洁净手术室沉降法测定沉降菌浓度采样布点法

管理文件一、目 的：规范洁净区沉降菌采样操作标准 二、适用范围：洁净区沉降菌采样操作 三、责 任 者：生产部、质量管理部 四、内 容：1.洁净区沉降菌采样依据：GB/T 16294-2010 《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》2.采样流程→3.采样准备 3.1培养皿准备选择Φ90mm ×15mm 规格的培养皿，培养皿盖和底盘均较平整，无损坏。

准备培养皿数量根据采样区域进行计算。

3.2培养基准备选择大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA ）或沙氏培养基（SDA ），根据实际情况选择。

4.采样前要求4.1沉降菌采样前，被测试洁净室（区）已经过消毒；4.2洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜）；4.3采样状态有静态和动态两种，采样状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明采样状态；4.4 静态采样时，培养皿暴露时间为0.5小时；动态采样时，培养皿暴露时间为4小时； 4.5静态采样时，室内测试人员不得多于2人。

5.采样：5.1洁净区域（设备）级别及代码5.2培养皿标记：洁净区代码+“-”+培养皿编号，例如，超净台1第5个培养皿标记为：A1-5。

5.3最少采样点数目 5.4采样点布局洁净区（室、设备）采样点布局备注分装间1 2 3 47 85 69 10按左图采样点布置放置培养皿，“○”代表一个培养皿。

分装准备间12 3 4 56 7 8 9 10分装准备间采样时，因内部含有周转筐，故按照左图铺设培养皿，“○”代表一个培养皿。

混合罐装间12 5 634 7 89 10混合灌装间采样时，因室内有混合罐，故按照左图铺设培养皿，“○”代表一个培养皿。

其他洁净区（室）1 32 5 6 4 7 98 10采样时根据具体洁净室代码标记培养皿，“○”代表一个培养皿。

5.5铺设培养皿5.5.1培养皿铺设时按照从洁净度级别较高的区域向洁净度级别较低的区域依次铺设，先铺设A 级区培养皿，再铺设B 级区培养皿，最后铺设C 级区培养皿。

洁净手术室空气采样方法Revised as of 23 November 2020洁净手术室空气采样方法1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。

2、采样方法：（1）布点：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积 >30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。

（2）平板暴露法平板直径9cm、采样高度，暴露5min。

3、检验方法平板37℃培养48h。

计数菌落数并分离致病菌。

4、平板暴露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3）=A×TA为平板面积（cm2）； T 为暴露时间（min）；N 为平均菌落数（cfu）5、结果判定（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。

（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。

每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90 培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。

单皿最大值不应超过平均值3倍。

（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。

标准：I级<30cfu/m3 ；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500cfu/m3。

（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降后在37℃下培养24h。

洁净度（沉降菌）测试的标准操作规程目的：建立洁净度（沉降菌）测试的标准操作规程，为沉降菌检查人员提供正确的标准操作方法。

范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测的全过程。

职责：QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，沉降菌检查人员对本规程的实施负责。

依据：GB/T16294－2010、2013-2017年环境监测数据及2016-2017年洁净区（室）环境监测回顾报告。

1定义：本规程采用下列定义：1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。

1.2沉降菌：用GB/T16294－2010提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数1.3沉降菌菌落数：在规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu//4小时表示。

1.4洁净室：对尘粒及微生物污染需进行控制的房间或区域。

1.5洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。

其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台等。

1.6洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子和微生物的允许统计数。

2、测试方法：2.1 方法概述：本测试方法按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌测试方法》采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。

2.2使用的仪器和设备：2.2.1恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。

2.2.2高压蒸汽灭菌器：使用时应严格按照仪器操作规程进行操作。

2.2.3培养皿：2.2.3.1.一般采用￠90mm×15mm 规格的硼硅酸玻璃培养皿。

2.2.3.2.使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。

2.1沉降菌检验用培养基。

3.相关文件：《沉降菌测定记录》RD-SOP-ZL-005。

4.内容：4.1采样点数目：采样点数目按房间大小和房间的洁净级别来设置，具体数目见下表：面积（m2）洁净级别100 10000 100000<10 10-20 20-40 >40 2-3481622242222在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表：洁净级别所需Φ90培养皿数（以沉降0.5h计）100 10000 100000 5-7 5 54.2取样点布置，如图示：文件名称洁净室沉降菌的测定法文件编号：HV-SOP-ZL-005/00 第 2 页共 2 页4.2.1采样点布置在离地0.8米高的水平面上均匀布置4.2.2 采样点多于5点时，可在离地面0.8-1.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5个点。

