肾纤维化动物模型特点与研究进展

大鼠肾纤维化模型肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质萎缩，导致肾功能减退。

梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩，最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。

单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞外基质的生成。

但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。

因此单侧输尿管梗阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。

1.实验动物SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g2.实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3.实验周期7d，14d，21d，28d4.建模方法1术前一晚禁食,自由饮水。

2称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手术区域。

3在上腹中线偏左约3-4mm剪开腹壁，手术组分离出左肾输尿管。

4在靠近肾下极处结扎并分离输尿管，然后双结扎，在2个结扎中间剪断输尿管，逐层缝合肌层及腹壁，酒精清洁缝合处。

待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。

5置于加热垫至其苏醒。

假手术组不结扎输尿管，其余步骤相同。

6术后三天连续注射青霉素20万单位/天防止感染。

5.模型的评价5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性测定模型组术后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常组和假手术组明显上升。

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化谢盛彬;王伟铭;陈楠【摘要】目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化.方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(n=16)和UUO模型组(模型组,n=16).两组大鼠分别于术后(模型组建模后)第2、5、9、14天分批(n=4)处死,留取手术侧(模型组梗阻侧)肾脏组织.分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、维生素D受体(VDR)及转化生长因子β1(TGF-β1)等相关蛋白的表达.结果肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重.免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN 阳性面积百分比均显著高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰.Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β1相对表达量均显著高于假手术组(P＜0.05),而VDR相对表达量显著低于假手术组(P＜0.05);建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%.结论 UUO 模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(030)007【总页数】7页(P752-757,796)【关键词】肾小管间质纤维化;单侧输尿管梗阻;α平滑肌肌动蛋白;维生素D受体;转化生长因子β1【作者】谢盛彬;王伟铭;陈楠【作者单位】上海交通大学,医学院瑞金医院肾脏内科,上海,200025;上海交通大学,医学院瑞金医院肾脏内科,上海,200025;上海交通大学,医学院瑞金医院肾脏内科,上海,200025【正文语种】中文【中图分类】R692.6肾小管间质纤维化是多种病因所致慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)进展至终末期肾病的最后共同通路。

张新 志 何 立 群 ，
（． １上海 中医药大 学 附属 曙光 医院 肾 内科 、 肾疾 病病证 教 育部 重点 实验 室 ， 海 肝 上
２ 上 海市 高校 中医 内科 Ｅ一研究 院 ， ． 上海 ２ １０ ） ０２３
２ １０ ； ０２ ３
摘 要 ： 肾间质纤维化与肾功能的恶化密切相关， 而动物实验是研究肾间质纤维化尤为重要的手段。 文章拟对常见的肾
—
ｉｔ ｒｔｔａ ｂ ｏ ｉ ｉ ｌｄｉ ｉａｅ ａ ｅｅ ａ ｂ ｔｕ ｔｏ ｍｏ ｅ ， ｃ ｃ ｏ ｐ ｒｎ ｎ ｅ ｓｉｉｌｆ ｒ ｓｓ， ｎｃｕ ｎｇ ｕｎ ｌｔｒ ｌｕｒ ｔｒ ｌｏ ｓｒ ｃ ｉｎ ｉ ｄ ｌ ｙ ｌ ｓ ｏ ｉ ｅ Ａ ｎ ｐ ｏ ｔ ｏ ｅ ， ｒｓｏｏ ｈ ｃ ａ ｉ Ｂ — ｅ ｈｒｐａｈｙ ｍ ｄ ｌ ａ ｉｔ ｌｃ ｉ ｃｄ ｅ
ｓｏ ｌ ｎ ｕ ａ ｐ ｏ ｒ ｔ ａ ｉ ｌ ｏ ｅ ｃｏｄｎ ｉ ｅｅ ｔ ｂ ｃｉ ｓ ｈ ｕｄｆ ｄｏ ｔ ｐ ｒ ｉ ｅ ｎ ｄ ｌ ａｃ ｒ ｉｇ ｏｄｆ ｒｎ ｏ ｊ ｔ ｅ ． ｉ ｐ ａ ｍａ ｍ ｓ ｔ ｆ ｅ ｖ
Ｋｅ ｒ ：Ｒｅ ａ ｕ ｕｏｎｅｓｉｌ ｂｏ ｉ：Ａｎｍａ ｄ ｌ ｙ ｗｏ ｄｓ ｎ ｌｔｂ ｌｉｔｒｔ ｒ ｓ ａｆ ｉ ｓ ｉ ｌｍｏ ｅ
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时珍 国 医 国 药 ２ １ ０ ０年第 ２ 卷 第 ４期 １
◇文献综述◇
肾 小 管 间 质 纤 维 化 动 物 模 型 的 研 究 进 展
ｐ ｒ ｐ ｔ ｙ ｍｏ ｅ ，ａ ａ ｇ ｓｃ ｎ ｐ ｒ ｐ ｔ ｙｍｏ ｅ ， ｄ ｉｍｙ ｉ ｅ ｈ ｏ ａｈ ｄ ｌ ｎ Ｏｏ ｒ ｅ ｉｗ ｄ ｉ ｈ ｓｐ ｐ ｒ Ｒｅ ｅ ｒｈ ｒ ｈ ｏ ａ ｈ ｄ ｌ ｎ ｌｅ ｉ ｅ ｈ ｏ ａ ｈ ｄ ｌ ａ ｒ ａ ｃｎ ｎ ｐ ｒｐ ｔ ｙｍｏ ｅ ｄ Ｓ ｎ ｗｅｅ ｒ ｖｅ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｅ ． ｓ ａ ｃ ｅ ｓ ａ

肾纤维化模型研究进展肾纤维化是各种形式肾脏病发展的最终共同途径，其结果是肾脏功能进行性不可逆转的损害，给人类健康带来巨大威胁。

肾纤维化类型多种多样，不同的致肾脏损害因素，均可导致肾纤维化。

因此，建立好的肾纤维化模型对于研究肾纤维化的发病机制、预防和治疗、延缓肾纤维化的措施均有十分重要的意义。

动物实验证实，肾纤维化与炎性细胞的侵润、成纤维细胞分化/增殖、细胞外基质蛋白的沉积和肾小管萎缩有关［1］。

肾纤维化的发生机制是一个非常复杂的慢性病理过程，很多细胞介质和生长因子都直接或间接参与了这一过程。

目前的研究主要集中于以下 3 个方面: 细胞生长因子的作用，主要包括促纤维化的转化生长因子β( TGF－β)、成纤维细胞生长因子( FGF) 、血管紧张素Ⅱ( Ang Ⅱ) 和起保护作用的肝细胞生长因子( HGF);肾小管上皮细胞－肌成纤维细胞转分TEMT or EMT) 过程的作用，包括表达α平滑肌肌动蛋白(α－SMA) 的肌成纤维细胞、细胞外基质成分如胶原( Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ) 、纤维连接蛋白( FN) 等; 信号转导通路的作用，包括 Smad 依赖性信号转导通路( 主要是Smad2、Smad3 和起负调节作用的Smad7) 和非TGF－β依赖的Smad 信号转导通路( 如ERK/P38MAPK) 。

1 单侧输尿管结扎(UUO)导致的肾纤维化模型大鼠UUO模型的制作方法：大鼠氯胺酮麻醉后取右侧卧位，局部剃毛，常规消毒铺孔巾，选择左侧背部肋下约0.5cm为切口，依次切开皮肤至腹膜后，游离肾脏及输尿管，将左侧输尿管用组织钳托起取中段部位，用止血钳夹住，在管两端各用丝线结扎后剪断输尿管，然后连续缝合皮肤。

UUO的特点是：进行性小管萎缩及间质纤维化。

小管和间质细胞增生，肾实质巨噬细胞、单核细胞浸润,这些改变最终导致小管间质纤维化和小管萎缩[2]，肾实质被纤维组织取代，而肾小球相对不受影响，不会产生高血压或脂代谢异常[3]。

ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ２０１０ ＶＯＬ ．２１ ＮＯ．４
时珍国医国药 ２０１０ 年第 ２１ 卷第 ４ 期
礄文献综述礄
肾小管间质纤维化动物模型的研究进展
张新志１ ，何立群２倡
（１．上海中医药大学附属曙光医院肾内科、肝肾疾病病证教育部重点实验室，上海 ２０１２０３； ２．上海市高校中医内科 Ｅ －研究院，上海 ２０１２０３）
伤，不能适应肾小管和间质损伤及其纤维化的所有情况，但是该
收 稿 日 期 ：２００９ －０８ －２６ ； 修 订 日 期 ：２００９ －１１ －１９
方法能够在短期内造成纤维化，就研究肾间质纤维化的发病规律
基金项目：国家自然科学基金（ Ｎｏ．３０８７３２５９） ；
及机制探讨而言，是一种较为快速、可靠的动物模型［８］ 。
２００７ 级博士研究生，硕士学位，主要从事肾小管间质疾病的研究工作．
久性坏死，从而易发生进行性慢性肾功能衰竭［１０］ 。 霍冬梅等［１１］
倡 通讯作者简介：何立群（１９５９－） ，男 （ 汉族） ，浙江宁波 人，现 任 上 海 中 医 采用经背部双侧肋弓下缘切口建立模型，认为具有比经腹正中切 药大学教授，主任医师，博士学位，主要从事肾脏疾病的临床与科研工作． 口手术方式切口小、操作简单、手术视野清晰、干净，术前无需禁
关键词：肾小管间质纤维化； 动物模型 中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０８０５（２０１０）０４－０９６９－０３
Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｒｅｎａｌ Ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ
ＺＨＡＮＧ Ｘｉｎ－ｚｈｉ１ ，ＨＥ Ｌ ｉ－ｑｕｎ２倡 （１．Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２０３，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｐｈｒｏｌｏ－ ｇｙ， Ｓｈｕｇｕａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｌｉｖｅｒ ａｎｄ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， Ｓｈａｎｇｈａｉ， ２０００２１， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｃｌｏｓｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｎ ａｎｉｍａｌ

