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脱细胞真皮基质-在制备过程中去除了表皮和真皮脱细胞真皮基质-在制备过程中去除了表皮和真皮中的细胞成分，仅保留真皮的不溶性基质成分，具有低抗原性、快速血管化和一定的稳定性。
脱细胞真皮基质为规则的三维网状支架，Ⅰ型胶原纤维占主要地位，构成脱细胞真皮基质的基本骨架；Ⅲ型胶原纤维减少至原来的一半；Ⅳ型胶原纤维和Ⅶ型胶原纤维几乎消失。
弹力蛋白明显减少，层粘连蛋白损失较多，硫酸软骨素消失殆尽，纤维连接素明显减少，糖蛋白几乎完整保存。
学术术语来源——人、猪、大鼠来源网状层真皮组织学及材料学表征的比较文章亮点：1 课题组前期研究发现猪边腹部网状层真皮较其他部位更适合作为异种脱细胞真皮支架的制作材料，但其组织学及材料学特点未见报道。
2 实验创新比较人、猪边腹部、Wistar大鼠背部网状层真皮的组织学及材料学表征，发现猪边腹部网状层真皮组织胶原纤维束直径及热力学行为与人接近，杨氏模量与人无统计学差异，取皮面积也较大鼠面积大，在单块较大面积脱细胞真皮材料的制作方面具有较好的应用前景；大鼠背部网状层真皮组织胶原纤维束排列与人类似，Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其比值也接近于人，热稳定性较好，在脱细胞真皮材料制作方面也具有一定的应用价值，在较小面积的脱细胞真皮材料制作时其临床效果可能优于猪边腹部网状层真皮。
关键词：生物材料；材料相容性；猪边腹部；大鼠；网状层真皮；间隙率；胶原束直径；苦味酸-天狼星红染色；杨氏模量主题词：真皮；猪；人；大鼠摘要背景：课题组以往研究证实，猪边腹部网状层真皮质地柔软，伸展性也较其他部位好，适合作为异种脱细胞真皮的制作材料，但将其与人网状层真皮和大鼠网状层真皮进行组织形态学和材料学表征的系统对比未见相关报道。
目的：研究猪边腹部、大鼠背部与人网状层真皮在组织学、生物力学、分子结构和热稳定性等方面的差异。
方法：取人、猪边腹部、Wistar大鼠背部网状层真皮标本并大体观察，石蜡切片后行苏木精-伊红染色、苦味酸-天狼星红染色，显微照相后用图像分析软件测量分析；样本真空干燥并复水后用电子拉伸机测量其力学性能并计算杨氏模量；真空干燥后的样品研碎后用傅里叶红外光谱仪及同步热分析仪分析测量。
牛乳酪蛋白降血压肽的超滤分离蒋菁莉，任发政*，蔡华伟(中国农业大学食品科学与营养工程学院，教育部-北京市功能乳品实验室，北京 100083)摘 要：采用超滤法分离酪蛋白降血压多肽溶液，研究超滤操作压力、温度和溶液浓度对膜渗透通量的影响，结果表明，超滤分离浓度为5%的多肽溶液，压力为0.15M P a ，温度为45℃条件下，膜渗透通量相对较高；利用高效凝胶排阻色谱技术分析超滤滤过液的相对分子量分布。
结果表明，超滤技术可以实现不同分子量多肽组分的分离；多肽超滤滤过液的A C E 抑制活性提高。
关键词： 超滤；降血压多肽；酪蛋白Separation of Antihypertensive Peptides Derived from Yak Milk Casein with Ultra-filtration TechnologyJIANG Jing-li ，REN Fa-zheng*，CAI Hua-wei (Key Laboratory of Functional Dairy, Ministry of Education and Municipal Government of Beijing, College of FoodScience and Nutritional Engineering, China Agricultrual University, Beijing 100083, China)Abstract ：Antihypertensive peptide derived from yak milk casein was separated by ultra-filtration technology. The effects of pressure, temperature