4.2.3布置采样点时，应避开回风口。

4.3测试时间：净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。

4.4测试方法：4.4.1将已准备好的培养皿置于采样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上。

4.4.2全部采样结束后，将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。

4.4.3菌落计数。

4.4.4结果计算：4.4.5结果判定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。

4.4.5.1洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。

见下表。

4.4.5.2若洁净室（区）内平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域进行消毒，然后重新采样2次，测试结果必须合格。

洁净级别 100级 10000级 100000 标准（平均） 0.5个/皿1.5个/皿3个/皿文件名称 洁净区尘埃粒子测定法文件编号：HV-SOP-ZL-006/00 起草人 日期 第 1 页 共 3 页 审核人 日期 颁发部门：行政部审定人 日期 批准人日期送达部门质量管理部目的：明确洁净区尘埃粒子检验的标准操作程序。

1 目的确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。

2 范围适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。

3 责任QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。

4 内容4.1 参考标准中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。

中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。

4.2 监测程序4.2.1 设备高压消毒锅恒温培养箱培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。

4.2.2 培养基及平皿制备4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基4.2.2.2 制备过程如下：◆将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20 分钟或180℃干热灭菌2小时；◆将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

◆待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

◆制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。

4.2.3 采样点和监测频次4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。

4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。

并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。

4.2.4 测试规则4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。

4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

4.2.4.4 测试时间：◆对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。

范围：洁净区
职责：质量部、生产车间对本规程的实施负责
正文：
1.试剂及仪器、器皿
1.1试剂
——营养琼脂培养基
1.2仪器及器皿
1.3生化培养箱，Φ90mm培养皿、锥形瓶、胶塞、灭菌锅、烧杯等。

2.测试前准备
2.1培养基的配制
——按SOP-QM-424《培养基配制标准操作规程》进行。

2.2培养基平皿的制备
2.2.1将Φ90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或180℃干热灭菌2小时。

2.2.2将培养基加热溶化，冷至45℃时，于无菌检查操作间将培养基注入平皿，每皿约15ml。

2.2.3待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃生化培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

3.采样
3.1采样点的数目及采样点的布置
3.1.2.1采样点的布置力求均匀,避免采样点在某局部区域过于集中或过于稀疏，关键区域可增加采样点。

3.1.2.2采样点位置离地0.8-1.5米左右（略高于工作台面）
3.2采样方法：按3.1的要求放置平皿数，打开培养皿盖，使培养皿暴露30分钟，再将培养皿盖盖上。

4.培养
第1页共2页
所有采样结束后，将平皿倒置在30ºC—35ºC的生化培养箱中培养48小时。

5.操作结果的评价
5.1用肉眼直接计数并记录。

5.2结果计算
式中 M—平均菌落数（CFU）
M i—1，2，3……号平皿菌落数
n—平皿总数
5.3结果评价标准见下表：
测试结果均须合格。

第2页共2页。

洁净手术室沉降法测定沉降菌浓度采样布点法手术室的级别分为：Ⅰ级手术室，Ⅱ级手术室，Ⅲ级手术室，Ⅳ级手术室。

Ⅰ-Ⅲ级手术室有手术区和周边区之分，手术区为需要特别保护的手术台及其周围区域，余下区域均为周边区。

Ⅳ级手术室不分手术区和周边区。

各级手术室不同区域的空气洁净度级别不同，有5级、6级、7级、8万级及8.5级之分。

GB50333-2013中（13.3.18.4）要求采用沉降法测定沉降菌浓度时，细菌浓度测点数要和被测区域含尘浓度测点数（13.3.11－2）相同，同时应满足表13.3.18-2 规定的最少培养皿（不含对照皿）数的要求。

也就是说按这两种方法中布点数多的布点。

表13.3.18-2 沉降菌最小培养皿数表13.3.11-2 测点位置表上表明确指出5级洁净度区域最少培养皿是13个；而含尘浓度的检测布点方法是（13.3.11.2）Ⅰ级手术室手术区5个，所以在测沉降菌的时候，Ⅰ级手术室手术区布点数应为13个。

沉降菌最少培养皿数明确指出6级洁净度区域最少培养皿是4个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅰ级手术室周边区8个，所以Ⅰ级手术室周边区布点数应为8个，即Ⅰ级手术室沉降菌采样共需布21个点（不包括对照）。