肾纤维化诊断研究进展【摘要】肾纤维化是影响各类肾脏疾病的治疗及预后的重要因素之一，延缓和阻断肾纤维化是防治肾损害的关键，也是目前国内外肾脏病研究的热点。

随着分子生物学技术的发展和应用，大量研究表明TGF-β1是启动和终止肾纤维化的关键细胞因子之一，PCⅢ、IV-C与肾纤维化也有密切的联系。

血清学诊断肾纤维化可以使临床医生动态观察肾脏病变程度，以及时、准确地判断是否存在肾纤维化及其纤维化程度，有助于合理制定治疗方案及准确地判断预后。

【关键词】转化生长因子；Ⅲ型前胶原；Ⅳ型胶原；肾纤维化；诊断；PCⅢ；IV-C；TGF-β1肾纤维化（包括肾间质纤维化和肾小球硬化）是一个动态发展的过程，标志着不可逆性肾损伤，是影响各类肾脏疾病的治疗及预后的重要因素之一［1］。

因此，延缓和阻断肾纤维化是防治肾损害的关键，也是目前国内外肾脏病研究的热点。

能否及时、准确地判断是否存在肾纤维化，有助于临床医生合理制定治疗方案及较准确地判断预后。

目前临床上对肾纤维化的诊断仍以肾组织病理活检为主，但它具有创伤性，加之其它诸多因素，难以动态观察。

因此，寻求一种能够比较准确地反映肾脏纤维化病变程度的非创伤性检查方法正是目前临床医生所面临的难题。

近年来，血清学方法诊断肾纤维化的价值日益受到人们的重视。

大量研究表明TGF-β1是启动和终止肾脏纤维化的关键细胞因子之一，对阻止肾病的进展有重要意义［2］。

随着肝纤维化领域研究的深入，诸多学者研究发现PCⅢ、IV-C可做为慢性肝纤维化的指标［3~4］。

人们在此基础上逐渐认识到各器官的纤维化都有相似之处。

1 TGF-β1与肾纤维化随着分子生物学技术的发展与应用，大量研究表明，TGF-β1的增多与组织纤维化存在因果关系。

在肾纤维化过程中， TGF-β1作为体内细胞外基质（ECM）平衡的调节器，可调节炎症反应，促进ECM的合成和沉积，减少ECM的降解，并能直接刺激其下游介质如结缔组织生长因子的基因转录，而调节成纤维细胞的生长以及成纤维细胞和系膜细胞外基质的分泌，促使肾小球硬化、肾间质纤维化［5~7］。

肾 阳虚 证 Ｓ Ｄ大 鼠模 型在 形 态 学 与性 腺 指标 方 面 更
的经 典方 药 。 当前 。 中医理论 指导 下 运用 现代 的实 在
验方 法建 立相 应 的 中医证候 动物 模 型 ， 已成 为研 究 中医药治疗 肾脏疾 病机 理 的主要 途径 。本 文 仅 就 当 前常 用 的证 候 动物模 型 的造 模方 法做 一综 述 。
Ｅ 中 医药 ２ ０ 京 ０ ９年 ３月 第 ２ ８卷 第 ３期
Ｂ ｉｎ ｕｎ ｌ ｆ ｒｄｔ ｎｌＣ ｉｅｅＭｅｉｉｅ Ｍａｃ 。０ ９ Ｖｏ． ８Ｎ ｅｉ ａＪ ｒａ ｏ Ｔａ ｉｏａ ｈｎｓ ｄｃｎ ． ｒｈ ２ ｏ ． １２ ． ｉ ｏ ｉ
・
文
献
综
述
・
肾脏疾病 中医证候 动物模 型 的研究进 展 木
肾 阳为 人之 元 阳 ，人 体各 器 官 的生命 活 动均 有
赖 于 肾阳 的温煦 与推 动 ， 肾阳虚 即意 味着 人体 生命
活动 机 能 的衰 退 与减 弱 。肾 阳虚动 物模 型是 目前研 究最 早 、 最广 泛 的证 候 模型 ， 其造 模 方法很 多 。 ２ Ｏ世 纪 ６ Ｏ年 代 ，邝 广垄 教 授 等就 已经 建立 了
通 过影 响下丘 脑 一 体一 垂 肾上 腺皮 质 轴 功 能 ， 致 动 导 物对 外界 环境 变化 的应 激 、 适应 能力 下 降 ． 出现一 而
ｍ ／ ｋ ・ 、 剂 量 组 １ ／ （ｇ Ｗ） 连 续 灌 喂 Ｓ ｓ （ ｇ ｗ） 低 ０ｍｓ ｋ ・ ， Ｄ 大鼠 １ ５天 ， 察 模 型 的 体 温 、 重 变 化 及 血 清 皮 质 观 体
统 中医 理论对 肾脏 疾病 已形成 了一 套完 整 的辨 证论 治体 系 ，留下许 多宝 贵 的治疗 经验 和具 有独 特 疗效

[标签:标题]肾纤维化动物模型特点与研究进展本文关键词：纤维化，研究进展，模型，动物肾纤维化动物模型特点与研究进展本文简介：摘要：肾纤维化为慢性肾病发展至终末期肾衰所必经的相同病理路径，病理改变分为肾间质纤维化和肾小球硬化。

肾纤维化的理想动物模型对慢性肾病发病机制的研究及其治疗药物的研发等存在现实意义。

目前，肾纤维化动物模型制作包括药物或毒物诱导、手术模型以及基因敲除等多种模型，不同动物模型肾功能、肾组织病理等方面各具特肾纤维化动物模型特点与研究进展本文内容：摘要：肾纤维化为慢性肾病发展至终末期肾衰所必经的相同病理路径，病理改变分为肾间质纤维化和肾小球硬化。

肾纤维化的理想动物模型对慢性肾病发病机制的研究及其治疗药物的研发等存在现实意义。

目前，肾纤维化动物模型制作包括药物或毒物诱导、手术模型以及基因敲除等多种模型，不同动物模型肾功能、肾组织病理等方面各具特点，尚无法完全模拟人类慢性肾疾病，这提示慢性肾疾病发病的复杂性，对于其病理机制认识与防治具有重要意义。

关键词：肾纤维化；肾间质纤维化；肾小球硬化；动物模型；肾纤维化是肾单位损坏，间质中成纤维细胞的大量增生及肌成纤维细胞的形成、细胞外基质生成过度并沉积发生的肾小球硬化（glomerulosclerosis, GS）、肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）, 并最终丧失肾功能。

确诊肾纤维化的金指标为肾组织的病理学检查，包括观察肾小管、间质和肾小球基底膜的病理形态。

肾纤维化的大体病理观察主要是：肾脏明显硬化、减小，表面不平整、颗粒样变；镜下观：肾间质炎性细胞弥漫性浸润、间质纤维组织增殖、纤维化形成；肾小球大部分发生硬化、透明样改变，毛细血管破坏，系膜基质增生；由于肾小球血流受阻，而造成肾小管发生萎缩，病变轻处，残余肾代偿性增大；生化检测主要表现在血清尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）、血清肌酐（serum creatinine, SCr）、24 h尿蛋白定量异常[1].诱导肾纤维化的方法主要有药物或毒物（氯化汞、环孢素A、肾毒性药物、氨基糖苷类药物等）、手术（输尿管单侧结扎、5/6肾切除模型、肾缺血-再灌注等）、单侧肾切除复合AngⅡ等复合因素以及转基因模型等等，本文对常见模型综述如下。

肾间质纤维化的研究进展及分析摘要】肾小管间质纤维化是慢性肾脏病进展为终末期肾病的共同通路，临床上对终末期肾病只能靠透析或者肾移植来维持生命，因此了解肾间质纤维化病因及其发病机制对于延缓慢性肾脏病进展具有重要意义。

【关键词】慢性肾脏病；肾间质纤维化；研究进展【中图分类号】R586 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）09-0220-011.研究背景肾间质纤维化是指在各种原发性及继发性致病因素下所导致细胞外基质（extracellular matrix ECM）异常增加，降解减少，沉聚于肾小球/肾间质内，引起肾脏组织形态学改变，导致肾单位丢失，肾小球硬化和肾间质纤维化。