and concentrations of peptides on ultra-filtration permeate flux were investigated. The results showed that the optimum conditions are: 5% peptides, pressure 0.15MPa and temperature 45℃. The relative molecular mass of permeates was investigated by high performance size exclusion chromatography. The results showed that the peptides mixtures can be effectively separated by ultra-filtration. The permeate fractions show higher ACE inhibitory activity than original peptide mixtures.Key words ：ultra-filtration ；antihypertensive peptides ；casein中图分类号：TS252.59 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2006)07-0124-05收稿日期：2006-04-07 *通讯作者基金项目：“十五”奶业专项基金资助项目(2002BA518A-05)作者简介：蒋菁莉(1979-)，女，博士研究生，研究方向为功能乳制品加工。
超滤膜分离牛血清蛋白的操作条件优化研究张晓艳;姜英;王龙飞;王旭;许海丽【摘要】本文采取超滤膜技术进行分离实验,用紫外分光光度计进行分离结果测量.通过聚砜聚乙烯超滤膜分离牛血清蛋白的研究,以主要影响的因素:牛血清蛋白的浓度、流量,膜前后压力来确定影响分离效果的因素,通过配制一系列不同的牛血清蛋白水溶液浓度和吸光度做出的标准曲线,清浓液浓度对比,以及用正交实验的方法对实验数据进行处理,即可得到膜分离的最佳条件.最后由正交实验得出最佳条件为第六组实验条件:浓液流量为8L/h,清夜流量为2.5L/h,膜前压力为0.200Mpa,膜后有压力为0.176Mpa.由最佳条件可知,若要提高超滤膜分离效率,需减小清液流量并且增大膜前压力.【期刊名称】《赤峰学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(033)016【总页数】3页(P5-7)【关键词】超滤;膜分离技术;牛血清蛋白;正交实验;最佳条件【作者】张晓艳;姜英;王龙飞;王旭;许海丽【作者单位】赤峰学院化学化工学院, 内蒙古赤峰 024000;赤峰学院化学化工学院, 内蒙古赤峰 024000;赤峰学院化学化工学院, 内蒙古赤峰 024000;赤峰学院化学化工学院, 内蒙古赤峰 024000;赤峰学院化学化工学院, 内蒙古赤峰 024000【正文语种】中文【中图分类】Q592膜分离技术是一种已经被广泛应用的新型分离技术，它采用的分离介质是对组分拥有有选择透过性的天然高分子薄膜或人工合成的无机膜等凝结相物质，其膜有气态、液态、固态的一相或复合相[1].在生产等工程中为了达到混合物分离的目的，通常可以使膜两侧产生一定的梯度差异进而形成相应的推动力，使原料中的某组分可以有选择性地优先透过分离膜，继而使其依次经过浓缩、提取，纯化等单元操作得到所需产物的一种新型分离过程[2].牛血清白蛋白(BSA)在生物体内主要有两种作用,一是平衡渗透压，二是维持营养的运转，它不仅是一种重要的载体蛋白，在生物学中，也是一种重要的模式蛋白[3].因其分子量较大，故在分离实验中，分离效果明显，所形成的实验数据能够清晰并且直观的表现出影响分离效果的因素.正交试验被叫做正交设计，它是以数理统计和概率论和为理论基础，科学地安排多种因素作为实验的研究对象，这是一类实用性比较强的数学方法[4].2.1 实验装置在本次实验中，采用聚砜聚丙烯膜为实验装置，由于本次实验为模拟实验，因此最大工作压力和透过液通量都低于工业现场实际使用情况，实验中，压力不可超过膜组件的承受范围.