沉降菌最少培养皿数指出6级洁净度区域最少培养皿是4个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅱ级手术室手术区3个，所以Ⅱ级手术室手术区布点数应为4个。

沉降菌最少培养皿数指出7级洁净度区域最少培养皿是3个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅱ级手术室周边区6个，所以Ⅱ级手术室周边区布点数应为6个。

即Ⅱ级手术室沉降菌采样共需布10个点（不包括对照）。

沉降菌最少培养皿数指出7级洁净度区域最少培养皿是3个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅲ级手术室手术区3个，所以Ⅲ级手术室手术区布点数为3个。

沉降菌最少培养皿数指出8级洁净度区域最少培养皿是2个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅲ级手术室周边区6个，所以Ⅲ级手术室周边区布点数应为6个。

即Ⅲ级手术室沉降菌采样共需布9个点（不包括对照）。

医院消毒灭菌效果监测标准操作规程医院消毒是预防医院内感染的重要措施之一，消毒效果的监测是评价其消毒设备运转是否正常、消毒药剂是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标的唯一手段。

为规范消毒效果监测，特制定医院消毒灭菌效果监测的标准操作规程。

一、空气消毒效果的监测1、监测频次：每季进行。

2、采样⑴采样时间：空气消毒后4小时内、手术操作前。

⑵平板暴露法：暴露前先检查平板是否污染，是否有气泡及霉点。

将普通营养琼脂平板（直径为 9cm）放在室内各采样点处，采样高度为距地面 1.5m，采样时将平板盖打开，斜扣放于平板旁，暴露5min，在放置、收取平皿时，手不能在暴露平皿的正上方移动。

⑶布点方法：室内面积≤30m2，设内、中、外对角线上的3点，内、外点布点部位距墙1M处；室内面积＞30m2，设 4 角及中央共 5 点，4 角的布点部位距墙壁 1m 处。

图1 室内面积≤30m2布点图图2 室内面积＞30m2的布点图3、注意事项⑴采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。

⑵平板摆放如取一条对角线，避免离门近的一条。

⑶工作人员不要靠近自动门，以免影响监测结果。

4、结果判定⑴非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数≤４cfu／15min·直径9cm平皿。

⑵儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数≤4cfu/5min·直径9cm平皿。

二、手、物体表面消毒效果监测1、监测重点科室：手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科、消毒供应中心等。

2、监测频次⑴重点科室物表每月监测，工作人员手每季度监测。

管理文件一、目 的：规范洁净区沉降菌采样操作标准 二、适用范围：洁净区沉降菌采样操作 三、责 任 者：生产部、质量管理部 四、内 容：1.洁净区沉降菌采样依据：GB/T 16294-2010 《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》2.采样流程→3.采样准备 3.1培养皿准备选择Φ90mm ×15mm 规格的培养皿，培养皿盖和底盘均较平整，无损坏。

准备培养皿数量根据采样区域进行计算。

3.2培养基准备选择大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA ）或沙氏培养基（SDA ），根据实际情况选择。

4.采样前要求4.1沉降菌采样前，被测试洁净室（区）已经过消毒；4.2洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜）；4.3采样状态有静态和动态两种，采样状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明采样状态；4.4 静态采样时，培养皿暴露时间为0.5小时；动态采样时，培养皿暴露时间为4小时； 4.5静态采样时，室内测试人员不得多于2人。

5.采样：5.1洁净区域（设备）级别及代码5.2培养皿标记：洁净区代码+“-”+培养皿编号，例如，超净台1第5个培养皿标记为：A1-5。

5.3最少采样点数目 5.4采样点布局洁净区（室、设备）采样点布局备注分装间1 2 3 47 85 69 10按左图采样点布置放置培养皿，“○”代表一个培养皿。

分装准备间12 3 4 56 7 8 9 10分装准备间采样时，因内部含有周转筐，故按照左图铺设培养皿，“○”代表一个培养皿。

混合罐装间12 5 634 7 89 10混合灌装间采样时，因室内有混合罐，故按照左图铺设培养皿，“○”代表一个培养皿。

其他洁净区（室）1 32 5 6 4 7 98 10采样时根据具体洁净室代码标记培养皿，“○”代表一个培养皿。

5.5铺设培养皿5.5.1培养皿铺设时按照从洁净度级别较高的区域向洁净度级别较低的区域依次铺设，先铺设A 级区培养皿，再铺设B 级区培养皿，最后铺设C 级区培养皿。