肾间质纤维化是各种不同病理类型肾病进展为终末期肾病的共有的病变过程。

动物实验和临床实验都证明了肾间质损伤程度加剧慢性肾脏病的恶化[1]。

进入终末期肾脏病之后，患者需要长期透析或肾移植来维持生命。

2.肾间质纤维化的致病因素肾间质纤维化病因多种多样，临床上常见接触药物或毒物所致肾间质炎症，例如随着造影剂在临床上应用增加，造影剂所造成的肾间质纤维化，也常见于先天性遗传疾病，急性肾间质肾炎持续进展，尿路堵塞，感染，肿瘤，免疫性疾病和代谢性疾病等[2]。

3.肾间质纤维的发病机制3.1 细胞因子、炎症细胞与肾间质纤维化在慢性肾脏病发生发展过程中都存在各种各样的细胞因子参与，并相互作用。

如涉及的核因子、肿瘤坏死因子（TNFa）、白细胞介素1（IL-1）、血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）、TG Fβ、结缔组织生长因子（CTGF）、单核细胞化学趋化蛋白（MCP-1）、醛固酮等均参与了肾间质纤维化的进展[3-4]。

正常肾间质组织中有少量的巨噬细胞和T细胞浸润，它们可以起到清除感染物质并促进组织修复。

而肾病患者肾间质的巨噬细胞数目明显增多，同时可以产生各种细胞因子，导致组织损伤和纤维化[5]。

抑制肾组织中的巨噬细胞的表达及抑制巨噬细胞激活的细胞因子可以减轻肾间质纤维化[6]。

小鼠肾纤维化模型肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质萎缩，导致肾功能减退。

梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩，最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。

单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞外基质的生成。

但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。

因此单侧输尿管梗阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。

1.实验动物SPF级Balb/C小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为18g~20g2.实验分组实验随机分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组，每组15只动物。

3.实验周期7d，14d，21d，28d4.建模方法1. 小鼠3%戊巴比妥钠80mg/kg腹腔麻醉后侧卧，左侧背部脱毛2. 在大腿上方脊椎左侧1cm处开口，剪开皮肤及肌肉，3. 分离出左侧输尿管，在其上1/3处游离输尿管，6号线结扎2道，在其间剪断输尿管，清理伤口后分两层缝合，待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。

4. 在模型建立后7d，14d，21d，28d分别处死小鼠，取左侧部分肾组织于4%多聚甲醛溶液固定，石蜡包埋；其余肾组织液氮冷冻，-80度保存。

5.模型的评价1. 蛋白尿含量、尿NAG活性测定模型组术后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常组和假手术组明显上升。

熊宁宁等嘲通过反复小剂量注射牛血清白蛋白 造成家兔系膜增殖型肾炎，认为该模型所表现的血 循环免疫复合物增高及肾小球系膜细胞增殖，是湿 热滞留伤肾的表现。而红细胞免疫复合物花环率升 高，是机体对湿热滞留的防御性反应，反映了湿热证
万方数据
ｊＥ塞生匡荭至堂生３旦墓２８鲞墓≥翅瑙ｊ逝扛型蓝Ｔ—ｒａｄｉｔ—ｉｏｎａｌ—Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｒｃｈ，２００９．Ｖ０１．２８，Ｎｏ．３
’国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．３０５００６８７）；上海市教育委员会重点 学科（第五期，Ｊ５０３０１） 作者单位：２０１２０３．上海中医药大学科技实验中心 ’通讯作者：张悦。Ｔｅｌ：０２１－５１３２２３９ｌ，ＥｍａｉＬ＇ｙｕｅｚｈａｎｇ＿ｓｈａｎｇｈａｉ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍｅｎ
前列腺、肾上腺组织形态变化：放免法检测大鼠睾 酮、雌二醇的改变情况。结果发现腺嘌呤制作的ＳＤ 大鼠肾阳虚证动物模型睾丸萎缩。精曲小管退化变 性，精囊萎缩，前列腺体明显萎缩甚至消失，肾上腺 皮质变薄，以束状带萎缩明显，睾酮水平偏低，这些 变化较氢化可的松诱导组明显。认为腺嘌呤诱导的 肾阳虚证ＳＤ大鼠模型在形态学与性腺指标方面更 符合中医肾阳虚形态学表现。
王培源等【ｌ研选用体重２５０～３５０ ｇ的白色红目健 康豚鼠，每日肌注醋酸强的松龙注射液５０ ｍｇ／ｋｇ， 共１０天。建立肾阴虚模型。动物在９一１１天相继出现 躁动、易惊、怕人、食量减少、饮水增多、体重增长缓 慢、大便干结等表现。模型组ｃＡＭＰ、ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ升 高（Ｐ＜Ｏ．０５，Ｐ＜０．０１），认为本研究建立的豚鼠肾阴 虚模型是成功的。
模型【Ｊ】．云南中医中药杂志，２００５，２６（２）：５６—５８． 【４】 邵命海，肖静，王毅兴，等．从“肾主生殖”角度评价腺嘌呤
与氢化可的松诱导的肾阳虚模型叨．上海中医药杂志， ２００８，４２（２）：５７－５９． 【５１ 董兴刚，徐建国，安增梅，等．肾切除加阿霉索诱导“肾阳 虚”动物模型的研制叨．中国医药学报，２００２，１７（２）：８４—

03
肾单位损伤及修复
肾纤维化过程中，肾单位受到损伤，导致肾小球和肾小管萎缩、硬化
和功能丧失。同时，肾脏固有细胞发生增殖和分化，参与损伤修复过
程，但过度修复会导致纤维化的发生。
肾纤维化的诊断与评估
病理学诊断
生化指标
肾活检是诊断肾纤维化的金标准。通过观察 肾脏病理切片，可以判断肾脏是否发生纤维 化及纤维化的程度。
《肾纤维化动物模型特点与 研究进展》
2023-10-28
目 录
• 肾纤维化概述 • 肾纤维化动物模型构建 • 肾纤维化动物模型的应用 • 肾纤维化动物模型的研究进展 • 展望与未来研究方向
01
肾纤维化概述
肾纤维化的定义
• 肾纤维化：是指由各种原因引起的肾脏固有细胞损伤，从而 引发一系列的细胞外基质过度沉积，导致肾脏发生纤维化的 病理过程。
发展前景与展望
揭示发病机制
随着科技的发展，未来有 望更深入地揭示肾纤维化 的发病机制，为治疗提供 更多线索。
发展新型治疗策略
基于新的动物模型，未来 有望发现更多针对肾纤维 化的新型治疗策略，提高 治疗效果。
完善疾病评估体系
未来可能建立更完善的肾 纤维化评估体系，以便更 准确地诊断和评估疾病进 展。
根据研究目的确定模型的构建方法，选择合适的药物 、毒素或手术方法。
定期进行肾功能和病理学检查，评估肾脏纤维化的发 展情况。
03
肾纤维化动物模型的应用
研究肾纤维化的发生机制
疾病模拟
动物模型可以模拟人类的肾纤 维化过程，帮助研究者深入理
解肾纤维化的发病机制。
病理学研究
通过对动物模型进行病理学检查 ，研究者可以观察到肾纤维化的 病理变化，如肾小球硬化、肾小 管萎缩等。

肾疾病 中也扮 演着很 重要 的作 用 ， 同Ｔ Ｇ Ｆ—Ｂ作 用相
反， Ｂ ＭＰ一 ７具 有 抗 纤 维 化 的 作 用 ， 因 此 引 起 了 更 多 研究 者 的注意 。Ｂ ＭＰ一 ７可 以 阻 止 Ｓ ｍ ａ ｄ ３和 Ｄ Ｎ Ａ 序
性 的肾小管 上皮 细胞损 伤可 导致 肾间质 纤维化 ， 毛细
型， 为 临床上 的预 防奠定 基础 。
一
在 肾疾 病 中起着 很重要 的作 用 ， 包 括 肾纤 维化 、 炎症、
细胞 生 殖 、 细胞凋 亡和变异¨ 。Ｔ Ｇ Ｆ —Ｂ 有 Ｔ Ｇ Ｆ一
、
肾 纤 维 化 的 发 生 机 制
１ ． 上皮 损伤 ： 不 同的器官 在发展 成纤 维化之 前 大 部 分是 以局 部上 皮 损 伤 为 主 的。上 皮 细胞 暴 露 于 毒 素可 导致组 织 纤 维化 的 发展 ， 突 出上 皮 损 伤 的这是 通过 刺激 肌成纤 维 细胞 而形成 的 。上 皮 间质 转 化 （ ｅ ｐ ｉ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｍ ｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ
ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｅ ＭＴ ） 也 是 导 致 大 部 分 间质 纤 维 化 肾 病 的
主要 机制 。有研 究对 １ ３ ３例 肾病 患 者 的 肾组 织 活 体 进行 检查发 现 除了组织 学损 伤外 ， 大多数 的患 者体 内
存在 上皮 管状 细 胞 的 上 皮 间 质 转 化 ， 更 为 重 要 的是 Ｅ ＭＴ的 延 伸 与 间 质 损 害 的 程 度 是 密 切 相 关 的 。 Ｇ ｒ ｇ ｉ ｃ等 研究 表 明 ， 肾小 管 上皮 细胞 靶 向表 达 白喉 素受 体 ， 允许 白喉素 暴 露 后诱 导 上 皮 损伤 ， 这 种 选 择

