维生素B1标准品 杂质 对照品

维生素B1、B2的测定方法比较比较维生素B1、B2含量测定方法。

方法：采用紫外分光光度法中三种不同方法测定维生素B1、B2含量。

结果：1、按 E 值测标示量维生素B1：98.3 ± 2.51，维生素B2：94.8 ±0.308，复合维生素B片中维生素B1:102.1± 1.70，维生素B1平均回收率为100.4%，RSD为2.13%(n=6)，维生素B2平均回收率为94.9%，RSD为6.5%(n=6)。

2、标准曲线法维生素B1、B2浓度分别在3～18、1～8μg/ml范围内，均呈良好线性关系，标示量分别为：102.9±0.661，98.4±0.152。

3、双波长法测维生素B1标示量：94.2±1.97。

结论：三种方法用于维生素B1、B2含量测定，操作简便、快速、准确，精密度好。

近年来对维生素B1、B2测定方法报道较多，如高效液相色谱法[1,2]、流动注射化学发光法[3]、多元线性分光光度法[4]、荧光分光光度法[5]、毛细管电泳电化学法[6]、氧瓶燃烧电位滴定法[7]等。

这些方法操作麻烦、时间较长。

本文采用紫外分光光度法中按 E 值测定法、标准曲线法和双波长分光光度法，测定维生素B1、B2含量，并将三种方法进行比较。

三种方法均操作简便、快速、准确。

1 仪器和材料仪器：722型分光光度计DU-7紫外—可见分光光度计材料：维生素B1、B2对照品(购自Sigma 公司) ；维生素B1片(批号：20021202) 维生素B2片(批号：20021288-02)；复合维生素B片(批号：20021283-02)三种片剂均为昆明制药股份有限公司产品；冰醋酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。

2 试验及结果2.1 维生素B1含量测定2.1.1 按E 值测定维生素B1标示量取本品 1 0 片，精密称取、研细，精密称取适量(约相当于维生素B125mg)，加盐酸(9 →1000)约70ml，振摇15min使之溶解，再加盐酸(9→1000)定容至100ml，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取滤液5 m l，用盐西装盐酸(9 →1000)稀释至100ml，摇匀，扫描得最大吸收波长为246nm(图1)，在该波长处测定吸光度，按其吸收系数( )为421计算：A 为供试品在246nm 波长处测得的吸光度；D 为稀释倍数；W 为维生素B1片的平均片重；W样为称取的维生素B1片粉重；S标为标示量，测定结果(X ±SD)：98.3±2.51(n=7)。

附件4保健食品中9种水溶性维生素的测定BJS 2017161范围本方法规定了保健食品中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺含量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺含量的测定。

2原理试样经水提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。

3试剂和材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂3.1.1甲醇：质谱级。

3.1.2甲酸：质谱级。

3.1.3氨水：含量26%。

3.1.4冰醋酸。

3.1.5 浓盐酸。

3.1.6氨水（1+5）：量取100 mL 氨水（3.1.3）缓慢倒入500 mL 水中，混匀。

3.1.7 盐酸（0.01 mol/L）：吸取9 mL 浓盐酸（3.1.5），溶于1000 mL 水中。

吸取该溶液50 mL，用水稀释并定容至500 mL。

3.1.8 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1 mL用水稀释至1 000 mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。

3.1.9 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1 mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。

3.2标准品维生素B1（硫胺素盐酸盐）、维生素B2、泛酸（泛酸钙）、维生素B6（吡哆醇）、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。

3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液（1 mg/mL）3.3.1.1维生素B1标准储备液：称取维生素B1标准品（3.2）0.1 g（精确至0.000 1 g），用0.01 mol/L 盐酸（3.1.7）溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

3.3.1.2维生素B2、生物素、叶酸标准储备液：分别称取生物素、叶酸标准品（3.2）0.1 g（精确至0.000 1 g），加入30 mL氨水（3.1.6）溶解，甲酸调节pH值至7.0后，用水转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。

紫外分光光度法测定维生素B1片的含量前言维生素B1又称盐酸硫胺或抗神经炎素, 化学名为４-甲基-３-［（２-甲基-４-氨基-５-嘧啶基）甲基］-５-（２-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐。

