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课堂探究探究点一培养基的成分与配置原则·问题导引·组成生物体的化学元素归根结底是从哪里来的？提示：组成生物体的化学元素归根结底是从无机自然界获取的。
·名师精讲·1．培养基的营养2（1）目的要明确。
要根据培养的微生物的种类、培养的目的等，选择原料。
如自养微生物可以用无机物作碳源、氮源。
（2）营养要协调。
配制培养基时，必须注意各种营养物质的浓度和比例。
如蔗糖是多种微生物的主要营养物质，但高浓度的蔗糖会抑制微生物的生长。
其中碳源和氮源的比最为重要。
例如：碳氮比为4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。
（3）pH要适宜。
因为各种微生物适宜生长的pH范围不同。
【例题1】下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（）A．是碳源的物质不可能同时是氮源B．凡是碳源都提供能量C．除水以外的无机物只提供无机盐D．无机氮源也能提供能量解析：A、B两项错误，有的碳源只提供合成含碳物质的原料，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。
除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。
二氧化碳可作为自养型微生物的碳源，NaHCO3可作为自养型微生物的碳源和无机盐，而NaCl则只能提供无机盐，故C项错误。
无机氮源也可以提供能量，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。
答案：D方法点拨含C、H、O、N的化合物既是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量；有些无机物也可作为碳源、氮源或能源。
变式训练1 含C、H、O、N的大分子有机化合物可以作为（）A．异养微生物的氮源、能源B．异养微生物的碳源、能源C．自养微生物的碳源、氮源、能源D．异养微生物的碳源、氮源、能源解析：含C、H、O、N的大分子有机化合物是蛋白质，因此可给异养微生物提供碳源、氮源、能源。
教学准备1. 教学目标一、知识目标:1、阐明微生物培养的目的和意义;2、说明平板划线法和稀释涂布平板法等操作的基本方法和目的二、能力目标:1、分析实验思路的确定和形成的原因,分析实验流程,对比前后实验,归纳共性,分析差异2、提升合作探究的能力三、情感、态度、价值观:关注生物学知识与现实生活的联系。
2. 教学重点/难点教学重点:平板划线法和稀释涂布平板法操作教学难点:对实验结果的分析3. 教学用具4. 标签教学过程【导入】【PPT】用不同微生物不同菌落颜色制造出来的有生命的艺术品(微生物的美)什么是菌落?什么是培养基?【PPT】自制艺术培养基、有杂菌的培养基简单说明消毒、灭菌一、培养基的配制:【问题】实验室中需要培养基去培养我们想要的微生物,如何评价培养基的制作是否合格?PPT呈现几个固体培养基图片:①倒平板溅到壁上的培养基②有杂菌菌落的培养基学生分析原因,教师总结:1、水、碳源、氮源、无机盐等营养物质是否符合微生物的生理习性。
(如自养微生物提供无机碳源、固氮微生物提供无机氮源等等)2、倒平板时不要溅到壁上,在酒精灯火焰旁进行且动作要快3、培养基灭菌情况如何(未接种的培养基在恒温箱中培养1-2d后无菌落生长)4、培养基的放置方式(倒置原因)(课前已将培养基配制并灭菌完毕)【活动】平板划线法接种培养基制作合格后,如何将微生物接种到培养基上?本实验的目的是为了获得某种微生物的单个菌落,也就是纯化某种微生物。
(回顾微生物艺术品的图片,给学生点提示)(一)平板划线法:PPT呈现实验步骤,某些步骤后带有问题,学生边做实验边思考:(实验前让学生检查实验器材)实验前提示:1.酒精灯火焰和火焰周围1-2cm范围分别有什么作用;2.板书划线方法。
(教师可演示)①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环,并打开酵母菌的菌种试管的棉塞。
(为什么要等接种环冷却?)③将菌种试管口通过火焰(原因?)④将冷却的接种环伸入到菌液中蘸取一环菌种。
专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养（高二生物）第1课时培养基的基础知识无菌技术【学习目标】1学生预习教材P14-15 “（一）培养基”，结合必修的相关知识，能够整理归纳出培养基的基础知识：培养基的用途和种类；培养基的组成成分及作用2学生预习教材P15 “（二）无菌技术”的内容，结合生活经验整理归纳无菌技术的操作对象和相关概念3课堂上通过教师提示，学生合作探究，学生能够对消毒和灭菌进行区别，填表整理归纳消毒和灭菌的方法（参考教材P85, 86的内容）4课堂上通过观看视频，学生能够掌握消毒和灭菌的常用方法重点培养基的组成成分及作用消毒和灭菌的常用方法难点消毒和灭菌的常用方法【课前预习】一培养基阅读教材P14-15 “（一）培养基”，整理归纳出培养基的基础知识1概念：人们按照微生物对______________ 的不同需求，配制出的供其_____________2营养构成（1）物质构成(2) 一些条件要求培养乳酸杆菌需要添加 ____________________培养霉菌需要调节pH为_______ ；培养细菌需要调节pH为_________ 培养厌氧微生物需要提供 _________ 条件3培养基的类型二无菌技术阅读教材P15 “(二)无菌技术”的内容，结合生活经验整理归纳无菌技术的操作对象和相关概念，完成填空和连线获得纯净培养物的关键是无菌技术的对象操作的方法实验操作的空间、操作者的衣着和手培养微生物的器皿、接种用具和培养基操作在酒精灯火焰附近进行已经灭菌处理的材料用具与周围物品 消毒【预习自测】判断正误1培养自养型微生物时，培养基中可以不用额外添加碳源（）2制备培养基时，营养物质的浓度越高越好（） 4牛肉膏只能为微生物的生长提供碳源（） 5消毒和灭菌是一回事（）【课堂学习，合作探究】 二无菌技术阅读教材P15 “（二）无菌技术”的最后一段内容以及全部楷体字部分，完成F 