， 成都医学院学报 ２ Ｎ １ 卷第 ６ 期 Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｎ ｄ ｕ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｅ ２ ０ １ ６， Ｖ ｏ ｌ ． １ １， ｏ ． ６ ０ １ ６ 年第 １ ｇ ｇ
·７ ７· ４
／ ／ ／ ／ ／ 网络出版地址 ： ｔ ｔ ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｎ ｅ ｔ ｋ ｃ ｍ ｓ ｄ ｅ ｔ ａ ｉ ｌ ５ １． １ ７ ０ ５． Ｒ． ２ ０ １ ６ ０ ７ ２ ８． １ ８ ３ ７． ０ ２ ８． ｈ ｔ ｍ ｌ ｗｗｗ． ｈ ｐ：
： ； 上海市科 国家自然科学基 金 资 助 项 目 （ ｏ ８ １ ３ ７ ３ ６ １ ３） Ｎ ＊ 基金项目 ： ： ） 委专项经费动物实验研究 （ ｏ １ ６ １ ４ ０ ９ ０ ３ ５ ０ ０ Ｎ ： 高建东 ， ａ ｏ ｉ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｏ ｔ ｍ ａ ｉ ｌ ． ｃ ｏ ｍ ａ ｉ ｌ Ｅ－ｍ △ 通信作者 ： ＠ｈ ｇ ｊ ｇ
［］ ３］ 和Ｃ 高尿酸血症 。 王莉等 ［ ｈ ｅ ｎ等 ４ 用 １ ０％ 高酵母
， 据 调 查， 我国高尿
且越来 越年 轻化。尿 酸的 酸血 症 患 者 已 达 １ ． ２ 亿， 升高不仅与高血压 、 代谢综合征 、 糖尿病肾病和心血 管疾 病 等 密 切 相 关 ，还 是 慢 性 肾 脏 病 （ ｈ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｃ ， ） 发 生 和 发 展 的 独 立 危 险 因 ｋ ｉ ｄ ｎ ｅ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ Ｋ Ｄ ｙ
： ／ ｏ ｉ １ ０． ３ ９ ６ ９ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ４ ２ ５ ７． ２ ０ １ ６． ０ ６． ０ ２ ６ ｄ ２ － ｊ
·综 述·
高尿酸血症肾纤维化动物模型研究进展 ＊

肾纤维化动物模型特点与
汇报人： 2023-12-15
目录
• 肾纤维化概述 • 肾纤维化动物模型构建 • 常见肾纤维化动物模型特点 • 肾纤维化动物模型应用与展望 • 结论与展望
01
肾纤维化概述
定义与病理生理过程
定义
肾纤维化是慢性肾病发展到终末期的主要病理过程，表现为肾小球硬化、肾间质纤维化 及血管硬化。
分类
根据病因，肾纤维化可分为原发 性肾小球疾病、继发性肾小球疾 病和遗传性肾病等。
肾纤维化的诊断与评估
诊断
肾纤维化的诊断依赖于临床病史、体格检查、实验室检查和影像学检查。其中，肾脏活检是诊断肾纤维化的金标 准。
评估
评估肾纤维化的程度和预后需综合考虑患者的临床表现、实验室检查和影像学检查结果。常用的评估指标包括血 肌酐、尿素氮、尿蛋白定量等肾功能指标，以及肾脏影像学检查如超声、CT、MRI等。
病理生理过程
肾纤维化起始于肾小球的损伤，包括肾小球毛细血管袢的损伤和肾小管间质的损伤。损 伤后，肾组织发生炎症反应，释放多种生长因子和细胞因子，促进肾间质成纤维细胞的
增生和活化，分泌大量细胞外基质（ECM），导致肾间质纤维化。
肾纤维化糖尿病肾病、高血压肾病、药 物性肾病等。
02
肾纤维化动物模型构建

