5果胶酶实验

实验报告果胶酶在果汁生产中的作用一．实验目的1.探究不同温度对果胶酶活性的影响;2.探究不同 ph 对果胶酶活性的影响;3.探究果胶酶的用量对果汁生产的影响。

二．实验原理1.果胶酶的活性受温度影响。

处于最适温度时，活性最高。

果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。

2.果胶酶的活性受ph影响，处于最适ph，酶的活性最高，高于或低于此值活性均下降。

果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。

3.在一定的条件下，随着酶浓度的增加，果汁的体积增加；当酶浓度达到某一数值后，在增加酶的用量，果汁的体积不再改变，此值即是酶的最适用量。

三．实验材料与用具苹果、果胶酶、盐酸溶液、榨汁机、电子天平、恒温水浴锅、烧杯、量筒、试管、漏斗、温度计、玻璃棒、滤纸、滴管、三脚架四．实验步骤（一）温度对果胶酶活性的影响1.制备果汁选取一个中等大小的苹果( 约 200g) 洗净后，不去皮，切成小块，放入榨汁机中，加入约 200ml 水，榨取 2min，制得苹果泥。

量取一定体积的苹果泥，不同条件下处理后，用滤纸进行过滤即可得到果汁；2.取9支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶；3.将9支试管分别放入30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃的水浴锅中保温10分钟；4.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。

（二）ph 对果胶酶活性的影响1.制备果汁；2.取5支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶；3.将5支试管放入40℃恒温水浴锅中加热；4.待试管内温度稳定后在5支试管分别加入ph分别为5、6、7、8、9的盐酸溶液；5.恒温保持10min；6.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。

（三）果胶酶的用量对果汁生产的影响1.配制不同浓度的果胶酶溶液准确称取纯的果胶酶1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg，配制成相等体积的水溶液，取等量放入9支试管中，并编号1～9。

探究果胶酶的最适用量实验报告
一、实验目的：探究果胶酶最适用量。

二、实验原理：果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层。

使得浑浊的果汁变
澄清。

三、材料用具：35mL苹果泥、2%的果胶酶溶液、10mL量筒4个、漏斗7个、滤纸10
张、试管16只、玻璃棒4根、简易榨汁机1台。

四、实验步骤：
1、制备苹果泥：将200g苹果洗净后，不去皮，切成小块，放入榨汁机，手动榨汁。

2、分别对7只试管进行编号为1～7，另7只编号为甲～庚。

3、分别量取苹果泥5mL于1～7号试管中，再分别量取1、1.5、2、2.5、3、3.5、
4mL的2%果胶酶溶液倒入甲～庚中，用蒸馏水调节体积相同。

4、将甲试管中果胶酶溶液倒入1试管中，余下试管用同样方法处理。

最后将温度
保温7分钟。

5、将每组用滤纸过滤出果汁，并观察澄清度（做好记录）。

五、实验结果：
【A～H为果汁澄清度从大到小】
六、实验结论：用量为1.5mL的果胶酶溶液产生果汁的最为澄清。

七、实验反思：因苹果泥制备所耽误的时间过长，导致实验时间增长。

且因为在过滤果
汁之前没有用沸水浴将所有试管中的果胶酶高温失活，导致实验结果有一定的误差。

“果胶酶在果汁生产中的作用”的实验设计和实施陆奇沈红梅蒋选荣（江苏省扬州市新华中学225009）摘要本文介绍了在普通高级中学实验室允许的条件下开展“果胶酶在果汁生产中的作用”定量实验的案例，并对课题的实验步骤及设计、实验结果分析等具体问题进行讨论。

关键词果胶酶生产应用实验设计“果胶酶在果汁生产中的作用”是人教版（选修一）《生物技术实践》专题四“酶的研究与应用”中的课题一，课题要求学生能设计实验探究温度和pH对果胶酶活性的影响以及果胶酶的最适用量，此内容与学生的日常生活联系紧密，并且又有必修一“探究影响酶活性的条件”作基础，因此对于学生来说并不困难，适合进行实际动手操作。

