SDS-PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理

SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分析技术，通过电泳分离蛋白质样品的方法得到了广泛的应用。

本文将着重介绍SDS-PAGE电泳的基本原理。

一、SDS-PAGE电泳的概念SDS-PAGE是一种已经被广泛应用的蛋白质分离技术，它的全称是聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）。

这种电泳技术利用聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质，通过直流电场将蛋白质样品分离出不同电荷和大小的蛋白质成分。

二、SDS-PAGE电泳的原理1. 聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE电泳中所使用的凝胶是由聚丙烯酰胺构成的。

聚丙烯酰胺凝胶具有一定的孔隙结构，可以根据蛋白质的大小和电荷来调整孔隙的大小，从而实现不同大小的蛋白质的分离。

2. SDS处理SDS是指月桂基硫酸钠，它是一种阴离子表面活性剂。

在SDS-PAGE 电泳中，将样品中的蛋白质经过SDS处理后，蛋白质表面都会均匀地吸附一定数量的SDS分子，并且使蛋白质呈负电荷。

这样，所有的蛋白质分子都会带有类似的电荷密度，可以消除蛋白质的本身的电荷特性，使蛋白质在电场作用下只受到电场力的作用，而不受到其他因素干扰。

3. 蛋白质分离将经过SDS处理的蛋白质样品加载到聚丙烯酰胺凝胶上，然后通过电泳进行分离。

经电泳分离后，蛋白质会根据其大小和电荷迁移到不同位置，从而使不同的蛋白质分离开来。

三、SDS-PAGE电泳的应用SDS-PAGE电泳技术在生物化学和分子生物学研究领域应用广泛。

它可以用于研究蛋白质的分子量、纯度和比例，也可以用于检测蛋白质的存在和表达水平，同时还可以用于鉴定蛋白质的异构体等。

四、SDS-PAGE电泳的发展SDS-PAGE电泳技术自问世以来，经过不断的改进和完善，在蛋白质分离和分析领域一直处于领先地位。

未来，随着科学技术的不断进步，SDS-PAGE电泳技术也将会迎来新的发展，并在更广泛的领域得到应用。

SDS－PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理（甘氨酸的作用）SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术。

下面就SDS-PAGE 的基本原理做简单介绍。

SDS－PAGE电泳的基本原理？SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS 溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE电泳成功的关键是什么？①溶液中SDS单体的浓度SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式存在，能与蛋白质分子结合的是单体。

为了保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1∶4 或1∶3。

②样品缓冲液的离子强度因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。

所以，SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，常为10-100 mM。

③二硫键是否完全被还原只有二硫键被完全还原以后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上从而给出相对迁移率和分子质量对数的线性关系。

SDS-PAGE电泳的基本原理和应用1. SDS-PAGE电泳的基本原理1.1 电泳原理SDS-PAGE是一种基于凝胶电泳的蛋白质分析技术。

其中SDS是十二烷基硫酸钠（Sodium Dodecyl Sulfate）的缩写，是一种表面活性剂，能够使蛋白质样品中的蛋白质在电场作用下带负电荷，同时也能够给蛋白质提供线性结构。

