微生物的实验室培养_(正式)_PPT幻灯片

例如： 在培养基中加
入伊红和美蓝，可以 用来鉴别饮用水和乳 制品中是否存在大肠 杆菌等细菌：如果有 大肠杆菌，其代谢产 物就与伊红和美蓝结 合，使菌落呈深紫色， 并带有金属光泽。
练习
• 下列有关培养基的叙述正确的是（ A ）
A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基 质
B.培养基只有两类：固体培养基和液体培养基
2.特殊营养： 生长因子：微生物生长不可缺少的微量有机物 （如：维生素、氨基酸、碱基等 。）
a、牛肉膏主要提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素; b、蛋白胨主要提供碳源、氮源和维生素。
3. pH、氧气的需求：
4.种类：
据物理性质分
液体培养基 常用于工业生产
加琼脂
半固体培养基
加琼脂
用于观察运动、 鉴定
5. 配制原则
生产 科研
⑴目的明确：根据微生物的种类、培养目的选择原料
自养型：不加碳源（CO2碳源） 异养型：有机碳源
⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当
⑶适宜的pH值：加入缓冲剂
（细菌偏碱，真菌偏酸）
二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染
1.消毒与灭菌：
消毒
灭菌
较为温和理化方法， 强烈的理化方法， 定义 杀死部分有害菌体 杀死所有微生物
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠ 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡ 纯化大肠杆菌：
1.接种： ⑴平板划线法： 接种环
菌种
防止划破培养基
（重复实验） 划3个平板
1个不划线 （空白对照）
平板划线的操作方法
为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接 种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为 什么？
子细胞群体
2.特征：大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。
3.功能：鉴定菌种的重要依据
四.大肠杆菌的纯化培养：分散成单个细胞,
形成单个菌落。 ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.计算：培养基用量 依配方计算各成分的用量
2.称量：牛10肉00膏ml黏牛稠肉，膏用蛋称白量胨纸培称养取基的配方 牛肉膏、蛋白琼胨脂易2吸0.0潮g ，要快、加盖
C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养 基
D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉 眼可见的单个细菌
练习
• 要从多种细菌中分离某种细菌，培养基
要用（ A ）
A.固体培养基 B.液体培养基 C.加入青霉素的培养基 D.加入高浓度食盐的培养基
练习
• 下列叙述错误的是（ B ） A.培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素 B.培养霉菌时需将培养基中的pH调至碱性 C.培养细菌时需将pH调至中性或微碱性 D.培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件
蛋白胨 10g Nacl 5g H2O 定容至1000ml
分析营养构成？
一.培养基：微生物生存的环境和营养物质
1.基本成分：
⑴碳源
无机碳源：CO2、CO32-、HCO3- 自养微生物 有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等 异养微生物
⑵氮源 无机氮源：NH4＋、NO3有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源
巴斯德在微生物学上的贡献
• 有机物发酵和腐败由微生物引起 • 解决葡萄酒和啤酒变酸问题——创立巴氏消毒
法 • 主张传染病是由微生物引起的，并可通过接触、
唾液及粪便传播 • 1885年，巴斯德第一次治好了被疯狗咬伤的9
岁男孩——奠定了免疫学基础
著名的巴斯德研究院
微生物方法学和医学微生物学奠基人
—— 科赫
（不包括芽孢、孢子） （包括芽孢、孢子）
煮沸消毒法
灼烧灭菌
方法
巴10氏0℃消、毒5法~6min 化70学~7药5℃剂、30min
接金耐干种属高热用环灭温具、菌需接保种持针干等燥的
酒紫8精0外℃、线、氯1气5m、in石炭酸等 物高压品蒸，汽16灭0～菌170℃
1培1～00养K2基小Pa，时、
请你判断以下材料或用具是否需要消 毒或灭菌。如果需要，请选择合适的 方法。
在培养基中加入或 减少某种化学物质， 以抑制不需要的微 生物的生长，促进 所需要的微生物的 生长。
b、加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
c、不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
d、不加含碳有机物的无碳培 养基: 分离自养型微生物
鉴别培养基:
根据微生物的代谢 特点，在培养基中 加入某种指示剂或 化学药品配制而成, 用以鉴别不同种类 的微生物 。
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上 可能存在的微生物污染培养物。
杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直 接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加， 使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染 环境和感染操作者。
⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液：
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
二.无菌技术：防止外来杂菌的污染
1.消毒与灭菌：
2.无菌范围：实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 酒精灯旁操作
超净工作台
三.菌落
1.定义：
单个 或少数菌体
固体培养基上 大量繁殖
德国细菌学、现代微 生物学奠基人之一。 因发现结核菌和结核 菌素而获1905年诺贝 尔生理学或医学奖。
专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养
思考：微生物“吃”什么？
牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 琼脂20.0g 牛肉膏 5g
固体培养基
用于微生物的分 离、鉴生长
半固体培养基：
无动力
固体培养基：菌落
有动力(弥散)
天然培养基 据化学成分分
合成培养基
常用于工业生产 常用于分类、鉴定
选择培养基 据用途分
鉴别培养基
培养、分离出特定微生物 鉴别不同种类的微生物
选择培养基:
例如：
a、加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
微量 移 液器
3.溶化：牛肉膏、称量牛纸肉膏、少5量g 水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、蛋N白aC胨l→琼10脂g →补水定容
4.调pH、分装、封口：Nacl 5g 5.灭菌：培养基、H培2O养皿定容至1000ml 6.倒平板：
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染