但是，教材要求有实验方案的设计，还涉及到实验变量的梯度设计，要想获得理想的结果，必须进行反复多次的实验和摸索。

在实际教学过程中，学生对教材和参考资料中的实验方案进行了讨论和实践，并提出了改进措施，本文小结如下。

1实验方案1．1预实验确定水果的种类→确定制备果汁的方法→确定制备果汁的用量→确定果胶酶作用的检测指标→确定果胶酶的用量→确定果胶酶的作用时间。

1．2探究实验①探究不同温度对果胶酶活性的影响；②探究不同pH对果胶酶活性的影响。

2实验材料与方法2．1实验材料本实验选用苹果作为实验材料，榨成汁后使用；实验中使用的果胶酶购自上海蓝季生物技术有限公司，配成质量分数为2%溶液后使用。

2．2制备果汁的方法选取一个中等大小的苹果（约200g）洗净后，不去皮，切成小块，放入榨汁机中，加入约200mL水，榨取2min，制得苹果泥。

量取一定体积的苹果泥，不同条件下处理后，用滤纸进行过滤即可得到果汁。

2．3果胶酶活性的检测指标果胶酶能将果胶分解成小分子物质，小分子物质可以通过滤纸，苹果汁的体积大小体现了果胶酶催化分解果胶的能力。

通过测定滤出的苹果汁的体积大小作为果胶酶活性的检测指标。

2．4确定果胶酶的最适用量取5支试管，编号后各加入10mL苹果泥，依次加入水、0．5mL、1mL、2mL、4mL 2%的果胶酶溶液，加水使每支试管反应体系的终体积皆为14mL，室温下作用足够长时间，过滤15min，量取滤出的苹果汁的体积，确定果胶酶的最适用量。

一、实验目的1. 学习果胶酶的提取方法。

2. 探究不同提取条件对果胶酶活性的影响。

3. 测定果胶酶的活性。

二、实验原理果胶酶是一种复合酶，主要包括果胶分解酶、果胶酯酶和果胶酶等。

它们能将果胶分解为低聚果胶、果胶酸和果胶单糖等，从而降低果胶的粘度，提高果汁的澄清度。

本实验通过提取果胶酶，并测定其活性，旨在了解果胶酶的提取方法和活性。

三、实验材料1. 材料：新鲜柑橘皮、硫酸铵、吐温-80、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、葡萄糖标准液、蒸馏水等。

2. 仪器：电子天平、高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、烧杯、量筒、移液器、试管等。

四、实验方法1. 果胶酶的提取（1）将新鲜柑橘皮洗净，去皮，切成小块。

（2）将柑橘皮与蒸馏水按1:10（质量比）的比例混合，置于高速离心机中，以4000 r/min离心10分钟。

（3）取上清液，加入硫酸铵，使硫酸铵的终浓度为0.5 mol/L，置于4℃冰箱中沉淀过夜。

（4）将沉淀物重新溶解于蒸馏水中，加入吐温-80，使吐温-80的终浓度为1%，混匀后置于高速离心机中，以4000 r/min离心10分钟。

（5）取上清液，用0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 6.0）透析，去除硫酸铵，透析时间为4小时。

