1株髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒感染性克隆的构建与病毒拯救

禽白血病病毒多重PCR检测法的建立及初步应用管宏伟;吴润;赵春林;刁小龙;罗鹏;何轶群【期刊名称】《甘肃农业大学学报》【年(卷),期】2012(047)005【摘要】根据GenBank中登录的禽白血病病毒A、B、J亚群的核苷酸序列设计合成了3对引物,各对引物可分别扩增出大小约为195、260、924 bp的核苷酸片段；经优化建立禽白血病病毒多重PCR检测法,并进行其敏感性试验及对马立克病病毒(MDV)、火鸡疱疹病毒(HVT)、新城疫病毒(NDV)、传染性囊病病毒(IBDV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和DF-1细胞基因组的特异性试验；应用该方法对1294份临床样品进行禽白血病病毒检测,对阳性检出样品抽样进行测序鉴定.结果表明:该方法的最小检出拷贝数为103,特异性试验均为阴性,检出临床样品中的核苷酸片段与参考毒株核苷酸序列的同源性达98％以上,符合率100％,具有良好的特异性、敏感性和符合率,可为禽白血病病毒感染的临床诊断及流行病学调查研究提供有效借鉴.【总页数】6页(P12-17)【作者】管宏伟;吴润;赵春林;刁小龙;罗鹏;何轶群【作者单位】甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州730046;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.H5、H9亚型禽流感病毒及鸭坦布苏病毒多重 PCR 检测方法的建立及初步应用[J], 李海琴;傅光华;黄瑜;韦启鹏;唐维国2.猪瘟病毒猪细小病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用 [J], 赵耘;秦玉明;张广川;赵启祖;宁宜宝;戴志红;谢磊3.A、B、J和K亚群禽白血病病毒多重PCR检测方法的建立及应用 [J], 俞燕;周生;李建梅;高明燕;程旭;姜逸;赵秀美;徐步4.猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步临床应用 [J], 丁庆文;闫晓光;张红垒;李倩倩;张云飞;舒祥力;单法;李林姣;胡慧5.J亚群禽白血病病毒TD-PCR检测方法的建立及初步应用 [J], 杭柏林;秦爱建;钱琨;金文杰;沈海玉;吴晓平;仇钰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

J亚型禽白血病病毒的拯救与鉴定王超;缪华先;谢宝婵;张伟伟;吴润;刘光清【摘要】为鉴定含J亚群禽白血病病毒(ALV-J)全长cDNA分子克隆(pBlALV)的感染性,首先将pBlALV转染CEF细胞,拯救出病毒(rALV),然后连续传代3次,对拯救病毒进行增殖培养.分别利用RT-PCR、western blot、IFA等方法,对拯救病毒进行鉴定,并应用实时荧光定量PCR方法对拯救病毒的复制动力学进行了测定.研究结果证明,本研究成功拯救出了具有感染性的rALV-J,为研究禽白血病的致病机理和探讨新的防制措施等提供了良好的ALV的反向遗传操作技术平台.%To confirm the infectivity of the fiill-length cDNA clone (pBlALV) of subgroup J avian leucosis virus (ALV-J) HPRS103 strain, pBlALV was transfected into chicken embryo fibroblast (CEF) cells and the ALV was rescued. The rescued ALV (rALV-J) was identified by RT-PCR, western blot and indirect immunofiuorescence assay, respectively. Besides, the real-time PCR was applied to evaluate the replication dynamic of the rescued virus. The results showed that the rALV-J was able to well replicate in CEF. This study provides an useful platform for investigation of the pathogenesis and molecular biology of ALV-J.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2011(033)011【总页数】4页(P837-840)【关键词】J亚群禽白血病病毒;ALV-J;感染性克隆【作者】王超;缪华先;谢宝婵;张伟伟;吴润;刘光清【作者单位】甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;惠州出入境检验检疫局,广东惠州516001;惠州出入境检验检疫局,广东惠州516001;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241【正文语种】中文【中图分类】S852.65禽白血病是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus，ALV)和禽肉瘤病病毒(Avian sarcoma virus，RSV)引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称[1]。

专利名称：一种番鸭细小病毒感染性克隆的构建及拯救方法专利类型：发明专利
发明人：王建业,黄钰,王志仙,凌珏怡,朱国强,孟霞,朱礼倩
申请号：CN201710299948.5
申请日：20170502
公开号：CN107012170A
公开日：
20170804
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种番鸭细小病毒(Muscovy duck
parvovirus,MDPV)感染性克隆的构建和拯救方法。

该方法是将MDPV的完整基因组克隆入载体质粒pBSKN，获得重组质粒；将重组质粒与转染试剂混合后，通过绒毛尿囊膜途径接种非免疫番鸭胚，重组质粒在番鸭胚中得到拯救；所述pBSKN载体，是将商品化质粒pBluescript II(SK)多克隆位点原有的EcoRV酶切位点用NcoI位点替换而得到。

