动物细胞工程知识点总结

动物细胞工程12月20日动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。

一、动物细胞培养1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

2、原理：细胞增殖3、过程分散成单个细胞，制成细胞悬液注意：①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。

②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。

③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。

思考回答：⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养?答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。

⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么?答：不需要。

因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。

⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 答：主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2，当ＰＨ大于6时就会失去活性，多数动物细胞培养适宜PH为7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。

（胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2－8.4，胰蛋白酶活性较高）⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤，因此必须控制好消化时间。

⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体4、重要概念①细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。

＿＿＿培养 ② 单个细胞 细胞悬液 培养 接触抑制 动物细胞 ① 细胞培养 供体 体细胞 ＿＿＿＿＿＿ 卵巢卵 母细胞 减 Ⅱ中 期 去核 无核卵母细胞 注 入 ＿＿＿＿＿＿ 发 育 胚 胎 胚胎移植 代孕母体 生出与供体遗传 物质相同的个体动物细胞工程要点梳理一、动物细胞培养1．概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成＿＿＿＿＿＿＿，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和＿＿＿＿＿。

2．过程：注：①②代表的是＿＿＿＿＿＿或胶原蛋白酶。

10～50代的细胞群叫细胞株。

50代以后的细胞群叫＿＿＿＿＿。

3．条件：（1）无菌、无毒的环境：培养液应进行＿＿＿＿＿处理。

（2）营养（合成培养基成分）：糖类、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素，通常需加入＿＿＿、血浆等。

（3）温度：适宜温度36.5±0.5 ℃；pH ＿＿＿＿。

（4）气体环境：空气95%，＿＿＿5%。

4．应用：如病毒疫苗、干扰素、＿＿＿＿＿。

二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1．动物体细胞核移植：将一个动物细胞的＿＿＿＿＿移入一个去核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物个体。

2．种类：（1）体细胞核移植：难。

（2）＿＿＿＿＿移植：易。

3．过程：4．应用：（1）加速家畜＿＿＿＿改良进程，促进＿＿＿＿＿繁育。

（2）保护濒危物种。

（3）生产＿＿＿＿＿＿。

（4）作为异种移植的＿＿＿＿。

（5）用于组织器官的移植。

5．问题：克隆动物存在＿＿＿＿＿、生理缺陷、＿＿＿＿＿等。

三、动物细胞融合不同＿＿＿＿＿的两个细胞灭活的病毒PEG杂交细胞选择B淋巴细胞抗原刺激骨髓瘤细胞克隆检测＿＿＿＿＿浆细胞杂交瘤细胞单克隆抗体B－B细胞瘤－瘤细胞杂交瘤细胞体外培养1．概念：＿＿＿＿＿＿动物细胞结合形成一个细胞的过程，又叫细胞杂交。

2．结果：形成＿＿＿＿细胞。

3．过程：4．意义：克服了＿＿＿＿杂交的不亲和性。

四、单克隆抗体1．抗体的产生：＿＿＿＿＿＿产生的抗体具有特异性。

《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的概念动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的操作，以获得人们所需要的生物产品或细胞本身。

它是现代生物技术的重要组成部分，涵盖了细胞培养、细胞融合、细胞核移植、胚胎移植等多个方面。

二、动物细胞培养（一）基本原理细胞培养的基本原理是细胞的增殖。

细胞在适宜的环境中，能够吸收营养物质，进行新陈代谢，并通过分裂增加数量。

（二）培养条件1、无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还会添加一定量的抗生素，以防止培养过程中的污染。

2、营养物质：包括糖、氨基酸、无机盐、维生素等，这些物质要按照细胞所需的种类和量进行精确配置。

3、适宜的温度和 pH：哺乳动物细胞的培养温度一般在 365℃左右，pH 则在 72 74 之间。

4、气体环境：细胞培养所需的气体主要有氧气和二氧化碳，氧气用于细胞呼吸，二氧化碳则用于维持培养液的 pH。

（三）培养过程1、取材：通常从动物的组织或器官中获取细胞，如从胚胎或幼龄动物的器官组织中获取细胞，其分裂能力更强。

2、原代培养：将取得的组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，然后制成细胞悬液，放入培养瓶中培养。

3、传代培养：当细胞贴满瓶壁时，需要用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱落下来，然后分瓶继续培养。

三、动物细胞融合（一）概念动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。

（二）诱导融合的方法1、物理法：如电激融合法。

2、化学法：常用的诱导剂是聚乙二醇（PEG）。

3、生物法：如灭活的病毒。

（三）应用1、制备单克隆抗体：这是动物细胞融合技术最突出的应用。

2、用于基因定位和染色体转移等研究。

四、单克隆抗体（一）概念单克隆抗体是由单个 B 淋巴细胞经过无性繁殖形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。