洁净病房、洁净手术室空气细菌培养沉降法的布点方法
（洁净手术部建筑技术规范GB50333-2013）
（一）静态监测 ●测点位置： 洁净手术室：
洁净度局部6（1000） 级周围7（万）级设置11个点； 洁净度局部7（10000） 级周围8（10万）级设置7个点； 洁净度局部8（10万） 级周围8.5（30万）级设置5个点。

层流洁净室空气采样布点图
局部千级、周围万级：手术区布放5点，周
边区布放6点（长边内2点，短边内1点） 局部万级、周围10万级：手术区布放3点 （对角布点），周边区布放4点（每边内1点）
十万级：布放5点（避开送风口正下方）
注：采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m 的任意高度上。

可编辑修改精选全文完整版医院消毒灭菌效果监测标准操作规程医院消毒是预防医院内感染的重要措施之一，消毒效果的监测是评价其消毒设备运转是否正常、消毒药剂是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标的唯一手段。

为标准消毒效果监测，特制定医院消毒灭菌效果监测的标准操作规程。

一、空气消毒效果的监测1、监测频次：每季进行。

2、采样⑴采样时间：空气消毒后4小时内、手术操作前。

⑵平板暴露法：暴露前先检查平板是否污染，是否有气泡及霉点。

将普通营养琼脂平板〔直径为 9cm〕放在室内各采样点处，采样高度为距地面 m，采样时将平板盖翻开，斜扣放于平板旁，暴露5min，在放置、收取平皿时，手不能在暴露平皿的正上方移动。

⑶布点方法：室内面积≤30m2，设内、中、外对角线上的3点，内、外点布点部位距墙1M处；室内面积＞30m2，设 4 角及中央共 5 点，4 角的布点部位距墙壁 1m 处。

图1 室内面积≤30m2布点图图2 室内面积＞30m2的布点图3、考前须知⑴采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。

⑵平板摆放如取一条对角线，防止离门近的一条。

⑶工作人员不要靠近自动门，以免影响监测结果。

4、结果判定⑴非洁净手术部〔室〕、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数≤４cfu／15min·直径9cm平皿。

⑵儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供给中心、血液透析中心〔室〕、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数≤4cfu/5min·直径9cm平皿。

二、手、物体外表消毒效果监测1、监测重点科室：手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科、消毒供给中心等。

洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试是对洁净室环境中空气中悬浮微粒的数量和种类进行评估的方法之一。

沉降菌测试是通过将培养基暴露在空气中，使空气中的微生物落到培养基上生长，然后计数和鉴定这些微生物来评估洁净室的微生物污染。

以下是一般的洁净室沉降菌测试方法：
1. 准备培养基：选择适用于微生物生长的培养基，如营养琼脂培养基。

按照培养基说明制备培养基。

2. 制备沉降皿：将培养基倒入锅中，加热至液态，然后倒入含有适量培养基的沉降皿中。

3. 安置沉降皿：在洁净室中的代表性位置放置沉降皿，如工作台面、天花板等。

4. 收集样品：根据需要和测试目的，选择适当时间段收集样品。

可以采用定期采样或连续采样的方式。

5. 培养：将采集的样品放置在培养箱中，以合适的温度和湿度条件孵育。

通常情况下，温度为30-37摄氏度，孵育时间为24-48小时。

6. 计数和鉴定：在孵育结束后，观察培养皿中的菌落形成情况，并进行计数。

可以根据菌落的形态和特征，使用显微镜和生化试剂等进行鉴定。

7. 报告结果：根据实验结果，记录沉降菌的数量和种类，并参考相关标准，如ISO 14698等，评估洁净室的微生物污染级别。

需要注意的是，洁净室沉降菌测试方法可能因测试目的、要求和标准的不同而有所差异。

在进行实际测试之前，最好参考相关的测试标准和指南，并根据具体情况进行适当的调整和验证。

医院洁净手术室是整个医院病房的核心部分，它充分体现一个现代化医院的医疗管理水平。

一个合格的洁净手术室应该具备优良的设计施工、先进的净化空调设备设施、以及后期科学的运行管理保障体系，这三点缺一不可。

下文就具体带大家了解一下医院手术室洁净度检测的具体方法。

1、悬浮粒子数（1）手术室检测和洁净辅助用房洁净度级别的检测，应在系统至少已运行30min，并确认风速、换气次数、检漏和静压差的检测无明显问题之后进行。

（2）当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测，测点数不少于3点；当附近有显著障碍物时，可适当避开；应避开送风口正下方：当送风口分散时，应按全室统一布点检测，测点可均布，但不应布置在送风口正下方。

