氯霉素速测金标试纸条及其保护剂配方研究
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氯霉素残留检测方法研究进展氯霉素残留对人体的危害极大,因此在国际上有关氯霉素的检测方法备受关注和研究。
起初是利用微生物进行定性检测,目前应用较多的是先进检测技术的联用,例如:UPLC-MS/MS,LC-MS等技术使氯霉素的检测限、精密度和回收率等方面都得到了极大提高。
标签:氯霉素;检测方法;研究进展目前有关氯霉素的检测方法有十几种,在这些现有检测方法中,公认的方法是色谱法和色谱-质谱联用法,但此技术仍需不断地改进。
在国内外对氯霉素残留量的检测方法仍在不断的研究中。
1 色谱法1.1 薄层色谱法莫金娜[1]等利用薄层色谱方法(TLC)检测化妆品中的氯霉素残留量。
该方法是先用乙醇溶剂提取,以硅胶制板为载体、在展开剂为三氯甲烷-甲烷(85:15)的薄层条件下鉴别化妆品中的氯霉素残留量。
从此实验得知,所检验的样品最小的检限度为1.0mg/g。
1.2 高效液相色谱-荧光检测法潘莹宇等[2]高效液相色谱-荧光检测方法(HPLC-FL)检测牛奶中氯霉素残留量。
氯霉素易与锌粉发生还原反应,将氯霉素与锌粉反应后的溶液在缓冲溶液(醋酸钠-醋酸)条件下可发生荧光衍生化反应,之后加入荧光胺丙酮溶液。
将待测品逐渐稀释后在一定的色谱条件下进行检测。
上述实验得出,氯霉素检测检出限为0.2μg/L。
运用此方法检测牛奶中氯霉素的残留量准确度高,灵敏度好,操作较简便等优点。
1.3 超高效液相色谱-串联质谱法彭麟等[3]利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法检测黄鳝肌肉中氯霉素残留量。
此实验首先在黄鳝肌肉样品中加入无水硫酸钠和氯化钠溶液,用碱性乙酸乙酯提取两次。
合并两次提取液,在45℃水浴中氮吹至干。
之后用5%甲醇溶液复溶,再加正己烷除脂,将下层水相过0.22μm滤膜,进样检测。
上述实验得出氯霉素检测限为0.1μg/kg。
本实验使用的UPLC-MS/MS方法具有精密度高,重现性好等优点,同时可以在保证回收率的基础上有效地提高了检测效率。
一、实验目的本实验旨在通过胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行快速、准确的检测,为食品安全监管提供技术支持。
二、实验原理氯霉素残留检验实验采用胶体金免疫层析法,该方法基于抗原抗体特异性结合的原理。
当氯霉素样品与标记有抗氯霉素单克隆抗体的胶体金颗粒混合时,如果样品中含有氯霉素,则氯霉素会与抗氯霉素单克隆抗体结合,形成抗原抗体复合物。
复合物在层析膜上通过毛细作用向前移动,与固定在层析膜上的抗氯霉素抗体结合,形成金标记的抗原抗体复合物,最终在层析膜上形成两条色带:控制线(C)和测试线(T)。
如果样品中氯霉素浓度超过检测限,则在测试线上形成明显的色带;如果样品中氯霉素浓度低于检测限,则测试线上无色带。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:(1)氯霉素标准品(2)阴性对照样品(3)阳性对照样品(4)氯霉素残留样品(5)胶体金免疫层析试纸条(6)试剂:缓冲液、洗涤液、封闭液等2. 实验仪器:(1)电子天平(2)恒温培养箱(3)移液器(4)微量加样器(5)一次性无菌手套四、实验方法1. 样品处理(1)准确称取氯霉素残留样品0.1g,加入1ml缓冲液,涡旋混匀,室温下放置10min。
(2)取1ml样品溶液,加入1ml洗涤液,涡旋混匀,室温下放置5min。
(3)重复步骤(2)两次。
2. 检测(1)取一条胶体金免疫层析试纸条,将样品加样孔浸入样品溶液中,室温下放置5min。
(2)取出试纸条,观察结果。
五、实验结果与分析1. 阳性对照实验阳性对照样品在测试线上形成明显的色带,说明试纸条的性能良好。
2. 阴性对照实验阴性对照样品在测试线上无色带,说明试纸条对阴性样品具有良好的检测效果。