1.2 凝胶电泳凝胶电泳是一种利用膠體凝膠將生物物质分开的电泳技术。

在SDS-PAGE中，常使用聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel）作为电泳介质。

聚丙烯酰胺凝胶是一种聚合物凝胶，通过调整聚丙烯酰胺单体和交联剂的比例，可以调整凝胶的孔径。

1.3 SDS-PAGE的步骤SDS-PAGE主要包括以下几个步骤：•准备样品：将待测蛋白质样品添加SDS、还原剂和草酸，使蛋白质样品变性和解离。

•准备凝胶：制备聚丙烯酰胺凝胶，将之倒入电泳槽中，插入电泳板。

•加载样品：将准备好的样品加入凝胶双孔板中，注意标记样品位置。

•电泳：将准备好的样品盖在电泳槽上，接上电源进行电泳分离。

•显色染色：将分离出的蛋白质进行显色染色，以观察结果。

•图像分析：利用成像仪或凝胶图像分析系统对染色的凝胶图像进行定量分析。

2. SDS-PAGE电泳的应用2.1 蛋白质分析SDS-PAGE电泳是蛋白质分析的基础技术，通过对蛋白质样品进行电泳分离，可以获得蛋白质的表观分子质量、纯度和组成信息。

这对于研究蛋白质结构、功能以及与疾病的关系等具有重要意义。

2.2 分子生物学研究SDS-PAGE电泳在分子生物学研究中有多种应用。

例如，可以用于检测基因表达的变化，比较不同条件下的蛋白质组分等。

此外，SDS-PAGE也可以用于鉴定蛋白质的亚细胞定位、研究蛋白质与其他分子（如核酸、小分子化合物等）的相互作用等方面。

2.3 药物研发SDS-PAGE电泳在药物研发领域也有广泛应用。

例如，可以用于药物候选化合物与蛋白质之间的相互作用研究，评估药物的结合能力和亲合力。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）实验原理和操作步骤实验原理：SDS—PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法.该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。

SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中.SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比.在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。

蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。

试剂和器材：试剂：1。

5x样品缓冲液(10ml）：0。

6ml 1mol/L的Tris-HCl （pH6。

8),5ml 50％甘油，2ml 10%的SDS,0。

5ml巯基乙醇，1ml 1％溴酚蓝，0。

9ml蒸馏水。

可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。

2。

凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0。

8g，加重蒸水溶解后,定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中,4℃保存，一般可放置1个月.3。

pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8。

9，定容至100ml，4℃保存.4。

pH6。

7浓缩胶缓冲液: Tris 5。

98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6。

7，定容至100ml，4℃保存。

5. TEMED(四乙基乙二胺）原液6。

10％过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制）7。

pH8。

3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6。

0g，甘氨酸28.8g,加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。

置4℃保存,临用前稀释10倍。

8。

考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70％的过氯酸,最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤.器材：电泳仪,电泳槽，水浴锅，摇床。

实验操作(一）样品制备将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20ul＋5ul）在一个Eppendorf 管中混合。

几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS－PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论：Q：SDS－PAGE电泳的基本原理A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。

当分子量在15KD到200KD 之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW 为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响A：在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是，分离胶；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。

在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。

由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。

当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。

所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。

Q：样品如何处理A：根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。

SDS－PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE电泳成功的关键是什么？①溶液中SDS单体的浓度SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式存在，能与蛋白质分子结合的是单体。

为了保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1∶4或1∶3。

②样品缓冲液的离子强度因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。

所以，SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，常为10-100mM。

③二硫键是否完全被还原只有二硫键被完全还原以后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上从而给出相对迁移率和分子质量对数的线性关系。

Samplebuffer中的β-巯基乙醇的浓度常为4-5%，二硫苏糖醇的浓度常为2-3%。

SDS是阴离子去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白分子的二、三级结构。

作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。

而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。

在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。

SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。

分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。

电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。

2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。

当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。

电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。

蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。

电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。

过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。

在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE电泳的基础原理和实验步骤概述十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE）是聚丙烯酰胺凝胶电泳中最常用的一种蛋白表达分析技术。

此项技术的原理，是根据检体中蛋白质分子量大小的不同，使其在电泳胶中分离。

在大肠杆菌表达纯化外源蛋白的实验中，SDS-PAGE更是必不可少的操作，其通常用于检测蛋白的表达情况（表达量，表达分布），以及分析目的蛋白的纯度等。

SDS-PAGE作用机理蛋白中含有很多的氨基（+）和羧基（-），不同的蛋白在不同的pH值下表现出不同的电荷，为了使蛋白在电泳中的迁移率只与分子量有关，我们在上样前，通常会进行一些处理（上样缓冲液）。

即在样品中加入含有SDS和β-巯基乙醇的上缓冲液。

SDS即十二烷基磺酸钠（CH3-（CH2）10-CH2OSO3-Na+），是一种阴离子表面活性剂，它可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构；β-巯基乙醇是强还原剂，它可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键。