（3）每次粒子计数器采样的最小采样量5级区域应为8.6L，以下各级区域应为2.83L。

（4）测点布置应在距地面0.8m高的平面上，在手术区检测时应无手术台。

当手术台已固定时，台面上测点应高出台面0.25m，并记录在案。

（5）当在5级区域检测时，采样口应对着气流流向；当在其他级别区域检测时，采样口均应向上。

（6）当检测含尘浓度时，检测人员不得多于2人，都应穿洁净工作服，处于测点下风向的位置，减少动作。

（7）当检测含尘浓度时，除无影灯外，手术室照明灯应全部打开。

2、温湿度检测（1）室内温湿度测定应为距地面0.8m高的中心点。

检测仪器为可显示小数点后一位的数字式温湿度测量仪。

（2）测量值应通过调试大道测定时气象条件下静态能力的极值，如有疑问或建设方有要求，可在动态或最不利季节复核。

（3）测出室内的温湿度后，应同时测出当天室外温湿度。

3、噪声的检测（1）噪声检测宜在外界干扰较小的晚间进行，以A声级为准。

不足15m2的应在室中心和四角共测5点。

洁净手术室测点高度为地上1.5m，其他房间应为地上1.1m。

检测仪器宜用带倍频程分析仪的声级计。

（2）全部噪声测定之后，应关闭净化空调系统测定背景噪声，当背景噪声与室内噪声之差小于10dB时，室内噪声应按常规予以修正。

ABC药品有限公司药品生产质量管理体系质量控制文件2019年最新版编制: 日期:审核: 日期:批准: 日期:发放范围：公司各部门 2020年01月01日生效目录目的： (3)范围： (3)责任： (3)依据： (3)内容： (3)1测试方法： (3)2测试规则 (4)3结果计算 (5)文件更改履历 (7)目的：建立一个沉降菌测试操作规程。

范围：洁净区沉降菌检测。

责任：检验员、质检科长、质保科长、质量总监。

依据：《中华人民共和国药典》2000年版内容：1 测试方法：1.1 方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。

1.2 所用的仪器和设备：1.2.1 高压灭菌锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。

1.2.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。

1.2.3 培养皿：一般采用由90mm×15mm的玻璃培养皿。

1.2.4 培养基：药典认可的培养基。

1.3 测试步骤：1.3.1 采样方法：将已制备好的培养皿放置于采样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露 0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。

1.3.2 培养1.3.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

1.3.2.2 在30℃－35℃培养箱中培养，时间不少于48h。

1.3.2.3 培养应作对照培养。

1.3.3 菌落计数1.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5—10倍放大镜检查，有否遗漏。

1.3.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

1.4 注意事项：1.4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

1.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。

1.4.3 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的茵落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法医药工业洁净室（区）的沉降菌的测试方法被用于收集洁净室（区）内的空气微生物和评估空气微生物活动水平。

沉降菌指的是通过重力和空气流动, 可以从空气中悬浮物中归集在底部，其中包括灰尘以及其他悬浮物。

沉降菌微生物检测方法已被广泛应用于医药行业的生物洁净室（区）的清洁度评估和风险评估中，其中包括药品研发，生产，包装和测试等诸多阶段，对空气中悬浮微生物的活动水平进行检测。

沉降菌测试的步骤包括:1、现场采样：设置采样点，确定采样时间和时间跨度，并在整个洁净室（区）空间内建立分布均匀的采样点，在此期间进行空气样本采集，以此来采集有代表性的空气悬浮物。

2、室内空气样品保存及处理：在空气样品采集完毕后，应采用乙醚、尼龙膜或其它能够有效保存样��微生物活性的特殊材料进行封装，然后将封装后的样品放置在4℃-8℃的低温下保存，减少空气样品中的细菌的活动，以防止空气样品的污染，同时能够有效地延长样品的保存周期。

3、室内空气样品富集：将保存室内空气样品，采用自然富集法进行富集，以便按照正规的检测流程操作，以便获取更加准确的测试结果。

4、室内空气样品检测：采用可用于室内空气悬浮物检测的干式微生物快速检测技术（例如TBDT荧光PCR，快速真菌检测，快速测菌等），在空气中检测洁净室（区）悬浮微生物的活动水平。

以上就是医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法，包括现场采样、室内空气样品保存和处理和测试等步骤，步骤之间紧密耦合，保证了检测结果的准确性。