3. 样品检测根据实验结果,氯霉素残留样品在测试线上形成明显的色带,说明样品中氯霉素残留量超过检测限。
六、实验结论本实验采用胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行检测,结果表明该方法具有快速、简便、准确的特点,适用于食品中氯霉素残留的现场快速检测。
氯霉素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制肖治理;曾文亮;王弘;沈玉栋;孙远明;杨金易【摘要】为研究应用检测氯霉素(CAP)的胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗CAP单克隆抗体,将CAP偶联抗原和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,研制CAP胶体金快速检测试纸条.通过优化试验,确定最佳标记pH为8.5、最佳标记量为36 ug/mL、最佳抗原包被浓度和最佳二抗包被浓度分别为0.5,1.0mg/mL.经过试验制成的试纸条检测限为2ng/mL,检测时间5~8min,肉眼即可判断结果.用该试纸条检测CAP残留具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高等特点,适用于现场快速检测和筛选工作.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2013(029)004【总页数】6页(P54-58,62)【关键词】氯霉素;胶体金;试纸条;快速检测【作者】肖治理;曾文亮;王弘;沈玉栋;孙远明;杨金易【作者单位】广东省食品质量安全重点实验室,广东广州 510642;华南农业大学食品学院,广东广州 510642;广东省食品质量安全重点实验室,广东广州 510642;华南农业大学食品学院,广东广州 510642;广东省食品质量安全重点实验室,广东广州510642;华南农业大学食品学院,广东广州 510642;广东省食品质量安全重点实验室,广东广州 510642;华南农业大学食品学院,广东广州 510642;广东省食品质量安全重点实验室,广东广州 510642;华南农业大学食品学院,广东广州 510642;广东省食品质量安全重点实验室,广东广州 510642;华南农业大学食品学院,广东广州510642【正文语种】中文氯霉素(chloramphenicol,CAP)是一种高效广谱抗生素[1],曾被作为药物应用于畜禽及水产品的疾病治疗和预防。
然而由于其存在较为严重的毒副作用,对人的造血系统和消化系统的危害较大[2],容易造成再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症和灰婴综合症并对神经系统造成影响[3]。
氯霉素快速检测试纸条说明书
【产品简介】
本产品用于快速检测生鲜乳中的氯霉素药物残留,操作简单快速,整个检测过程只需要15分钟左右,灵敏度为0.1ppb。
【产品组成】
氯霉素快速检测试纸条(48份/盒)
【操作步骤】
1. 撕开包装,取出金标微孔。
2. 用配套的吸管吸取适量奶样,将吸管垂直在微孔上方,加入5滴奶样在微孔中,并将吸管中的剩余奶样弃去。
2分钟后用吸管吹打样品数次使微孔中的试剂和样品充分混匀,再等2分钟后,将试纸条划有箭头线的一端插入微孔,箭头方向朝下。
3. 等待8~10分钟后判读结果。
【结果判断】
阴性(—):T线(检测线,靠近加样孔一端)显色比C线(对照线)深或一样深,表明样品中氯霉素浓度低于检出限或者无氯霉素残留。
阳性(+):T线比C线浅,表明样品中氯霉素浓度高于检出限。
T线比C线越浅,表明样品中氯霉素浓度越高。
无效:C线未出现,可能操作不当或试剂条已失效,应用新的试纸条,参照说明说方法重新测试。
【注意事项】
试纸条一次性使用;
请勿触摸试纸条中央的白色膜面;
切勿重复使用配备的滴管,以免交叉污染;
【特异性】
本产品与喹诺酮、四环素、链霉素、磺胺类等药物无交叉反应。
【贮存条件】
4℃~30℃避光保存,切勿冷冻。
【有效期】