主要工艺参数如表1.2.2 实验内容及分析2.2.1 实验步骤以自来水为原料，利用紫外分光光度计测量料液通过超滤膜后浓液和清液的吸光度进而分析膜的渗透通量随时间的衰减情况，操作压力和清液、浓液浓度对渗透通量的影响.操作步骤如下：标准曲线：用电子天平称量牛血清蛋白（生化试剂），加蒸馏水使其溶于烧杯中，配置出不同浓度的溶液，继而在紫外分光光度计上测得到标准曲线.2.2.1.1 控制膜前、膜后压力、清液流量不变，调节浓液流量大小（1）先向料液槽内加入适量自来水，再将适宜牛血清蛋白倒入料液灌中的自来水，打开泵进口阀、超滤进口阀和超滤出口阀，关闭微滤出口阀和微滤进口阀，打开电源、泵、仪表开关.（2）控制泵的回流阀，控制压力表的压力为某一压力值（不超过0.2MPa），稳定清液流量在某一值，调节浓液流量计，待稳定好后取少许清液和浓液分别为样液1和样液2.（3）将样液1和样液2分别在紫外分光光度仪内测出相应的浓度.隔一定的时间，多取几组样液进而测量.（4）记录相关数据.2.2.1.2 控制膜前、膜后压力、浓液流量不变，调节清液流量大小（1）先向料液槽内加入适量自来水，再将适宜牛血清蛋白倒入料液灌中的自来水，打开泵进口阀、超滤进口阀和超滤出口阀，关闭微滤出口阀和微滤进口阀，打开电源、泵、仪表开关.（2）控制泵的回流阀，控制压力表的压力为某一压力值（不超过0.2MPa），稳定浓液流量在某一值，调节清液流量计，待稳定好后取少许清液和浓液分别为样液3和样液4.（3）将样液3和样液4分别在紫外分光光度仪内测出相应的浓度.隔一定的时间，多取几组样液进而测量.（4）记录相关数据.2.2.1.3 控制清液流量、浓液流量不变，调节膜前、膜后压力（1）先向料液槽内加入适量自来水，再将适宜牛血清蛋白倒入料液灌中的自来水，打开泵进口阀、超滤进口阀和超滤出口阀，关闭微滤出口阀和微滤进口阀，打开电源、泵、仪表开关.（2）控制泵的回流阀，稳定浓液流量和清液流量分别在某一值，调节压力表的压力值（不超过0.2MPa），待稳定好后取少许清液和浓液分别为样液5和样液6. （3）将样液5和样液6分别在紫外分光光度仪内测出相应的浓度.隔一定的时间，多取几组样液进而测量.（4）记录相关数据2.2.1.4 实验结束，关闭实验仪器并清洗实验仪器，整理实验数据.2.2.2 实验内容将样液用紫外分光光度计进行检测，采用蒸馏水为基准，分光光度计波长设为280nm，光度模式为单波长法，得到紫外光谱，得到校正曲线如下：通过标准曲线可以的到浓度与吸光度的关系，y=-0.13613+0.68985x，R^2=0.99972.可以得出各种不同浓度下溶液的吸光度或者已知吸光度得到不同吸光度的溶液的浓度.影响分离的因素有牛血清蛋白的浓度、流量，膜前后压力，分别控制每一个变量，根据实验数据判断出个影响因素之间的影响，综合起来就可以得到分离牛血清蛋白的最优条件.由此清浓液对比折线图可以看出，设定的清液浓度和浓液浓度变化范围不大，浓液浓度在0.8g/L左右，清液浓度在0.4g/L左右，但清液浓度和浓液浓度之间差别较大，更加清楚的反应出实验结果.以自来水为原料，考察当料液通过超滤膜后，膜的渗透通量随时间的增加而衰减的情况，并考察膜表面流速和操作压力对渗透通量的影响.操作步骤如下：用去离子水清洗超滤组件，加热到60℃后清洗超滤组件2～3次.在原料液储槽中加入一定量的自来水后，打开低压料液泵回流阀和低压料液泵出口阀，打开超滤料液进口阀、超滤清液出口阀和浓液出口阀，则整个超滤单元回路已畅通.将泵启动，等到泵运转稳定后，通过控制和调整泵出口阀门和超滤馏液出口阀门，来达到实验所需要的流量和压力，待稳定后，测量一定实验时间内的渗透液体积，每十分钟一次，做好记录.调节膜后的压力为0.03 MPa，待稳定后，测量渗透液的体积,，做好记录.然后依次增加膜后的压力分别为0.04MPa，0.06MPa，0.08MPa，分别测量渗透液的体积，做好记录.利用用去离子水清洗超滤组件，方法同上.