（6）透析后的溶液即为果胶酶提取液。

2. 果胶酶活性测定（1）绘制标准曲线：以葡萄糖标准液为参比，采用紫外分光光度法测定葡萄糖浓度，绘制标准曲线。

（2）酶活性测定：取1 mL果胶酶提取液，加入0.5 mL 0.5%果胶溶液，混匀后置于恒温水浴锅中，在40℃下反应30分钟。

（3）终止反应：向反应体系中加入1 mL 1 mol/L NaOH溶液，混匀。

（4）测定吸光度：用分光光度计测定反应体系的吸光度，根据标准曲线计算葡萄糖浓度。

（5）计算酶活性：根据葡萄糖浓度和反应体系体积，计算果胶酶活性。

五、实验结果与分析1. 果胶酶提取结果通过实验，成功提取了果胶酶，提取液呈淡黄色，说明果胶酶提取成功。

果胶酶的制作及对苹果匀浆的作用一、实验目的本实验旨在掌握果胶酶的制作方法，并通过对苹果匀浆中果胶酶的应用，了解果胶酶在果汁生产中的作用。

二、实验原理果胶酶是一种酶类，其可以将果胶分子中的苯基甲酸与甲酸酯键裂解，使得多聚果胶分解成低聚果胶或者单体果胶，从而起到分解果胶、降低黏稠度的作用。

因此，果胶酶被广泛地应用于果汁生产中的浑浆处理过程中。

三、实验器材•热水浴器•50mL锥形瓶•5mL量筒•口径适宜的漏斗•邮票式电子天平•空心玻璃管四、实验材料•食品级苹果浆•果胶酶•磷酸盐缓冲液•无水酒精五、实验步骤1. 制备酶制剂1.将果胶酶粉末称取适量（推荐用蛋白质含量25%~40%的复合果胶酶），加入磷酸盐缓冲液中。

2.用邮票式电子天平对酶粉加入液体进行称重，使称重误差控制在0.001g以内。

3.在热水浴器中保持60℃恒温2h。

4.添加等体积的无水酒精混合，放置雪柜中1h沉淀。

5.用空心玻璃管取出上清液，放置雪柜中储存备用。

2. 实验操作1.将30mL苹果浆倒入50mL锥形瓶中。

2.加入3mL前一步制备的果胶酶制剂。

3.在热水浴器中保持50℃恒温1h。

4.用适当的漏斗过滤液体，得到果汁。

六、实验结果及分析通过观察实验结果，可以发现经过酶制剂处理后的果汁明显比原来的果浆流动性更好，粘度降低。

这一现象说明果胶酶能够有效地降低果汁的粘度，提高果汁的流动性，加速果浆的分离过程。

七、实验注意事项1.实验中用到的仪器、试剂，要认真核对检查是否与实验操作步骤相符合，严格按照实验操作步骤加以使用。

2.在制备果胶酶制剂时，要避免酶粉受潮和受污染，以及加入过多或过少磷酸盐缓冲液等不当操作。

3.实验操作时，应根据实验室的实际情况适当调整实验步骤，确保实验能够安全、顺利进行。

4.实验结果可能会受到许多因素的影响，如实验人员误操作，实验条件不同等，应加以注意并合理解释结果。

八、实验延伸本实验基于果胶酶对果汁黏稠度的影响展开，可以延伸到对其他果汁的研究中，如考虑果胶酶作用于柑橘汁、西瓜汁、菠萝汁等果汁中的效果等等，能够加深我们对果胶酶在果汁生产中的作用认知。

一、实验目的1. 了解果胶酶的特性和作用机制。

2. 掌握果胶酶提取和纯化的方法。

3. 学习果胶酶在不同条件下的酶活性测定。

4. 探究果胶酶在食品加工中的应用。

二、实验原理果胶酶是一类能够降解果胶的多糖水解酶，主要分为三种：果胶分解酶、果胶酯酶和果胶裂解酶。

果胶酶在食品加工中具有重要作用，如果汁澄清、果酱生产、果胶降解等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：柑橘皮、淀粉酶、葡萄糖标准液、酚酞指示剂等。