12个月。
【生产日期及批号】
详见包装袋。
上海圣蓝生物技术有限公司
地址:上海市沪宜公路1868弄13号102室。
氯霉素胶体金免疫层析试纸条的技术报告1 胶体金的制备1.1玻璃器皿的准备玻璃器皿表面的少量污染会干扰金颗粒的生成,一切玻璃容器应绝对清洁,用前经过酸洗,硅化。
硅化过程一般是将玻璃容器浸泡于含5%二氯二甲硅烷的氯仿溶液中1min,室温干燥后蒸馏水冲洗,再干燥备用。
专用的玻璃器皿以第一次生成的胶体金稳定其表面,弃去后以双蒸馏水淋洗,可代替硅化处理。
将玻璃器皿用酸液浸泡72小时后,取出,大量自来水冲洗,洗洁精洗涤,蒸馏水浸泡24h后用去离子水冲洗三次,37℃温箱烘干后备用。
1.2柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液在胶体金免疫层析试验中,检测信号是由于金颗粒在检测线或质控线上聚集而成,所以如果金颗粒太小就不能产生足够的颜色信号,如果太大又会遇到空间位阻问题。
空间位阻可以阻止小分子蛋白质接近金颗粒的zeta电位,例如IgG分子(160 000 Daltons)大约8nm,约有4nm可以与金颗粒的表面结合,其最适的标记金颗粒为40nm,而对小分子抗原来说,可以使用20nm的胶体金颗粒进行标记。
取0.01%氯金酸水溶液100ml用恒温电磁搅拌器加热至沸腾,持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠水溶液1.5ml,继续搅拌加热40min,溶液呈透亮的红色。
室温冷却,用去离子水恢复到原体积,4℃保存。
1.3 胶体金的质量鉴定1.3.1 肉眼观察用肉眼观察制备的胶体金,其颜色为酒红色、均匀度较好无杂质、透明度较高。
1.3.2 紫外扫描鉴定取冷却后的胶体金溶液进行400~600nm紫外扫描,确定最大吸收峰波长,观察最大吸收峰的峰形、峰宽。
紫外扫描的最大吸收峰波长为530nm,根据回归方程Y= 0. 4271X + 514. 56计算得到胶体金颗粒粒径为36.2nm。
由图谱可以看出最大吸收峰的峰宽较小,说明胶体金颗粒分布比较均匀。
1.3.3 透射电镜鉴定透射电镜下观察胶体金颗粒的大小是否均匀一致,有无椭圆形及多角形。
拍片放大后测量胶体金颗粒直径大小,取多个点计算胶体金颗粒的平均直径。
水产品中氯霉素的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201905)1 范围本方法规定了水产品中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于水产品中氯霉素的快速测定。
2 原理本方法的测定以竞争抑制免疫层析原理为基础。
样品中的氯霉素经有机试剂提取,固相萃取小柱净化,浓缩复溶后,氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合,抑制了抗体和微孔膜检测线(T线)上抗原的结合,从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线颜色深浅比较,对样品中氯霉素含量进行定性判定。
3 试剂和材料除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682 规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1 正己烷。
3.1.2 丙酮。
3.1.3 乙酸乙酯。
3.1.4乙腈3.1.5磷酸二氢钠,NaH2PO4·2H2O。
3.1.6磷酸氢二钠,Na2HPO4·12H2O。
3.1.7 氯化钠3.1.8 复溶液:称取0.12 g磷酸二氢钠(3.1.5)置于100 mL容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,制成溶液A;称取磷酸氢二钠7.16 g (3.1.6)置于100 mL容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,制成溶液B。