面内容的归纳总结（可参考P85, P86的内容）（1） __________________ 消毒：指使用 的物理或化学方法杀死物体表面或内部的—________________ （不包括芽抱和抱子）o（2） ____________________ 灭菌：指使用 _______________________________ 的理化因素杀死物体内外 ______________ ,包括 _____________O2比较项目理化因素的作用 强度消灭微生 物的数量芽砲和抱子能否被消灭消毒灭菌3方法条件作用对象消 毒100°C,煮沸 5〜6 min杀死微生物的营养细胞和一部分芽抱70〜75°C 煮 30 min 或 80°C 煮 15 min不耐高温的液体70%的酒精 对双手消毒避免实验操作时周围环境的微生物污染避免接触体培养基中没有水，液体培养基中含有水（5%的石炭酸(苯酚) 对空气消毒一定浓度的乳酸、食醋通过熏蒸对空气进行消毒紫外线法紫外线照射30 min物体表面或空气中的微生物灭菌在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可以对试管口、瓶口灭菌在干热灭菌箱内，160〜170°C条件下，加热1〜2 h耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等在高压蒸汽灭菌锅内，121°C, 100kPa,火菌15〜30 min【巩固练习】力提升1, 2, 5练习册P18例题1,例题2； P19随堂演练即时巩1, 4 (1)； P19课时过关能。
教学准备1. 教学目标了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术2. 教学重点/难点无菌技术的操作3. 教学用具4. 标签教学过程微生物生存的环境和营养物质一.培养基：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、无机盐1.基本成分：自养微生物CO2、CO32-、HCO3-无机碳源：⑴碳源有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等异养微生物NH4＋、NO3-（为硝化细菌提供N源和能源）⑵氮源有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源微生物生存的环境和营养物质一.培养基：碳源、氮源、水、无机盐1.基本成分：维生素、碱基等（生长因子）2.特殊营养：（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求：4.种类：物理性质：液体培养基固体培养基化学成分：天然培养基合成培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
5. 配制原则⑴目的明确：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳型（CO2碳源）异养型：⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当加入缓冲剂⑶适宜的pH值：细菌偏碱，真菌偏酸防止外来杂菌的污染二.无菌技术：1.消毒与灭菌：强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）;较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）思考请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。
如果需要，请选择合适的方法。
（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手2.无菌范围：操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程酒精灯旁操作二.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：1.纯化大肠杆菌的方法：平板划线法和稀释涂布平板法⑴平板划线法：划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）⑵稀释涂布平板法课题成果评价（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
人教版高中生物选修一专题2课题1微生物的实验室培养教学案含解析.微生物的实验室培养1.培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质。
2．消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3．实验室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用紫外线或化学药剂进行消毒，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。
4．固体培养基的配制过程为：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板。
5．微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
6．长期保存菌种可以采用甘油管藏法。
一、培养基1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
2．种类：(按物理性质分)3．营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、无菌技术1．获取纯净培养物的方法.消毒灭菌较为温和强烈物体表面或内部的部分微生物物体内外所有的微生物不能能(2)常用方法：[连线]三、大肠杆菌的纯化培养1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)操作步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板(2)倒平板的方法及注意事项：①请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
②甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
③丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。
2．纯化大肠杆菌(1)纯化原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
.(2)接种方法：①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
..(3)培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_℃恒温箱中，培养12.h和24.h后，分别观察、记录。
四、菌种的保存[连线]1．不同培养基的具体配方不同，但一般都含(..)A．碳源、磷酸盐和维生素B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素解析：选C.培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还应考虑pH、特殊营养物质及O2等条件。
专题2 微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养（高二生物）第2课时制备培养基纯化大肠杆菌（方法一）【学习目标】1 学生预习教材P16-17“(一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基”的内容,整理归纳出制备细菌培养基的方法2 学生预习教材P17“倒平板操作”的内容，初步了解操作步骤的要点3学生预习教材P18“（二)纯化大肠杆菌”的内容,初步了解平板划线法以及操作步骤4课堂上通过观看视频，教师提示,学生合作探究，学生能够准确理解并掌握(1）“制备牛肉膏蛋白胨固体培养基”技术操作以及相关的注意事项；(2)“倒平板操作”的技术操作以及注意事项和原因（3）“平板划线法”的技术操作以及注意事项和原因重点倒平板操作技术平板划线法技术难点倒平板操作技术平板划线法技术【课前预习】一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基阅读教材P16—17“（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基”的内容，整理归纳出制备细菌培养基的方法1 制备流程：→→→→倒平板（1)计算100mL培养基中各种成分的用量：牛肉膏蛋白胨NaCl 琼脂水(2）称量时的动作要求是：，原因：（3）溶化时需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么?(4）灭菌培养基和培养皿的灭菌方法是否一样？（5）倒平板仔细阅读教材中“倒平板操作”的图,文，初步体会操作要点。
①在火焰旁右手，左手；②使锥形瓶的瓶口;③左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖.④待平板冷却凝固后，将平板。
思考:倒平板为什么需要在酒精灯火焰附近操作进行？二纯化大肠杆菌阅读教材P18“(二）纯化大肠杆菌”的内容，观看视频，初步了解平板划线法以及操作步骤1常用的微生物接种方法有和;还有和等。
这些技术的核心都是要，保证2平板划线法:是通过在琼脂固体培养基表面的操作,将的菌种逐步分散到培养基的表面。
最后可以分离到由细胞繁殖而来的肉眼可见的，这就是。
阅读P18“平板划线操作”的图，文字，初步了解该操作的方法。
【预习自测】1琼脂在牛肉膏蛋白胨培养基起碳源的作用（)2牛肉膏蛋白胨培养基的配制过程中,水要一次加够。
选修 1 专题 2 课题 1 微生物的实验室培育教课设计一、课题目标1.知识目标a.认识有关培育基的基础知识。
b.认识消毒和灭菌方法。
2.能力目标a.进行无菌技术操作。
b.进行微生物培育。
3.感情目标形成勇于实践、谨慎务实的科学态度和科学精神。
二、课题重点无菌技术操作。
三、课题难点无菌技术操作。
四教课流程教课教师活动学生流程活动环节1. 专题导入：供给章页图资料和微生物有关图片，解说微生物与人类的亲密关阅一：系，导入本专题。
读、课程导入资料：生物学的发展史表示，诸多革命性改变人类对生命认识的事件，都与微倾生物有着千头万绪的联系。
比如，肺炎双球菌转变实考证明DNA是遗传物质，听。
青霉素的发现，第一个在和DNA分子的体外建立等。
微生物包含五类：病毒、细菌、放线菌、真菌、野生动物。
2.课题导入：解说课题背景和讲堂目标。
课题背景：19 世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭到毁坏性打击。
在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。
经过一番研究，法国科学家巴期德发现，致使生产失败的本源在于发酵物混入杂菌。
由这人们认识到保持培育物纯净的重要性。
防备杂菌入侵，获取纯净的培育物，是研究和应用微生物的前提。
在实验室培设计企图情形导入本章和本节目标。
环节二：解说新课养微生物，一方面需要为培育的微生物供给适合的营养和环境条件，另一方面需要保证其余微生物没法混入。
在本课题，我们将经过培育大肠杆菌实验，学习微生物培育的基本技术。
课题目标： a. 认识有关培育基的基础知识； b. 进行无菌技术的操作；c. 进行微生物的培育。
一、基础知识（一）培育基1.观点：解说培育基观点：由人工方法配制而成的，专供微生物生长生殖使用的混淆营养基质。
2.种类展现培育基有关图片，解说依据物理性质区分的培育基种类、用途。
3.成分（ 1）基本成分展现 1000mL 牛肉膏蛋白胨培育基的营养构成表格，让学生剖析回答以下问题。
培育基成分供给的主要营养物质牛肉膏 5g碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨 10g氮源和维生素NaCl 5g无机盐H2O定容至 1000ml氢元素、氮元素问题 1：培育基包含哪些基本成分？水、碳源、氮源、无机盐问题 2：从细胞的化学元素构成来看，培育基中为何都含有这些营养成分？阅认识读、培育倾基相听。