２０２０年１２月第２８卷㊀第６期中国实验动物学报ＡＣＴＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭＡＮＩＭＡＬＩＳＳＣＩＥＮＴＩＡＳＩＮＩＣＡＤｅｃｅｍｂｅｒ２０２０Ｖｏｌ.２８㊀Ｎｏ.６庄子锐ꎬ王明亮ꎬ张婷ꎬ等.肝肾纤维化动物模型的研究进展及评价[Ｊ].中国实验动物学报ꎬ２０２０ꎬ２８(６):８４５－８５２.ＺｈｕａｎｇＺＲꎬＷａｎｇＭＬꎬＺｈａｎｇＴꎬｅｔａｌ.Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｈｅｐａｔｏｒｅｎａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＡｃｔａＬａｂＡｎｉｍＳｃｉＳｉｎꎬ２０２０ꎬ２８(６):８４５－８５２.Ｄｏｉ:１０ ３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００５－４８４７ ２０２０ ０６ ０１６[基金项目]国家自然科学基金资助项目(８１７７４１７８ꎬ８１３７３８８８)ꎬ江苏省研究生实践创新计划资助项目(ＳＪＣＸ２０＿０５７２)ꎮＦｕｎｄｅｄｂｙＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ(８１７７４１７８ꎬ８１３７３８８８)ꎬＰｒａｃｔｉｃｅａｎｄＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＰｒｏｇｒａｍｏｆＰｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅｓｉｎＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ(ＳＪＣＸ２０＿０５７２).[作者简介]庄子锐(１９９５ )ꎬ女ꎬ在读研究生ꎬ研究方向:中药药理学研究ꎮＥｍａｉｌ:５４２０６５１８６＠ｑｑ.ｃｏｍ[通信作者]彭蕴茹ꎬ女ꎬ研究员ꎬ硕士研究生导师ꎬ研究方向:中药药理学ꎮＥｍａｉｌ:ｐｅｎｇｙｕｎｒｕ＠１２６.ｃｏｍꎻ沈明勤ꎬ研究员ꎬ硕士研究生导师ꎬ研究方向:中药药理学ꎮＥｍａｉｌ:ｍｑｓｈｅｎ＠１６３.ｃｏｍꎮ∗共同通信作者肝肾纤维化动物模型的研究进展及评价庄子锐１ꎬ２ꎬ王明亮１ꎬ２ꎬ张婷１ꎬ２ꎬ苏鹏亮１ꎬ２ꎬ邵久针１ꎬ２ꎬ印鑫１ꎬ２ꎬ彭蕴茹１ꎬ２∗ꎬ沈明勤１ꎬ２∗(１.南京中医药大学ꎬ南京㊀２１００２８ꎻ２.江苏省中西医结合医院ꎬ南京㊀２１００２８)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀肝㊁肾纤维化是由持续的肝㊁肾组织细胞损伤导致细胞外基质(ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘꎬＥＣＭ)过度沉积㊁实质细胞减少的病理过程ꎬ肝肾纤维化是慢性肝肾疾病持续进展的必经过程ꎮ除了器官移植ꎬ早期纤维化阶段现在被认为是治疗整个慢性疾病的关键阶段ꎮ目前有很多肝纤维化或肾纤维化的啮齿动物模型以及少量肝肾纤维化的复合模型可供疾病研究和药物筛选ꎮ本文对常用的肝㊁肾纤维化及其复合模型的造模方法与机制进行综述ꎬ并比较不同方法间的优势与不足ꎬ为日后不断建立和完善更加贴合临床的肝肾纤维化复合动物模型提供参考ꎮʌ关键词ɔ㊀肝纤维化ꎻ肾纤维化ꎻ肝肾纤维化复合模型ʌ中图分类号ɔＱ９５－３３㊀㊀ʌ文献标识码ɔＡ㊀㊀ʌ文章编号ɔ１００５￣４８４７(２０２０)０６￣０８４５￣０８ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｈｅｐａｔｏｒｅｎａｌｆｉｂｒｏｓｉｓＺＨＵＡＮＧＺｉｒｕｉ１ꎬ２ꎬＷＡＮＧＭｉｎｇｌｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＺＨＡＮＧＴｉｎｇ１ꎬ２ꎬＳＵＰｅｎｇｌｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＳＨＡＯＪｉｕｚｈｅｎ１ꎬ２ꎬＹＩＮＸｉｎ１ꎬ２ꎬＰＥＮＧＹｕｎｒｕ１ꎬ２∗ꎬＳＨＥＮＭｉｎｇｑｉｎ１ꎬ２∗(１.ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｊｉｎｇ２１００２８ꎬＣｈｉｎａ.２.ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｊｉｎｇ２１００２８)Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ:ＰＥＮＧＹｕｎｒｕ.Ｅ￣ｍａｉｌ:ｐｅｎｇｙｕｎｒｕ＠１２６.ｃｏｍꎻＳＨＥＮＭｉｎｇｑｉｎ.Ｅ￣ｍａｉｌ:ｍｑｓｈｅｎ＠１６３.ｃｏｍʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｆｉｂｒｏｓｉｓｏｆｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｓｉｓａｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｎｗｈｉｃｈｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ(ＥＣＭ)ｉｓｏｖｅｒｄｅｐｏｓｉｔｅｄａｎｄｐａｒｅｎｃｈｙｍａｃｅｌｌｓａｒｅｒｅｄｕｃｅｄｂｙｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｄａｍａｇｅｔｏｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｃｅｌｌｓ.Ｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓｉｓａｎｉｎｅｖｉｔａｂｌｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｃｈｒｏｎｉｃｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅｓ.Ｅｘｃｅｐｔｆｏｒｏｒｇａｎｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎꎬｔｈｅｅａｒｌｙｓｔａｇｅｏｆｆｉｂｒｏｓｉｓｉｓｎｏｗｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｔｈｅｋｅｙｐａｒｔｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｃｈｒｏｎｉｃｄｉｓｅａｓｅ.Ｔｈｅｒｅａｒｅｃｕｒｒｅｎｔｌｙｍａｎｙｒｏｄｅｎｔｍｏｄｅｌｓｏｆｌｉｖｅｒｏｒｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓꎬｂｕｔｏｎｌｙａｆｅｗｍｏｄｅｌｓｗｉｔｈｃｏｍｂｉｎｅｄｌｉｖｅｒａｎｄｒｅｎａｌｆｉｂｒｏｓｉｓａｒｅａｖａｉｌａｂｌｅｆｏｒｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇ.Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｍｏｄｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｃｏｍｍｏｎｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓꎬａｎｄｃｏｍｐｏｓｉｔｅｍｏｄｅｌｓ.Ｗｅａｌｓｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｍｅｒｉｔｓａｎｄｄｅｍｅｒｉｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｆｕｔｕｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｍｏｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｌｙｒｅｌｅｖａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓ.ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓꎻｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓꎻｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓｍｏｄｅｌＣｏｎｆｌｉｃｔｓｏｆＩｎｔｅｒｅｓｔ:Ｔｈｅａｕｔｈｏｒｓｄｅｃｌａｒｅｎｏｃｏｎｆｌｉｃｔｏｆｉｎｔｅｒｅｓｔ.㊀㊀纤维化可发于多器官ꎬ其实质是慢性损伤长时间超出实质细胞修复能力ꎬ导致器官结构破坏㊁功能减退ꎬ最终脏器硬化和衰竭ꎬ目前有效疗法只有疾病晚期器官移植[１]ꎮ而肝㊁肾作为人体的两大免疫和代谢器官ꎬ更加容易遭受各种原因的损伤ꎬ使得肝肾处于慢性损伤的状态ꎮ在亚太地区ꎬ每年经由纤维化发展的肝硬化㊁肾硬化及其并发症成为亚太地区的主要死亡原因之一ꎮ因此ꎬ慢性肝病和慢性肾病一直都是研究的热点ꎬ对慢性肝病和慢性肾病的部分机制㊁药物筛选也有详尽的研究和说明ꎬ但在实际临床中以及在肝㊁肾纤维化实验模型的建立过程中ꎬ肝肾总是在功能和血液动力学方面体现紧密联系ꎮ除此之外ꎬ由于一些传统中药的肝肾同治功效需要适宜的动物模型来用进行现代科学研究与阐释ꎮ因此ꎬ近年来逐渐有人尝试建立一种肝肾纤维化的新复合模型以适应当代需求ꎮ作为慢性疾病的早期阶段ꎬ早期纤维化阶段被普遍认为具有可逆性ꎬ并非不可逆的 疤痕组织 [２]ꎮ因此ꎬ阻断早期肝肾纤维化进程可以成为治疗慢性肝肾疾病新的切入点ꎬ使慢性肝肾病在早期阶段就有治愈的可能性ꎮ目前针对肝肾纤维化有效的药物非常有限ꎬ因此ꎬ能成功建立更加贴近临床的疾病模型ꎬ成为突破阻断纤维化㊁逆转肝肾硬化的关键点之一ꎮ本文总结了肝纤维化㊁肾纤维化和肝肾纤维化复合模型常用的建立方法ꎬ初步探讨了模型机制㊁对比了不同方法间的优缺点ꎬ旨在为建立更贴近人类临床肝肾纤维化的模型提供参考(见图１)ꎮ１㊀肝纤维化模型１ １㊀化学试剂法多采用四氯化碳㊁硫代乙酰胺㊁Ｎ￣亚硝基化合物等ꎮ四氯化碳模型主要以脂肪变性为主ꎬ适合于一般肝纤维化的机制和药物研究ꎻ硫代乙酰胺在体内与肝细胞化学反应致其坏死ꎬ此模型更适合于肝硬化初期阶段的研究ꎻＮ￣亚硝基化合物在机体内更依赖于氧化应激反应造成损伤ꎮ１ １ １㊀四氯化碳(ｃａｒｂｏｎｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅꎬＣＣｌ４)四氯化碳(ＣＣｌ４)为无色有毒的挥发性液体ꎬ具有令人愉快的气味ꎬ使用过程中实验人员应注意防止吸入ＣＣｌ４ꎮ因其诱导肝纤维化模型的高复制性㊁与人类纤维化病理变化的高相似性成为目前应用最为广泛的化学药物ꎮＣＣｌ４诱导肝纤维化的分子机制现在还尚不完全清楚ꎬ但Ｄｏｎｇ等[３]联合利用转录㊁蛋白质组学分析和生物网络技术ꎬ证实ＣＣｌ４毒性主要涉及氧化还原㊁氧化应激反应ꎬ途径主要包括视黄醇代谢㊁花生四烯酸代谢等ꎮ注:损伤反应可使肝㊁肾分泌炎症因子ꎬ活化肝星状细胞㊁促进肾上皮－间质转化ꎬ相反肝星状细胞的活化和上皮－间质的转化又可促进炎症因子的分泌ꎬ使损伤持续进行ꎬ从而导致细胞外基质过度沉积ꎬ脏器纤维化产生ꎮ图１㊀肝肾纤维化的形成Ｎｏｔｅ.