2. 仪器：恒温水浴锅、紫外可见分光光度计、离心机、天平等。

四、实验方法1. 果胶酶的提取（1）将柑橘皮洗净、去皮、去核，切成小块。

（2）将柑橘皮放入组织捣碎机中，加入适量的蒸馏水，捣碎成浆状。

（3）将浆状物过滤，得到果胶酶提取液。

2. 果胶酶的纯化（1）将果胶酶提取液加入适量的硫酸铵，使蛋白质沉淀。

（2）离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，得到粗果胶酶。

（3）将粗果胶酶加入适量的硫酸铵，使蛋白质再次沉淀。

（4）离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，得到纯果胶酶。

3. 果胶酶的酶活性测定（1）配制果胶溶液：称取一定量的果胶，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的果胶溶液。

（2）取一定量的果胶溶液，加入适量的淀粉酶，在恒温水浴锅中反应一定时间。

（3）加入酚酞指示剂，用葡萄糖标准液滴定至溶液呈粉红色，记录消耗的葡萄糖标准液体积。

（4）根据消耗的葡萄糖标准液体积和果胶溶液的浓度，计算果胶酶的酶活性。

4. 果胶酶在食品加工中的应用（1）果汁澄清实验：将柑橘汁中加入适量的果胶酶，观察果汁澄清效果。

（2）果酱生产实验：将柑橘皮与果胶酶混合，观察果酱的质地和口感。

五、实验结果与分析1. 果胶酶的提取和纯化实验成功提取了果胶酶，并通过硫酸铵沉淀法进行了初步纯化。

2. 果胶酶的酶活性测定通过酶活性测定，得到了果胶酶的酶活性为XX U/mg。

3. 果胶酶在食品加工中的应用在果汁澄清实验中，加入果胶酶的柑橘汁澄清效果明显优于未加果胶酶的柑橘汁。

一、实验目的1. 了解果胶酶的提取方法；2. 掌握果胶酶活性的测定方法；3. 探究不同提取方法对果胶酶活性的影响。

二、实验原理果胶酶是一种复合酶，主要由果胶分解酶、果胶酯酶和半乳糖醛酸酶组成。

它能够分解植物细胞壁中的果胶，使植物组织变得柔软，便于提取。

本实验通过提取黑曲霉等真菌中的果胶酶，并测定其活性，以了解果胶酶的特性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 黑曲霉菌种- 柑橘皮- 硫酸铵- 乙酸乙酯- 氯化钠- 碳酸氢钠- 磷酸氢二钠- 磷酸二氢钠- 果胶- 水浴锅- pH计- 离心机- 移液器- 烧杯- 试管- 滴定管- 酶标板- 酶标仪2. 实验试剂：- 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）- 果胶酶提取液- 果胶溶液- 氯化钠溶液- 碳酸氢钠溶液- 磷酸氢二钠溶液- 磷酸二氢钠溶液四、实验方法1. 果胶酶提取（1）将黑曲霉菌种接种于装有马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基的培养皿中，培养48小时。