专题1 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养【学习目标】1.了解有关培养基的基础知识2.进行无菌技术的操作3.进行微生物的培养【重点难点】重点：无菌技术的操作难点：无菌技术的操作【预习案】任务一、基础知识1.培养基（1）培养基的种类包括培养基和培养基等。
（2）培养基的化学成分一般都含有、、、四类营养成分，（3）在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对、以及等的要求。
例如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加；培养霉菌时需要将培养基的PH调至；培养细菌时需要将培养基的PH调至；培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件2.无菌技术（1）获得纯净培养物的关键是。
避免杂菌污染的方法主要包括以下四个内容：①②③④（2）消毒是指灭菌是指（3）实验室常用的消毒方法是，此外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用、等。
常用的灭菌方法有、、，此外，实验室里还用或进行消毒。
任务二、实验操作1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤：→→→→倒平板2.纯化大肠杆菌（1）微生物接种的方法中最常用的是和。
平板划线法是指。
稀释涂布平板法是指。
【探究案】探究点一概括制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤。
认真阅读P17倒平板操作过程，并回答讨论的问题。
探究点二微生物纯化培养技术中的平板划线法和稀释涂布平板法的原理分别是什么？探究点三认真阅读P18平板划线法的操作过程，用红笔画出关键词，并回答讨论的问题。
探究点四认真阅读P19稀释涂布平板法的操作过程，用红笔画出关键词，并回答讨论的问题。
【训练案】1．下列有关培养基的叙述正确的是 ( )A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个菌落2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含( )A．碳源、磷酸盐和维生素 B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐 D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素3．获得纯净培养物的关键是 ( )A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B．接种纯种细菌C．适宜环境条件下培养D．防止外来杂菌的入侵4．下列常用的无菌操作中错误的是 ( )A．用酒精擦拭双手 B．用氯气消毒水源C．验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭5．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板6．有关倒平板的操作错误的是 ( )A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置7．有关平板划线操作正确的是 ( )A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C．沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养8．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是 ( )A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．再放在适宜条件下培养D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落9．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是 ( )A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染C．没必要放人未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用10．自养生物唯一碳源的是（）A．糖类 B．石油 C．二氧化碳 D．花生粉饼11．菌种保存控制的条件是（）（1）湿度（2）低温（3）干燥（4）有光（5）隔绝空气（6）适当有氧A．（1）（4）（6） B．（2）（3）（6） C．（1）（5）（6） D．（2）（3）（5）12．下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（）A．含碳有机物 B．蛋白胨C．含碳无机物 D．花生粉饼等天然物质13．平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（）A．利于大肠杆菌的接种 B．防止杂菌污染C．利于培养的冷却 D ．防止皿盖冷却水倒流入培养基14．含C、H、O、N的大分子化合物可以作为（）A．异养微生物的氮源、能源B．异养微生物的碳源、氮源C．自养微生物的氮源、能源、碳源 D．自养微生物的氮源、能源、碳源15. 关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量16. 下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A.防止杂菌污染B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌D.灭菌必须在接种前17．鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在中保温1-2天看有无，如果没有说明制作合格，反之则不合格。