取溶液A 2.8 mL、溶液B 7.2 mL、氯化钠(3.1.7)0.85 g,用水溶解并稀释至100 mL,得磷酸盐缓冲液,即为复溶液。
3.1.9丙酮-正己烷(1+9):丙酮(3.1.2)、正己烷(3.1.1)按体积比1:9混匀。
3.1.10丙酮-正己烷(6+4):丙酮(3.1.2)、正己烷(3.1.1)按体积比6:4混匀。
3.2 标准物质氯霉素标准物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分之式、相对分子质量见表1,纯度≥98.6%。
注:或等同可溯源物质。
3.3标准溶液配制3.3.1 氯霉素标准储备液(1 mg/mL):精密称取氯霉素标准物质(3.2)10 mg,置于10 mL容量瓶中,用乙腈(3.1.4)溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为1 mg/mL的氯霉素标准储备液。
氯霉素胶体金快速检测试剂条的研制及在水产品中的应用桑丽雅;吴茂生;黄奕雯;盛慧萍;柳爱春【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2013(034)012【摘要】应用胶体金免疫层析技术,研制一种水产品中氯霉素免疫胶体金快速检测试剂条.将制备的金溶液以最适蛋白标记量标记抗氯霉素单克隆抗体制成金标抗体,将羊抗鼠IgG、氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-BSA)和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜质量浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和胶体金结合垫上.NC 膜经37℃恒温干燥32h或25℃恒温干燥7d后,和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试剂条.经实验,该试剂板对水产品中氯霉素的检测限为0.3μg/kg,假阳性率4%,假阴性率为2%,常温保质期6个月以上.【总页数】5页(P351-355)【作者】桑丽雅;吴茂生;黄奕雯;盛慧萍;柳爱春【作者单位】杭州南开日新生物技术有限公司,浙江杭州 310022;福建省海洋环境与渔业资源监测中心,福建福州 350003;福建省海洋环境与渔业资源监测中心,福建福州 350003;杭州南开日新生物技术有限公司,浙江杭州 310022;杭州市农业科学研究院,浙江杭州 310024【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.赭曲霉毒素A胶体金快速检测试剂条的研制 [J], 邵伟;巴泽忠;管树舫;王伟萍;胡叶军;盛慧萍2.人心肌脂肪酸结合蛋白胶体金快速检测试剂条的研制 [J], 郑杰;龚成;赵肃清3.胶体金免疫层析法快速检测水产品中氯霉素的应用与验证 [J], 刘文珍;王振国;田飞焱;谢世红4.水产品中孔雀石绿和结晶紫残留免疫胶体金快速检测试剂盒产品的比较和应用选择 [J], 何洁怡5.磺胺类药物胶体金快速检测试剂条的研制及在水产品中的应用 [J], 张敏;李翘;盛慧萍因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
美正氯霉素试条标准美正氯霉素试条是一种用于快速测定猪肉、鸡肉和牛肉等食品中氯霉素的一种试剂盒。
氯霉素是一种广泛应用于动物饲料中的抗生素,但是其使用存在一定的风险。
有机会造成人类食品中的残留物质,对人体健康产生危害。
因此,对于含氯霉素的食品进行准确、快速的检测就显得尤为重要。
本文将从美正氯霉素试条的试验原理、操作流程、结果解析等方面进行详细介绍,以帮助用户更好地了解这种试剂盒。
一、试验原理美正氯霉素试条采用免疫层析法,即将特异性单克隆抗体与金标记抗体等共同沉淀在膜上,组成成熟的免疫双抗体复合物。