Ｔｈｅｉｎｊｕｒｙｒｅａｃｔｉｏｎｃａｎｍａｋｅｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｓｅｃｒｅｔｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓꎬａｃｔｉｖａｔｅｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｒｅｎａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ.Ｏｎｔｈｅｃｏｎｔｒａｒｙꎬａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｃａｎｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓꎬｓｏｔｈａｔｔｈｅｉｎｊｕｒｙｃｏｎｔｉｎｕｅｓꎬｒｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎｅｘｃｅｓｓｉｖｅｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘａｎｄｏｒｇａｎｆｉｂｒｏｓｉｓ.Ｆｉｇｕｒｅ１㊀ＦｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓＣＣｌ４通常与玉米油㊁花生油㊁橄榄油等按比例混合ꎬ通过灌胃㊁腹腔注射㊁吸入㊁皮下注射等方式给药ꎮ腹腔注射会造成更高的死亡率ꎬ但因建模快㊁稳定性好㊁成功率高得到更广泛的应用ꎮ一般根据不同实验动物品系ꎬ使用不同剂量ＣＣｌ４均可在６~８周表现出炎症因子浸润㊁肝脂肪变性和坏死的明显的纤维化阶段特征ꎮ雌性啮齿类动物对ＣＣｌ４表现出耐受难成模倾向ꎬ所以多数选取雄性大鼠进行造模ꎮ此模型具有缓慢形成肝纤维化的变化过程ꎬ形态学㊁病理学及血清生化指标的明显变化都具有类似人类肝纤维化的典型特征ꎬ适用于肝纤维化形成的动态研究和药物筛选ꎮ１ １ ２㊀硫代乙酰胺(ｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅꎬＴＡＡ)硫代乙酰胺是无色或白色结晶ꎬ１９４８年被报导具有肝毒性[４]ꎬ２０１７年ＷＨＯ将其纳入２Ｂ类致癌物ꎮＴＡＡ在体内和体外均可被ＣＹＰ２Ｅ１酶激活ꎬ代谢为不稳定的反应物ＴＡＳＯ２与肝大分子共价结合而引发坏死ꎮＢａｓｈａｎｄｙ等[５]人用ＴＡＡ诱导肝纤维化时ꎬ肾同时表现出肾小球缩小㊁肾小管上皮变性㊁间质淋巴细胞浸润等损伤ꎮＴＡＡ可用蒸馏水或生理盐水配制ꎬ通过饮用水㊁腹腔注射等途径给药ꎻ饮用水给药可建立比较温和的肝纤维化模型ꎬ但饮用水给药会因为个体摄入差异造成剂量偏差ꎬ因此常采用腹腔注射ꎬ剂量范围１５０~２５０ｍＬ/ｋｇꎬ最常用剂量２００ｍｇ/ｋｇꎬ大概４~６周即可成功建立肝纤维化模型[５－８]ꎮＴＡＡ相比ＣＣｌ４表现出更强肝毒性ꎬ造模过程中更高的死亡率要求实验人员扩大啮齿类动物数量ꎬ而集中在中央门静脉的病变㊁与人类肝纤维化血流动力学和代谢改变的相似性使其更适合肝纤维化向肝硬化发展的阶段研究ꎮ１ １ ３㊀Ｎ￣亚硝基化合物二甲基亚硝胺/二乙基亚硝胺(ｄｉｍｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ/ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅꎬＤＭＮ/ＤＥＮ)均属Ｎ￣亚硝基化合物ꎬ在２０世纪３０年代先后报道具有强致癌性与肝毒性ꎮＮ￣亚硝基化合物在各器官主要依靠细胞色素Ｐ４５０代谢激活ꎬ转变为更具活性的代谢产物ꎬ导致烷基化ＤＮＡ和活性氧产生ꎬ从而对器官产生氧化损伤[９－１０]ꎮ虽然Ｎ￣亚硝基化合物的主要损伤靶向器官除肝外还有肾ꎬ但其对肾的损伤研究较为缺乏ꎬ研究主要集中于肝毒性ꎮ以肝萎缩㊁脾肿大㊁血小板减少和血清总胆红素水平显著升高为典型特征的Ｎ￣亚硝基化合物模型是研究肝纤维化和肝硬化发展相关的生化㊁病理生理以及分子改变的优秀动物模型ꎮＤａｐｉｔｏ等[１１]认为将ＤＥＮ与ＣＣｌ４合用ꎬ会促使肠道产生更多内毒素ꎬ可更好的模拟人类肝癌的微环境ꎮＤｉｎｇ等[１２]利用ＳＤ大鼠建立了完整的肝炎－肝纤维化－肝癌模型轴ꎬ为不同阶段疾病模型的准确建立提供了参考ꎬ此研究显示每周两次注射ＤＥＮ(３０ｍｇ/ｋｇ)ꎬ８~１２周肝即处在明显肝纤维化阶段ꎮ１ ２㊀手术法肝纤维化手术法是通过手术将胆管暴露并结扎ꎬ直接人为造成胆汁淤积ꎬ是一种以胆管增生为病变特点的胆汁淤积型肝纤维化模型ꎮ胆管结扎可通过手术在动物体内结扎胆总管ꎬ也可在体外对细胞使用抑制剂ꎬ造成胆汁阻塞性病变ꎮ胆管结扎一定程度上可较好的模拟人类因长期胆汁淤积而引起的肝细胞增殖和凋亡㊁门静脉纤维化及肝硬化过程ꎬ以及伴有常见的胆汁性急性肾损伤并发症[１３－１４]ꎮ但手术结扎会阻断所有的胆汁流通ꎬ因此ꎬ无法更完全复制人类临床具有一定胆汁通量的原发性硬化性胆管炎和原发性胆源性胆管炎的病理过程ꎮＧｈａｌｌａｂ等[１５]利用荧光胆汁盐和非胆汁盐有机阴离子的双光子成像技术对胆管结扎的病理机制进行研究ꎬ结扎胆总管后ꎬ肝内和胆内胆汁酸水平急剧升高损伤细胞ꎮ氧化应激和炎症反应在胆管结扎损伤肝中起重要作用[１６]ꎮＹａｎｇ等[１７]用ＳＤ大鼠结扎总胆管不同位置进行研究发现ꎬ胆总管上端结扎比胆总管中部结扎可用更小的死亡率诱导更严重的胆汁淤积性肝纤维化ꎮ胆管结扎建模周期大概在２~４周ꎬ在７ｄ左右开始看见病理变化ꎬ结扎时间不宜过长ꎬ否则啮齿类动物死亡率会大幅度升高以致数据缺失ꎻ手术法在所有方法中建模最快ꎬ但其病变也近似于急性损伤的变化ꎬ而纤维化是一种慢性疾病的过程ꎬ因此胆管结扎可能对于慢性疾病模型来说不够典型ꎮ１ ３㊀免疫诱导法免疫反应本是机体免疫系统对抗外侵的正常反应ꎬ但大量免疫细胞和蛋白的堆积又会损伤正常组织细胞ꎮ免疫诱导法正是利用此原理在啮齿类动物体内模拟人类的免疫性纤维化病变ꎬ因此ꎬ免疫诱导应用的前提是作为模型的动物源要具有正常免疫系统ꎮ１ ３ １㊀刀豆蛋白(ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡꎬＣｏｎＡ)刀豆蛋白是从植物中提取的凝集素ꎬ具有强烈的促有丝分裂和促淋巴转化反应作用ꎬ是重要的生化和免疫研究试剂ꎮＣｏｎＡ诱导的免疫性肝炎模型可用于人类免疫性肝炎㊁急性病毒性肝炎等疾病或药物筛选的研究ꎮＣｏｎＡ的肝毒性依赖于激活体内Ｔ淋巴细胞和巨噬细胞ꎬ和内皮细胞表面糖蛋白结合ꎬ激活自身免疫系统分泌ＴＮＦ￣α㊁ＩＦＮ￣γ㊁ＴＧＦ￣β１等炎症因子ꎬ从而损伤肝细胞ꎮ因此ꎬ造模时不能选用免疫缺陷无Ｔ细胞应答的啮齿类动物[１８－１９]ꎮ本方法建模采用小鼠居多ꎬ造模周期约４~８周ꎮ造模时ＣｏｎＡ可用生理盐水或ＰＢＳ配制ꎬ通过尾静脉或腹腔注射给药ꎬ关于剂量Ｈｅｙｍａｎｎ等[２０]建议具有更多Ｔｈ１亚系的Ｔ细胞免疫反应的啮齿类动物ꎬ例如Ｃ５７ＢＬ/６㊁Ｃ３Ｈ小鼠对刀豆蛋白更加敏感ꎬ只需要１５~２０ｍｇ/ｋｇ体重ꎻ而具有更多Ｔｈ２亚系的免疫应答啮齿类动物ꎬ例如ＢＡＬＢ/ｃ品系的近交或杂交ＮＭＲＩ小鼠对刀豆蛋白不敏感则至少需要３０ｍｇ/ｋｇ体重的量ꎮ１ ３ ２㊀猪/牛血清蛋白血清蛋白是凭借引起自身过激免疫反应产生全身性的损伤ꎬ因此本模型更适合于免疫性纤维化病理学研究ꎬ但本模型存在自愈的问题ꎮ其所致免疫性肝纤维化模型是研究细胞水平上纤维化隔膜形成的模型ꎬ以及肝纤维化后的结构变化ꎬ例如毛细血管化和静脉化ꎻ但目前未见血清蛋白诱导肝肾纤维化复合模型的诱导研究ꎮ猪/牛血清蛋白无法在免疫缺陷或免疫耐受啮齿类动物中诱导肝纤维化ꎬ因其免疫性损伤依赖于一定周期的激活巨噬细胞㊁Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞ꎬ释放炎症因子ꎬ进而激活星状细胞和成纤维细胞纤维化[２１]ꎮ用猪血清蛋白诱导的免疫性纤维化程度与血清蛋白剂量并无依赖关系ꎬ只会随时间不同呈现不同病理变化[２２]ꎮＹｏｕ等[２３]用牛血清蛋白(ＢＳＡ)致ＳＤ大鼠肝小叶结构严重受损ꎬ炎性细胞浸润ꎬ广泛的纤维组织增生ꎬ纤维组织通过中央小叶增生并扩展为肝实质ꎮ２㊀肾纤维化模型２ １㊀化学试剂法重金属化合物㊁腺嘌呤和手术法在国内建立慢性肾病模型的应用属最为广泛ꎮ建立肾纤维化模型的几种化学物质相较肝纤维化模型的几种物质ꎬ明显缺少对肾损伤的高度靶向性ꎬ且研究多集中于肾的急性损伤研究ꎮ２ １ １㊀氯化汞(ｍｅｒｃｕｒｙｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅꎬＨｇＣｌ２)重金属汞是主要以金属汞㊁无机汞㊁有机汞三种形式普遍存在于自然环境中的污染物ꎬ对环境和人体有极大的伤害ꎮ肾是受无机汞毒性影响的主要器官之一ꎬ因为无机汞更容易在肾中累计ꎬ使肾成为受伤最严重的器官ꎮＺａｌｕｐｓ[２４]发现ＨｇＣｌ２静脉注射０ ５μｍｏｌ/ｋｇ或２ ０μｍｏｌ/ｋｇ后３ｈꎬ超过总剂量５５％的Ｈｇ２＋都集中在肾近段小管上皮细胞中ꎮＨｇＣｌ２可诱导Ｔ细胞死亡和破坏细胞中线粒体膜ꎬ当线粒体电子传输链功能受损会产生过量活性氧自由基(ＲＯＳ)ꎬ氧化应激反应可激活细胞死亡程序ꎮＨｇＣｌ２造模时多选取大鼠进行实验ꎬ原因是小鼠对ＨｇＣｌ２显示出一定的耐药性ꎬ难成模ꎮ本方法可通过皮下注射㊁静脉注射㊁灌胃等途径给药ꎮ造模中ＨｇＣｌ２剂量非常关键ꎬ过小难成模ꎬ剂量稍大啮齿类动物容易大批死亡ꎬ因此ꎬ预实验时ꎬ对于大鼠的剂量ꎬ应多进行尝试或采取梯度给药ꎮ在国内多采用每日８ｍｇ/ｋｇＨｇＣｌ２水溶液灌胃给药ꎬ８周左右即可建立肾小管间质纤维化模型[２５]ꎮ２ １ ２㊀腺嘌呤腺嘌呤可在体内代谢为２ꎬ８－二羟基腺嘌呤(ＤＨＡ)ꎬＤＨＡ在肾小管积累ꎬ形成晶体(结石)堵塞肾小管造成肾损伤ꎬ虽然ＤＨＡ的致病机理还尚未完全清楚ꎬ但已知ＴＧＦ￣β在其中起到重要作用[２６]ꎮ用腺嘌呤诱导的慢性肾病(ｃｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅꎬＣＫＤ)模型会增加增加尿酸的排泄ꎬ形成蛋白尿ꎬ游离氨基酸减少ꎬ肾外表颗粒化且伴有肾纤维化ꎬ同时还会出现心血管系统的结构和功能损伤ꎬ无论是缓慢变化的慢性肾病还是并发症均与临床人类ＣＫＤ表现高度一致ꎮ腺嘌呤诱导肾纤维化多采用大鼠进行含有０ ７５％腺嘌呤的饲料喂食ꎬ可引起肾迅速且严重的变化ꎬ伴随肾小管损伤㊁肾小球㊁肾间质纤维化及炎症ꎮ但Ｔａｍｕｒａ等[２６]和Ｉｍａｍｕｒａ等[２７]仅用含有０ ２％和０ ２５％腺嘌呤饲料喂食Ｃ５７ＢＬ/６小鼠ꎬ也成功诱导肾纤维化ꎬ可能说明小鼠比大鼠对腺嘌呤更敏感ꎮ２ １ ３㊀硝酸铀酰(ｕｒａｎｙｌｎｉｔｒａｔｅ)硝酸铀酰目前在国外诱导急性肾损伤模型应用较多ꎬ其急性肾毒性和急性肾衰竭的病理机制有很多深入的研究和详细的描述ꎮ向啮齿类动物注射硝酸铀酰之后ꎬ５０％的铀化合物通过肾排出ꎬ铀化合物在肾中又集中在肾皮质部分ꎬ在其他器官分布的数量微不足道ꎬ具有较好的肾靶向性[２８]ꎮ硝酸铀酰可使啮齿类动物尿量和肾小球过滤率减少ꎬ近端肾小管萎缩ꎻ其慢性肾毒性多与重金属汞㊁锌等对肾损伤的机理类似ꎬ硝酸铀酰同样可以破坏线粒体电子传输链功能ꎬ产生的氧化应激反应损伤肾[２９]ꎮ在国内不仅对硝酸铀酰的慢性肾毒性研究不多ꎬ应用都非常少ꎬ但基于硝酸铀酰对肾的靶向性ꎬ我们应尝试扩大对硝酸铀酰的慢性肾毒性研究ꎬ也许可以建立良好的慢性肾纤维化模型ꎮ在为数不多的硝酸铀酰诱导纤维化模型文章中ꎬ多采用雌性啮齿类动物ꎬ硝酸铀酰的给药方式和剂量都比较统一ꎬ多采用单次腹腔注射５ｍｇ硝酸铀酰/ｋｇ体重ꎬ大约８~１０周即可见肾间质纤维化ꎮ２ ２㊀手术法对肾纤维化的研究中更多会采取手术法建立模型ꎬ一般手术法有单侧输尿管结扎㊁５/６肾切除手术和缺血再灌注法ꎻ其中结扎单侧输尿管最经典ꎬ应用也是最为广泛ꎬ而缺血再灌注法则因其临床实际应用的高度需求性同样被研究的较多ꎮ５/６肾切除法虽然也能快速建立肾的损伤ꎬ但因其需要切除大部分肾ꎬ对机体产生过大的损伤且并不是很符合临床需求的研究ꎮ２ ２ １㊀单侧输尿管结扎(ｕｎｉｌａｔｅｒａｌｕｒｅｔｅｒａｌｌｉｇａｔｉｏｎꎬＵＵＯ)本方法适用于大鼠和小鼠ꎬ输尿管结扎后阻碍尿液正常排泄ꎬ短时间便可造成尿潴留ꎬ肾肿大ꎬ肾小管细胞坏死ꎬ肾组织结构完全被破坏从而导致肾功能不全ꎮ此模型已经成为了研究尿路梗阻肾小管间质纤维化原因和机制的标准模型ꎮ但ＵＵＯ模型同样存在慢性病变特点不够典型的问题ꎬ并且伴随结扎时间延长ꎬ啮齿类动物死亡率会加速提升ꎮ此模型病变只发生在结扎输尿管一侧ꎬ对侧肾功能依旧正常ꎮ单侧输尿管结扎后ꎬ从第３天起有肾髓质和皮质减少的病理变化ꎬ且有少量纤维化出现ꎬ随时间推移ꎬ结扎７ｄ后血清肌酐和尿素氮成倍增长ꎬ单核巨噬细胞浸润ꎬ间质水肿ꎬ部分近端小管上皮空泡变性[３０]ꎬ两周后即可形成以小管细胞坏死和萎缩㊁炎症细胞渗透㊁细胞外基质和Ｉ型胶原蛋白大量沉积为特点的严重的结构破坏[３１]ꎮ刘克剑等[３２]等发现从侧腹开口结扎单侧输尿管两端后ꎬ不离断输尿管ꎬ可保证不影响造模效果的同时大幅提升啮齿类动物的存活率ꎮ２ ２ ２㊀缺血再灌注在临床的外科手术㊁器官移植㊁烧伤等过程均可出现缺血再灌注损伤ꎬ然而短暂缺血并不足以引起器官细胞损伤ꎬ反而缺血后的血液再灌注可造成微血管和实质细胞更严重的损伤ꎮ因此缺血再灌注模型具有高度应用局限性ꎬ基本全部用于缺血再灌注引起肾损伤的相关研究ꎮ缺血再灌注引起的肾损伤主要与活性氧自由基和Ｃａ２＋超载有关ꎬ在缺血组织中清除自由基的酶类合成能力受损ꎬ并且缺血再灌注可以直接损伤肾小球内毛细血管内皮细胞ꎬ引起炎症级联反应ꎮ因此ꎬ抑制ＴＬＲ４通路和增强清除自由基能力可减少缺血再灌注造成的损伤[３３]ꎮ张蕊[３４]利用动态对比增强ＭＲＩ监测大鼠缺血再灌注后的肾损伤ꎬ发现当大鼠肾缺血３０~４５ｍｉｎ时可在保证大鼠存活率的条件下对肾造成不可逆转的伤害ꎮ３㊀肝肾纤维化复合模型作为人体两大免疫器官ꎬ肝肾总是有千丝万缕的联系ꎬ不仅临床上的肝肾综合征㊁乙肝相关性肾病㊁胆汁性肾病等ꎬ中医的肾病从肝论治ꎬ肝病从肾论治等均体现着肝肾协作㊁互滋的能力ꎻ此外ꎬ为了深入研究一些传统中药对肝肾的异病同治功效ꎬ开始尝试建立肝肾纤维化复合模型ꎮ基于以往建立肝纤维化和肾纤维化模型的经验之上ꎬ几乎所有肝损伤药物和手术法都具有高度肝靶向性的同时可轻损肾ꎬ而致肾损伤的化学药物往往肾靶向性较低ꎬ因此在建立肝肾纤维化复合模型时多采用肝靶向性损伤药物结合肾损伤药物或直接采用能造成全身损伤的化学试剂㊁药物ꎮ３ １㊀四氯化碳和牛血清Ｍａｎｏｊ[３５]联合四氯化碳和牛血清蛋白腹腔注射ꎮ在本研究中ꎬ四氯化碳主要造成肝损伤ꎬ牛血清蛋白主要通过免疫复合物形成蛋白尿造成肾损伤ꎻ１０周后肝病理切片可见明显的纤维化ꎬ肾仅见结缔组织增生和炎症细胞浸润ꎮ四氯化碳具有较高肝靶向性的同时对肾也有损伤ꎬ牛血清蛋白作为免疫性损伤药物配合四氯化碳ꎬ使肝肾损伤程度均大致处于纤维化阶段ꎬ但本试验最终并未显示严重的肾纤维化结果ꎻ反而发现牛血清蛋白对四氯化碳的肝损伤有拮抗作用ꎬ为日后造模方法提供了新发现ꎮ３ ２㊀ＤＭＮ和汞姜哲浩等[３６]在研究扶正化瘀方对大鼠肝肾纤维化的影响时采用了腹腔注射ＤＭＮ和喂食含有重金属汞的饲料建立肝肾纤维化复合模型ꎮ８周之后ꎬ肝组织坏死㊁肝细胞肿胀㊁大量炎症细胞浸润㊁假小叶形成ꎻ肾间质水肿伴炎细胞浸润㊁肾间质中大量胶原纤维ꎮ汞在诱导肾纤维化单独使用时ꎬ剂量难以控制ꎬ但配合对肝肾都有损伤的ＤＭＮ使用大大提高了成功诱导肝肾纤维化的几率ꎮ３ ３㊀酪氨酸氧化产物酪氨酸是常见的食品添加剂和药原料ꎬ容易被氧化修饰[３７]ꎻ因此在售卖的牛奶㊁奶粉㊁动物饲料中等均可检测到酪氨酸及其氧化产物的存在ꎮ因此ꎬ酪氨酸及其氧化产物对人体的影响成为了研究热点ꎮ李竹青[３８]发现短期２８ｄ喂食酪氨酸氧化产物可对肝肾均产生损伤ꎬ随喂食时间增长ꎬ会引起肝肾炎症因子大量分泌ꎬ产生氧化应激反应ꎬ紧接着激活肝星状细胞与内质网应激反应ꎬ促进肾小球内皮细胞－间质转化反应ꎬ引起肝肾纤维化ꎮ３ ４㊀环孢菌素Ａ(ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅꎬＣｓＡ)从２０世纪８０年代ＣｓＡ作为免疫抑制剂应用于临床ꎬ主要用于器官移植手术后的排异反应ꎬ但由于较严重的肝㊁肾毒性副作用ꎬ使其应用受限ꎮ短期注射ＣｓＡ可使肾血流减少ꎬ长期注射会导致具有广泛的肾小管纤维化的肾衰竭ꎮＣｓＡ的急性肾毒性与激活肾素－血管紧张素系统有关ꎬ慢性肾毒性是因为可触发机体分泌ＴＧＦ￣βꎬ大量的ＴＧＦ￣β是触发上皮间质转化的关键因素ꎮＣｓＡ可破坏肾近端管状细胞的形态㊁连接结构㊁细胞骨架ꎬ并且在上皮－间质转化后ꎬ成肌纤维细胞可以自由迁移到间质中ꎬ并释放出大量的细胞外基质(ＥＣＭ)ꎬ促进纤维化发展[３０－４０]ꎮ程根阳[４１]先建立低盐饮食(ｌｏｗｓａｌｔｄｉｅｔꎬＬＳＤ)喂养ꎬ然后每日皮下注射ＣｓＡꎬ１４ｄ后即显示肝肾功能受损㊁炎症细胞浸润ꎬ３５ｄ试验结束时ꎬ间质炎性细胞浸润减少ꎬ纤维化程度明显ꎮ４㊀总结与展望４ １㊀总结现有建立肝㊁肾纤维化模型的方法在建模难易程度㊁临床相似性㊁重复程度都各有千秋ꎮ化学诱导法建模耗时较长ꎬ但比较符合慢性疾病病变过程ꎬ个别毒性化学物质ꎬ如氯化汞㊁ＤＭＮ等由于安全管控原因难以购买ꎬ因此模型出现空缺ꎬ丞待开发新的模型ꎻ手术法虽然建模过程耗时短ꎬ但对于慢性疾病的慢性病变过程来讲不够典型ꎬ同时术后感染㊁啮齿类动物撕咬造成刀口撕裂㊁结扎时间过长等使死亡率升高ꎻ免疫法虽能引起全身性的炎症ꎬ但却存在停药后可自愈的问题ꎬ这并不利于肝肾纤维化的治疗药物筛选ꎮ现有造模方法基本可以实现从不同发病原因来模拟人类临床中出现的肝㊁肾纤维化的一些病理变化ꎬ可以适用于不同科研目的ꎮ相对来讲肝肾纤维化复合模型现在处于较空白的阶段ꎬ由于胆管结扎㊁注射硫代乙酰胺等方法能同时引起肝肾的损伤ꎬ是对肝肾同时的直接毒性还是基于肝肾功能交互的损伤ꎬ对其潜在机制及诱导复合模型的潜力还有待深入研究ꎮ近年仅有两篇报道称酪氨酸氧化产物和环孢菌素Ａ均可同时引起肝肾纤维化ꎬ但在大鼠体内引起的病理变化及模型特点还需进行大量且深入的研究ꎻ而能够引起全身性损伤的阿霉素和免疫性血清可能成为诱导肝肾纤维化复合模型的潜力物质ꎻ同时也可以尝试分别选取建立肝纤维化和肾纤维化模型的经典方法ꎬ结合使用建立肝肾纤维化复合模型ꎬ例如经典四氯化碳模型㊁硫代乙酰胺模型结合单侧输尿管结扎法等ꎮ４ ２㊀展望人类慢性肝病和慢性肾病作为全球健康问题ꎬ其药物研究日益迫切ꎮ而实验性动物模型不仅可以从群体数量上满足疾病实验和药物筛选实验的要求ꎬ还可以在实验中各个环节实现条件控制ꎬ可以人为的剔除一些干扰因素ꎬ从而实现对发病机制㊁疾病进程㊁药物筛选等进行深入的研究ꎮ但现有的肝㊁肾纤维化动物模型依旧存在问题:(１)对动物模型本身的发病机制尚未完全清楚ꎻ(２)肝肾纤维化动物模型大多在大㊁小鼠身上建立ꎬ模型的动物种类较少ꎻ(３)无法完全模拟人类肝㊁肾纤维化进展所引起的所有变化ꎻ(４)造模过程中死亡的啮齿类动物无法确认死因ꎬ且可能会在啮齿类动物体内引发并发症或其他变化我们也无法详尽得知ꎻ(５)造模过程至今并未有统一化的规范操作标准ꎬ会因为啮齿类动物品种㊁实验人员操作㊁药品配置等方面造成成模差异ꎮ因此ꎬ对现有建模方法继续优化以及对所有动物模型进行发病机制的探讨ꎬ都将是日后重点研究的领域ꎮ参㊀考㊀文㊀献(Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ)[１]㊀ＬｕｏＭꎬＰｅｎｇＨꎬＣｈｅｎＰꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｒｏｌｅｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣３５ｉｎｆｉｂｒｏｔｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１９ꎬ１５(４):４３１－４３９.[２]㊀ＫｉｓｓｅｌｅｖａＴꎬＢｒｅｎｎｅｒＤＡ.Ａｎｔｉ￣ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃｓｔｒａｔｅｇｉｅｓａｎｄｔｈｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｆｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＢｅｓｔＰｒａｃｔＲｅｓＣｌｉｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌꎬ２０１１ꎬ２５(２):３０５－３１７.[３]㊀ＤｏｎｇＳꎬＣｈｅｎＱＬꎬＳｏｎｇＹＮꎬｅｔａｌ.ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＣＣｌ４￣ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｗｉｔｈｃｏｍｂｉｎｅｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃａｎｄｐｒｏｔｅｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓ[Ｊ].ＪＴｏｘｉｃｏｌＳｃｉꎬ２０１６ꎬ４１(４):５６１－５７２.[４]㊀ＦｉｔｚｈｕｇｈＯＧꎬＮｅｌｓｏｎＡＡ.Ｌｉｖｅｒｔｕｍｏｒｓｉｎｒａｔｓｆｅｄｔｈｉｏｕｒｅａｏｒｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ１９４８ꎬ１０８(２８１４):６２６－６２８. [５]㊀ＢａｓｈａｎｄｙＳＡꎬＡｌａａｍｅｒＡꎬＭｏｕｓｓａＳＡꎬｅｔａｌ.Ｒｏｌｅｏｆｚｉｎｃｏｘｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｎａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅｉｎｒａｔｓ[Ｊ].ＣａｎＪＰｈｙｓｉｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１７ꎬ９６(４):３３７－３４４.[６]㊀ＳａｉｄＥꎬＳａｉｄＳＡꎬＧａｍｅｉｌＮＭꎬｅｔａｌ.Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ/ｃｉｒｒｈｏｓｉｓｂｙｓｉｌｄｅｎａｆｉｌｔｒｅａｔｍｅｎｔ[Ｊ].ＣａｎＪＰｈｙｓｉｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１３ꎬ９１(１２):１０５５－１０６３.。