中学高效课堂高二生物选修1导学案课题专题2 课题1 微生物的实验室培养导学案备课时间授课时间编号备课教师备课组长课型学习目标1.了解培养基的用途、种类及一般成分，2.掌握培养基制作的一般的步骤，3.掌握微生物分离中的划线法和涂布法。
4.学会一般的消毒、灭毒的方法，进行无菌技术的操作。
德育渗透通过本节学习，了解和掌握生物技术在日常生活中的应用，所以要认真学好生物知识。
学习重点培养基的制备、微生物的培养的操作。
学习难点培养基的制备和微生物的分离。
学法指导课前预习，完成自主学习内容。
课前阅读教材，完成自主学习部分，为课上合作探究作好准备。
自主学习内容教师活动（一）培养基1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其营养基质称为培养基。
可分为培养基和培养基。
2．营养构成：各种培养基一般都含有水、、和无机盐，此外还要满足微生物生长对、特殊营养物质以及氧气的要求。
3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。
（二）无菌技术A、获得纯净培养物的关键是防止外来的人侵，具体操作如下：1．对实验操作的、操作者的和进行清洁和消毒。
2．将用于微生物培养的、接种用具和培养基等器具进行。
3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。
4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。
B、消毒和灭菌1．消毒是指使用较为的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。
常用的方法有消毒法和消毒法。
2．灭菌是指使用的理化因素杀死物体内外的微生物。
常用的方法有：灭菌、灭菌、灭菌。
（三）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板1.计算：根据比例，计算100mL培养基各成分用量。
2.称量：牛肉膏较黏稠，可用玻棒挑取，同一同称量。
称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。
3.溶化：加水加热熔化牛肉膏与称量纸→取出称量纸→加入蛋白胨和氯化钠继续加热→加入→用蒸馏水定容到100mL（整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）。
专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养（高二生物）第3课时 纯化大肠杆菌（方法二）结果分析与评价菌种的保藏【学习目标】1学生预习教材P19内容，结合第2课时的学习，初步整理归纳出稀释涂布平板法的操作过程2课堂上通过观看视频，教师提示，学生合作探究，学生能够准确理解并掌握（1） “稀释涂布平板法”操作技术；（2） “稀释涂布平板法”的操作注意事项以及原因3对本实验的结果进行科学的分析和评价 重点稀释涂布平板法实验结果的分析和评价 难点稀释涂布平板法 【课前预习】 （-）稀释涂布平板法阅读教材P19 “稀释涂布平板法”的相关内容，整理归纳出稀释涂布平板法的操作过程1稀释涂布平板法：将菌液先进行一系列的 _________________ ,然后将不同稀释度的培养基的表面，进行培养。
如果稀释度足够高,______________ 和 ______________2系列稀释操作认真阅读教材P19关于该操作的图，文字，解决下列问题:（1）该操作过程中涉及到了哪些无菌操作的措施？（2）如果原始菌液的细菌密度是108个/Ml,请计算：理论上6支试管中的细菌 密度分别是多少？则能在培养基表面形成菌落。
该方法分为两个环节:种的保藏方法3涂布平板操作（1）涂布平板操作过程中使用的接种工具是什么？（2）该操作过程中涉及到了哪些无菌操作的措施?【预习自测】1以下操作用到接种环的是（ ）A 平板划线操作B 系列稀释操作C 涂布平板操作D 倒平板操作 2微生物的接种技术最常用的有（）①平板划线法②稀释涂布平板法③斜面接种④穿刺接种A ①②③B ①②C ②③④D ①②③④3稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。
下列相关叙述错误的是（ ）A 操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B 需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面C 不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D 操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理 4涂布平板操作需要用到（ ）1系列稀释操作向试管中注入菌液时，为什么要用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次?2涂布平板操作准确理解教材中的2个注意事项3两种纯化细菌的方法的比较A 接种环、滴管、酒精灯B 接种环、移液管、酒精灯C 涂布器、移液管、酒精灯【课堂学习，合作探究】 （-）稀释涂布平板法D 涂布器、接种环、酒精灯结合预习内容，观看视频，思考以下问题, 整理好答案（三）微生物的培养接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37°C恒温箱内培养，观察记录结果.思考？为什么放置一个未接种的培养基于37°C恒温箱内培养三结果分析与评价1如何判断大肠杆菌的分离纯化成功了？2未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？3如果接种后的培养基上有不同形态的菌落，请分析原因4培养12h和24h后的菌落大小，菌落分布位置一样吗？分析原因? 四菌种的保藏完成教材P20 “课题延伸”的学习，填写下表【巩固练习】1分离纯化大肠杆菌最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
一、培养基（阅读教材P14～15）1．概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
