人类性染色质小体的制备和观察
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人类X染色质的制备与观察摘要:人类X染色质(巴氏小体)是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态(染色质高度螺旋化),形成直径约1μm,贴近于核膜边缘的染色小体。
根据X染色体失活与Lyon假说,雌性哺乳动物的两条X染色体中,只有一条X染色体有转录活性,另一条X染色体无转录活性,呈固缩状,形成X染色质。
失活发生在胚胎发育早期,且失活是随机的。
本实验以人口腔颊部粘膜细胞、发根毛囊细胞为材料制备X染色质标本,通过硫瑾染色、压片等方法观察巴氏小体。
本次试验的目的是掌握鉴定人类X染色质的方法,在显微镜下正确识别X染色质,即Barr小体的形态特征及所在部位,了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1.引言1.1巴氏小体人类有23对染色体,其中22对为常染色体,另一对为性染色体。
女性为XX,男性为XY。
X与Y染色体有一部分是同源的,在减数分裂时可以相互配对,其余部分则不同源。
Y 染色体含有很少的基因,而X染色体则含有大量的基因。
男性与女性的常染色体数目是一样的,所含有的基因数目也相等;但是女性含有两条X染色体,而男性一条X一条Y,因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性,然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的,其原因可以用剂量补偿效应解释。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)的定义: 在XY性别决定机制的生物中,使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
也就是说,在雌性和雄性细胞里,由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。
剂量补偿存在两种情况,雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活),只有一条X 染色体具有活性,使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的;另一种是X染色质的转录速率不同,如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性,但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。
人类X染色质标本的制备与观察张皓予15335203一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
2、正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3、说明人体细胞中核内X染色体的数目与性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理X染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后,便可观察到染色较浓,多位于核膜内侧缘,呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形,直径约1μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40%~60%。
Barr与Bertram首先(1949)在雌性猫的神经细胞核中发现,在多数核中部有一个小的深染的小体,而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体,此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类与灵长类等动物的多数组织细胞中存在,而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin),或称为“巴氏小体”(Barrbody)。
这种小体常位于核膜的内表面,呈Feulge n阳性反应,表明就是DNA的成分,有证据表明,性染色质的存在就是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体,其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体,那就会有一个性染色质,虽然表现为男性。
同样,XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此,性染色质实质上就是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前,已有许多证据证明,在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化,成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明,失活的X染色体的固缩周期与其它染色体就是不同步的,它在S期就是晚复制的。
此外,人们也已发现,晚复制的这根X染色体常位于核的边缘,这个位置也正好就是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂1.仪器与用具显微镜,水浴锅,牙签,载玻片,盖玻片,镊子,吸水纸。
人类X染色质小体的制备和观察实验时间2016.12.06晚摘要:本实验利用传统的细胞生物学方法,通过选取女性和男性口腔上皮细胞,制备人类X 染色质小体装片,并进行观察,对X染色质小体的形态特征进行辨别。
最后对奥运利用巴氏小体进行性别检测存在的问题进行分析。
1引言1948年Barr发现雌性动物大多数组织中都存在着被碱性染料深染的小体,并称之为性染色质(sex chromatin)。
在之后的几年,Barr及其学生又相继研发了用皮肤活组织切片及口腔上皮细胞涂片检测性染色质的技术。
国际奥委会曾用使用检测性染色质的方法防止“伪娘”参加女子项目。
从大量的观察、统计的数据中,Harnden归纳出一个细胞中性染色质数与一个个体中所含的X染色体数、倍性的关系:一个细胞中性染色质数(最大值)=X染色体数-倍性/2。
本实验利用传统的细胞生物学方法,通过选取女性和男性口腔上皮细胞,制备人类X染色质小体装片,并进行观察,对X染色质小体的形态特征进行辨别。
最后对奥运利用巴氏小体进行性别检测存在的问题进行分析。
2实验材料2.1实验材料每一个学生:显微镜,载玻片,盖玻片,牙签,一次性水杯,镊子,解剖针。
每一组学生:引用矿泉水,固定液(95%乙醇:冰乙酸=3:1,装在染色缸中),蒸馏水;70%、95%乙醇,无水乙醇,45%乙醇,5mol/LHCl,记号笔;二甲苯,香柏油,镜头纸;石炭酸品红染液。
2.2实验步骤2.2.1获取实验材料取一干净载玻片,用记号笔在即将涂细胞的一面作个标记。
用水将口漱净,尽可能除去口中杂物。
然后用牙签钝头在口腔(颊内侧)用力刮取,弃去第一次得到的刮取物,在同一部位继续刮取以取得深层的表皮细胞,将刮得的细胞涂抹在干净的载玻片上,反复几次,使玻片上的材料尽量抹厚些。
实验材料选自同学口腔上皮细胞。
2.2.1染色及制片在晾干的玻片上直接滴上石炭酸品红染料,染色10分钟,盖上盖玻片,吸去多余的染料,放在显微镜下观察[1]。