（2）将培养好的黑曲霉菌种接种于装有马铃薯葡萄糖液体培养基的三角瓶中，培养48小时。

（3）将培养好的菌液以4,000 r/min离心10分钟，收集菌体。

（4）将菌体用pH 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除杂质。

（5）将洗涤后的菌体加入硫酸铵溶液中，搅拌溶解，调节pH至7.0。

（6）将溶液以4,000 r/min离心10分钟，收集沉淀。

（7）将沉淀用pH 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除杂质。

（8）将洗涤后的沉淀加入乙酸乙酯溶液中，搅拌溶解，去除蛋白质。

（9）将溶液以4,000 r/min离心10分钟，收集沉淀。

（10）将沉淀用pH 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除杂质。

（11）将洗涤后的沉淀加入氯化钠溶液中，搅拌溶解，调节pH至7.0。

（12）将溶液以4,000 r/min离心10分钟，收集沉淀。

（13）将沉淀用pH 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除杂质。

（14）将洗涤后的沉淀加入碳酸氢钠溶液中，搅拌溶解，调节pH至7.0。

一、实验目的1. 了解果胶酶在果汁生产中的应用及其作用原理。

2. 探究不同果胶酶用量对果汁产量和品质的影响。

3. 确定果胶酶的最适用量，为果汁生产提供理论依据。

二、实验材料1. 材料：苹果泥、果胶酶溶液、蒸馏水、pH试纸、恒温水浴装置、试管、漏斗、滤纸、量筒、试管夹。

2. 试剂：质量分数为2%的果胶酶溶液、体积分数为0.1%的缓冲液。

三、实验方法1. 实验分组：将实验分为6组，分别编号为1～6。

2. 苹果泥处理：取等量的苹果泥，用pH试纸测定其pH值，调节至4.8。

3. 果胶酶溶液添加：向1～6号试管分别加入不同体积的果胶酶溶液（如：0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL）。

4. 恒温水浴：将装有苹果泥和果胶酶溶液的试管放入45℃恒温水浴装置中，保温相同时间（如：30分钟）。

5. 过滤：使用漏斗和滤纸将苹果泥过滤，收集果汁。

6. 果汁体积测量：使用量筒测量过滤得到的果汁体积，记录数据。

四、实验结果与分析1. 实验结果：通过实验，得到以下数据（单位：mL）：组号果胶酶用量（mL）果汁体积（mL）1 0.1 302 0.2 403 0.3 504 0.4 605 0.5 656 0.6 652. 结果分析：（1）随着果胶酶用量的增加，果汁体积逐渐增加。

当果胶酶用量达到0.5mL时，果汁体积达到最大值，之后继续增加果胶酶用量，果汁体积不再增加。

说明果胶酶用量在一定范围内对果汁产量有显著影响。

（2）在实验中，果胶酶用量为0.1mL时，果汁产量较低，可能是因为果胶酶用量不足，未能充分发挥其催化作用。

随着果胶酶用量的增加，果汁产量逐渐提高，但超过0.5mL后，果汁产量增加不明显，可能是因为酶活性已经达到饱和，继续增加果胶酶用量对果汁产量影响不大。

（3）从实验结果可以看出，果胶酶的最适用量为0.5mL。

在此用量下，果汁产量较高，且能保证果汁品质。

五、实验结论通过本实验，我们得出以下结论：1. 果胶酶在果汁生产中具有重要作用，可以提高果汁产量和品质。

实验报告果胶酶在果汁生产中的作用一．实验目的1.探究不同温度对果胶酶活性的影响;2.探究不同 ph 对果胶酶活性的影响;3.探究果胶酶的用量对果汁生产的影响。

二．实验原理1.果胶酶的活性受温度影响。

处于最适温度时，活性最高。

果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。

2.果胶酶的活性受ph影响，处于最适ph，酶的活性最高，高于或低于此值活性均下降。

果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。

3.在一定的条件下，随着酶浓度的增加，果汁的体积增加；当酶浓度达到某一数值后，在增加酶的用量，果汁的体积不再改变，此值即是酶的最适用量。

三．实验材料与用具苹果、果胶酶、盐酸溶液、榨汁机、电子天平、恒温水浴锅、烧杯、量筒、试管、漏斗、温度计、玻璃棒、滤纸、滴管、三脚架四．实验步骤（一）温度对果胶酶活性的影响1.制备果汁选取一个中等大小的苹果( 约 200g) 洗净后，不去皮，切成小块，放入榨汁机中，加入约 200ml 水，榨取 2min，制得苹果泥。

量取一定体积的苹果泥，不同条件下处理后，用滤纸进行过滤即可得到果汁；2.取9支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶；3.将9支试管分别放入30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃的水浴锅中保温10分钟；4.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。

（二）ph 对果胶酶活性的影响1.制备果汁；2.取5支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶；3.将5支试管放入40℃恒温水浴锅中加热；3.待试管内温度稳定后在5支试管分别加入ph分别为5、6、7、8、9的盐酸溶液；4.恒温保持10min；5.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。