（二）制备过程1、给小鼠注射特定的抗原，使其发生免疫反应，产生能分泌特定抗体的 B 淋巴细胞。

高二动物细胞工程知识点动物细胞工程是指运用细胞生物学、遗传学、分子生物学等理论和技术，对动物细胞进行研究、操作和改良的一门学科。

它在农业、医学和科学研究等多个领域具有重要的应用价值。

本文将介绍一些高二动物细胞工程的基础知识点。

一、细胞培养基础动物细胞培养是动物细胞研究中最基本的技术手段之一。

常见的细胞培养基包括无血清培养基和含血清培养基。

无血清培养基不含动物血清，通过添加人工合成的营养物质来满足细胞生长所需。

而含血清培养基则利用动物血清中所含有的生长因子和营养物质来维持细胞的生长。

二、细胞培养技术1. 细胞传代：细胞传代是指将原始培养的细胞分为若干个小培养皿中，使细胞继续生长和分裂。

细胞传代的目的是为了扩增细胞数量，以满足后续的实验需求。

2. 细胞冻存：细胞冻存是将细胞在低温下保存，以便日后使用。

通过添加特定的保护剂和冷冻液，可以在极低温度下减少细胞的代谢活动，避免细胞死亡。

3. 细胞鉴定：细胞鉴定是通过观察细胞的形态、生长特性、标记物等来确定细胞的身份和纯度。

常用的方法包括细胞形态观察、细胞分子标记和遗传分析等。

4. 细胞转染：细胞转染是将外源基因导入细胞的过程。

常用的转染方法有化学法、电穿孔法和病毒介导的转染法等。

三、动物细胞培养的应用1. 药物筛选：动物细胞培养可以用于药物的筛选和评价。

通过将药物添加到细胞培养系统中，观察其对细胞的影响，可以评估药物的毒性和疗效。

2. 组织工程：动物细胞培养可以为组织工程提供细胞来源。

通过培养和增殖体外的细胞，可以获得大量的细胞用于组织重建和移植。

3. 基因工程：动物细胞培养可以用于基因工程研究。

通过导入外源基因，可以改变细胞的性质和功能，用于疾病基因治疗和基因表达研究。

四、动物细胞工程的挑战与展望尽管动物细胞工程在许多领域都已取得了重要的成果，但仍面临着一些挑战。

例如，细胞培养过程中的细胞衰老、细胞突变和污染等问题需要得到解决。

此外，细胞工程的应用还需要更深入的研究和探索，以满足不断发展的医学和科学需求。

生物选必三必背长空（第2章动物细胞工程）1.细胞的全能性是指细2.人工诱导原生质体融合的方法3.杂交是指4.植物体细胞杂交的原理5.微型繁殖技术的优点6.什么叫次生代谢物7.分散动物细胞时不用胃蛋白酶的原因是28.动物细胞培养时需要分瓶传代培养的原因是9.诱导动物细胞融合的方法有10.杂交瘤细胞的特点11.制备单克隆抗体时，第一次筛选的目的是，第二次筛选时进行，目的是。

12.单克隆抗体的优点是。

13.单克隆抗体的应用有。

14.ADC在临床上具有靶点清楚，副作用小的优点，原因是。

15.核移植时，受体选择卵母细胞的原因是。

16.克隆动物是供体100%的复制吗？为什么？。

17.卵母细胞去核的原因是。

18.体细胞核移植难度明显高于胚胎细胞核移植的原因是。

19.动物细胞培养加入血清的作用是。

20.胚胎工程是指。

21.防止多精入卵的两道屏障，名称及发生时间：22.受精的标志。

23.内细胞团将来发育成。

24.胚胎移植是指。

25.胚胎移植的基本程序（5步）26.供体的选择标准，受体的选择标准27.同期发情处理的意义：28.胚胎移植的实质是29.胚胎移植的意义：30.胚胎分割是指248生物选必三必背长空（第2章动物细胞工程）1.细胞的全能性是指细胞经分裂和分裂后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能，即细胞具有全能性。

2.人工诱导原生质体融合的方法物理法包括电融合法、离心法；化学法包括聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca—高PH 融合法等。