当待检样品中存在氯霉素时,会和被固定在膜上单克隆抗体结合,形成一个抗原和抗体的复合物。
紧接着,标记抗体会再次结合抗原上未覆盖的表面区域,同时固定于试纸膜上。
经过一定的阴影反应,会在试纸膜上呈现出阳性条纹。
如果待测样品中没有氯霉素,那么标记抗体不会和试纸上的单克隆抗体结合,因此没有阳性条纹出现。
二、操作流程1. 取一只新的吸附板,取出所需的试条。
推开瓶盖,将试条从瓶中取出并快速用力夹紧,以免其遭到外界污染。
2. 将待检样品从冰箱中取出,混合样品使之达到均匀状态,并采用专用的万能管将其吸取至“S”标记线处。
若样品较浑浊、黏稠、含有大量沉淀物,则需先过滤。
3. 将吸取的样品加到试条的样品孔中,呈90度方向插入吸条孔中,插入后按照提示时间观察试纸浸入液反应结果,并记录相应的反应时间。
4. 观察试条的结果,在试条的控制线上无论是否被染色,都说明试剂盒操作没问题。
如果样品上出现了阴性或阳性条纹,那么相应的检测结果就应该依据试条的说明手册进行解析和判断。
三、结果解析1. 对于“无反应”或“仪器未测到”的样品,说明该样本中未检测到氯霉素。
2. 对于“仪器已测到”但“样品为阴性”,说明该样本中氯霉素的浓度低于0.3ug/kg。
3. 对于出现一条浓淡不一的颜色线,表示样品中存在氯霉素,大小意味着该食品样品中氯霉素的检测值。
4. 对于有时在样品孔旁的微型孔上出现的颜色条,称为“重复线”,是检测试验效果的保证。
氯霉素残留免疫胶体金快速检测试剂板使用说明书(产品编号: CAP-216h3)本产品用于野外快速检测原蜜中的氯霉素残留,整个检测过程只需要30分钟左右,灵敏度为0.3μg/kg ( 0.3ppb )。
本说明书中涉及的样本处理方法不适用于浓缩蜜。
【产品组成】氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板(20个/盒)【配套试剂】CAP专用PBST缓冲液(1瓶/盒)【配套器具】滴管(80个/盒)15ml刻度离心管(20个/盒)5ml刻度冷冻管(20个/盒)注:客户可根据自身需要进行删减。
【需使用但未提供试剂、器具】乙酸乙酯(分析纯)、电吹风(850W左右即可,鼓风温度不宜过高)、试管夹【样品处理】无结晶的蜂蜜样品,将其搅拌均匀;有结晶的样品,在密闭情况下,置于60-80℃的热水中温浴,待样品全部融化后搅匀。
【配套简单工具的样品处理】♦于15ml离心管中加入蜂蜜至“3ml”标志线以上,切勿超过“5ml”标志线;♦使用滴管加入8ml(参照刻度)乙酸乙酯于离心管中;♦剧烈振荡8min后,静置至上层有机溶剂澄清,用滴管转移5ml(参照刻度)上清液于5ml刻度冷冻管中;♦用电吹风吹干溶剂,使用滴管垂直滴加5滴CAP专用PBST缓冲液于冷冻管中,溶解残留物,待检。
【配套精准工具的样品处理】采用该处理方法还需配套如下的器具:天平、20μl~200μl定量可调移液枪+枪头、移液管、吸耳球。
♦称取4g蜂蜜于15ml刻度离心管中;♦再加入8ml乙酸乙酯于离心管中;♦剧烈振荡8min后,静置至上层有机溶剂澄清,转移5ml 上清液于5ml刻度冷冻管中,用电吹风吹干;♦吸取160μl CAP专用PBST缓冲液于冷冻管中,振荡溶解残留物,待检。
【使用步骤】在进行测试前先完整阅读使用说明书。
♦从原包装袋中取出试剂板,打开后请在一个小时内尽快地使用。
♦用滴管吸取待检样品溶液,滴加3滴于加样孔中,加样同时开始计时;♦结果应在3~5分钟读取,其他时间判读无效;读取结果时,试剂板应如上图所示摆放方式置于观察者正面。
氯霉素胶体金检测试纸卡(组织)使用说明书【产品名称】氯霉素胶体金检测试纸卡(组织)【产品用途】本产品用于快速检测动物组织(含水产品、畜禽)、蜂蜜中的氯霉素残留,整个检测过程只需要10分钟,适用于各类企业及检测机构定性或半定量筛查。
【产品性能】试纸条灵敏度:1 ng/mL【产品组成】1、氯霉素胶体金检测试纸卡(40份/盒)2、5×样品处理液30ml3、产品说明书1份【检验原理】本产品应用竞争抑制胶体金免疫层析的原理,将氯霉素抗原先固定于硝酸纤维素膜的测试区,根据金标垫上的金标抗体迁移到该测试区后,能被T线捕获的多少来定性判断待测样品中氯霉素的含量。