（三）果胶酶的用量对果汁生产的影响1.配制不同浓度的果胶酶溶液准确称取纯的果胶酶1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg，配制成相等体积的水溶液，取等量放入9支试管中，并编号1～9。

一、实验设计实验序号实验三实验名称特定产物工业生产菌种发酵试验时间2010年13日-23日实验室基础生物2（121）一、实验目的1、掌握菌种选育、菌种发酵条件的优化和微生物酶制剂酶活测定的基本方法；2、了解酶学性质的研究.3、了解影响果胶酶对果汁澄清效果的各种因素二、实验与原理1、果胶酶概况（1）、果胶质：是高等植物细胞壁内及细胞壁间的结构性多糖，是一类高分子碳水化合物，它的存在往往给果蔬加工等工艺带来许多麻烦和损失。

（2）、果胶酶：是指能分解果胶质的多种酶的总称，广泛存在于高等植物和微生物中。

（3）、产生果胶酶的微生物：细菌、放线菌、酵母和霉菌，但目前商品果胶酶多数来自霉菌。

（4）、果胶酶的应用：主要是用于果胶的分解，在水果加工、葡萄酒生产、麻类脱胶和饲料等方面有着广泛的应用。

2、果胶酶的酶活测定方法（1）、粘度降低法：利用粘度计测量在一定温度、酶浓度和一定反应时间内，标准果胶溶液的粘度降低值。

（2）、脱胶作用时间法：以脱胶作用的时间来测定果胶酶的酶活力。

（3）、次亚碘酸法：用滴定法定量测定半乳糖醛酸的生成量，以表示果胶酶的活力。

（4）、还原糖法（DNS法）：根据果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，后者是一种还原糖，与3，5 -二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈比例关系，可利用比色法在540nm进行测定。

3、微生物发酵生产产品受以下条件制约：（1）、培养基成分：C源、N源、无机盐、水和生长因子（2）、培养条件：温度、pH、溶解氧等（3）、附加条件：诱导物、表面活性剂等4、酶催化反应的进行受多种因素的影响：底物浓度、酶浓度、温度、pH、激活剂、抑制剂三、设备与材料（一）、培养基1、菌种筛选使用培养基（1）、基本培养基:果胶1% 、磷酸氢二钠0.5%、蛋白胨1%、pH4.5、琼脂2.0%。

（2）、分离培养基：果胶0.5%、磷酸氢二钠0.5%、琼脂2.0%、H4.5。

实验4 果汁中的果胶和果胶酶1.果胶是植物细胞壁的以及胞间层的主要成分之一，由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯组成。

下面是果胶的结构式：山楂的果实中果胶含量最多，煮沸的山楂泥可制成山楂糕，就是由于果胶的作用。

果胶起着将植物细胞粘合在一起的作用，去掉果胶，就会使植物组织变得松散。

果胶不溶于乙醇，这是鉴别果胶的一种简易方法。

2.果胶是植物细胞壁和胞间层的主要组成成分之一。

在果汁加工中，果胶的存在易导致果汁出汁率低，果汁浑浊。

果胶酶分解果胶的作用是：①瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁更容易；②把果胶分解为可溶性的半乳糖醛酸，使浑浊的果汁变得澄清，因此可以解决果汁加工中出现的问题。

果胶酶是一类酶的总称，包括：多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶。

在植物细胞工程中果胶酶的作用是与纤维素酶一起除去植物细胞的细胞壁。

果胶酶和果胶甲酯酶可水解果胶，瓦解植物的细胞壁和胞间层。

有些微生物，如黑曲霉、苹果青霉等都可用于生产果胶酶。

在果汁生产中应用果胶酶可以提高出汁率(果汁量）和澄清度.〖设备用品〗1．匀浆机(图9) 2．小刀3．100ml的烧杯4．沸水浴或酒精灯5．试管6．移液器7．量筒8. 过滤器〖材料〗1．山楂或苹果。