电泳样品加入样品处理液后，经过高温处理，其目的是将SDS与蛋白质充分结合，以使蛋白质完全变性和解聚，并形成棒状结构同时使整个蛋白带上负电荷；另外样品处理液中通常还加入溴酚蓝染料，用于监控整个电泳过程；另外样品处理液中还加入适量的蔗糖或甘油以增大溶液密度，使加样时样品溶液可以快速沉入样品凹槽底部。

当样品上样并接通两极间电流后（电泳槽的上方为负极，下方为正极），在凝胶中形成移动界面并带动凝胶中所含SDS负电荷的多肽复合物向正极推进。

样品首先通过高度多孔性的浓缩胶，使样品中所含SDS多肽复合物在分离胶表面聚集成一条很薄的区带（或称积层）。

电泳启动时，蛋白样品处于pH6.8的上层，pH8.8的分离胶层在下层，上槽为负极，下槽为正极。

出现了pH 不连续和胶孔径大小不连续：启动时Cl¯解离度大，Pro¯解离度居中，甘aaCOO¯解离度小，迁移顺序为（pH6.8）Cl¯>Pro¯>—COO¯。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）一、材料准备（1）丙烯酰胺单体（Arc）：在交联剂作用下形成聚丙烯酰胺（2）N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis）：交联剂（3）10%十二烷基硫酸钠（SDS）：阴离子去污剂，可与蛋白质结合，形成SDS-蛋白质复合物。

由于SDS带有大量负电荷，当与蛋白质形成复合物后好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖，即消除了蛋白质分子之间电荷差异。

配制方法：10g SDS，用双蒸水溶解并定容至100ml，室温保存。

（4）10%过硫酸铵（Ap）：引发剂。

配制方法：0.1 g过硫酸铵溶解于1ml双蒸水中。

过硫酸铵会缓慢分解，应新鲜配制。

（5）N、N、N’、N’－四甲基乙二胺（TEMED）：其碱基催化AP产生氧自由基，激活单体形成自由基，发生聚合。

配制方法：原液使用。

应使用电泳级TEMED。

（6）30%丙烯酰胺凝胶贮液（Arc-Bis贮液）配制方法（50mL体系）：14.55 g丙烯酰胺＋0.45 g N，N-甲叉双丙烯酰胺，先用40ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至50 ml，0.45μm滤膜过滤。

用棕色瓶储存于4℃（丙烯酰胺单体贮液在储存过程中因光和碱催化发生脱氨反应，会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸，储存液应测定pH值不超过7.0。

丙烯酰胺单体贮液应在暗色瓶中保存，每隔数月须重新配制。

丙烯酰胺具有很强的神经毒性和致癌性，并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量时必须戴手套和面具。

）（7）分离胶缓冲液（pH8.8的Tris-HCl缓冲液）：1.5M Tris-HCl，pH8.8。

配制方法：9.08 g Tris溶解在40ml 双蒸水中，用4 mol/L盐酸调节pH值8.8，再用双蒸水加至50ml。

4℃保存。

（8）浓缩胶缓冲液（pH6.7的Tris-HCl缓冲液）：1.0M Tris-HCl，pH6.8。

配制方法：6.06 g Tris溶解在40 ml双蒸水中，用4 mol/L盐酸调节pH值6.8，再用双蒸水加至50 ml。

SDS－PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理（甘氨酸的作用）SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术。

下面就SDS-PAGE 的基本原理做简单介绍。

SDS－PAGE电泳的基本原理？SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS 溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE电泳成功的关键是什么？①溶液中SDS单体的浓度SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式存在，能与蛋白质分子结合的是单体。

为了保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1∶4 或1∶3。

②样品缓冲液的离子强度因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。

所以，SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，常为10-100 mM。

③二硫键是否完全被还原只有二硫键被完全还原以后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上从而给出相对迁移率和分子质量对数的线性关系。

S D S A G E电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]SDS－PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE电泳成功的关键是什么？①溶液中SDS单体的浓度SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式存在，能与蛋白质分子结合的是单体。

为了保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1∶4或1∶3。

②样品缓冲液的离子强度因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。

所以，SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，常为10-100 mM。

③二硫键是否完全被还原只有二硫键被完全还原以后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上从而给出相对迁移率和分子质量对数的线性关系。