【样品处理方法】根据样品数量将5×浓缩样品处理液用超纯水(或纯净水)稀释至1×(例:1mL 5×样品处理液加入4mL超纯水)。
1.鸡肉、猪肉、鱼肉:法一:适用于现场粗测,备用工具(普通天平、剪刀、刻度离心管)(1)称取约1g瘦肉组织,用剪刀剪成直径约2~3mm的肉丁。
(2)根据刻度预先在离心管中加入约3mL 1×样品稀释液,将肉丁转移至离心管中,上下用力颠倒震摇20次。
(3)用一次性滴管吸取液体检测。
法二:适用于实验室、质量监督机构,备用工具(电子天平、均质器、移液器、离心管)(1)取待测样本的瘦肉部位,尽量剔除脂肪和结缔组织,将组织剪碎(直径约1cm);(2)称取10 g 组织用均质器均质至呈乳白色糊状物;(3)称取1 g均质样品于5mL离心管内,加入3mL 1×样品处理液,上下用力颠倒震摇20次;(4)静置5min或3000r/min离心5min;(5)用一次性滴管吸取上层液体检测。
2.蜂蜜取0.3mL蜂蜜加入2.7mL 1×样品处理液,充分混匀、直接用一次性滴管吸取液体检测。
【使用步骤】1、在进行测试前先完整阅读使用说明书,使用前将试纸卡和待检样本溶液恢复至室温。
2、从原包装袋中取出试纸卡,打开后请在一个小时内尽快地使用。
氯霉素单克隆抗体免疫金标快速检测试纸的研制及性能测定王自良;张改平;杨艳艳;张海棠;杨继飞;刑广旭;柴书军【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2006(021)005【摘要】以分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析试验(GICA)成功研制出CAP残留快速检测试纸(CAP-Strip),并对其性能进行了测定.结果表明,CAP-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应为160%,与其他酰胺醇类和抗菌药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%;10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合CAP残留快速检测的推广应用.【总页数】5页(P127-131)【作者】王自良;张改平;杨艳艳;张海棠;杨继飞;刑广旭;柴书军【作者单位】河南科技学院,动物科学学院,河南,新乡,453003;河南省农业科学院生物技术研究所,河南,郑州,450002;河南省农业科学院生物技术研究所,河南,郑州,450002;河南科技学院,动物科学学院,河南,新乡,453003;河南省农业科学院生物技术研究所,河南,郑州,450002;河南省农业科学院生物技术研究所,河南,郑州,450002;河南省农业科学院生物技术研究所,河南,郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.酶联免疫吸附试剂盒与免疫金标快速检测试纸检测氯霉素的比较 [J], 王美英;杨挺;王立君;赵健2.氯霉素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制 [J], 肖治理;曾文亮;王弘;沈玉栋;孙远明;杨金易3.磺胺甲噁唑单克隆抗体的研制及免疫金标试纸检测方法的建立 [J], 刘宣兵;张改平;刘庆堂;彩鸿翔;杨继飞;滕蔓;邓瑞广;侯玉泽;王自良4.旋毛虫53kuES重组蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制 [J], 赵黎黎;路义鑫;李晓云;扈炳新;宋铭忻5.抗人血白蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制 [J], 李莉;任林柱;逄大欣;张英;欧阳红生因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。