3.植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。

4.植物体细胞杂交的原理细胞膜的流动性、植物细胞的全能性5.微型繁殖技术的优点高效、快速地实现种苗的大量繁殖；保持优良品种的遗传特性；可实现工厂生产。

6.什么叫次生代谢物一般认为不是植物基本的生命活动所必需的的产物。

7.分散动物细胞时不用胃蛋白酶的原因是多数动物细胞生存的适宜PH为7.27.4,，而胃蛋白酶最适PH为2，PH>6会失活，胃蛋白酶在此环境中没有活性。

动物细胞工程第一章动物细胞工程概论一、动物细胞工程的概念1.动物细胞工程的定义动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的技术方法对动物细胞进行各种操作并使其在体外生长、增殖、分化以生产有用产品或引向成体化（产生新型生物个体）的技术体系，是生物技术（生物工程）的重要组成部分。

狭义细胞工程指对细胞个体进行的各种操作，广义的细胞工程包括对细胞、组织、器官所进行的各种操作。

2.动物细胞工程研究的主要内容以狭义细胞工程为主，兼顾组织、器官工程等内容的研究。

(1)狭义细胞工程：研究体外分离、培养、增殖、分化动物细胞的条件以及保存、操作及利用动物细胞的工艺技术体系。

(2)组织工程：研究体外培养、增殖动物组织的条件以及保存、操作及利用动物组织的工艺技术体系。

(3)器官工程：研究体外培养、增殖器官的条件以及保存、操作及利用动物器官的工艺技术体系。

(4)动物胚胎工程：研究动物胚胎生产、保存、操作及移植的工艺技术体系。

3.动物细胞工程研究的意义(1)是动物繁殖的重要技术手段加快动物繁殖速度：A.体外受精生产胚胎 B.胚胎移植生产动物(2)是人类辅助生殖技术的重要组成部分体外受精—胚胎移植技术，可以克服雄性不育和雌性不孕；(3)是动物遗传育种的重要技术手段对精子或卵子进行遗传操作，或利用细胞融合、胚胎嵌合技术可以使若干个动物性状进行有机组合，产生新的生物个体；(4)生产药物直接培养细胞或组织，从细胞或组织代谢物中直接获得药物;对细胞进行遗传操作，生产转基因动物，利用转基因动物生产药物（生物反应器）；(5)保存珍惜动物资源由于动物克隆技术的成功，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生命个体，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生物种群(6)提供人类器官移植的材料人类器官移植发展很快，目前可以进行心脏、肝、肾脏移植，可以进行皮肤、角膜、骨髓细胞移植。

三、动物细胞工程讲授的主要内容1.动物细胞、组织培养2.动物细胞融合3.动物细胞重组4.向细胞内引入高分子物质5.动物细胞冷冻保存6.动物胚胎工程四、动物细胞工程实验（实习）内容1.实验仪器设备的识别与使用2.动物细胞培养用液的制备3.动物胎儿成纤维细胞分离与培养4.动物细胞常规检查和生物学检测5.培养细胞的冻存与复苏五、动物细胞工程研究取得的重要进展1.精液采集、精液冷冻与人工授精技术的成熟和发展，为充分发挥利用雄性动物生殖潜力奠定了基础；2.雌性动物卵母细胞体外成熟培养技术的成功，使人们在体外完成动物生殖过程成为可能；3.体外受精与胚胎移植技术的成功，产生了试管婴儿，试管牛，试管猪，试管山羊，试管兔；4.细胞核移植技术的成功，使人们克隆高等哺乳动物的梦想得以实现体细胞核移植、胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植技术的成功，为克隆动物和转基因动物生产提供了技术支撑；5.胚胎干细胞与组织干细胞成功分离、体外扩增与诱导分化研究的成功，为人类医学发展提供了宝贵的材料；胚胎干细胞，胰腺干细胞，神经干细胞，骨髓干细胞，皮肤干细胞，角膜干细胞6.转基因细胞（细胞转染基因）技术的成功，为转基因动物的生产创造了条件；7.胚胎嵌合技术一种或两种动物胚胎共同生长发育形成一个生物个体的技术，即在一个生物体内，含有来源于两个不同胚胎的细胞和组织；8.细胞融合技术将两种或两种以上的细胞融合，形成一个具有新性状的细胞，这种技术称为细胞融合技术。

《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的定义和范围动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的遗传操作以及细胞和组织培养技术，以改造细胞、创造新的生物品种或生产生物产品的一门综合性科学技术。