2．种类按照培养基的物理状态划分为液体培养基和固体培养基。
3．营养要素各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、无菌技术（阅读教材P15～16）1．获得纯净培养物：关键是防止外来杂菌的入侵。
2．无菌操作主要包括以下四个方面(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
3．消毒和灭菌(1)消毒①概念：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。
②常用的方法有煮沸消毒法和化学药剂消毒法。
(2)灭菌①概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。
②常见的方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。
三、大肠杆菌的纯化培养（阅读教材P16～20）1．制备固体培养基2．纯化大肠杆菌(1)微生物接种最常用的方法①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
(2)微生物培养分析①如果接种了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明接种操作符合要求。
②若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中被杂菌污染。
③未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中若长出菌落，说明灭菌不彻底，实验失败。
（阅读教材P20）[共研探究]该培养基根据物理性质划分应是固体培养基，原因是该培养基中加入了凝固剂琼脂。
(2)该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的4类营养物质(成分)，分别是碳源、氮源、无机盐和水。
有时候还需要加入特殊的营养物质(生长因子)。
(3)①蔗糖提供碳源，除此之外，提供碳源的主要有：a.无机化合物CO2、Na2CO3等；b.有机化合物糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等。
②NaNO3提供氮源和无机盐。
(4)【总结提升】某些微生物的代谢及特点(1)硝化细菌：自养，需NH3或亚硝酸盐做氮源。
(2)圆褐固氮菌：异养，培养基中不需加氮源。
(3)金黄色葡萄球菌：异养，培养基中需加高浓度食盐。
(4)破伤风杆菌：异养厌氧。
2．无菌技术(1)目的：防止外来杂菌的入侵。
(2)消毒和灭菌的比较(3)连线(4)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
【易错易混】(1)消毒与灭菌的最根本区别：芽孢和孢子是否存活。
灭菌能杀死芽孢和孢子，因而灭菌更彻底。
(2)具体选择消毒还是灭菌需要考虑：一是效果，灭菌的效果比消毒要好；二是操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。
[总结升华]【易错易混】(1)对异养微生物来说，含C 、H 、O 、N 的化合物既是碳源又是氮源、能源。
(2)一些天然营养物质，如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子。
(3)不同微生物对营养的需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
(4)营养物质过少不能满足微生物的营养需要，过多对微生物的生长有抑制作用。
(5)自养型微生物的碳源是无机碳(如CO2)，异养型微生物的碳源是有机碳(如糖类)，由此可见培养不同类型的微生物，所用的培养基的组成成分不同，但一般微生物所需的营养物质可分为五类：碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。
2[对点演练]1．防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。
下列叙述错误的是()A．实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒B．接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌C．在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染D．使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境解析：选B对接种环等金属用具进行灼烧灭菌，应放在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰处灼烧灭菌。
[共研探究]1．完成下面的实验过程(1)培养基的配制(2)灭菌(3)倒平板待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行下列操作：①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞(如图1)。
②使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰，目的是进行灭菌，防止瓶口微生物污染培养基(如图2)。
③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖(如图3)。
④等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置(如图4)，原因：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
2．纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，接种时尽量接种单个的大肠杆菌，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