加入保护液甲醛溶液于超滤膜组件中，然后密闭系统，避免保护液的损失，到此，实验结束. 由表2可以得出，B组即清液流量的大小和C组膜前压力值对超滤膜分离牛血清蛋白的效果影响比较大,A组浓液流量的大小和D组膜后压力值对分离效果影响最小.并且影响因素由主到次为，清液流量，膜前压力，膜后压力，浓液流量，最优组合条件为第一组实验的实验条件.在本次试验中，对超滤膜的性能有一定的要求，其中有一个重要的参数为截留率(R)，截留率是指溶液经过超滤处理后，被膜截留的溶质质量占溶液中该溶质总量的百分率.截留率可以直观的表现出超滤膜的性能是否合格，在本次实验所采用的超滤膜经过测试截流率为0.9992，达到实验的标准.由实验结果得出，清液流量和膜前压力对超滤膜分离的效果影响最为显著，因此，若要得到最为理想的分离效果，需减小清液流量同时增大膜前压力.【相关文献】〔1〕张云飞，田蒙奎，许奎.我国膜分离技术发展的现状[J].现代化工学报，2017，37（4）. 〔2〕王华,刘艳飞,彭东明,王福东,鲁曼霞.膜分离技术的研究进展及应用展望[J].应用化工，2013(3). 〔3〕吕华，单晓辉.碳量子点的制备及与牛血清蛋白的相互作用[J].新型碳材料，2013（28）：308-310.〔4〕秦颖.正交实验设计法在造纸试验中的应用[J].黑龙江造纸,2006（1）：42-45.。
牛的牛血清白蛋白残留检测酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中类牛血清白蛋白残留检测的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛的牛血清白蛋白残留检测水平。
用纯化的牛的牛血清白蛋白残留检测抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类牛血清白蛋白残留检测，再与HRP标记的类牛血清白蛋白残留检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的类牛血清白蛋白残留检测呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛的牛血清白蛋白残留检测浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
、八、、》刖言大面积深度烧伤或其他创伤导致皮肤真皮成分缺损，通过刃厚小皮片或微粒植皮技术虽然能使创面愈合，但由于其缺乏真皮层，导致愈合后创面弹性差，凸凹不平，易挛缩且不耐摩擦。
移植自体皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法，但大面积深度烧伤后，能作为供皮区的部位已很少，供皮区又将形成同等程度的缺损，日后形成瘢痕。
为解决这一问题，国内外学者致力于寻找一种理想的真皮替代品。
1. 脱细胞真皮基质概述脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix ADM ）是用物理、化学等方法将人或动物皮肤中的表皮层及细胞成分彻底去除仅保留真皮中含胶原网架的细胞外基质。
脱细胞真皮基质由于完全没有了细胞成分和I、U型细胞相容性抗原的主要免疫活性,故一般不会诱发排斥反应。
但脱细胞真皮基质保留有正常胶原的三维结构和真皮中含胶原支架的细胞外基质能为组织细胞的再生提供一个良好的支架结构，具有创面覆盖、组织缺损填充、引导组织再生和支架等作用。
脱细胞真皮基质中无细胞成分，免疫活性低，不会诱发免疫反应。
它保留了表皮和真皮间的基底膜，移植后可形成真皮面和基底膜面。
基底膜面可支持断层皮片的生长，这对表皮细胞的增殖分化以及移植皮的外观和功能起着重要作用，同时也有利于种子细胞的點附增殖等。
真皮面利于脱细胞真皮基质的快速血管化，为成纤维细胞的增殖提供支架，有助于胶原成分改建，促使成纤维细胞排列分布规则,形成结构形态正常的胶原纤维，此外,还有诱导、调节宿主细胞和新生血管长入,促进上皮形成等作用。
此外,细胞外基质蛋白也可以促进表皮细胞的再生。
