大肠杆菌菌体抗原免疫小鼠实验方案的设计实验材料1. 1试剂与器材生理盐水、酒精、碘酊、试管、吸管、三角烧瓶、离心机、剪刀、镊子、注射器、离心管。
1. 2无菌器皿的制备试管、大平皿、三角烧瓶、注射器、吸管、离心管, 经洗液处理后, 用自来水冲洗干净, 再用蒸馏水冲洗3 次, 用纸包好后, 用干烤箱( 160℃) 干烤2 小时。
一、制备免疫原1、细菌的培养：用接种环挑取大肠杆菌，放入肉汤培养基中培养。
37℃培养24小时后，用注射器吸取3ml菌液注入300ml肉汤培养基中，37℃振荡培养24小时。
2、比浊：1.175%BaCl2 0.5ml，1%H2SO4 99.5ml，制作比浊液。
比浊标准为0.5麦氏比浊。
3、取菌液稀释至上述浊度：菌液细菌浓度为1×10ˆ9/L。
4、灭活：隔水煮沸2到2.5小时。
5、灭菌效果检查：取适量煮沸后的肉汤培养液涂布在琼脂培养基上，37℃培养24小时，看是否有菌落生长。
二、选择免疫动物并进行标记选择家兔作为实验动物,挑选年龄在6个月以上当年繁殖的雄性,体重1-2公斤,健康家兔一只,免疫前用苦味酸涂沫在动物的背部,作出明确的标记，避免混淆。
三、阴性对照标本的留取1.采血方法（1）静脉采血法：将家兔放在固定盒内，拔去拟采血部位的毛，用电灯照射加热或用电吹风吹热或用二甲苯棉球擦耳壳，使耳部血管扩张。
用粗针头刺破耳缘静脉或以刀片在血管上切一小口，让血液自然流出即可。
取血后用棉球压迫止血。
亦可用针头插入耳线静脉取血，其操作步骤基本与耳缘静脉注射相似。
最好有一助手帮助压紧耳根部，这样采血时比较容易。
（2）颈动脉放血:使动物仰卧固定四肢,颈部剪毛、消毒后纵向切开前颈部皮肤长约10cm,用止血钳将皮肤分开夹住,剥离皮下组织,露出肌层,用刀柄加以分离,即见搏动的颈动脉。
小心将颈动脉和迷走神经剥离长约5cm,选择血管中段,用止血钳夹住血管壁周围的筋膜。
远心端用丝线结扎,近心端用动脉钳夹住,用酒精棉花球消毒血管周围,用无菌剪刀剪一V形缺口。