另外，此测试方法可同时检测洁净室（区）内悬浮菌的种类和数量，以及分析洁净室（区）不同位置悬浮菌数量的分布，以便进一步评估洁净室（区）的清洁度情况。

同时，由于洁净室（区）的清洁度要求不断提高，因此审核计划的定期监督应是一个不可或缺的环节，根据前期审核数据对现有控制系统进行去除和定期检查，以确保实验室和洁净室（区）空气微生物活性水平在一定范围内稳定。

沉降菌测试如何布点首先，测试区域的大小是布点的首要考虑因素。

通常情况下，测试区域的大小应该与整个区域的大小成比例。

例如，如果要测试一个办公室区域，可以选择在办公桌上、墙角、窗帘上等位置布点，以覆盖整个区域。

其次，测试区域的位置也是布点的重要因素。

测试位置的选择应该尽可能地代表该区域的微生物负荷情况。

可以选择典型的、高风险的位置进行测试，如厕所、食堂、医院等区域，以获取更准确的测试结果。

在进行布点前，需要确定合适的采样设备。

目前常用的采样设备有空气采样器、接触法采样器等。

根据测试需求和采样设备的特点，选择合适的设备进行布点。

不同采样设备的使用和布点方式可能有所不同，需要根据设备使用说明进行操作。

另外，布点时需要考虑采样设备的数量。

通常情况下，可以根据测试区域的大小和形状，以及测试时间的长短，确定采样设备的数量。

如果测试区域较大，可以选择多个采样设备进行布点，以获取更全面的测试结果。

在布点过程中，还需要考虑采样时间的选择。

采样时间的选择应该根据测试需求和测试设备的要求来确定。

一般情况下，采样时间应至少达到15分钟以上，以确保足够的空气样本被采集到。

最后，在进行布点前，需要对测试区域进行清洁和准备工作。

清洁工作包括清理垃圾、整理物品、消毒空气需要测试的区域等。

准备工作包括准备好采样设备、调整设备参数、确认测量方法和标准等。

总之，沉降菌测试布点需要考虑测试区域的大小、位置、采样设备的选择和数量、采样时间等一系列因素。

合理的布点能够帮助我们获取准确的测试结果，为环境卫生评估和微生物控制提供有力的依据。

洁净手术室沉降法测定沉降菌浓度采样布点法手术室的级别分为：Ⅰ级手术室，Ⅱ级手术室，Ⅲ级手术室，Ⅳ级手术室。

Ⅰ-Ⅲ级手术室有手术区和周边区之分，手术区为需要特别保护的手术台及其周围区域，余下区域均为周边区。

Ⅳ级手术室不分手术区和周边区。

各级手术室不同区域的空气洁净度级别不同，有5级、6级、7级、8万级及8.5级之分。

GB50333-2013中（13.3.18.4）要求采用沉降法测定沉降菌浓度时，细菌浓度测点数要和被测区域含尘浓度测点数（13.3.11－2）相同，同时应满足表13.3.18-2 规定的最少培养皿（不含对照皿）数的要求。

也就是说按这两种方法中布点数多的布点。

表13.3.18-2 沉降菌最小培养皿数表13.3.11-2 测点位置表上表明确指出5级洁净度区域最少培养皿是13个；而含尘浓度的检测布点方法是（13.3.11.2）Ⅰ级手术室手术区5个，所以在测沉降菌的时候，Ⅰ级手术室手术区布点数应为13个。

沉降菌最少培养皿数明确指出6级洁净度区域最少培养皿是4个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅰ级手术室周边区8个，所以Ⅰ级手术室周边区布点数应为8个，即Ⅰ级手术室沉降菌采样共需布21个点（不包括对照）。

沉降菌最少培养皿数指出6级洁净度区域最少培养皿是4个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅱ级手术室手术区3个，所以Ⅱ级手术室手术区布点数应为4个。

沉降菌最少培养皿数指出7级洁净度区域最少培养皿是3个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅱ级手术室周边区6个，所以Ⅱ级手术室周边区布点数应为6个。

即Ⅱ级手术室沉降菌采样共需布10个点（不包括对照）。

沉降菌最少培养皿数指出7级洁净度区域最少培养皿是3个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅲ级手术室手术区3个，所以Ⅲ级手术室手术区布点数为3个。

沉降菌最少培养皿数指出8级洁净度区域最少培养皿是2个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅲ级手术室周边区6个，所以Ⅲ级手术室周边区布点数应为6个。

即Ⅲ级手术室沉降菌采样共需布9个点（不包括对照）。