因此，脱细胞真皮基质可作为真皮替代品，在为烧伤创面提供真皮的同时，可明显减少瘢痕形成。
是一种理想的真皮替代材料。
1.1脱细胞真皮基质的制备方法根据来源的不同脱细胞真皮基质分为异体脱细胞真皮基质（来源主要为尸体皮）和异种脱细胞真皮基质（来源为动物皮以猪皮和牛皮为主）两种。
制备过程都是尽可能的去除具有抗原性的细胞（表皮细胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中血管内皮细胞、成纤维细胞等）,保留完整的胶原纤维成分和组织基本结构。
不同方法纯化颗粒脂肪的效果评价及其对移植后转归的影响自体脂肪移植术(autologus fat transplantation,AFT),又称自体脂肪注射,是利用自身脂肪组织作为填充材料修复皮下软组织缺损一种手段。
与人造材料和异种材料相比,自体脂肪获取便捷,价格低廉且具有更好生物相容性,在整形美容外科中的应用非常广泛。
临床工作中,移植后脂肪的存活情况是医患双方最为关注的问题,而抽吸后脂肪的纯化处理与脂肪组织的存活情况直接相关。
目的对棉垫吸附(AWG,Absorptionwithgauze)法、离心分离(CEN,Centrifugation)法以及静置沉淀(DEC,Decantation)法纯化处理脂肪的效果进行评价,并在动物实验中对移植物转归进行比较分析,以初步探索其影响移植物存留和转归的具体机制。
方法将人腹部来源的抽吸颗粒脂肪分别经棉垫吸附法、离心分离法、静止沉淀法进行纯化处理。
在体外实验中,将纯化后脂肪经高速离心处理,使得液体成分、油脂、脂肪组织分离,测量各自体积以评价不同方法的纯化效力。
通过组织学检测和代谢功能检测对不同方法纯化后脂肪组织的结构和功能完整性进行比较;经胶原酶消化获得脂肪组织中的血管周围基质成分(Stromal Vascular Fraction,SVFs),利用流式细胞分析仪对中的细胞成分进行分析;将SVFs细胞贴壁培养至第三代,获得脂肪间充质干细胞(Adipose-Derived Stem Cells,ADSCs,)利用 CCK8(Cell Counting Kit-8)试剂绘制细胞增殖曲线,并对其细胞周期和凋亡情况进行检测,通过成脂、成骨、成软骨分化对其分化活性进行比较;使用免疫缺陷小鼠构建颗粒脂肪移植的动物模型,于注射后3天,6天,9天,12天,3周,6周,9周,12周取出移植后脂肪。
通过称取移植物重量、测量体积对不同方法纯化后脂肪组织的存留情况进行比较;组织学用脂周蛋白染色标记活性良好的脂肪细胞,比较不同方法纯化后脂肪在体内的存活情况。
现代商贸工业小牛血清去蛋白提取物的常用分析方法孙秀娥(吉林工程技术师范学院，吉林长春130052)摘要：多年来，对小牛血清去蛋白提取物的研究中，对组分分离及所含组分的结构确证一直是个难题，尤其 是有效成分的分析方法更是值得深入研究的课题。
关键词：小牛血清去蛋白提取物；有效成分；分析方法中图分类号：G4 文献标识码：A doi：10. 19311/j,cnki. 1672-3198. 2016. 34. 266在常用的分析方法中高效液相色谱法可分析游离氨基酸含量；毛细管区带电泳可得到产品的指纹图谱；液质联用可测出初步的相对分子质t t信息；加热、烘烤、酸碱处理、萃取、接种微生物发酵等方法可以帮助推测产品中成分组成。
细胞实验中同位素标记法可测脂肪生成增加率；微量减压技术可测产品促进豚鼠肝匀浆耗氧量，得到呼吸活性分析9丁亚军，王莹等对小牛血清去蛋白提取物的药理、毒理作用进行研究，并将其主要成分和活性指标与爱维治比较。
研究结果表明两药对比差异无显著性。
李爱菊，郑宏强，熊爱琴用异硫氰酸_酯（Isothiocyanate，PITC)柱前衍生高效液相 色谱法 (HPLC法）测 定小牛血清去蛋白提取物制剂中游离氨基酸。
任淑萍对小牛血清去蛋白注射液与小牛血去蛋白注射液有效成分含量和生物活性的比较研究，采用 H PL C法进行鉴定分析，用Low ry法测定多肽含量，用 瓦氏微量呼吸检压仪测定呼吸活力并计算刺激指数，测定两者对小鼠耐缺氧试验的不同影响时间，比较两 者在主要成分、多肽含量、生物活性等方面的差异s赵 宗阁，王尊文等在画内小牛血、小牛血清去蛋白提取物注射液质量分析及其抗缺氧作用研究中，采用Lowry 法测定多肽含量，IT C作为衍生剂的高效液相色谱法测定游离总氨基酸，瓦氏呼吸实验测定其促进豚鼠肝匀浆呼吸活性，H P L C法鉴定双峰肽图。