SDSPE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-）是一种常用的蛋白质分离和定量分析技术，用于研究蛋白质的分子量，相对含量和电荷特性。

电泳是通过蛋白质在电场中进行迁移分离的方法，而浓缩胶则可以提高分离效果和样品检测的灵敏度。

SDS-的基本原理：1.凝胶制备：SDS-通常使用聚丙烯酰胺凝胶，选择合适的凝胶浓度以控制蛋白质的迁移速度。

聚丙烯酰胺作为凝胶基质，可以形成一个具有孔隙结构的三维网状结构。

2.样品处理：在SDS-之前，将待测样品加入处理缓冲液，并加热至95℃，加入SDS（十二烷基硫酸钠）作用于样品，使得蛋白质分子以线性链形式存在，同时加入还原剂β-巯基乙醇酸使得蛋白质的二硫键断裂。

3.蛋白质迁移：将样品加载到凝胶中并施加电场。

SDS和还原剂使得蛋白质获得负电荷，根据蛋白质的大小和负电荷，蛋白质将在凝胶中进行迁移。

较小的蛋白质迁移速度较快，较大的蛋白质则迁移速度较慢。

4.蛋白质分离和染色：经过一段时间的电泳，标准蛋白质分子权重层析蛋白电泳完成，可以对凝胶作进一步处理，以及染色来可视化蛋白质。

浓缩胶的原理：浓缩胶是用于集中和浓缩样品蛋白质的一种方法，可以增强蛋白质的检测灵敏度和分离效果。

1.凝胶浓度：通过控制浓缩胶的聚丙烯酰胺含量，选择合适的凝胶浓度。

较高的凝胶浓度可以提供更大的蛋白质分离区和更快的迁移速度。

2.染料：为了增强蛋白质的可视化，并区分不同的蛋白质，通常使用共染料来染色蛋白质。

戈姆萨染料是常见的染料之一，通过与蛋白质相互作用，使蛋白质呈现出蓝色的颜色。

3.蛋白质负载量：浓缩胶可以用于提高样品中蛋白质的负载量。

为了提高负载量，可以调整浓缩胶中蛋白质的浓度和凝胶孔隙的大小。

通过增加样品负载量，可以提高蛋白质的可检测性和分离效果。

4.实验条件：在浓缩胶过程中，需要控制实验条件，例如充分冲洗样品，以去除杂质。

此外，还需进行一系列蛋白质分离处理，包括控制电场强度，调整电泳时间和添加适当的缓冲剂。

从网上分享的»SDS－PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理（甘氨酸的作用）实验台这是以前从网上下到的关于SDS－PAGE电泳的讲解，个人觉得非常好，正好这几天有人问到这个东东，所以就拿出来贴到实验台里。

在此声明该内容为转载。

SDS－PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理（甘氨酸的作用）SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术。

下面就SDS-PAGE的基本原理做简单介绍。

SDS－PAGE电泳的基本原理？SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE电泳成功的关键是什么？①溶液中SDS单体的浓度SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式存在，能与蛋白质分子结合的是单体。

为了保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1∶4 或1∶3。

②样品缓冲液的离子强度因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。

SDS-PAGE电泳【实验原理】一、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子质量的基本原理蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。

1967年，Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，简称SDS），则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的Mr，而与所带电荷和形状无关。

在一定条件下，蛋白质的Mr与电泳迁移率间的关系，可用下式表示：LgMr =lgK-bm=K1-bmM r 为蛋白质的相对分子质量；K，K1为常数；b为斜率；m为迁移率。

因此，要测定某个蛋白质的Mr，只需比较它和一系列已知Mr的蛋白质在SDS-凝胶电泳时的迁移率就可以了。

后来，Weber等人基本按Shapiro的方法对约40种蛋白质进行了研究，进一步证实了这个方法的可行性。

现在，经SDS-凝胶电泳研究过的蛋白质，已有很多种。

用这种方法测定蛋白质的Mr，简便、快速，只需要廉价的设备和μg量的蛋白质样品；所得结果在Mr为15000-200000的范围内，与用其他方法测得的Mr 相比，误差一般在±10%以内。