为白色结晶或结晶性粉末。

在酸性溶液中很稳定, 在碱性溶液中易被氧化和受热破坏。

遇光和热效价下降，故应置于遮光、凉处保存, 且不宜久贮, 具有维持正常糖代谢的作用，在临床上常用于防治缺乏维生素B1所致的脚气病，也用于神经炎、消化不良等症的辅助治疗[1] 。

近年来测定维生素B1片含量的方法较多，如高效液相法[2] 、荧光分光光度法[3] 、毛细管电泳电化学法[4] 、氧瓶燃烧电位滴定法[5] 等。

这些方法操作麻烦、实验时间较长。

紫外分光光度法仪器较便宜，普及度高且操作较简便，此外，维生素B1是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵类化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐[6] 。

维生素B1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收峰，故本次选用紫外分光光度法测定维生素B1含量，根据朗伯-比尔定律，利用紫外吸收光谱来进行定量分析，方法准确、简便、重复性好。

1. 仪器与试药1.1仪器紫外分光光度仪，分析天平，25mL棕色容量瓶，移液管。

1.2 试药维生素B1片；维生素B1生化试剂BR；0.1mol·L -1 HCl（自制）2．实验方法与结果2.1 样品预处理取维生素B1片20片（标示量为10.0mg），总重为1.23921g，其平均质量为61.96mg，充分研磨并混匀，称取3份样品置于25mL棕色容量瓶中，3份样品质量各为10.53mg、10.28mg、10.27mg，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL备用。

2.2对照品溶液配制维生素B1对照溶液：在分析天平上精密称取维生素B1 10.90mg置于25mL 棕色容量瓶，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL，作为维生素B1对照品储备液。

液相色谱-质谱法测定运动饮料中9种水溶性维生素施煜;林加如;辛希奕;郑曼冰【摘要】建立液相色谱-质谱法快速测定运动饮料中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺9种水溶性维生素的方法.样品用水超声提取后,采用ACQUITY HSS T3液相色谱柱分离,以0.1％甲酸甲醇-0.1％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,采用质谱多反应监测扫描模式的选择性和特异性定量.9种水溶性维生素的质量浓度与色谱峰面积分别在各自范围内具有良好的线性关系,线性相关系数均大于0.999.当称样量为2.00 g,定容体积为50 mL时,方法检出限为0.0250～0.0625μg/g,测定下限为0.10～0.25μg/g.样品的加标回收率为90.0％～102.3％,测定结果的相对标准偏差为0.9％～3.2％(n=7).该方法简便、快速、准确、灵敏,适用于运动饮料中水溶性维生素的测定.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2018(027)005【总页数】5页(P29-33)【关键词】液相色谱-质谱法;运动饮料;水溶性维生素【作者】施煜;林加如;辛希奕;郑曼冰【作者单位】广东省汕头市质量计量监督检测所,广东汕头 515041;广东省汕头市质量计量监督检测所,广东汕头 515041;广东省汕头市质量计量监督检测所,广东汕头 515041;广东省汕头市质量计量监督检测所,广东汕头 515041【正文语种】中文【中图分类】O657.7运动饮料是根据人体运动后的生理代谢状态而配制的饮料，主要含有糖类、氨基酸、电解质、维生素等成分［1–2］，能够有针对性地补充人体运动时丢失的营养元素，可为机体补充水分、电解质和能量，有助于保持或提高机体运动能力，延缓运动性疲劳的产生［3–4］，其中水溶性维生素能够提高人体新陈代谢，将运动饮料中的糖类物质转化为热量，可舒缓心情，缓解紧张感，令人精力充沛，从而提高人体的运动动力，但维生素摄入过多会引起肝脏、肾脏的代谢负荷［5–6］。

检测维生素c和维生素b1的化学方法
检测维生素C和维生素B1的化学方法主要有以下几种：
1. 线性比色法：该方法是采用维生素C和二硝基苯肼在适当条件下反应生
成橙红色化合物，然后根据产物的吸收光谱进行定量测定。

