化钠溶液 2、蒸馏水 3、有机溶剂（甲苯） 4、磷酸缓冲液 5、柠檬酸钠 6、凝胶色谱柱实验所需用品 7、SDS-PAGE实验所需用品 8、血红蛋白计、0.1mol/L盐酸溶液、载玻片、刺血针

实验操作流程 ： （1）静脉取血1.5~2.0ml，加于含有3.8%柠檬酸 钠抗凝剂的小试管内，血液和抗凝剂按9:1混合， 加葡萄糖20mg。 （2）将此标本离心沉淀5min（ 1000 r/min）或 放置4℃冰箱过夜，待红细胞下沉后吸去部分血浆 ，使红细胞与血浆比列约为1:1（相当红细胞比容 35%~40%）。 （3）摇匀后取此血液1ml，加12.5g/L亚硝酸钠葡萄糖溶液和0.0001mol/L美蓝溶液各0.05ml，颠 倒混合15次，使与空气中的氧气充分接触，加塞 ，置于37℃水浴（或保温箱）3h。
主要试剂: （1）12.5g/mL亚硝酸葡萄糖溶液 取亚硝酸纳 1.25g，葡萄糖5g，蒸馏水加至100ml。 （2）0.0001mol/L美蓝溶液 取美蓝0.15g， 蒸馏水加至100ml。 （3）0.02mol/L磷酸盐缓冲溶（PH7.4） 称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）51mg，磷酸 二氢钾52.2mg，加蒸馏水至100ml。 主要仪器： 可见分光光度计 离心机 恒温水浴箱 移液器 小 试管
（4）取出后摇匀，吸取此液0.1ml，加于 0.02mol/L磷酸盐缓冲液10ml中，2min后于波长 634nm处比色，测其吸光度的血液0.1ml ，加于0.02mol/L磷酸盐缓冲液10ml中，2min后按 上法进行比色，测其吸光度为B，再于此液内加 12.5g/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液1滴，摇匀，5min后 同样方法测其吸光度为St。
注意事项： （1）受检者红细胞比容对结果有一定影响，比容 低于30%时，高铁血红蛋白还原率可明显降低故贫 血患者应先调整红细胞比容后再测定。 （2）抗凝剂以38g / L柠檬酸或输血时用的抗凝 剂ACD为好，血液标本可保存1周左右。肝素抗凝 剂可用（每毫升血液用肝素0.5mg），但标本只能 保存3天。草酸盐抗凝不适于本法。 （3）ACD抗凝剂不宜太多，血液与ACD抗凝剂按 1:0.15混合即可，否则可因PH降低，而使高铁血 红蛋白还原速度减慢，以致出现假阳性。

品并能在较短的时间内完成。
设计实施过程（1）
最终采用Sephadex G 25层析分离γ球蛋白以及小分子铵盐，达到提纯γ球蛋白的目的。 ③根据文献对比几种电泳方法的优劣，最终确定采用SDS—PAGE技术进一步分离γ球蛋白。 ９．探究甘油包埋SOD液的最适甘油浓度和pH环境
❖ 1、设计实验题目的选定和文献查阅 ９．探究甘油包埋SOD液的最适甘油浓度和pH环境
生物技术学院
❖ 三等奖：《皂甙中毒的快速定性分析》
公共卫生与热带医学学院
❖
《从蛋白质底物及酶活性角度研究茶对蛋白质消化
的影响》Βιβλιοθήκη 中医药学院❖ 优胜奖：《探究黄酮类化合物芦丁在清除自由基及抗氧化 方面的功能》
第一临床医学院
举例：阿司匹林的制备
❖ 物质的制备： ❖ 1.合成与制备——通过酰化反应等得到目标产物
②通过各种检索工具和方法查找相关文献，特别是 ７．乙酰胆碱酯酶法检测蔬果残余农药
4、开题报告（PPT汇报），对实验方案进行论证
英文文献检索，对文献进行总结，写成小综述。 ①根据布置题目、关键词及所学知识自选一个设计实验题目；
从鸡蛋清中提取某蛋白； 举例：从猪血中分离γ球蛋白 4、开题报告（PPT汇报），对实验方案进行论证
❖ 化妆品中有害物质与违禁 化学品分析；
▪ 西布曲明、氛氟拉明、吗吲 哚、去氢表雄酮、双氢克尿 噻、去甲麻黄素；
▪ 铬、汞等重金属；
❖ 水质分析、污染物分析；
❖ 药物代谢、药代动力学分 析。
❖ 临床血液与头发中微量元 素与重金属检测。
❖ 司法鉴定服务
▪ 毒物分析 ▪ 微量物证 ▪ 血液中酒精含量分析 ▪ 鼠药/农药中毒分析。
❖ ④对照验证：将γ球蛋白标准品，纯化的 γ球蛋 白，猪血清，采用SDS—PAGE技术做进一步的 对照验证。