其范围涵盖了细胞培养、细胞融合、细胞核移植、胚胎移植、细胞重组、转基因动物等多个方面。

二、动物细胞培养技术（一）基本原理细胞培养是动物细胞工程的基础，其原理是细胞具有分裂和生长的能力。

在适宜的条件下，细胞可以不断增殖并保持一定的生理特性。

（二）培养条件1、无菌环境：防止微生物污染是细胞培养成功的关键。

2、合适的培养基：包含细胞生长所需的营养物质，如氨基酸、维生素、无机盐等。

3、适宜的温度和 pH：一般来说，培养温度在 37℃左右，pH 在 72 74 之间。

4、气体环境：通常需要 95%的空气和 5%的二氧化碳，二氧化碳用于维持培养基的 pH 稳定。

（三）培养过程1、取材：从动物体内取出组织或器官，进行处理以获得单细胞。

2、原代培养：将获得的细胞直接培养，这是细胞培养的第一代。

3、传代培养：当原代培养的细胞生长到一定密度时，进行分瓶培养。

（四）应用1、生物制品的生产，如疫苗、抗体等。

2、细胞生物学和分子生物学的研究。

3、药物筛选和毒性测试。

三、细胞融合技术（一）原理细胞融合是指两个或多个细胞通过物理、化学或生物方法融合成一个杂种细胞的过程。

其原理基于细胞膜的流动性。

（二）方法1、病毒诱导融合：使用某些病毒，如仙台病毒，促使细胞膜融合。

2、化学诱导融合：常用的化学试剂有聚乙二醇（PEG）。

3、电融合：通过电场作用使细胞排列紧密接触，进而融合。

（三）应用1、单克隆抗体的制备：将免疫小鼠的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，分泌单克隆抗体。

2、细胞遗传和细胞免疫的研究。

四、细胞核移植技术（一）原理细胞核移植是将一个细胞的细胞核移植到另一个去核的细胞中，使其发育成一个新的个体。

这基于细胞核的全能性，即细胞核包含了生物体发育所需的全部遗传信息。

基本概念部分动物细胞工程学：指以动物细胞或其组成成分为研究对象，以细胞生物学、发育生物学、生殖生物学和分子生物学的理论和技术为基础，结合工程学原理和技术，对细胞或其组分进行操作、加工或改造，使其按照所规定目的发生结构或功能等生物学特性的改变，获得人类所需的生物产品或创造新的动物品种的一门综合性技术科学。

原代培养：期也称为初代培养期，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1～3周。

传代培养：在瓶皿内生长的细胞增殖到一定密度后，需要重新悬浮在培养液中，经稀释后接种到新的瓶皿中培养，否则将影响细胞的继续生存的这一过程。

细胞培养：指单个细胞或离散的细胞群在体外生长增殖，并维持一定结构和功能的培养技术。

组织培养：指组织中不同类型的细胞在体外培养过程中相互依存，并维持一定结构和功能的培养技术。

器官培养：指将动物的某一器官或器官原基取出，在体外维持其生存状态和功能的培养技术。

转化：细胞在体外培养过程中发生与原代细胞形态、抗原、增殖或其他特性的可遗传的变化。

细胞系：初代培养细胞一经传代成功后便改称细胞系。

细胞株：细胞经过克隆培养后，来源于一个共同的祖细胞的后裔细胞群。

克隆形成率：是指细胞被制成分散的悬液，以低密度接种后，当细胞生长增殖并形成细胞小群（克隆）的比率。

细胞分裂指数：指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数目。

细胞融合：在自然或人为条件下，两个或两个以上的细胞相互接触，相继发生膜融合、胞质融合，最终发生核融合，从而形成融合细胞的现象。

细胞杂交：指不同类型的两个或两个以上细胞的融合。

克隆化：一般是指将抗体阳性孔进行克隆。

干细胞：是一群具有无限的或者永生的自我更新能力，至少能够产生一种高度分化的子代细胞的细胞，是个体生命过程中产生和存在的一个特殊细胞群体。

全能干细胞：它具有形成完整个体的分化潜能。

多能干细胞：具有分化出多种组织细胞的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制。

定向祖细胞：多能干细胞继续向前分化则为此类细胞。

专题2 细胞工程 2.3 动物细胞工程知识点汇总1. 动物细胞培养（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。

（2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。

（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。

细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

（4）动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。

通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。

此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。

通常需加入血清、血浆等天然成分。

③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。

④气体环境：95%空气+5%CO2。

O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。

（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。

2.动物体细胞核移植技术和克隆动物（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。

（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。

（3）体细胞核移植的大致过程是：高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的卵母细胞，去核（显微操作）（注：为什么要用卵细胞？它可以提供充足的营养；操作简便；细胞质不会抑制细胞核全能性的表达）；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛。