第3章 消毒与灭菌

长。
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3.温度
温度升高可增强消毒剂的杀菌效果。温度每增高
l0℃，重金属盐类的杀菌作用约增加2～5倍，石炭酸的杀
菌作用约增加5～8倍。
4.酸碱度
消毒剂杀菌作用受pH影响。如新洁尔灭pH 9时
杀菌作用强。同时pH也影响消毒剂的电离度，一般说，未 电离的分子，较易通过细胞壁，杀菌效果好。 5.有机物 6.药物颉抗 7.其他因素 环境中有机物，可降低消毒剂效果。 两种消毒剂合用时，有的能相互颉抗。如阴 湿度、穿透力、表面张力等。
800nm。可见光线只有微弱的杀菌作用。 2.阳光 直射日光有强烈杀菌作用，是天然杀菌因素，紫外线是日光
杀菌作用的主要因素。许多微生物在直射日光下，半小时到数小时即 可死亡。芽抱的抵抗力强，经20h才死亡。
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3.紫外线 紫外线中波长200-300nm部分具有杀菌作用，其 中以265-266nm段的杀菌力最强，这与DNA吸收光谱范围一 致。常用的紫外线杀菌灯波长为 253.7nm，杀菌力强而稳定。
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（1）干热灭菌法 包括火焰灭菌和热空气灭菌两类。
火焰灭菌法是以火焰直接烧灼杀死物体中微生物的方 法。分为灼烧和焚烧两种。 热空气灭菌指利用干热灭菌器以干热空气进行灭菌的 方法。用于耐高温物品。灭菌条件：160℃维持 l-2h，才 能杀死所有微生物（芽孢、孢子）。
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高压蒸汽灭菌法 最有效的灭菌方法 121 ℃ 20~30分钟 煮沸消毒法 水煮100 ℃ 5分钟(繁殖体)~2小时(芽胞) 流通蒸汽消毒法 水蒸汽100 ℃ 15~30分钟(繁殖体) 巴氏消毒法 较低的温度（61 ℃ 30分钟）杀灭致病菌 间歇蒸汽灭菌法 反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌
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巴氏消毒法具体方法有三种
低温维持巴氏消毒法（LTH） 63-65℃ 30min；
高温瞬时巴氏消毒法(HTST) 71-72℃ 15s； 超高温巴氏消毒法(UHT) 132℃ 1-2s。消毒后均须迅速冷 却至10℃以下，促进细菌死亡，称为冷击法。这样可进一步 促使细菌死亡，也有利于鲜乳等食品马上转入冷藏保存。超
用，用于环境的消毒；
化学治疗剂对宿主和病原微生物具有选择性，它们能 阻碍微生物代谢某些环节，使其生命活动受到抑制或使其 死亡，而对宿主细胞毒副作用甚小。
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一、消毒剂的种类及其应用
消毒剂的种类很多，一般可根据用途与消毒剂特点选
择使用。
理想的消毒剂 杀菌力强、无腐蚀性、能长期保存、
对动物毒性很小、无残留污染、价格低等。
对超声波有抵抗力。又因超声波费用颇大，故末应用于消 毒灭菌。目前主要用于裂解细胞，提取细胞组分，研究其 抗原、酶类、细胞壁的化学性质以及从组织内提取病毒等。
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五、微 波 从几百兆赫至几十万兆赫频率的无线电波称为 微波。微波灭菌，主要是利用微波的加热作用完成（交变 电场，分子旋转振动、分子相互作用产生摩擦力，分子克 服摩擦力产生热量，使物品升温，起加热灭菌作用）。
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灭菌(sterlization) 指杀灭物体中所有微生物（包括芽孢和 孢子）的方法。 消毒(disinfection) 指杀灭物体中病原微生物的方法。消毒
只要求达到消除传染性的目的，而对非病原微生物及其芽
孢、孢子并不严格要求全部杀死。用于消毒的化学药品叫 消毒剂或杀菌剂。
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防腐(antisepsis) 指阻止或抑制微生物生长繁殖的方法。用于 防腐的化学药品叫防腐剂或抑菌剂。
用途 这种灭菌法，需时短、加热均匀。可用于非金属医
药用品等的灭菌。
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六、滤 过 通过物理阻留作用将液体或空气中细菌等微生物除去以
达到除菌目的的方法。
滤菌器 含有微细小孔<0.22微米,只允许液体或气体通过，而 大于孔径的细菌等颗粒不能通过 。
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用途 液体培养基和药物除菌。 糖培养液、特殊培养基、
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消毒剂的分类及作用机制 （1）使菌体蛋白质变性 如酚类、醇类、重金属盐类、 酸碱类、醛类； （2）损伤胞浆膜 如酚类(低浓度)、表面活性剂、醇类等 脂溶剂； （3）干扰细菌的酶系统和代谢 如氧化剂、重金属盐类 (低度)； （4）改变核酸功能 如染料、烷化剂等。
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二、影响消毒剂作用的因素 消毒剂
第三章
第一节 第二节 第三节 第四节
消毒与灭菌
物理因素对微生物的影响 化学因素对微生物的影响 生物因素对微生物的影响 微生物的亚致死性损伤及其修复
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微生物的生命活动极易受外界环境条件影响。了解外 界环境因素对微生物的影响，以便控制外界因素，达到利
用或消灭微生物的目的。
本章着重介绍物理、化学、生物学因素对微生物的抑
血清、毒素、抗毒素、抗生素、维生素、氨基酸等不能