2．黑曲霉提取液或果胶酶溶液。

3．95％的乙醇。

实验目的：1．探究制作果汁的最佳条件。

2．检测果胶酶活性。

本实验的内容是探究利用苹果或山楂匀浆制作果汁的最佳条件，也是检测果胶酶的活性、了解果胶酶对果汁形成的作用和收集果胶酶的应用材料。

在果汁生产中应用果胶酶可以提高出汁率和澄清度。

实验用具和材料：磨浆机、烧杯、试管、量筒、刀片、玻璃棒、漏斗、纱布等；苹果、质量分数为2％的果胶酶溶液、蒸馏水等。

【课题一】探究果胶酶催化果胶水解的最适pH。

实验方法及步骤：(1)将苹果洗净去皮，用磨浆机制成苹果泥，加入适量蒸馏水备用。

(2) 分别向编号为l～7的7个100 mL洁净的烧杯中各加入20ml苹果泥之后，下面两种操作：方法一：将试管中的果胶酶溶液和烧杯中的苹果泥相混合，再把混合液的pH分别调至4、5、6、 (10)方法二：将试管中的果胶酶溶液和烧杯中的苹果泥的pH分别调至4、5、6、…、10 ，再把pH相等的果胶酶溶液和苹果泥相混合。

正文果胶酶的固定化及其活力测定一、目的：果胶酶（EC.3.2.1.15）广泛存在于植物界，参与果实的成熟及其它代谢过程。

在果品加工业中，果胶酶主要用于果汁的澄清和提高榨汁率。

果胶酶的固定化将有助于提高酶的利用率，同时还可减少外源物质对果制品的污染。

果胶酶需求量大，且多为一次性使用，既造成了很大的浪费，又大大提高了产品生产成本。

固定化果胶酶可以重复多次使用，能够减少果胶酶的使用量，节约生产成本。

通过本实验，了解载体的制备方法，掌握酶的固定化原理及方法。

二、原理：本实验固定化方法为共价结合法。

以壳聚糖为载体，通过戊二醛共价交联固定化果胶酶。

壳聚糖是从蟹、虾外壳中提取的一种氨基多糖（α-氨基-1.4-β-葡萄糖多聚物），对人和动物无毒副作用，是一种具有网状结构，机械性能好，化学性质稳定，耐热性好的酶固定化载体材料，特别是壳聚糖分子中含有游离的氨基，通过化学交联剂（如戊二醛）很容易与酶发生间接共价结合，使酶牢固地固定在壳聚糖分子上。

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,可用DNS法定量：3,5-二硝基水杨酸与醛糖共热能产生棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和含有呈色氨基化合物的反应液颜色深浅成正比，在540nm下测其吸光度，从而可计算出果胶酶活力。

三、试剂及仪器仪器：冷冻离心机分光光光度计比色皿（8只）摇床水浴箱混合振荡器天平瓷盘药匙剪刀(1把) 记号笔（1支）通风橱吸水纸具塞刻度试管（4支）三角瓶（2支）烧杯（100ml×3个）试管架（1个）试管（6支）量筒（100ml×1个）滴管（16个）离心管(5ml×2个,50ml×1个)移液管架(1个) 移液管(2ml×3个,5ml×1个) 注射器（1支）滴管(1个)吸耳球（1个）洗瓶（1个）玻棒（1个）烧杯(300 ml×5个)试剂：乙酸－乙酸钠缓冲液（0.2mol/L,pH5.0）磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.0) 3,5－二硝基水杨酸氢氧化钠冰醋酸丙三醇戊二醛无水乙醇浓盐酸果胶酶果胶半乳糖醛酸壳聚糖蒸馏水若干桶四、方法步骤1 载体的制备1.1取壳聚糖4g加入180ml的3%的乙酸中，加20ml甘油搅拌溶解，制得壳聚糖溶液。