2. 高效液相色谱法：该方法是利用高效液相色谱仪分离维生素C并测定其
峰面积或峰高值，再与外标品进行比较计算出维生素C的含量。

3. 滴定法：该方法是利用碘液与维生素C发生化学反应，在反应过程中当
溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。

根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。

4. 荧光法：该方法是利用荧光光度计记录维生素C在特定波长下的荧光强度，通过与标准品比较，计算出样品中维生素C的含量。

5. 钼蓝比色法：该方法是利用维生素C与钼酸铵在酸性条件下反应生成蓝
色络合物（钼蓝），在660nm处有最大吸收，通过比色法测定样品中维生素C的含量。

6. 碘滴定法：该方法是利用碘和还原性维生素C反应，根据消耗的碘的量，可以计算出被测物质中还原性维生素C的含量。

这些方法各有优缺点，选择合适的检测方法取决于实验目的、样品类型和实验室条件。

紫外分光光度法测定维生素B1片的含量维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。

中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。

采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。

1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。

1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。

2 实验方法处方分析：组成处方量(g) 比例(%)10 16.39维生素B1淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。

平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。

1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm 的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%E）为421计算，即得。

1cm2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1250μg/ml的对照溶液。

中国药科大学药物分析考点整理(适用于期末、研究生考试)第一章药典概况一、药典内容：凡例、正文、附录、索引1.凡例：解释和使用药典的基本原则，并规定共性咨询题标准品、对比品系指用于鉴不、检查、含量测定的标准物质，均由国务院药品监督治理部门指定的单位制备、标定和供应。

标准品系指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位（或ug）计，以国际标准品举行标定；对比品除另有规定外，均按干燥品（或无水物质）举行计算后使用。

2.正文：药品或制剂的质量标准。

按笔画顺序罗列，单方制剂在其原料药后，药用辅料集中编排。

3.附录：制剂通则、通用检测办法、指导原则。

4.索引：中文按拼音排序，英文按字母排序。

二、药典发展与国外药典1.共8版药典：1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、200505版首次将《中国生物制品规程》纳入，列为三部2.美国USP(32)-NF(27)，英国BP，欧洲Ph-Eur，XXX药局方JP三、药品检验工作基本程序：取样、鉴不、检查、含量测定、写出检验报告。

第二章药物的鉴不试验一、概述：判不真伪，检验是否为标示药物，别能赖以鉴不未知物。

二、鉴不试验项目1.性状：外观、溶解度、物理常数（熔点、比旋度、汲取系数）2.普通鉴不试验：依靠阴阳离子及官能团，证实是某一类，别能证实是哪一种。

3.专属鉴不反应：证实某一种药物的依据，选用特有的灵敏定性反应，鉴不真伪。

三、鉴不办法1.化学法：呈群反应、沉淀生成反应、荧光反应、气体生成反应、使试剂褪XXX、测定生成物熔点2.光谱法：紫外（专属性别如红外）、红外、近红外、原子汲取、核磁共振3.X射线粉末衍射4.群谱法：薄层群谱、高效液相、质谱5.生物学法第三章药物的杂质检查一、概述1.来源（1）在生产过程中引入：在合成药物的生产过程中，原料别纯或未反应彻底、反应的中间体与反应副产物在精制时未能彻底除去而引入杂质。

维生素B1片有关物质检查
维生素B
片
1
Weishengsu B1 Pian
Vitamin B1 Tablets
【检查】有关物质取本品的细粉适量，加流动相适量，振摇使维生素B1溶解，用流动相稀释制成每1ml中含维生素B1 1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

照维生素B1有关物质项下的方法试验，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（1.5%）。

维生素B
1
Weishengsu B1
Vitamin B1
【检查】有关物质取本品的细粉适量，加流动相适量，振摇使维生素B1溶解，用流动相稀释制成每1ml中含维生素B1 1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

照高效液相色谱法（附录Ⅴ D）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液（含1%三乙胺，用磷酸调pH至5.5）（9：9：82）为流动相，检测波长为254nm，理论板数按维生素B1计算不低于2000，维生素B1峰与前后峰的分离度应符合要求。

取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%。

再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的3倍。

供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%）。