三、肝肾纤维化动物模型的优缺 点评价
1、准确性：化学诱导模型的准确性相对较高，能够短时间内诱发明显的肝 肾损伤和纤维化，适用于药物筛选和短期疗效评价；而基因敲除模型能够更好地 模拟人类肝肾纤维化的发病机制，探讨特定基因在肝肾纤维化过程中的作用。
2、可靠性：化学诱导模型的可靠性取决于剂量和给药频率的控制，不同批 次动物的反应可能存在差异；而基因敲除模型的可靠性则取决于基因敲除技术的 稳定性和实验操作的质量控制。
3、基因敲除模型
基因敲除技术是通过改变动物体内特定基因的表达或功能，模拟人类肝肾纤 维化的发生发展过程。例如，敲除动物体内的转化生长因子-β（TGF-β）基因 或Smad基因，诱发肝肾纤维化。此模型的优点是能够更好地模拟人类肝肾纤维化 的发病机制，探讨特定基因在肝肾纤维化过程中的作用；缺点是操作复杂，实验 周期长，且存在伦理道德问题。
二、肺纤维化动物模型
1、博来霉素诱导的肺纤维化模型：博来霉素是一种由轮枝链霉菌产生的碱 性糖肽类物质的多组分复合抗生素，被广泛用于诱导肺纤维化。通过在动物身上 注射博来霉素，可以引发炎症和纤维化反应。这种模型已被广泛应用于研究肺纤 维化的病因和病理生理过程。
2、石棉诱导的肺纤维化模型：石棉是一种已知的致癌物，可导致肺癌和肺 纤维化。通过让动物吸入石棉，可以模拟石棉诱发的肺纤维化。这种模型有助于 研究石棉对肺部的影响以及开发新的预防和治疗策略。
四、结论
肺纤维化是一种复杂的疾病，需要综合多种研究方法来全面理解其发病机制。 动物模型在这方面发挥了关键作用，通过模拟人类肺纤维化的病理生理过程，为 研究提供了重要的工具。随着科学技术的进步，我们期待着更多的研究能够进一 步揭示肺纤维化的病因和病理生理过程，为开发更有效的治疗方法提供支持。