产生的感染性病毒可致死番鸭胚，拯救病毒与亲本病毒对雏番鸭具有相近的致死率。

该拯救方法操作简便高效，避免了转染原代细胞带来的繁琐和低效问题，在MDPV反向遗传学研究和疫苗创制上具有潜在应用价值。

申请人：扬州大学
地址：225009 江苏省扬州市大学南路88号
国籍：CN
代理机构：南京知识律师事务所
代理人：卢亚丽
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LTR对J亚群禽白血病病毒感染的影响冯少珍;李娇;吴晓婵;曹伟胜;廖明【摘要】为探讨LTR基因在骨髓瘤病变型J亚群禽白血病病毒(ALV-J) NX0101致病中的作用,利用反向遗传将血管瘤病变型ALV-J HN06株中两端LTR元件替换至NX0101株的相应位置,拯救出重组病毒NX-HNLTR株.人工接种7日龄SPF雏鸡,分别检测NX0101株和NX-HNLTR株对鸡体的影响.感染鸡生长都较慢.感染NX0101株的鸡,胸腺指数和腔上囊指数明显比对照组低,脾脏指数与对照组相比波动较大,骨髓和脾脏在攻毒后3周可检测到病毒整合到基因组中,胸腺和腔上囊在攻毒后6周才检测到.感染NX-HNLTR株的鸡脾脏指数明显比对照组低,攻毒后2周可检测到病毒整合到脾脏基因组中,骨髓和胸腺分别在攻毒后3周和6周检测到.结果提示,LTR对NX0101株感染鸡的免疫器官有一定的影响.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2012(048)003【总页数】4页(P3-6)【关键词】J亚群禽白血病病毒;骨髓瘤病变型;长末端序列;病毒基因整合【作者】冯少珍;李娇;吴晓婵;曹伟胜;廖明【作者单位】华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.3J亚群禽白血病病毒（Subgroup J avian leukosis virus，ALV－J）属于禽α反转录病毒属。

Payne等在1991年首次在肉鸡中发现 ALV－J［1］，我国在1999年证实 ALV－J的存在［2－3］，2002年，首次发现蛋鸡存在J亚群禽白血病［4－5］。

但不到10年的时间，全国已有相当多的鸡场发现该病，其主要临床表现为骨髓瘤、血管瘤、淋巴瘤、纤维肉瘤等多种肿瘤［6］，造成鸡群免疫抑制，并成为其他疾病的诱因。

J亚群禽白血病病毒感染DF-1细胞的蛋白质组学研究的开题报告一、选题的背景和意义：白血病是一种常见的疾病，其发生率不断增高，尤其是在家禽群体中的发生越来越严重。

白血病是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）引起的一种疾病。

ALV是一种肿瘤病毒，能够引起家禽血液病理学、免疫学变化和造成家禽免疫抑制等症状。

该病毒属于反转录病毒，且具有极强的致癌性和快速变异的特点。

目前，在家禽养殖业中，白血病对养殖业的发展造成了很大的威胁和影响。

因此，了解ALV感染后细胞的生物学变化对于研究ALV致病机理以及研究相关的治疗手段都具有重要意义。

蛋白质组学作为一项高通量技术，在研究ALV感染后的细胞生物学变化方面具有广泛的应用潜力。

当前，利用蛋白质组学技术可以对ALV感染后的细胞进行全面的蛋白质组分析，以发现新的标志蛋白和病毒生物学行为的调节蛋白，并对其功能进行初步研究，为进一步研究ALV的致病机理和疗效评价提供基础数据。

二、研究的主要内容和方法：（1）主要内容：本研究旨在应用蛋白质组学技术研究ALV感染后DF-1细胞的蛋白质组学变化，探索ALV感染调控蛋白质的变化和功能，为后续研究ALV的致病机理和疗效评价提供基础数据。

（2）研究方法：通过纯化ALV感染后DF-1细胞的总蛋白，应用蛋白质分离、鉴定和功能分析等技术手段对ALV感染后DF-1细胞蛋白质组学进行系统研究并分析相关蛋白质的功能。

具体包括：1.纯化ALV感染后DF-1细胞的总蛋白。

2.应用二维凝胶电泳对ALV感染后DF-1细胞的总蛋白进行分离。

3.利用液相色谱质谱技术（LC-MS/MS）鉴定分离出的蛋白质并建立蛋白质质量数据库。

4.利用蛋白质组学分析软件对LC-MS/MS 数据进行定量分析和生物信息学分析。

5.设计和实施RNA干扰等技术对表达差异蛋白的功能进行深入研究。

三、研究的预期目标和意义：（1）预期目标：1. 研究ALV感染后DF-1细胞的总蛋白质组学变化；2. 提供ALV感染调控蛋白质的变化和功能基础数据；3. 为后续研究ALV的致病机理和疗效评价提供基础数据。

专利名称：一种重组J亚群禽白血病病毒感染性克隆质粒及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：廖明,赖汉漳,曹伟胜,张贺楠,辛朝安
申请号：CN200910213800.0
申请日：20091215
公开号：CN101899465A
公开日：
20101201
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种重组J亚群禽白血病病毒感染性克隆质粒及其制备方法和应用。

本发明是将J亚群禽白血病病毒前病毒基因两端的长末端重复序列替换为E亚群禽白血病病毒前病毒基因两端的长末端重复序列，将其插入载体中，以此构建了重组J亚群禽白血病病毒感染性克隆质粒，得到序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明重组J亚群禽白血病病毒克隆质粒经转染得到的重组病毒株的复制能力和致病性明显弱于自然的J亚群禽白血病病毒，但可表达J亚群禽白血病病毒的结构蛋白，具备J亚群禽白血病病毒的抗原性，可被J亚群禽白血病病毒特异性单克隆抗体JE9所识别。

本发明病毒克隆质粒为制备J亚群禽白血病病毒弱毒性活疫苗提供了材料和方法借鉴。

申请人：华南农业大学
地址：510642 广东省广州市天河区五山华南农业大学
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：林丽明
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