加热灭菌的液体常用滤器过滤除菌。 病毒液分离除菌 用于病毒分离。 空气净化除菌 超净工作台、无菌隔离器、无菌操 作室、实验动物室以及疫苗、药品、食品等生产中洁净 厂房的空气过滤除菌。
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滤菌过程
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第二节
疗疾病。 防腐消毒剂
化学因素对微生物的影响
许多化学药物能抑制或杀死微生物，已广泛用于消毒、防腐及治
体、胞浆膜和细胞壁。反复冷冻与融化对微生物具有很 大伤害，应尽力避免。 为了减少细菌在冷冻时的死亡，可于菌液内加入10 ％左右甘油、蔗糖、脱脂乳或5％二甲基亚砜作为保护 剂。
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冷冻真空干燥（冻干）法 是保存菌毒种、疫苗、补体、
血清等的良好方法，可保存微生物及生物制剂数月至数年不 失活。其原理是迅速冷冻，不形成冰晶，同时抽真空让固体
无菌(asepsis) 指在一定空间内没有活微生物的状态。防止任
何微生物进入动物机体或物体的方法，叫无菌法。以无菌法
进行的操作称无菌技术或无菌操作。以无菌技术剖腹产取出
分娩胎儿，并在无菌条件下饲喂的动物，称无菌动物。
SPF动物： 以无菌方法取出，饲养在相对封闭的环境中，动
物明显健康，无规定疫病病原。
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三、干 燥和渗透压 作用 微生物在干燥的环境中失去水分，新陈代谢障碍，菌体蛋白 变性，逐渐死亡。微生物对干燥的抵抗力差异很大。巴氏杆菌、嗜血 杆菌、鼻疽杆菌等在干燥的环境中仅能存活几天，而结核杆菌能耐受 干燥 90d。细件下可存活数十年。霉菌的孢子对干燥也有较强的抵抗力。
种类 菌龄
细菌
浓度 种类
作用时间
环境
酸碱度 有机物 温度
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1.消毒剂的性质、浓度和作用时间
绝大多数消毒剂在高浓度时杀菌作用大，例外的有70% 乙醇或50%-70%异丙醇的消毒效果最好。
消毒剂在一定浓度下，对细菌的作用时间愈长，消毒效 果也愈强。 2.微生物的种类与数量 同一消毒剂对不同种类和处于不同生长期的微生物的杀 菌效果不同；微生物的数量越大，所需消毒的时间就越
用途 微生物在干燥环境中不能生长繁殖，常用干燥法来保存食品、
饲料、谷类、皮张、药材等。利用高浓度的盐水或糖水保存食品，高
渗溶液吸取菌体水分，造成生理干燥而抑菌。
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四、超 声 波 频率在2万-20万hz的声波称为超声波。细菌 和酵母菌在超声波作用下于几十分钟内死亡。超声波处理
虽可使菌体裂解死亡，但往往有残存者，小型病毒、芽抱
冰中的水分子升华除去，最后在真空状态下对玻璃容器严密
封口。 。
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冷冻真空干燥法： 在低温状态下真空抽去水分
用途：保存菌种
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2. 高温 高温对微生物具有致死作用，常用于消毒和灭菌。 用高温处理微生物时，可对菌体蛋白质、核酸、酶系统 等产生直接破坏作用，热力可使蛋白质中的氢键破坏使 之变性或凝固，使双股DNA分开为单股，受热而活化的 核酸酶使单股的DNA断裂，导致菌体死亡。
使空气中分子氧变为臭氧，臭氧放出氧化能力强的原子氧，
呈现杀菌作用。
剂量与诱变育种 紫外线的杀菌作用随照射量的增加而加
强。若紫外线照射量不足以致死细菌，则可引起核酸的部分
改变，使其发生突变。因此，紫外线照射也是一种有效的诱
变方法。
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4. 电离辐射——包括高速电子、X射线和 γ 射线 杀菌机理 产生游离基，破坏DNA。 杀菌作用 X射线（波长0.06-13.6nm）、γ射线(波长0.00l0.4nm) 的电离辐射微弱。α与β射线的电离辐射作用较强， 有抑杀菌作用。 用途 一次性医用塑料制品的消毒 食品的消毒不破坏其营养成分
物处于最低生长温度以下时，其代谢活动降低到最低水平， 生长繁殖停止，但仍可长时间保持活力。常在低温下保存 微生物种。温度愈低病毒存活的时间也愈长。也有些细菌
如脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等对低温特别敏感，在冰
箱内保存比在室温下保存死亡更快。
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冷冻保存 动存微生物种时，必须迅速降低温度，起用
时也应迅速融化。防止胞浆水分形成冰晶，破坏胞浆胶
制或杀灭作用以及消毒灭菌方法。介绍几个基本概念。
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杀菌作用(bacteriocidic action): 指某些物质或因素具有的 杀死微生物的作用。 抑菌作用(bacteriostatic action): 指某些物质或因素所具有 的抑制微生物生长繁殖的作用。 抗菌作用(antibiotic action): 指某些药物所具有的抑制或杀 灭微生物的作用。
用于杀灭体外病原微生物的化学药物称为消毒剂；
用于抑制微生物生长繁殖的化学药物称为防腐剂或抑菌剂，消毒剂在 低浓度时只能抑菌，而防腐剂在高浓度时也能杀菌，它们之间并没有 严格的界限，统称为防腐消毒剂。
化学治疗剂
学药物。
用于消除宿主体内病原微生物或其他寄生虫的化
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二者区别 消毒剂在杀灭病原微生物的同时，对动物体有损害作
汽产生压力，随压力的增大水的沸点升高，温度也升至100℃以上，
以提高灭菌的效果，缩短灭菌时间。 灭菌条件 常用1.02kg／cm2 （每平方英寸15磅）的压力，在 12l.3℃温度下，维持15-20min，即可杀死所有微生物，达到完全灭 菌的目的。