(1)平板划线法(2)稀释涂布平板法结合示意图，完成下面步骤： ①系列稀释操作a ．将盛有9 mL 水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。
b ．用移液管吸取1 mL 培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。
用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与无菌水充分混匀。
c ．从101倍稀释的试管中吸取1 mL 稀释液，注入102倍稀释的试管内吹吸均匀，获得102倍稀释液。
依次类推，直到完成最后一只试管的稀释。
②涂布平板操作结合图示，完成下列操作：a ．为了保持菌种的纯净，需将菌种放在低温环境中保藏，目的是降低微生物的新陈代谢速率。
b ．保存菌种的方法[总结升华]1．培养基的配制原则(1)目的要明确(根据微生物的种类、培养目的等)，如生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定所用培养基内必须加入已知化学成分的物质。
(2)营养要协调，注意各种营养物质的浓度和比例①营养物质浓度过低不能满足微生物的营养需求，过高对微生物的生长有抑制作用。
②培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。
例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为4∶1时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为3∶1时，菌体繁殖受到抑制，但谷氨酸合成量大增。
(3)pH 要适宜，各种微生物适宜生长的pH 范围不同，细菌6.5～7.5、放线菌7.5～8.5、真菌5.0～6.0。
2．平板划线法中不同时期灼烧接种环的目的3.(1)酒精灯与培养皿的距离要合适。
(2)吸管头不要接触任何其他物体。
(3)吸管要在酒精灯火焰周围使用。
[对点演练]2．如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为l →2→3→4→5。
下列操作方法正确的是( )A ．操作前要将接种环放在火焰旁灭菌B ．划线操作要在火焰上进行C ．在5区域中才可以得到所需菌种的菌落D ．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌 解析：选D 操作前要将接种环放在酒精灯的外焰灼烧进行灭菌；整个操作过程要在酒精灯旁进行；1、2、3、4、5这5个区域都可能有所需菌种的菌落；在每次划线前对接种环灼烧是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，划线结束后对接种环灭菌是为了杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
1．不同培养基的具体配方不同，但一般都含()A．碳源、磷酸盐和维生素B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素答案：C2．下面对微生物培养中灭菌的理解不正确的是()A．防止杂菌污染B．灭菌就是杀死培养基中的杂菌C．培养基和培养设备都必须进行灭菌D．灭菌必须在接种前解析：选B灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。
3．如图甲、乙是稀释涂布平板法中的部分操作，丙是平板划线法操作结果。
下列叙述错误的是()A．乙图中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液B．对于浓度较高的菌液，如果甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不是由单一的细胞或孢子繁殖而成C．丙图培养皿中所得的菌落都符合要求D．丙图中连续划线的起点都是上一次划线的末端解析：选C灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，A正确。
稀释倍数过低，会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B正确。
平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C错误。
连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成。
4(1)蛋白胨在培养基中的作用是___________________________。
(2)要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是____________。
(3)确定表中各成分含量依据的原则是_______________________________。
(4)培养基配制好后，分装前应进行的工作是______________________________。
(5)从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌污染的方法有________________。
(6)在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是____________________________。
解析：蛋白胨中含有大量的蛋白质降解而成的多肽类物质等，因而在培养基中提供碳源、氮源和生长因子。
细菌菌落是在固体培养基上形成的。
确定各营养成分含量要依据所培养的微生物的需要。
培养基配制好后，首先要调整pH，然后再分装，整个操作过程都要保证无杂菌污染。
答案：(1)提供碳源、氮源、生长因子(2)琼脂(凝固剂)(3)所培养微生物对各营养成分的需要量(4)调整pH(5)对培养基进行高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精棉擦手、在火焰旁接种、在火焰旁迅速用棉塞塞住试管口(6)扩大接种面积。