因此，SDS-凝胶电泳测定Mr的方法，已得到非常广泛的应用和迅速的发展。

为了阐明SDS-凝胶电泳法测定蛋白质Mr的原理，许多人进行了深入的研究。

实验证明，在蛋白质溶液中加入SDS和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原；SDS能使蛋白质的氢键、疏水键打开，并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS复合物。

在一定条件下，SDS与大多数蛋白质的结合比为1.4gSDS/lg蛋白质。

由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。

SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。

蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为1.8nm，而长轴则随蛋白质的Mr成正比的变化。

SDS－PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE电泳成功的关键是什么？①溶液中SDS单体的浓度??SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式存在，能与蛋白质分子结合的是单体。

为了保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1∶4或1∶3。

②样品缓冲液的离子强度??因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。

所以，SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，常为10-100 mM。

③二硫键是否完全被还原??只有二硫键被完全还原以后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上从而给出相对迁移率和分子质量对数的线性关系。

Sample buffer中的β-巯基乙醇的浓度常为4-5%，二硫苏糖醇的浓度常为2-3%。

S D S聚丙烯酰胺凝胶电泳S D S P A G E实验原理和操作步骤The pony was revised in January 2021SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。

该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。

SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。

SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。

在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。

蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。

试剂和器材：试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。

可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。

2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。

3. pH8.9分离胶缓冲液： Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。

4. pH6.7浓缩胶缓冲液： Tris5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。

5. TEMED（四乙基乙二胺）原液6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。

置4℃保存，临用前稀释10倍。

8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。

sds-page中浓缩胶和分离胶工作原理SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用于蛋白质分离和定量的方法。

它通过将蛋白质样品在聚丙烯酰胺凝胶中的电泳来实现蛋白质分离。

SDS-PAGE中的关键步骤包括制备胶液、制备样品和运行凝胶电泳。

其中，浓缩胶和分离胶是SDS-PAGE中的两个关键组分，下面将分别详细介绍它们的工作原理。

浓缩胶是SDS-PAGE中的第一个凝胶。

其主要作用是将样品中的蛋白质浓缩在一个较小的体积中，从而提高蛋白质的负载量。

浓缩胶通常是由较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶制成。

制备浓缩胶的步骤如下：1.根据需要的凝胶浓度和厚度，将适量的丙烯酰胺和交联剂加入缓冲液中，得到聚合物化合物。

2.将聚合物化合物倒入凝胶模具中，加入推荐量的TEMED和过硫酸铵（APS），使聚合反应开始。

3.反应后，将浓缩胶从模具中取出，并用缓冲液冲洗浓缩胶，以去除未反应的物质。

浓缩胶的工作原理是通过聚合物网状结构的形成，将蛋白质限制在凝胶中。

聚合物中包含交联剂，能够在聚丙烯酰胺分子之间产生交联反应，形成一个三维的网状结构。

蛋白质样品中的SDS（十二烷基硫酸钠）和化学试剂在电泳过程中会与聚合物发生作用，使蛋白质分子展开并与聚合物的分子结合。

这样，蛋白质就被限制在凝胶内部，无法自由迁移。

分离胶是SDS-PAGE中的第二个凝胶，也是用来实现蛋白质分离的关键步骤。

分离胶的主要作用是根据蛋白质的大小和电荷特性，将蛋白质样品分离成不同的带状条纹。

分离胶通常是由较低浓度的聚丙烯酰胺凝胶制成。

制备分离胶的步骤如下：1.根据需要的凝胶浓度和厚度，将适量的丙烯酰胺和交联剂加入缓冲液中，得到聚合物化合物。

2.将聚合物化合物倒入凝胶模具中，加入推荐量的TEMED和过硫酸铵（APS），使聚合反应开始。

3.反应后，将分离胶从模具中取出，并用缓冲液冲洗分离胶，以去除未反应的物质。

分离胶的工作原理是通过改变凝胶的孔隙结构来实现蛋白质的分离。

在分离胶中，聚丙烯酰胺凝胶网状结构相对较松散，有更多的孔隙。