体外抗缺氧实验采用M T T比色法测定其对缺氧诱导神经细胞损伤保护作用。
超滤法（ultrafiltration）分离明胶厚壳贻贝血清蛋白溶液一、实验目的1.熟悉超滤的基本原理、板式超滤器的结构及基本流程2.了解超滤过程中的影响因素如温度、压力、流量及物料分子量等因素对超滤通量的影响3.了解超滤器污染的原因及其对策二、实验原理超滤的技术原理近似机械筛分。
当溶液体系由水泵进入超滤器时，在超滤器内的膜表面发生分离，溶剂（水）和其他小分子量溶质透过具有不对称微孔结构的滤膜，大分子溶质和微粒（如蛋白质、病毒、细菌、胶体等）被滤膜截留（图1）。
从而达到分离和纯化的目的。
图1 超滤技术原理示意图一般来说，以截留分子量来间接地反映超滤膜孔径的大小，具体做法是：通过测定具有相似化学性质的不同分子量的一系列化合物的截留率所得的曲线，根据该曲线求的截留率大于90%的分子量即为截留分子量（图2）。
通常截留分子量在500～106间的膜分离过程称为超滤。
表征超滤膜性能的参数除截留分子量外，还有截留率和膜的纯水通量。
截留率是指对一定分子量的物质来说，膜所能截留的程度，其定义为式中C f为料液的浓度，C p为超滤液的浓度。
膜的纯水通量是指料液为纯水时，单位时间透过纯水的体积，一般是在0.13～0.3 MP a压力下测定的实验装置图3为本实验的流程，料液先放入料液槽，由泵供给，旁路阀3用以调节进料流量，用出口阀4调节进出口压力，料液泵入系统后，超滤液用一排塑料收集管收集，截留液进入料液槽循环。
三、实验材料：厚壳贻贝血清溶液四、实验仪器和试剂：NaOH, 去离子水，真空抽率仪，滤纸，低温离心机，0.45μm孔径滤膜，制冰机，五、实验步骤1.将贻贝血清于4℃，13000rpm 离心，取上清液，并用0.45μm孔径滤膜过滤。
2. 关闭进口阀1，向料液槽加入一定量的去离子水排出泵内空气后，按说明书将滤膜装于超滤仪上，并拧紧。
3．合上电源，启动泵，打开出口阀4，并半开进口阀1，然后从小到大不断关闭出口阀，使出口压力表的读数由小到大发生变化（注意不能超过压力表的量程范围，推荐值为20psi），4．清洗完毕后，先打开出口阀，再关闭进口阀，停止进料泵。
ELISA法检测干细胞溶液中残留牛血清白蛋白含量宛莹;聂德志;贲亮;黄若洋【摘要】目的检测胎牛血清白蛋白(Fetal bovine serum albumin,BSA)在脐带源间充质干细胞溶液的含量以代表异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液中的残留情况的适用性,并通过改进培养条件和增加清洗次数以进一步减少BSA等异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液内的残留.方法运用定量ELISA方法检测了脐带源间充质干细胞溶液中BSA的含量,并探讨改进培养方式与增加清洗次数等方法对干细胞溶液中残留的BSA含量的影响.结果对细胞清洗次数的增加能够有效减少BSA等异源蛋白的残留,并且采用无血清培养基进行干细胞培养是减少BSA等异源蛋白在干细胞溶液内残留量的最有效方法.结论通过检测BSA以代表异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液中残留情况具有适用性；并且增加清洗次数能有效地降低BSA的残留量；采用无血清培养基进行干细胞培养是减少BSA等异源蛋白在干细胞溶液内残留量的最有效方法.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2013(017)010【总页数】3页(P1764-1766)【关键词】BSA;脐带源间充质干细胞;ELISA;无血清培养基;细胞培养【作者】宛莹;聂德志;贲亮;黄若洋【作者单位】四平中心人民医院中心实验室,吉林四平136000;吉林省拓华生物科技有限公司,吉林四平136000;四平中心人民医院中心实验室,吉林四平136000;吉林省拓华生物科技有限公司,吉林四平136000;四平中心人民医院中心实验室,吉林四平136000;吉林省拓华生物科技有限公司,吉林四平136000;四平中心人民医院中心实验室,吉林四平136000;吉林省拓华生物科技有限公司,吉林四平136000【正文语种】中文【中图分类】R446.61间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一种来源于中胚层的具有多向分化潜能的干细胞，是造血微环境中一种重要细胞成分，目前临床实验证实间充质干细胞移植可用于组织的修复及治疗间充质组织遗传缺陷性疾病，临床应用前景广阔［1－4］。
超滤膜分离牛血清蛋白作者：王兴权来源：《赤峰学院学报·自然科学版》 2011年第12期王兴权（赤峰市特种设备检验所，内蒙古赤峰 024000）摘要：运用膜分离现代分离技术对牛血清蛋白溶液浓缩，实现物质纯化与分离.关键词：膜分离；浓缩；牛血清蛋白中图分类号：TQ464.7 文献标识码：A 文章编号：1673-260X（2011）12-0166-03膜及其相关技术在自然界中扮演着越来越重要的角色，它的产生和发展与人类的生活密切相关，在人类的生活与实践中，人们早已不自觉地接触和应用到了膜分离技术.膜分离技术的迅猛发展是在上世纪60～80年代，由于膜分离技术的应用与发展，使传统的分离过程受到挑战，引起了分离技术的重大变革.膜分离技术是一种借助外界能量或化学位的推动，以选择性透过膜为分离介质，对两组分或多组分气体或液体进行分离、分级和富集.与传统分离方法(蒸发、萃取或离子交换等)相比，它是在常温下操作，没有相变，最适宜对热敏性物质和生物活性物质的分离与浓缩；具有高效、节能、工艺过程简单、投资少、污染小等优点，因而在化工、轻工、电子、医药、纺织、生物工程、环境治理、冶金等方面具有广泛的应用前景[1].1 膜及膜分离技术1.1 膜的分类工业上膜分离大致分为微滤、超滤、纳滤和反渗透等，不同的分离类型其作用机理是各不相同.微滤：膜孔径大约0.1μm；主要从气相和液相物质中截留微米及亚微米的细小悬浮物、微生物、微粒、细菌、酵母、红血球、污染物等，以达到净化和浓缩的目.在静压差的作用下，小于膜孔的粒子透过膜，大于膜孔的粒子则被截留在膜的表面上，使大小不同的粒子得以分离.微滤分离的实质是利用膜的“筛分”作用来进行的.超滤：膜孔径在10～100nm，主要用于分离液相物质，如蛋白质、核酸聚合物、淀粉等大分子化合物、胶体分散液和乳液等.超滤过程的分离机理一般认为是压力驱动的筛孔分离过程，但膜表面的化学物质也是影响分离的一个重要因素.纳滤：膜孔径在1～10nm，是一种介于反渗透和超滤之间的压力驱动膜分离过程，主要用于二价或多价离子及分子量介于200～500之间的有机物的脱除.与超滤膜相比，纳滤膜有一定的荷电容量；与反渗膜相比，纳滤膜又不是完全无孔的，因此其分离机理在存在共性的同时，也存在差异.反渗透：膜孔径小于1nm，它仍是一种压力驱动的膜过程，与其他压力驱动的膜过程相比，反渗透是最精细的过程，因此又称“高滤”.它过滤的实质是利用反渗透膜具有选择性透过溶剂而截留离子物质的性质.分离的过程是依靠膜两侧的静压力差为推动力，用以克服溶剂的渗透压，使溶剂通过反渗透膜而实现对液体混合物的分离.它主要用于水的脱盐、软化、除菌等.它的分离机理与其它压力驱动膜过程有所不同，分离过程除与孔的大小有关外，还取决于透过组分在膜中的溶解、吸附和扩散，因此与膜的化学、物理性质以及透过组分与膜之间的相互作用有很大关系.四个过程的主要区别在于被分离物粒子或分子的大小和所采用膜的结构与性能.微滤膜的压差范围约为0.015～0.2MPa；超滤膜压差范围约为0.1～0.5MPa；反渗透的压差与溶液中溶质的相对分子质量及浓度有关，通常的压差在2MPa左右，也有高达10MPa的；介于反渗透与超滤之间的为纳滤过程，膜的脱盐率及操作压力通常比反渗透低.1.2 膜分离技术膜分离是以对组分具有选择性透过功能的膜为分离介质，通过在膜两侧施加（或存在）一种或多种推动力，使原料中的某组分选择性地优先透过膜，从而达到混合物的分离，并实现产物的提取、浓缩、纯化等目的的一种新型分离过程.其推动力可以为压力差、浓度差、电位差、温度差等.膜分离过程有多种，不同的过程所采用的膜及施加的推动力不同，通常称进料液流侧为膜上游、透过液流侧为膜下游.膜分离技术是一种新型高效、精密分离技术，它是材料科学与介质分离技术的交叉结合，具有高效分离、设备简单、节能、常温操作、无污染等优点，广泛应用于工业领域，尤其在化工、食品、医药、生化领域发展迅猛[2].膜分离技术具有如下特点：(1)膜分离过程不发生相变化，因此膜分离技术是一种节能技术；(2)膜分离过程是在压力驱动下，在常温下进行分离，特别适合于对热敏感物质，如酶、果汁、某些药品的分离、浓缩、精制等.(3)膜分离技术适用分离的范围极广，从微粒级到微生物菌体，甚至离子级都有其用武之地，关键在于选择不同的膜类型；(4)膜分离技术以压力差作为驱动力，因此采用装置简单，操作方便.2 超滤膜分离实验2.1 实验仪器膜分离实验装置，电子天平，紫外可见分光光度计.2.2 实验原理2.2.1 膜性能表征2.2.3 实验内容（1）用电子天平称量牛血清蛋白（生化试剂），加蒸馏水使其溶于烧杯中，分别配制浓度为0.200g/l、0.100g/l、0.067g/l、0.050g/l的溶液，取样为样液1、样液2、样液3、样液4.（2）将配好的的牛血清蛋白溶液（浓度为0.05g/l）倒入料液灌中，打开泵进口阀、超滤进口阀和超滤出口阀，关闭微滤出口阀和微滤进口阀，打开电源、泵、仪表开关.（3）控制泵的回流阀，控制压力表的压力（不超过0.15MPa），调节清液和浓液流量计，待稳定好后取少许清液和浓液分别为样液5和样液6.（4）实验完毕后关闭电源，打开排水阀.然后用水清洗管路，若较长时间不用时，为了防止系统生菌，应加入少量防腐剂，例如甲醛、双氧水等（浓度均不高于0.5％）.在下次使用前，则必须将这些保护液冲洗干净，才能进行实验.（5）将样液用紫外分光光度计在波长为280nm处进行检测（以蒸馏水为基准）得到以下图谱（见图2）；根据lambert-beer定律A=abc.A为吸光度，a为吸收系数(l·g-1·cm-1)，b为液层厚度(cm)，c为吸光度物质的浓度（g/l）.对于同一种物质ab都是定值，则A与c呈线性方程，由样液1、样液2、样液 3、样液4的数据可得到下图（见图3）.通过线性方程可以得出样液5和样液6的浓度，从图谱结果可以得出超滤能对牛血清蛋白浓缩，这可用于某些药物的纯化与分离.目前膜分离技术在许多方面得到广泛应用，而且在某些方面应用得还比较成熟.在对产品质量要求不断提高、生产成本要求不断降低的今天，膜技术的优势越来越明显，其必将取代传统的低效分离技术.但我们也应该清醒的认识到，膜分离技术的大量应用毕竟是近几十年开始的，许多方面还不成熟，还有待进一步深入的研究.首先，选择性问题应集中于膜材的研究，继续开发功能高分子膜材料和无机膜材料.对仿生膜、高效电解质膜、分子识别型膜的研究需要达到智能化、高效化和专一化目标.其次，膜通量的稳定性和产值比问题应集中于渗透时的防污染和膜过程强化的研究上.无论采用那种类型的膜，都存在膜孔被堵塞、膜表面形成黏性附层等膜污染问题，这极大的影响了通量的稳定性和产值比.因此应研究一种适用面广的强化膜过程分离技术，以减少膜污染、增大过滤通量、延长膜寿命.这需要将许多因素结合起来综合考虑，如选择合适的膜材，合理的膜组件设计、具有针对性的清洗和防污染方法、以及周密的工艺流程设计等方面.随着新型膜材料的不断开发、高效强化膜过程分离技术研究的不断深入，膜分离技术必定会有更加广泛的应用前景[3].参考文献：〔1〕王志斌，杨宗伟，邢晓林，高朝祥.膜分离技术应用的研究进展[J].过滤与分离，2008，（2）:19-23.〔2〕罗丽萍，高荫榆，扬柏云.膜分离技术在食品工业上的应用[J].江西科学，2004，2(2)：146—150．〔3〕王驰，魏东洋.膜处理技术在饮用水处理的应用研究.医药卫生，2005，34(3)：210.。
